血凝抑制试验

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血凝及血凝抑制试验的应用

血凝及血凝抑制试验的应用

血凝及血凝抑制试验的应用血凝现象是指血液由流动的液体状态变成不能流动的凝胶状态的过程。

这种现象在医学领域具有重要意义,可用于血液凝固机制的研究、血液疾病和血栓性疾病的检测和诊断等。

而血凝抑制试验则是一种通过检测血凝因子的抗凝活性,评估血液抗凝系统功能的一种方法。

血凝现象在医学中应用广泛。

血凝机制的研究可以帮助人们更好地了解血液凝固的生理过程,从而对止血和血栓性疾病的发病机制有更深入的认识。

血凝检测在医学诊断中具有重要价值,例如在手术前对患者的凝血功能进行评估,以避免手术中大出血的风险。

血液疾病如凝血障碍、血小板减少等以及血栓性疾病如心肌梗死、脑血栓等均可通过血凝检测进行诊断和病情监测。

血凝抑制试验是一种检测血凝因子抗凝活性的方法。

该方法的基本原理是当血液中存在某种物质(如抗体)时,会抑制血凝因子的活性,从而阻止血液凝固。

通过检测这种物质的含量,可以评估血液抗凝系统的功能。

血凝抑制试验在临床上应用广泛,可用于检测和诊断各种凝血性疾病和免疫系统疾病,如血友病、系统性红斑狼疮等。

血凝及血凝抑制试验在医学领域中具有广泛的应用价值。

对于医生来说,了解血凝现象和血凝抑制试验的原理和应用,可以更准确地诊断和治疗各种血液疾病和血栓性疾病。

随着科学技术的不断发展,血凝检测技术和方法的不断完善和提高,其在医学领域的应用也将越来越广泛和重要。

本文将探讨定向遗忘中提取抑制的机制,并分析其成功提取引起抑制的案例。

简要介绍定向遗忘和提取抑制的概念,然后介绍基础知识点,包括抑制遗忘和提取抑制的作用。

接下来,详细介绍定向遗忘中提取抑制的机制,最后分析一个实际案例,阐述该机制的成功应用。

当我们遇到一个新概念或事物时,通常需要对其进行记忆。

然而,记忆并不总是准确无误的,有时甚至会遗忘某些信息。

定向遗忘便是一种有目的地遗忘特定信息的记忆过程。

与此当我们试图回忆某些信息时,也会受到抑制的影响,导致信息无法成功提取。

提取抑制是一种自我保护机制,可以避免不必要的回忆,从而减轻大脑的负担。

血凝抑制试验测抗原的原理

血凝抑制试验测抗原的原理

血凝抑制试验测抗原的原理血凝抑制试验是一种用于测定血液中抗原的方法,主要用于诊断某些感染性疾病或免疫疾病。

该试验的原理是通过检测抗原与抗体结合的能力来判断血液中的抗原含量。

血凝抑制试验的操作步骤如下:1. 准备实验物质:包括抗原溶液和抗体溶液。

抗原溶液可以是疾病相关的细菌、病毒等微生物抗原,抗体溶液则是能与抗原特异结合的抗体。

2. 加入抗凝剂:将新鲜的全血加入抗凝剂,防止血液凝固。

3. 分离血细胞和血清:通过离心等方法将血液分离成血细胞层和血清层。

4. 制备稀释物:将抗原制备成一系列不同浓度的稀释物,以便检测抗体与抗原结合的最佳条件。

5. 反应抗原与抗体:将不同浓度的抗原稀释物分别与包含抗体的血清混合。

6. 观察反应:将反应混合物孵育一段时间后,观察有无凝结物的形成。

若凝结物形成较少或没有形成,则说明抗体与抗原结合,抗原含量较高;若凝结物形成较多,则说明抗体与抗原结合能力较弱,抗原含量较低。

7. 结果分析:根据凝结物的形成情况,可以定量分析血液中的抗原含量。

若血液中凝结物的形成较少,则说明抗体对抗原的结合能力较强,抗原含量较高;若血液中凝结物的形成较多,则说明抗体对抗原的结合能力较弱,抗原含量较低。

血凝抑制试验基于抗原与抗体的特异性结合原理。

当抗原与抗体相互结合时,会发生凝结反应,形成受体-抗原复合物。

凝结反应的原理是抗体与抗原结合后,抗原在血液中形成一种聚集结构,从而导致血液中的凝集物形成。

血凝抑制试验通过加入已知浓度的抗体制剂来观察对应抗原稀释物中凝结物的形成情况,以评估血液中的抗原含量。

当抗原含量较高时,抗体与抗原结合较多,凝结物形成较少;当抗原含量较低时,抗体与抗原结合较少,凝结物形成较多。

血凝抑制试验具有高度的特异性和敏感性。

它可以识别和测定血液中特定抗原的含量,从而用于诊断某些感染性疾病或免疫疾病。

同时,血凝抑制试验还可以用于研究免疫反应的机制,以及评价特定疫苗或药物的抗原活性。

总结而言,血凝抑制试验通过观察凝结物的形成情况来测定血液中特定抗原的含量。

实验四血凝和血凝抑制试验课件

实验四血凝和血凝抑制试验课件

02
实验材料
实验器材
01
02
试管
用于血样的采集、分离和反应 。
吸管
用于吸取试剂和血样。
03
离心机
用于血样的分离。
04
显微镜
用于观察血凝现象。
实验试剂
生理盐水
用于稀释血样和作为反应介质 。
抗血清
用于血凝抑制试验,针对特定 病毒或细菌。
凝血酶
促使血液凝固的酶。
抗凝剂
如肝素,防止血液凝固。
实验样本
出了抗体滴度与病毒滴度之间的关系。这一发现有助于评估抗体治疗效
果和制定抗病毒治疗方案。
05
注意事项与安全须知
实验安全须知
01
实验操作应在专业人员 的指导下进行,确保安 全。
02
实验过程中应穿戴实验 服和防护眼镜,避免意 外伤害。
03
实验器材应保持清洁, 避免交叉污染。
04
实验废弃物应按照规定 进行处理,避免对环境 和人体造成危害。
血凝抑制试验
利用抗体与相应抗原结合后,抑 制红细胞发生凝集的现象。
实验步骤
准备试剂和器材:包括抗 原、抗体、红细胞、生理 盐水等。
制备不同浓度的抗原溶液。
取适量红细胞,加入不同 浓度的抗原溶液中,观察 红细胞是否发生凝集。
记录实验结果,分析数据, 得出结论。
对于血凝抑制试验,先加 入抗体,再加入抗原溶液, 观察红细胞是否发生凝集。
实验结果
实验结果一
实验结果三
血凝试验中,不同稀释度的病毒液与 红细胞混合后,红细胞迅速凝结成块, 形成明显的血凝现象。
通过比较不同稀释度的病毒液与加入 特异性抗体后的血凝抑制情况,可以 得出抗体滴度与病毒滴度之间的关系。

病毒的血凝试验名词解释

病毒的血凝试验名词解释

病毒的血凝试验名词解释病毒的血凝试验是一种常见的检测方法,用于确定病毒感染的存在以及病毒类型的鉴定。

该试验利用了人体免疫系统对病毒的免疫反应,通过检测血浆中的凝集反应来判断病毒感染的有无。

本文将对与病毒的血凝试验相关的一些术语进行解释。

1. 血凝试验(Hemagglutination):血凝试验是一种常用的免疫学方法,通过观察红细胞的凝集反应来判断病毒的存在。

在病毒感染的情况下,病毒可以使得红细胞发生凝集现象,从而形成一种网状结构。

这种凝集反应可以帮助医生确定病毒感染的类型和程度。

2. 血凝抑制试验(Hemagglutination Inhibition Assay):血凝抑制试验是一种用于确定病毒感染的抗体的存在与否以及抗体的效力的方法。

在这个试验中,医生将不同浓度的病毒抗原加入患者血浆样本中,观察其中是否出现了病毒凝集反应。

如果患者的血浆中存在与病毒抗原相结合的特异性抗体,那么这些抗体会与病毒抗原结合,并阻止病毒与红细胞产生凝集反应。

通过检测凝集反应的程度,可以评估患者血浆中的抗体效力及抗体的浓度。

3. 血凝试验凝集效价(Hemagglutination Titer):血凝试验凝集效价是用来表示血浆中抗体浓度的方法。

凝集效价通常以最高稀释度的倒数来表示,也就是需要将血浆稀释到什么程度才能抑制病毒凝集。

凝集效价越高,表示血浆中的抗体浓度越高,对病毒的抵抗能力也就越强。

4. 血凝图谱(Hemagglutination Curve):血凝图谱是在血凝试验中绘制的一种图形,用于表示血浆稀释度与血凝反应之间的关系。

血凝图谱的横轴通常表示血浆的稀释度,纵轴表示血浆与病毒的凝集反应的程度。

通过绘制血凝图谱,可以评估不同血浆样本的抗体效力以及浓度的分布情况。

这样的图形有助于医生判断病毒感染的程度,病程的演变以及抗体的持续时间等信息。

血凝试验作为病毒感染的常用检测方法,在临床医学中扮演着重要的角色。

通过观察红细胞的凝集反应,医生可以准确判断患者是否感染了病毒,并进一步确定病毒的类型。

血凝抑制实验报告三篇

血凝抑制实验报告三篇

血凝抑制实验报告三篇实验报告一:血凝抑制药物A的实验报告摘要:本实验旨在评估血凝抑制药物A对凝血过程的影响。

通过血小板聚集检测、凝血酶时间和纤维蛋白原时间测量,我们发现药物A可有效地抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间,表明其具有明显的抗凝血作用。

引言:血凝抑制药物在医学领域具有广泛的应用,用于治疗各种凝血相关疾病。

血小板聚集、凝血酶时间和纤维蛋白原时间是评估凝血功能的重要指标。

本研究旨在探究血凝抑制药物A对这些指标的影响,为进一步研究和药物开发提供实验依据。

材料与方法:1. 实验药物:血凝抑制药物A2. 血浆样本:从健康人士收集的血浆样本3. 试剂:ADP激活剂,凝血酶试剂,纤维蛋白原试剂4. 实验仪器:光学密度计,凝血时间测定仪5. 实验组设置:将血浆样本分为对照组和药物A处理组结果:1. 血小板聚集检测:药物A处理组显示较对照组明显的血小板聚集抑制,表明药物A具有抗血小板聚集作用。

2. 凝血酶时间测量:药物A处理组凝血酶时间明显延长,表明药物A能有效延缓凝血过程。

3. 纤维蛋白原时间测量:药物A处理组纤维蛋白原时间较对照组显著增加,表明药物A可抑制纤维蛋白原合成和聚合。

讨论:本研究结果表明,血凝抑制药物A可通过抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间发挥抗凝血作用。

这些发现与前期研究相一致,进一步验证了药物A的抗凝血机制。

然而,需要进一步的研究来探究该药物的作用机制以及临床应用前景。

结论:血凝抑制药物A具有明显的抗凝血作用,可通过抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间发挥其作用。

这些发现为该药物的临床应用提供了实验基础,并为进一步相关研究提供了方向。

实验报告二:血凝抑制药物B的实验报告摘要:本实验旨在研究血凝抑制药物B对凝血通路的影响。

通过活化部分凝血活酶时间和凝血因子测定,我们发现药物B可显著延长活化部分凝血活酶时间,同时对凝血因子Xa和IIa具有明显的抑制作用。

血凝和血凝抑制实验

血凝和血凝抑制实验

实验三血凝和血凝抑制实验一、实验目的与要求掌握血凝和血凝抑制实验操作及应用二、实验内容H5亚型猪流感抗体检测与分析三、实验步骤(一)血凝(HA)试验1、用微量移液枪在微量反应板的第一排1-12孔均加入50μLPBS,换枪头;2、吸取50μL抗原,加入第一孔,反复吹打5次混匀;3、从第一孔吸取50μL加入第二孔,吹打混匀吸取50μL加入第三孔,如此稀释至第11孔,从第11孔吸取50μL丢弃,第12孔作为红细胞对照;4、各孔均加入50μL0.5%鸡红细胞悬液(已充分摇匀);5、轻轻混匀,室温25℃静置20min观察结果;(二)血凝抑制(HI)试验1、血清样品处理:先加150μL胰酶溶液于300μL血清中,56℃水浴灭活30min 后冷却至室温;加900μL高碘酸钾,混合,室温孵育15min;加900μL丙三醇盐溶液,混合,室温孵育15min;加750μL生理盐水混合,4℃保存;2、根据HA试验中测定的HI抗原效价配制4单位抗原;3、在微量反应板第5-8排的2-11孔加入25μLPBS,第12孔加入50μLPBS;4、吸取50μL血清(编号为2-4血清、阳性血清、编号为1-4血清、阴性血清)加入第1孔,混匀后吸取25μL于第二孔,混匀后吸25μL于第三孔,依次稀释至第11孔,第11孔混匀后弃去25μL;5、各排前11孔均加入4单位抗原25μL,第12孔作为红细胞对照,室温下25℃静置30min;6、各孔均加入50μL0.5%的鸡红细胞悬液混匀,轻轻摇匀,室温下25℃静置30min。

四、实验结果及分析血凝(HA)试验,从第三个孔开始显示“滴泪”第一排为阳性对照第二排为阴性对照第三排,血清5-6第四排,血清6-6参考文献[1]GB/T 27535-2011,猪流感HI抗体检测方法[S].。

血凝与血凝抑制试验

血凝与血凝抑制试验

• 2、试验原理
三、血凝抑制试验(HI)
:病毒优先与血清中的抗体结合,然后才与红细胞结合
三、血凝抑制试验(HI)
结果判定:第二排为抗原对照,红细胞应全部凝集,第三排为红细胞对照,红细胞应 全部沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价 ,用2n表示。通常能使4个凝集单位病毒凝集红细胞的作用完全被抑制的血清最高稀 释倍数,称为抗体的血凝抑制价(HI效价)。只有阴性对照孔血清滴度不大于21g2, 阳性对照孔血清误差不超过1个滴度,试验结果才有效
四、注意事项
• 1、1%红细胞配制 • 2、四单位配制 • 3、样品稀释操作过程
欢迎各位提出宝贵意见!
Thank You!
血凝及血凝抑制试验 2012 年
目录
1 2 3 4 试验材料 血凝实验 血凝抑制试验 注意事项
一、试验试剂
血清抗体
病毒抗原
1%红血球
PBS
一、试验材料
V形板/血凝板
振荡器 移液枪
二、血凝试验(HA)
• 1、试验目的


检பைடு நூலகம்病毒抗原血凝效价
许多病毒表面具血凝素,具有凝集某些动物或 人红细胞的特性,称为血凝现象,可用于鉴定病 毒。
• 2、试验原理
二、血凝试验(HA)
二、血凝试验(HA)
结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,以试验排中能使等量红细胞发生 完全凝集的病毒最高稀释倍数,作为病毒的血凝价,即HI效价,用2n表示。
三、血凝抑制试验(HI)
• 1、试验目的


检测血清抗体效价
血凝现象可以被特异性抗体所抑制,称 为血凝抑制现象,利用这种特性可进行血 清学试验,称为血凝抑制试验。

血凝血抑实验操作方法

血凝血抑实验操作方法

血凝血抑实验操作方法
血凝血抑实验是用于检测血液中凝血系统的功能活性以及血管壁退行性变的一
种实验方法。

以下是一般的血凝血抑实验的操作方法:
1. 准备实验材料:新鲜的血液样本(采集静脉全血,使用无抗凝剂采血管),离心管,血小板计数管,玻璃片,25ml量瓶,10ml吸管,实验药物(如凝血因子和抗凝剂),计时器等。

2. 静脉全血采血:无菌条件下,采用无抗凝剂采血管从肘静脉采集血液样本。

要确保血液样本无抗凝剂,否则可能会影响实验结果。

3. 离心采血管:将静脉全血样本转移到离心管中,进行离心,用离心管分离血浆和红细胞。

4. 准备血浆:将离心后的上清液(血浆)转移到另一个离心管中,避免污染。

5. 凝血时间测定:取一份血浆加入25ml量瓶中,并在37水浴中预热。

同时,另取一份新鲜全血作为对照。

用吸管将凝血药物垂直加入含血浆的25ml量瓶中,计时器计时,观察血浆的凝固时间。

6. 凝固酶测定:将凝血酶加入血浆中,搅拌均匀后,记录酶加入后的凝固时间。

7. 抗凝物质测定:分别加入抗凝物质(如肝素)到血浆中,搅拌均匀后,记录凝固时间。

8. 结果分析:根据实验结果,可判断凝血系统的功能活性以及抗凝系统的功能活性。

较长的凝血时间可能暗示凝血系统功能较差,而较短的凝血时间可能暗示凝血系统功能较好。

需要注意的是,血凝血抑实验是一种较为复杂的实验,需要在严格的实验条件下进行,并且实验药物的使用应遵循安全操作规范。

此外,实验结果需要结合临床病史和其他检查结果进行综合判断。

血凝抑制实验报告10篇

血凝抑制实验报告10篇

血凝抑制实验报告10篇血凝抑制实验报告11 阿氏(Alsevers)液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100mL,散热溶解后调pH值至6.1,69kPa 15min高压灭菌,4℃保存备用。

(3.8%枸橼酸钠(3.8g枸橼酸钠,100ml超纯水),101 kPa,20min高压灭菌,4℃保存备用,保存期1个月)。

2 10%和1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL(3.8%枸橼酸钠),取至少2只SPF鸡(如果没有SPF鸡,可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡),采血约2~4mL,与阿氏液混合(3.8%枸橼酸钠),放入装10mL 阿氏液(生理盐水)的离心管中混匀。

2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500~1800 r/min 离心8分钟,弃上清液,沉淀物加入阿氏液(生理盐水),轻轻混合,再经1500~1800 r/min 离心8分钟,用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜,再重复2次以上过程后,加入阿氏液20 mL(生理盐水),轻轻混合成红细胞悬液,4℃保存备用,不超过5天。

2.3 10%鸡红细胞悬液取阿氏液保存不超过5天的红细胞,在锥形刻度离心管中离心1500~1800 r/min 8分钟,弃去上清液,准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL),加入9倍体积(mL)的生理盐水,用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。

(此步可省略,直接配制1%红细胞)2.4 1%鸡红细胞液取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL,加入9 mL生理盐水,混合均匀即可。

(根据检测血清的数量,估算一下需要的1%鸡红细胞量,可按0.3ml/每份血清)3 抗原血凝效价测定(HA试验,微量法)3.1 在微量反应板的1孔~12孔均加入25μl PBS(生理盐水),换滴头。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔,混匀。

3.3从第1孔吸取25μl,病毒液加入第2孔,混匀后吸取25μl加入第3孔,如此进行倍比稀释至第11孔,从第11孔吸取25μl 弃之,换滴头。

血凝抑制实验报告三篇

血凝抑制实验报告三篇

血凝抑制实验报告三篇(经典版)编制人:__________________审核人:__________________审批人:__________________编制单位:__________________编制时间:____年____月____日序言下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。

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血凝抑制实验报告

血凝抑制实验报告

血凝抑制实验报告(经典版)编制人:__________________审核人:__________________审批人:__________________编制单位:__________________编制时间:____年____月____日序言下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。

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血凝抑制试验

血凝抑制试验

血凝抑制试验
血凝抑制试验介绍:
有血凝素(HA)的病毒能凝集人或动物红细胞,称为血凝现象,血
凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验,一种测定抗原或抗体的
技术。

即加入特异性抗体或特异性抗原后,使原有的血凝反应被抑制。

血凝抑制试验正常值:
试验后的结果呈阴性。

血凝抑制试验临床意义:
异常结果:相应抗体与病毒结合后,阻止病毒表面HA与红细胞结合,常用于正粘病毒、副粘病毒及黄病毒等的辅助诊断、流行病调查,也可用于鉴定病毒型与亚型。

需要检查的人群:新生儿和孕妇者有需要,和带有相关病毒的患者,以做医疗的测定。

血凝抑制试验注意事项:
不合宜人群:无特殊要求。

检查前禁忌:禁忌暴饮暴食,和剧烈运动,一般是早晨空腹检测。

检查时要求:要注意试验时室内的温度,注意血清标本不被污染,会导致结果呈假阳性。

血凝抑制试验检查过程:
首先是从检测者取得血清标本,鉴定病毒的血抑试验,最后是血凝滴度的判定,检查过程主要是医生的操作。

血凝和血凝抑制试验原理

血凝和血凝抑制试验原理

血凝和血凝抑制试验原理血凝和血凝抑制试验是在临床实验室中常用的实验方法,用于评估血液的凝血功能以及凝血抑制机制。

这些试验的原理可以通过一篇内容生动、全面、有指导意义的文章来进行解释。

血液在我们的身体中扮演着至关重要的角色,它通过循环系统将营养和氧气输送到全身各个组织和器官。

然而,当我们遭受创伤或出血时,凝血过程的启动就变得非常重要。

血凝是一种复杂的生物学过程,其中涉及多个因子和酶的相互作用。

这些因子和酶可以被激活从而形成凝块,以阻止进一步的出血。

血凝试验通常涉及到测量血浆中特定凝血因子的活性。

其中最常用的试验是凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)。

PT测量的是血浆中凝血因子Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ和Ⅴ以及凝血酶这些物质的活性。

而APTT则测量的是凝血因子Ⅻ、Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅴ和Ⅱ以及凝血酶这些物质的活性。

通过这些测量结果,我们可以评估一个人的凝血功能是否正常。

此外,血液中还存在着一系列的凝血抑制因子。

这些抑制因子可以抑制凝血过程,从而防止血凝块的过度形成。

其中最重要的抑制因子是抗凝血酶Ⅲ、蛋白C和蛋白S。

血凝抑制试验旨在评估这些抑制因子的活性。

其中,蛋白C和蛋白S的活性主要通过测量它们在凝血过程中的抑制作用来确定。

而抗凝血酶Ⅲ的活性则通过测量它与凝血酶结合的速度来确定。

血凝和血凝抑制试验在许多临床情况下具有重要意义。

例如,在手术前的筛查中,这些试验可以帮助医生判断患者的凝血功能是否正常以及是否存在凝血异常。

它们还可以用于评估一些与凝血功能相关的遗传性疾病,例如蛋白C和蛋白S缺乏症。

此外,在抗凝治疗药物监控中,血凝和血凝抑制试验可以帮助医生确定药物的剂量和疗效。

综上所述,血凝和血凝抑制试验是评估血液凝血功能和凝血抑制机制的重要方法。

通过测量特定凝血因子和抑制因子的活性,这些试验可以帮助我们及时发现和诊断凝血异常,并指导医生提供合适的治疗措施。

对于临床实验室工作者和医生来说,了解血凝和血凝抑制试验的原理和意义是非常重要的,它们对于提高患者诊疗水平具有重要的指导意义。

血凝抑制试验流程

血凝抑制试验流程

血凝抑制试验流程一、准备工作。

做血凝抑制试验呀,就像要做一场有趣的小实验游戏,前期准备可不能马虎。

咱们得先把要用的东西都找齐咯。

需要有一些试剂,像标准的红细胞悬液,这个可重要啦,就像游戏里的关键道具一样。

然后是被检测的血清样品,这可是我们要探究的主角哦。

还有血凝素抗原,这是引发整个试验反应的小能手。

当然啦,一些移液管、微量移液器、96孔微量反应板这些工具也得备着,它们就像是小助手,帮我们完成各种操作呢。

另外呀,在开始之前,咱们要确保实验室的环境是合适的。

温度和湿度都得差不多,就像我们人待着舒服的环境一样,这样才能让试验顺顺利利的。

而且这些工具都要洗得干干净净的,不然有脏东西捣乱,试验结果可就不准啦。

二、红细胞悬液的准备。

红细胞悬液的准备可是有讲究的。

一般我们会从合适的动物身上采集红细胞,这过程得小心翼翼的,就像呵护小宝贝一样。

采集到之后呢,要进行洗涤,把杂质什么的都去掉。

这就好比给红细胞洗个澡,让它们清清爽爽地去参加试验。

洗涤的时候呀,用生理盐水反复冲洗几次,一般三次就差不多啦。

然后把红细胞配制成一定浓度的悬液,这个浓度就像是调配魔法药水一样,得按照规定来,太浓或者太淡都不行哦。

三、血清处理。

血清样品也不是直接就能用的。

我们要对它进行一些处理。

先把血清进行稀释,这就像是把一杯浓果汁兑点水一样,让它的浓度适合我们的试验。

而且在稀释的时候,要非常精确地操作移液管或者微量移液器,不能多一点也不能少一点,不然就像做饭的时候盐放多放少了,结果会很糟糕的。

有时候血清里可能会有一些干扰物质,就像调皮的小怪兽一样,我们要想办法把它们除掉。

可能会用到一些特殊的处理方法,比如说加热或者加一些试剂来中和这些干扰物质。

四、血凝素抗原的滴定。

血凝素抗原滴定也是这个试验很重要的一步呢。

我们要确定血凝素抗原的血凝效价,这就像是在给抗原这个小明星评级一样。

把血凝素抗原按照不同的稀释度分别加到反应板的孔里,然后再加入红细胞悬液。

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血凝抑制试验
1 适用范围
本标准规定了禽流感的血凝试验、血凝抑制试验。

本标准适用于禽流感抗体的检测(主要适用于血清样品)。

2 血凝试验
2.1 材料与试剂
2.1.1 器材:普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、高压灭菌器、刻度离心管、微量移液器及96孔V形微量血凝板。

2.2.2 pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)。

2.2.3 1%鸡红细胞悬液。

2.2.4 阿氏液。

2.2.5 血凝抗原、被检血清。

2.2 操作程序
A. 取96孔V形微量血凝板,用微量移液器在第1孔~第12孔加25 μL生理盐水,共滴2排。

每排的第1孔加入抗原25 μL,用微量移液器,从第1孔~第11孔对抗原作系列倍比稀释:即将第1孔的抗原与生理盐水用移液器反复吹吸3次后,吸出25 μL移至第2孔,再反复吹吸3次后,吸出25 μL移至第3孔,以此类推,直至第11孔。

从第11孔中吸出25 μL弃去,此孔抗原的最终稀释度为1:211(即11 log2)。

第12孔作为对照孔。

B. 每孔中加入25 μL生理盐水,再加入1%鸡红细胞悬液25 μL。

C. 将血凝板置于微量振荡器上500 r/min振荡1~2 min。

D.在室温18~25℃下静置20~40 min,或37 ℃静置15~20 min,或4 ℃静置60 min。

红细胞对照孔成明显的纽扣状沉到孔底时即可判定结果。

2.3 抗原血凝效价判定
A. 在反应时间内,对照孔的红细胞全部沉淀时,观察判读血凝结果。

对于使用V形孔微量血凝板进行的试验,将血凝板倾斜70°,观察沉淀于孔底的红细胞是否沿倾斜面向下呈线状流动(红细胞对照孔成明显的纽扣状沉到孔底),以出现全部凝集(红细胞无流动)的抗原最大稀释度为该抗原的血凝效价,该效价为1个血凝单位(HAU)。

3 血凝抑制试验
3.1 血清的处理
3.1.1 被检血清样品准备
被检血清,包括阳性、阴性血清,置于56 ℃水浴中30~45 min,以破坏补体及血凝抑制因子。

3.1.2 抗原准备
进行血凝抑制试验时各种抗原所用血凝单位为4个血凝单位。

以4个血凝单位抗原的配置为例:如果某抗原的血凝效价为9log2,配置4个血凝单位则进行1:27稀释(29/22=27),取生理盐水11.8 ml,加入1:10稀释的抗原1.0 ml,混合均匀即可。

3.1.3 抗原血凝效价的重测定
为了确定血凝抑制试验时使用抗原的活性,有必要对已配置的4个血凝单位抗原进行血凝效价的再测定,此项试验常与血凝抑制试验同时进行。

3.1.3.1 第1孔分别加入50 μL4个血凝单位抗原。

3.1.3.2 第2孔~第4孔各加生理盐水25 μL。

3.1.3.3 将抗原分别作系列倍比稀释至第4孔,从第4孔吸25 μL弃去。

3.1.3.4 每孔加1%鸡红细胞悬液25 μL。

3.1.3.5 将血凝板置微量振荡器上以500 r/min振荡1~2 min。

3.1.3.6 室温18~22 ℃改作20~40 min左右。

3.1.3.7 观察结果,4、2、1血凝单位孔红细胞出现完全凝集,0.5血凝单位孔红细胞出现50%凝集。

不相符,则应重新标定抗原的血凝单位,同时进行的血凝抑制试验也需重新进行。

3.2 血凝抑制试验
3.2.1 血凝板每排检测一份被检血清,设阳性血清与阴性血清对照。

3.2.2 第1孔~第12孔,每孔加入25 μL生理盐水。

3.2.3 吸取血清25 μL加入第1孔中,混匀后吸取25 μL加入第2孔中,以此类推倍比稀释到第11孔,弃去25 μL,第12孔作为空白对照。

3.2.4 第1孔~第11孔分别加入25 μL4个血凝单位抗原。

血凝板置微量振荡器上以500 r/min振荡1~2 min。

3.2.5 每孔加入1%鸡红细胞悬液25 μL,以500 r/min振荡1~2 min混匀,置室温
(18~22 ℃)静置20~40 min或4 ℃静置60 min,此时对照孔(第12孔)的红细胞已沉淀为一个圆点。

3.2.6 静置完毕,对于使用V形微量血凝板进行的试验,将血凝板倾斜70°,凡沉淀于孔底的红细胞沿倾斜面向下呈线状流动(红细胞对照孔成明显的纽扣状沉到孔底时即可判定结果)。

呈现与红细胞对照孔(第12孔)一样者为完全不凝集孔。

出现完全不凝集的血清最高稀释度为该被检血清血凝抑制效价。

结果判定
检查各种对照。

阴性血清血凝抑制滴度应≤1:4(22),阳性血清血凝抑制滴度与已知滴度不应相差一个滴度以上。

红细胞对照无血凝现象。

禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽腺病毒Ⅲ群(EDS)的血清血凝抑制效价≥1:16(24)判为阳性;鸡毒支原体、滑液囊支原体的血清血凝抑制效价≥1:64(25)判为阳性。

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