免疫印迹法与间接免疫荧光法检测抗核抗体对照分析_张铁汉
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[ 2] 郎景和. 子宫颈病变的防治 [ M ] . 北京: 中华医学会主办, 2005, 3. [ 3] H utch inson, et a.l U t ility of liqu id - based cytology for cerv ical carci
nom a screen ing resu lts of a population- based study conducted in a re g ion of costa R ica w ith a h igh inciden ce of cervical carcin om a[ J] . Can cer, 1999, 48~ 5, 87 ~ 89. [ 4] A n jal iL inaye, et a.l Com parative analys is of conven t ional Papan icolaou tests and a f lu id - based th in - layer m eth od A rch Pathol Lab M ed, 2003, 127( 2 ) : 200~ 204. [ 5] 顾美皎. TBS 系统中异常上皮细胞的诊断和处理 [ J] . 中国妇产科 杂志, 2003, 19 ( 8) : 466 ~ 467.
收稿日期: 2008- 01- 19
[ 临床医学 ]
*
免疫印迹法与间接免疫荧光法检测抗核抗体对照分析
张铁汉, 赵永新, 郑辉, 王伟娟
摘要: 目的 探讨欧蒙免疫印迹法不 同项目阳性与间接免疫荧光法检测抗核抗 体 ( ANA ) 不同核 型的相关性。 方法 对比分析 251例欧 蒙印迹法不同项目阳性病例的抗体谱 类型与其 ANA 阳性核 型。 结果 欧蒙印 迹法抗 体 类型不同, ANA 荧光核型有很大差别, 规律不明显。 结论 依据荧光核型来推断抗 ENA 等抗体不可靠。
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间 接 免 疫 荧 光 法 检 测 抗 核 抗 体 ( A ntinuc lear antibody, ANA )和欧蒙印迹法检测 抗可提取性 核抗原 ( Ex tractab le nucle a r antigen, ENA ) 等自身抗体, 是目前风湿病 主要检测方 法。间 接免疫荧光法检测 ANA 主要 用于筛 查, 而 欧蒙 印迹 法检测 抗 ENA 等 抗体对于风湿病的诊断和鉴别 诊断意义 重大。我们 对 2005~ 2007年 我院血清库收集的部 分病例 的间接免 疫荧光 法 检测抗核抗 体 ( A ntinuc lear antibody, ANA ) 和 免疫 印迹 法检 测 抗可提取性核抗原 ( Ex tractab le nuclear antigen, ENA ) 等自身 抗 体检测结果进行对照 分析, 探讨欧蒙印迹法与间接免疫荧 光法 检测抗核抗体相关性 。报告如 下。 1 资料与方法 1. 1 标本来源 251份标本均来源于 2005~ 2007年本 院血清 库收集的新乡市 多家 医院 送检的 自身 免疫 性疾 病 患者 (其 中 系统性红斑 狼 疮 85例, 干燥 综 合征 89例, 系统 性 硬化 症 15 例, 混合结缔组织病 40例, 原发性胆汁型肝硬化 20 例, 原 发性 多肌炎 2例 ) , 所有患者均符合 1982年美国风湿病协会诊 断标 准。 1. 2 抗 ENA 等抗体 的检测 采 用欧 蒙印迹 法。检 测试剂 盒 购自德国欧蒙公 司。欧 蒙印 迹法 ANA 谱 3, 可检 测针 对如 下 15种抗原的抗体: nRNP /Sm、Sm、SS- A、R o - 52、SS - B、Sc l70、PM - Sc、l Jo- 1、着丝点蛋白 B、PCNA、dsDNA、核 小体、组蛋 白、核糖体 P蛋 白、AM A - M 2。膜 条上 平行 包被 了经 亲和 层 析纯化的天然抗原 (着丝点蛋白 B、PM - Sc、l R o - 52、PCNA 为 重组抗原 )。在第一次温育 时, 经 1: 100稀释的 患者 标本与 膜 条上的抗原反应。如 果标本 阳性, 特异性 的 IgG 抗 体 ( 也包 括 IgA 和 IgM )将与抗原结合。为检测已结合的抗体, 加入 酶标抗 人 IgG (酶结合物 )进行第二次温育, 然后加入色 原底物液 以产 生颜色反应。肉眼判 断结果, 各抗 原带的 位置固 定, 结果判 断 比免疫印迹法更简 单。膜条上 质控带 着色表 明实验 各步操 作 正确。阴、阳性结果容易区 分, 抗 原带着 色的深 浅与 相应抗 体
A SC- U S可能与炎症刺激、IUD 或制片不 良有关 ( 3~ 6个 月后复查 ), 也可能与 CIN 或癌有 关, 还 可能包 括不典 型化生、 修复、角化不良及萎缩 性细 胞改变。 值得注 意的 是, ASC - U S 在某些实验室里颇似 垃圾桶 , 凡诊断 不清者 统统置 入其中。 就其规范而言, 在运转良好的 实验室, A SC - U S在正 常人群 涂 片中不超过 3% ~ 5% 。本研 究结 果为 4. 23% , 可达 到细胞 学 试验室的质量控制要求。但是, 目前我国尚缺少细胞学质 控的 严格标准, 应尽快制定针 对细胞 学实验室 和人员 的质控 标准, 以促进细胞学水平 的提 高。同时, 近 年来关 于 HPV 是宫颈 癌 的主要生物学 病因的 报道 很多, 故应 进一 步研 究 A SC 病变 的 患者其 HPV 的表达情况及其相关性。
Ab stract: O b ject ive To investiga te the co rre lation o f positive types of ANA Profile 3 EUROL IN and the ir patte rns of the an tinuclear an tibod ies( ANA ) by IIF in hum an se rum. M e thods Indirect immuno fluo rescence ( IIF ) ( by HEP - 2 ce lls and prim ate liver as an tigen substrates) and ANA Profile 3 EUROL IN antinuc lear antibodies were used to ana lyze 251 pa tterns of the ANA and the ir an tibody types respective ly. R esults There no obv ious re lationship be tw een positive types of ANA P rofile 3 EU ROL IN antibod ies and their patterns of the ANA by IIF in hum an serum w as obse rved. Conclusion T he pat terns of ANA by IIF cannot be used to conc lude the types of ANA Profile 3 EU ROL IN.
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CH INA TROPICA L M ED IC IN E V ol 8 N o 4 A p ril 2008 中国热带医学 2008 年第 8卷第 4期
Fra Baidu bibliotek
5% ~ 17% 患者 经活检证实是宫颈上皮 内瘤变 ( C IN ) 、 ; 若 为 C IN 、 , 则 24% ~ 94% 证实为 ASC - H。但 A SC 妇女 的 浸润 性宫 颈癌 危 险很 低, 约 为 0. 1% ~ 0. 2% 。 本研 究 显示, A SC- U S 和 A SC - H 的 诊 断 分 别 占 A SC 病 变 的 约 90% 和 10% , 其中 ASC - H 组 所占比 例少, 但 40 例 A SC - H 患 者中, CIN 、 的病例 14例, 占 35% ; 而 417例 A SC- US 组患者中, CIN 级以上的病例仅 34例, 占 8. 15% , 可见 ASC - H 患者 中 CIN 以上级别病变的比 例明 显高于 A SC- U S 组, 且 经 2 检 验, 两组对应的组织病理学诊 断分级之 间有统 计学意 义 ( 2 = 59. 17, P < 0. 01) 。可见及时 发现 ASC 病变 并进行 A SC分 级 是十分必要的, 有利于我们对于不同病变级别和具体病变 情况 给于不同的处理措施 。
进行宫颈细胞涂片普查可早 期发现宫颈病 变, 是降 低宫颈 癌发生率的有效措施. 宫颈病变筛查方法有多种, 细胞学涂片法
是简便经济有效的 方法. LCT 是对原细 胞涂片技 术的改进。随 着 FDA 批准 LCT 应用于临床, 其在国外应用已相当广泛。本研 究结果显示, LCT 提高了宫颈早期病变的检出率, 有利于宫颈疾 病的早期诊断和治疗, 降低了宫颈癌的 发生率。阴道镜 检查可 观察宫颈上皮及血管的微小变 化, 有针对性 地进行活组 织病理 检查, 是诊断早期宫颈癌及癌前病变的重要检查手段之一, 而组 织学诊断是 宫颈 病变 诊断 的金 标准, 故应 广 泛推 广细 胞学 检 查 阴道镜下活检 病理学 检查 的宫颈 疾病 三阶梯 式诊 断程 序。
参考文献:
[ 1] H erbest A L. The B ethesda system for report ing cervical/ vagin al cyto logical d iagnoses[ J]. C l in Ob stet G yn eco,l 1992, 35( 1) : 22~ 27.
关键词: 抗核抗体; 抗可提取性核抗原; 自身抗体; 免疫印迹 中图分类号: R 593. 2 文献标识码: B 文章 编号: 1009- 9727( 2008) 4- 568- 03
Com par ison of detection of serum an tinu clear an tibody w ith imm unob lotting and ind irect immunofluorescence ( IIF) . ZHANG T ie- han, ZHAO Y ong- x in, ZHENG H u,i et a.l ( T hird A ffiliated H osp ital of X inx iang M ed ica l College, X inx iang 453003, H enan, P. R. Ch ina)
K ey w ords: A ntinuclear A ntibodies; Extractab le nuc lear antigen; A utoantibodies; immuoblotting
*作者单位: 新乡医学院第三附属医院检验科, 河南 新乡 453003.
中国热带医学 2008年第 8卷第 4 期 CH INA TRO PICAL M ED ICIN E V o l 8 N o 4 A pril 2008
的滴度相关。因所用抗原纯度 高, 大多数抗原是经亲和层 析分 离纯化的。膜条上不含多余的 蛋白, 因而不会引起非特异 的阳 性反应。实验时间大 约为 115m in。 1. 3 ANA 检测方法 采用 间 接荧 光免 疫法。试 剂盒 来源 于 德国欧蒙公 司, 每个反应 区同时 有 2种抗 原基质: 猴 肝组织 和 H ep- 2细胞。在第一次 温育时, 已 稀释 的血清 与固 定在载 片 反应区上生物薄 片中 的 H ep- 2 细胞 和灵 长类 肝脏 反 应。如 果标本阳性 , 特异性 IgA、IgG 和 IgM 抗体与相应抗原结 合。在 第二次温育 时, 结合的抗 体与荧 光素标 记的抗 人抗体 反应, 然 后在荧光显 微镜下观察特异性的荧光模型。 1. 4 抗 ENA 等抗 体、ANA 的 检测和 结果 的对比 采用 双盲 方 法。 2 结果 2. 1 251例抗 ENA 等抗 体 ( nRN P /Sm、Sm、SS - A、R o- 52、SS - B、Sc l- 70、PM - Sc、l Jo - 1、着丝点 蛋白 B、PCNA、dsDNA、核 小体、组蛋白、核糖体 P 蛋白、AMA - M 2)阳性病 例中 ANA 具 体核型见表 1。 2. 2 251例抗 ENA 等抗体阳 性病例 与其 ANA 各种 核型统 计 见表 2。
nom a screen ing resu lts of a population- based study conducted in a re g ion of costa R ica w ith a h igh inciden ce of cervical carcin om a[ J] . Can cer, 1999, 48~ 5, 87 ~ 89. [ 4] A n jal iL inaye, et a.l Com parative analys is of conven t ional Papan icolaou tests and a f lu id - based th in - layer m eth od A rch Pathol Lab M ed, 2003, 127( 2 ) : 200~ 204. [ 5] 顾美皎. TBS 系统中异常上皮细胞的诊断和处理 [ J] . 中国妇产科 杂志, 2003, 19 ( 8) : 466 ~ 467.
收稿日期: 2008- 01- 19
[ 临床医学 ]
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免疫印迹法与间接免疫荧光法检测抗核抗体对照分析
张铁汉, 赵永新, 郑辉, 王伟娟
摘要: 目的 探讨欧蒙免疫印迹法不 同项目阳性与间接免疫荧光法检测抗核抗 体 ( ANA ) 不同核 型的相关性。 方法 对比分析 251例欧 蒙印迹法不同项目阳性病例的抗体谱 类型与其 ANA 阳性核 型。 结果 欧蒙印 迹法抗 体 类型不同, ANA 荧光核型有很大差别, 规律不明显。 结论 依据荧光核型来推断抗 ENA 等抗体不可靠。
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间 接 免 疫 荧 光 法 检 测 抗 核 抗 体 ( A ntinuc lear antibody, ANA )和欧蒙印迹法检测 抗可提取性 核抗原 ( Ex tractab le nucle a r antigen, ENA ) 等自身抗体, 是目前风湿病 主要检测方 法。间 接免疫荧光法检测 ANA 主要 用于筛 查, 而 欧蒙 印迹 法检测 抗 ENA 等 抗体对于风湿病的诊断和鉴别 诊断意义 重大。我们 对 2005~ 2007年 我院血清库收集的部 分病例 的间接免 疫荧光 法 检测抗核抗 体 ( A ntinuc lear antibody, ANA ) 和 免疫 印迹 法检 测 抗可提取性核抗原 ( Ex tractab le nuclear antigen, ENA ) 等自身 抗 体检测结果进行对照 分析, 探讨欧蒙印迹法与间接免疫荧 光法 检测抗核抗体相关性 。报告如 下。 1 资料与方法 1. 1 标本来源 251份标本均来源于 2005~ 2007年本 院血清 库收集的新乡市 多家 医院 送检的 自身 免疫 性疾 病 患者 (其 中 系统性红斑 狼 疮 85例, 干燥 综 合征 89例, 系统 性 硬化 症 15 例, 混合结缔组织病 40例, 原发性胆汁型肝硬化 20 例, 原 发性 多肌炎 2例 ) , 所有患者均符合 1982年美国风湿病协会诊 断标 准。 1. 2 抗 ENA 等抗体 的检测 采 用欧 蒙印迹 法。检 测试剂 盒 购自德国欧蒙公 司。欧 蒙印 迹法 ANA 谱 3, 可检 测针 对如 下 15种抗原的抗体: nRNP /Sm、Sm、SS- A、R o - 52、SS - B、Sc l70、PM - Sc、l Jo- 1、着丝点蛋白 B、PCNA、dsDNA、核 小体、组蛋 白、核糖体 P蛋 白、AM A - M 2。膜 条上 平行 包被 了经 亲和 层 析纯化的天然抗原 (着丝点蛋白 B、PM - Sc、l R o - 52、PCNA 为 重组抗原 )。在第一次温育 时, 经 1: 100稀释的 患者 标本与 膜 条上的抗原反应。如 果标本 阳性, 特异性 的 IgG 抗 体 ( 也包 括 IgA 和 IgM )将与抗原结合。为检测已结合的抗体, 加入 酶标抗 人 IgG (酶结合物 )进行第二次温育, 然后加入色 原底物液 以产 生颜色反应。肉眼判 断结果, 各抗 原带的 位置固 定, 结果判 断 比免疫印迹法更简 单。膜条上 质控带 着色表 明实验 各步操 作 正确。阴、阳性结果容易区 分, 抗 原带着 色的深 浅与 相应抗 体
A SC- U S可能与炎症刺激、IUD 或制片不 良有关 ( 3~ 6个 月后复查 ), 也可能与 CIN 或癌有 关, 还 可能包 括不典 型化生、 修复、角化不良及萎缩 性细 胞改变。 值得注 意的 是, ASC - U S 在某些实验室里颇似 垃圾桶 , 凡诊断 不清者 统统置 入其中。 就其规范而言, 在运转良好的 实验室, A SC - U S在正 常人群 涂 片中不超过 3% ~ 5% 。本研 究结 果为 4. 23% , 可达 到细胞 学 试验室的质量控制要求。但是, 目前我国尚缺少细胞学质 控的 严格标准, 应尽快制定针 对细胞 学实验室 和人员 的质控 标准, 以促进细胞学水平 的提 高。同时, 近 年来关 于 HPV 是宫颈 癌 的主要生物学 病因的 报道 很多, 故应 进一 步研 究 A SC 病变 的 患者其 HPV 的表达情况及其相关性。
Ab stract: O b ject ive To investiga te the co rre lation o f positive types of ANA Profile 3 EUROL IN and the ir patte rns of the an tinuclear an tibod ies( ANA ) by IIF in hum an se rum. M e thods Indirect immuno fluo rescence ( IIF ) ( by HEP - 2 ce lls and prim ate liver as an tigen substrates) and ANA Profile 3 EUROL IN antinuc lear antibodies were used to ana lyze 251 pa tterns of the ANA and the ir an tibody types respective ly. R esults There no obv ious re lationship be tw een positive types of ANA P rofile 3 EU ROL IN antibod ies and their patterns of the ANA by IIF in hum an serum w as obse rved. Conclusion T he pat terns of ANA by IIF cannot be used to conc lude the types of ANA Profile 3 EU ROL IN.
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CH INA TROPICA L M ED IC IN E V ol 8 N o 4 A p ril 2008 中国热带医学 2008 年第 8卷第 4期
Fra Baidu bibliotek
5% ~ 17% 患者 经活检证实是宫颈上皮 内瘤变 ( C IN ) 、 ; 若 为 C IN 、 , 则 24% ~ 94% 证实为 ASC - H。但 A SC 妇女 的 浸润 性宫 颈癌 危 险很 低, 约 为 0. 1% ~ 0. 2% 。 本研 究 显示, A SC- U S 和 A SC - H 的 诊 断 分 别 占 A SC 病 变 的 约 90% 和 10% , 其中 ASC - H 组 所占比 例少, 但 40 例 A SC - H 患 者中, CIN 、 的病例 14例, 占 35% ; 而 417例 A SC- US 组患者中, CIN 级以上的病例仅 34例, 占 8. 15% , 可见 ASC - H 患者 中 CIN 以上级别病变的比 例明 显高于 A SC- U S 组, 且 经 2 检 验, 两组对应的组织病理学诊 断分级之 间有统 计学意 义 ( 2 = 59. 17, P < 0. 01) 。可见及时 发现 ASC 病变 并进行 A SC分 级 是十分必要的, 有利于我们对于不同病变级别和具体病变 情况 给于不同的处理措施 。
进行宫颈细胞涂片普查可早 期发现宫颈病 变, 是降 低宫颈 癌发生率的有效措施. 宫颈病变筛查方法有多种, 细胞学涂片法
是简便经济有效的 方法. LCT 是对原细 胞涂片技 术的改进。随 着 FDA 批准 LCT 应用于临床, 其在国外应用已相当广泛。本研 究结果显示, LCT 提高了宫颈早期病变的检出率, 有利于宫颈疾 病的早期诊断和治疗, 降低了宫颈癌的 发生率。阴道镜 检查可 观察宫颈上皮及血管的微小变 化, 有针对性 地进行活组 织病理 检查, 是诊断早期宫颈癌及癌前病变的重要检查手段之一, 而组 织学诊断是 宫颈 病变 诊断 的金 标准, 故应 广 泛推 广细 胞学 检 查 阴道镜下活检 病理学 检查 的宫颈 疾病 三阶梯 式诊 断程 序。
参考文献:
[ 1] H erbest A L. The B ethesda system for report ing cervical/ vagin al cyto logical d iagnoses[ J]. C l in Ob stet G yn eco,l 1992, 35( 1) : 22~ 27.
关键词: 抗核抗体; 抗可提取性核抗原; 自身抗体; 免疫印迹 中图分类号: R 593. 2 文献标识码: B 文章 编号: 1009- 9727( 2008) 4- 568- 03
Com par ison of detection of serum an tinu clear an tibody w ith imm unob lotting and ind irect immunofluorescence ( IIF) . ZHANG T ie- han, ZHAO Y ong- x in, ZHENG H u,i et a.l ( T hird A ffiliated H osp ital of X inx iang M ed ica l College, X inx iang 453003, H enan, P. R. Ch ina)
K ey w ords: A ntinuclear A ntibodies; Extractab le nuc lear antigen; A utoantibodies; immuoblotting
*作者单位: 新乡医学院第三附属医院检验科, 河南 新乡 453003.
中国热带医学 2008年第 8卷第 4 期 CH INA TRO PICAL M ED ICIN E V o l 8 N o 4 A pril 2008
的滴度相关。因所用抗原纯度 高, 大多数抗原是经亲和层 析分 离纯化的。膜条上不含多余的 蛋白, 因而不会引起非特异 的阳 性反应。实验时间大 约为 115m in。 1. 3 ANA 检测方法 采用 间 接荧 光免 疫法。试 剂盒 来源 于 德国欧蒙公 司, 每个反应 区同时 有 2种抗 原基质: 猴 肝组织 和 H ep- 2细胞。在第一次 温育时, 已 稀释 的血清 与固 定在载 片 反应区上生物薄 片中 的 H ep- 2 细胞 和灵 长类 肝脏 反 应。如 果标本阳性 , 特异性 IgA、IgG 和 IgM 抗体与相应抗原结 合。在 第二次温育 时, 结合的抗 体与荧 光素标 记的抗 人抗体 反应, 然 后在荧光显 微镜下观察特异性的荧光模型。 1. 4 抗 ENA 等抗 体、ANA 的 检测和 结果 的对比 采用 双盲 方 法。 2 结果 2. 1 251例抗 ENA 等抗 体 ( nRN P /Sm、Sm、SS - A、R o- 52、SS - B、Sc l- 70、PM - Sc、l Jo - 1、着丝点 蛋白 B、PCNA、dsDNA、核 小体、组蛋白、核糖体 P 蛋白、AMA - M 2)阳性病 例中 ANA 具 体核型见表 1。 2. 2 251例抗 ENA 等抗体阳 性病例 与其 ANA 各种 核型统 计 见表 2。