蒸发光散射问题集锦课稿

蒸发光散射技术讨论1、蒸发光检测器属于质量检测器，理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质，但对有紫外吸收的样品组份检测灵敏度比较底，重现性比较差（出厂要求重现性RSD<6%即可），现常用于检测没有紫外吸收的物质。

主要原理是，流动相及组份在蒸发室，先被雾化，流动相蒸发，组份形成气溶胶，然后进入检测室，用激光照射照射气溶胶而产生光散射，测定光散射的光强而获得信号。

组份质量（m）与散射光强（I）的关系为：lgI=b·lgm+lgkk和b是与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数。

剩下的就是一些注意事项和简单保养的问题，比如流动相中不能有盐，使用前先升温给气，再进流动相，使用完后先停流动相，后降温，最后停气，光机。

最后说明一下，使用完毕后可将流动相改为水及甲醇，调节温度及气流量冲洗蒸发室，这样可以增加使用寿命，降低噪音。

2、zzz79朋友所说“我们有一台Alltech ELSD 2000，也许是因为蒸发光散射技术本身的问题，重现性特别差。

在方法学学研究时，更是没法做。

”我想您指的重现性较差，可能是说峰面积的重现性比较差吧。

如果在每天测定中均采用随行对照品进行校对，含量的重现性还可以说得过去。

我个人认为气体的流速对峰面积的影响非常大，所以如果您使用纯净的气源，精准的气体流速控制，至少在一天内的重现性不成问题。

根据ELSD的工作原理，必须使用对数方程外标两点法进行计算。

但是，在实际应用过程中，如果对照品浓度和被测样品浓度较为接近，直接采用峰面积计算也不会有显著性的影响（尽管其不是合理的方法）。

3、比较赞成楼主的说法，ELSD很多人都说它重现性很差，其实我根据我自己的经验，重现性差一般应该是指其峰面积重现性较差（和UV比较），但其色谱条件的重现性还是比较稳定的。

至于标准曲线的做法，我曾经做过一系列的比较实验，也查询了一些资料，目前尚没有定论到底以峰面积和浓度直接做线性还是用自然对数还是以常用对数，三种方法都有。

至于我们在实验中应该如何做线性，个人认为：不必拘泥，首先用峰面积和浓度直接做线性，如果相关系数不好，再尝试用对数关系（自然对数或常用对数）。

一般都可以解决问题，不象那位同学说的方法学根本没法做，应该还是可以做的。

至于楼主所说的，对照品和供试品溶液接近时可直接用峰面积计算，我不是很认同，当很接近时，可以考虑做一个比较窄的范围做线性，你如果直接用两点法做计算的话，必须得有一些数据支持，否则文章是很难发表的，也没有说服力，很容易被人质问，至于做随行对照的问题，按正规要求，不只ELSD，其他检测器的液相也应该这样做，只是因为仪器相对的稳定性所以大家都不做，对于ELSD当然做随行对照最好，至于是否一定要做，我觉得如果是仪器一直都是你一个人在用，而且条件没有变，预热也够充分，那么不做也行，但是这只是考察了自己的一个实验而已，不敢建议大家都不做，在您自己做实验时建议你还是做随行对照的好，也好心里面有底，免得造成不好的影响，呵呵。

建议做随行对照。

谈到ELSE仪器的使用上，也有一些体会，但一时难以细细道来，主要就是雾化温度和气体流速的设置上，如果这两个参数设置合理，一般情况下都不会有什么问题，大部分的问题都是出在温度和流速设置不合理上。

基线噪音的出现也多是因为两个参数设置不合理而导致雾化器漂移管污染那就只好清洗了，也有个别人因为操作失误而导致问题的但不多见，一般仪器厂商提高的参数设置只能用来参考，实际实验时很少完全和他提供的条件一致的，多比他提供的参数稍微高些，开始设置温度建议高些，如果基线没问题再慢慢调整到最佳温度流速。

再有，就是因为ELSD为质量型检测器，所以样品的预处理就相对更重要些，尽可能地分离纯化将会使你的方法学更容易建立，太多的成分在里面容易干扰正常检测。

本人只用过ALTECH 2000，其他牌子的ELSD只是在展会上见过，遗憾。

见到一个内置工作站的ELSD 介绍，觉得不错，但没用过，不知道可有朋友用过，感觉如何？如果不错，倒可以考虑购买，呵呵4、法国的蒸发光散射检测器本人用过，Sedex-55型，Sedex-75型，都用过，也有五年多的历史了。

主要用于中药成分的含量测定，也作过麦芽糖。

感觉其重现性RSD达到3%以下没问题。

同时该品牌ELSD 采用超地温雾化技术，蒸发室温度一般低于50摄氏度，我一般用40左右，我曾经做过人参皂苷Rg1与Rb1的标准曲线几乎重合，则也充分证明其为质量型检测器，曾经做过中药注射剂的指纹图谱，在同一机器，同一牌号色谱主的情况下重现性较紫外好得多。

但更换色谱柱峰形变化较大。

ALTECH 2000本人也接触过，知道其不是同一天其样品峰面积差异相当大。

5、对于蒸发光散射检测器的分离装置，我了解也不是很多，Alltech2000采用双模式方式即在挥发性溶剂情况下，采用非分流模式；而水相或大流量情况下采用分流模式，其漂移管较短采用的是高温蒸发模式，蒸发温度90摄氏度以上，同时漂移管较短，是不锈钢材质。

Sedex-75型采用的是低温蒸发模式，由于其雾化室较大采用自然分流效果较前者好，同时其蒸发管（漂移管）长度较前者长许多，厂家工程师介绍有2m多长，且为螺旋形可以减缓漂移速度，同时其蒸发温度较低一般为40摄氏度左右，有利于被测物质形成较大结晶。

从而增加测定的准确性。

但Sedex 的管路均为玻璃材质，易破损，但我用的有5年了，中间还搬过两次家也没出什麽问题。

6、蒸发光散射检测器（ELSD）是一种通用型的检测器，其优势在于能检测无紫外吸收或紫外吸收很弱的物质，如：碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂等。

另外，在没有标准品和化合物结构参数的情况下也能检测未知化合物。

理论上，可检测挥发性低于流动相的任何样品；流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰；因此,ELSD应用比较广泛。

您说的“有些紫外检测器能检测到峰，而在蒸发光散射检测器中无法检测”情况不难理解:1、有些物质的挥发性比流动相大，进入飘移管后先于流动相而蒸发，到不了检测池，也就检测不到。

2、有些物质的含量可能很微量，而紫外吸收很强，因此在紫外检测器中可以看到色谱峰。

而在ELSD中，由于很微量的微粒或者液滴散射光的的能力有限，所以检测不到或色谱峰很弱。

7、我第一次使用蒸发光检测器，遇到一个问题跟大家请教下。

色谱条件：流动相甲醇：酸水=80：20，飘移管温度60度，气体压力25psi仪器：waters2420样品浓度3mg/ml，进样量10ul，存在问题：连续进样4次，但是峰面积一次比一次小，后来竟然有杂峰出现，而且该杂峰具有一定的规律性，具体请见附件。

请问是哪里出了问题呢？8、看了下图，没用过waters2420的，我用的是Alltech的，原理应该相通吧。

感觉上有几点地方可以注意下：1.不知道你的漂移管温度和喷雾器温度为什么那么低。

还有压力换算成流速是多少。

按气体流速2.5，80％甲醇来说，温度最少也得80度吧，喷雾器温度也低了点，容易造成污染并堵塞喷雾器的。

从你的图上看，很象这个原因。

可以适当提高温度试试。

2.样品浓度感觉高了点，虽说蒸发光灵敏度低，但和waters DAD（2996）比也差不了多少，基线不会那么杂的。

3.样品浓度低时为了提高灵敏度会采用降低温度和气体流速的办法，但你浓度很高，温度适当提高不至于有那么大影响，相反就容易堵塞喷头了。

4.以前曾遇到过一种特殊情况造成杂峰，仪器清洗，检查好久，发现是特殊原因：气体不纯。

你换瓶气试试看。

特别是气快没时特别容易产生杂峰。

9、1、飘移管温度确实有些低，设置成75度，杂峰少了很多。

气体流速也增大到30个压力，大约2.2吧2、原来的流动相是仪器混合的，改成人工混合后，杂峰就完全消失了。

峰行也漂亮了。

据说是泵不稳定看来要多积累阿10、我现在遇到一个问题让我很头痛,就是用蒸发光散射检测器测不准含量.我的样品含量总是测得比实际投料高.做回收率结果表明浓度为0.5mg/ml的回收率为220%,浓度为1.0mg/ml的回收率为150%,浓度为1.5mg/ml的回收率为130%.对照品进5ul和10ul,进10ul和20ul计算的同一个样品含量都相差很远. 我的样品的浓度都在线性(外标2点)范围内,并且基线很稳定.我怀疑是因为进样量太低了,我的样品浓度为0.5mg/ml,进样20ul, 各位大虾,麻烦帮忙想一下,到底是哪里出了错.11、进样量ELSD的检测器的检测限一般为2—5ng，由于ELSD在不同剂量段的响应曲线存在差异，尤其在较低剂量段响应曲线非线性，而且其最低检测能力较低（即最低检测限较大），所以要想取得准确的定量结果，以及提高微量组分的检测能力，进样量也是HPLC-ELSD实验条件的优化因素之一。

通常，在建立HPLC-ELSD含量测定方法时，可以在色谱柱承受限度范围内采用较高进样量，以有利于获得较好线性和减小定量分析误差。

在建立HPLC-ELSD有关物质含量测定方法时，一方面要通过色谱柱、流动相、流动相流速、载气流速、漂移管温度等多个条件的优化，以提高信噪比，另一方面也要考虑加大进样量，进一步提高有关物质或小组分的检测能力。

实验表明，进样量增大4倍，ELSD响应值漂移可减小40％。

样品浓度ELSD用于较高浓度的常量分析，流动相引起的响应漂移误差较小，在较高浓度范围，ELSD的剂量响应关系为直线，在低浓度范围，ELSD的剂量响应关系呈二项式曲线。

根据经验，样品浓度的跨度应不大于二个数量级。

首先要感谢楼上,但是我的绝对进样量已经达到10ug,比检测限高多了."进样量增大4倍，ELSD响应值漂移可减小40％。

"到底要提高到多大的量,ELSD的剂量响应关系才为直线呢?12、ELSD不要用外标两点法计算线性及含量，都应该用外标两点对数法lnA＝a＋b×lnC13、各位前辈,本人用蒸发光散色检测器时出现一个问题,请大家帮忙分析.分析同一浓度的样品,同一流动相不同的比例,漂流管\流速不变样品峰面积相差一倍,不知什么原因,可能是ELSD参数问题,另外求助漂流管温度的设置遵循的公式是什么.14、你的流动相比例变动，应该是水的比例增大蛮多吧，问题可能是水比例增大后，你原来的漂移温度无法把溶剂完全蒸干，溶剂和样品在一齐就增大了体积，当然散射的光强度就会增大，峰面积也会增大，试试提高温度或增大气流量。

15、增益值就是信号放大的倍数增益越大，峰面积就越大，当然这是相对的dalansong战友说的溶剂比例问题在ELSD中也比较常见，但我觉得是蒸发不完全，你可以试着提高漂移管温度漂移管温度的设定一般是经验值吧，不同品牌的检测器温度要求不一样，比如纯水，奥泰的需要溶剂完全气化，100摄氏度以上；而Waters的是部分气化，估计80摄氏度以上就可以了16、漂移管温度是由流动相的比例按公式计算出来的，不知道你的流动相是什么17、如果现在这个问题还没搞清楚，我告诉你原因（可能的）吧！1.流动相比例发生变化了，是不是保留时间和峰宽也发生变化了？如果是，请继续往下看；如果不是，我就不知道什么原因了~2.如果峰宽变窄意味着——单位时间内漂移管内的物质浓度变高了。