人巨细胞病毒pp65抗原检测
人巨细胞病毒pp65蛋白的研究进展
3 H MVp 6 蛋 白在治疗上的应用 目前临床药 物治疗 C p5
能限制 H MV 感染 的发展 , C 但不能 根治感 染且 有副 作用 , 人们将希望寄 托于免疫治疗 。有资料表 明[ 1特异性 细胞 5, 免疫 对 H MV感 染的控制和疾病 的恢复起决定性作 用 , C 尤 其是C D8 T细胞的杀伤作用 。 z s i Kuu hma等 ] 在异体骨髓 移植 者的研究 中发现 , 移植后外周血 中特异性C D8 T细胞 恢复的推迟与 H MV 的发病 率呈 正 比, 采用体外抗原激 C 而 活的 H CMV特异性 C +T细胞返输 . D8 也能有效地 阻止病 毒血症的 出现和疾病的发作 。 C H MVp 6 是最主要 的靶抗 p5
的诊 断 、 防 和 治 疗 是 新 近 众 多研 究 者 关 注 的 热 点 。 预 1 HC MVp 6 p 5蛋 白 的 特 性 H CMVp 6 p 5是 H MV 被 膜 C
蛋 白 , 于 病毒 的衣 壳 和其 包 膜 之 间 . 于 低 基 质 磷 酸 化 蛋 位 属 白 , 子 量 为 6 D. 病 毒 总 蛋 白 的 1 。 在 HC V 分 5k 占 5 M
HC MV 属 疱 疹 病 毒 口亚科 , 群 感 染 率 高 ( 8 ~ 人 达 O
较。结果提示 , 前两种方法的结果一 致4一0 6 9 , 巢式 r . 9 )而 P R法 的特异性较差 , C 其阳性 预测值较低4 7 ) 4 。
9 ) 0 初次感染后 . 由于宿主免疫控制 大多数为隐性 感染 , 且终身伴 随。当机体免疫 功能受损 , 伏的病毒被激 活 、 潜 增
人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒临床应用及初步评价
人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒临床应用及初步评价王述莲;邓中平;呼建民;戴立忠;黄基容;王军;艾颖娟【摘要】目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)核酸定量检测试剂(PCR‐荧光探针法)的临床使用及初步评价。
方法:用浓缩一步法试剂与煮沸法试剂对192例临床收集的样本进行HCMVDNA检测并对比其结果,同时,将两种试剂的检测结果分别与HCMV‐pp65抗原检测结果进行对比。
结果:新型人巨细胞病毒核酸检测试剂与煮沸法试剂的阳性一致性百分比98.06%,阴性一致性百分比95.51%,总一致性百分比96.88%;对6例不符样本进行测序复核,并对复核后的结果进行Kap‐pa检验一致性分析,结果Kappa值=1.000,表明新型试剂的检测结果与煮沸法试剂及复核检测的结果具有很好的一致性。
在与HCMV‐pp5抗原检测结果的对比中,两种试剂均表现出较好的准确性。
结论:人巨细胞病毒核酸检测试剂与煮沸法试剂检测结果具有很好一致性,操作简单快速,减少污染环节,并具有内标控制假阴性,结果准确,符合临床检测要求,具有较高的应用价值。
%Objective:The goal of this study is to evaluate the clinical application of a new Human Cyto‐megalovirus DNA Diagnostic Kit (refer to as concentrated one‐step method hereafter) .Methods:A total of 192 clinical specimens were detected by concentrated one‐step method and another kind of fluorescence diagnostic kit u‐sing boiling method ,The results were analyzed a nd compared .Simultaneously ,HCMV‐pp65 antigenemia test re‐sults of these 192 specimens were gathered and compared with the results from the one step and Boiling method kits . Results :The two kits showed excellent agreement The Positive consistency was 98 .06% ,the negative consistency was 95 .51% and the total consistency was 96 .88% ;6 cases ofdiscrepant samples were sequenced review ,then the results were performed with the Kappa consistency analysis ,The value ofKappa=1 .000 ,showed good consistency between the two methods .In addition ,compared with HCMV‐pp65 antigenemia test results ,the two reagents both showed good accuracy .Conclusion :The one step method showed good consistency compared with the conventional boiling method ,In this method ,the nucleic acid targets extracted by lysis buffer all went into the PCR reaction .This avoids laboratory contaminations which occur often during routine DNA extraction process .And the PCR detection system uses an internal positive control (internal control) to avoid a false negative result .With a simple procedure , precise results ,this new diagnostic kit is suitable for routine clinical lab usage .【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2014(000)011【总页数】3页(P1542-1544)【关键词】巨细胞病毒感染;脱氧核糖酸酶类/分析;荧光免疫测定;聚合酶链式反应;试剂盒,诊断;煮沸法【作者】王述莲;邓中平;呼建民;戴立忠;黄基容;王军;艾颖娟【作者单位】武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;湖南圣湘生物科技有限公司【正文语种】中文【中图分类】R446人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)亦称细胞包涵体病毒,为疱疹病毒科β属的双螺旋DNA病毒,由于感染的细胞肿大,并具有巨大的核内包涵体,所以称为巨细胞病毒。
CMV-PP65抗原检测在预防肾移植术后巨细胞病毒感染的临床价值
体检 测术后首次 出现 阳性 的平均 时间为 8 . 7± 5 . 8周 , 两者比较 有显 著差异性 ( P< 0 . 0 5 ) 。 结论 C MV — P P 6 5抗
原 检 测 可 早 期 排 除和 预 防 肾移 植 术 后 C MV感 染 , 值 得 临床 推 广 应 用 。
关键词 : 肾移植 ; 巨细胞病毒 P P 6 5 ; 巨细胞病毒 I g M抗体
5 7 0
Me d i c a l S c i e n c e J o u na r l o f C e n t r l a S o u t h C h i n a , No v . 2 0 1 3, Vo 1 . 4 1, No . 6
文章编号 : 2 0 9 5—1 1 1 6 ( 2 0 1 3 ) 0 6— 0 5 7 0— 0 2
a l o v i r u s i n f e c t i o n a f t e r r e n a l t r a n s p l a n t a t i o n . Me t h o d s T h e C MV— P P 6 5 a n t i g e n a n d C MV— I g M a n t i b o d y o f 5 2 c a s e s w i t h r e n a l t r a n s p l a n t a t i o n r e c i p i e n t s w e r e d e t e c t e d wi t h t h e me t h o d o f i n d i r e c t i mmu n o l f u o r e s c e n c e a n d e n z y me — l i n k e d i mmu n e c a p t u r e . Re s u l t s A mo n g t h e 5 2 c a s e s o f k i d n e y t r a n s p l a n t , 2 5 c a s e s w e r e t e s t e d p o s i t i v e wi t h CMV— P P 6 5 a n t i g e n, 1 7 c a — s e s we r e t e s t e d p o s i t i v e wi t h C MV— I g M a n t i b o d y . Al l p a t i e n t s we r e f o l l o we d u p f o r 3~6 mo n t h s , C MV o c c u r r e d i n 1 5 c a s e s , a n d t h e i r CMV— P P 6 5 a n t i g e n we r e d e t e c t e d p o s i t i v e , t h e d e t e c t i o n s e n s i t i v i t y nd a n e g a t i v e p r e d i c t i v e v a l u e o f C MV- P P 6 5 a n - t i g e n d e t e c t i o n we r e h i g h e r t h n a t h a t o f C MV— I g M a n t i b o d y d e t e c t i o n . T h e a v e r a g e l e n g t h or f t h e i f r s t p o s t s u r g i e l a p o s i t i v e
巨细胞病毒早期抗原pp65和晚期抗原pp67-mRNA在移植术后活动性巨细胞病毒感染诊断中的价值
[ 要 】 目的 : 过 对 器 官 移 植 术 后 受者 外周 血 中 巨细 胞 病 毒 ( MV) 期 抗 原 p 6 摘 通 C 早 p 5和 晚 期抗 原 p 6 一 R A 的监 测 , 价 p 7m N 评 其对于诊断器官移植术后 C V感染、 M 发病 及 预 后 的价 值 , 临床 准 确 有 效 地 分 析 理 解检 测 结果 提 供 依 据 。方 法 : 集 2 为 收 8例 器 官移 植 受 者 E T D A抗 凝 外周 血 标 本 共 10份 , 免 疫 荧 光 技 术 ( A 检 测 其 中 C 2 用 I ) F MV 早 期 抗 原 p 6 ; 核 酸 基 础 序 列 扩 增 p5用
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生 物 技 术 通 讯 L TI S I OT CHNOL E ' N BI E ER OGY V 11 N . r 0 8 o.9 o2 Ma . 0 ,2
2l 3
文章编号: 0-02 08 201 0 1 900( 0) -23 4 0 2 0 -
研 究 报 告
巨细胞病毒早期抗原 p 6 p 5和晚期抗原 p6 一 N p7 mR A在移 植术后活动 性 巨细胞病毒感染诊断 中的价值
肖漓 , 石炳 毅 , 明 , 叶勇 , 文强 , 蔡 钱 周 白剑
解 放 军 总 医 院 第二 附属 医 院全 军 器官 移 植 中心 研 究 室 , 北京 10 9 00 1
病 毒 潜 伏 期 间 , 试 者 工 作 特 征 ( OC 曲 线 下 面 积 ( U )p 5为 09 4 ,p 7 mR A 为 06 1 , p 6 受 R ) A Cp6 . 2p6- N 5 . 1 即 p 5检 测 的 灵 敏 度 和 6
特 异性 高于 p 6 - R A; 在 出现 临床 症 状 并 治 疗后 期 ,p 5的 A C为 08 0 p 6 一 R A 为 09 3 ,p 7 mR A 的 灵 p7 m N 而 p6 U . 0,p 7 m N 3 . 2p6一 N 2
新生儿人巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展
新生儿人巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展作者:王帅来源:《中国当代医药》2012年第29期[摘要] 新生儿巨细胞病毒性疾病是一种新生儿常见疾病,因其发病隐匿,故临床上以实验室检测为诊断疾病的关键。
本文综述了实验室常用的检测方法,比较了各种检测方法的利弊及临床的应用状况和前景,为医生合理地诊断新生儿巨细胞病毒性疾病提供参考。
[关键词] 巨细胞病毒感染;新生儿;pp65抗原血症;研究进展[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)10(b)-0017-02新生儿巨细胞病毒性疾病是由人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染所引起的一种疾病,新生儿因免疫系统尚未发育完全,机体抵抗HCMV的入侵能力极弱,很容易形成HCMV活动性感染。
2004年的统计学研究报道,新生儿的HCMV平均感染率接近10%,病死率接近20%;其余感染患儿可出现中枢神经系统损害、颅骨发育畸形、发育迟缓等症状[1-3]。
因HCMV感染无特异的临床症状和体征,而且患儿多因免疫系统发育不完全而表现为隐性感染,故如何准确、快速、特异性地检测到早期HCMV活动性感染成为临床治疗的关键。
1 病毒分离病毒分离法一直被认为是诊断HCMV活动性感可靠性和特异性最强的方法。
利用免疫标技术检测病毒抗原可缩短病毒检测时间至24~48 h。
常采用尿样本,也可取体液和组织样本[4-5]。
该方法将尿、脐血等检测标本与人胚成纤维(HF)细胞共同孵育,在培养1~3周后,观察HF细胞有无出现致细胞病变效应。
但由于HCMV在体外生长速度缓慢,检测时间长,不能快速确诊以满足临床需要,故该法主要应用于科研[3]。
2 血清特异性抗体检测新生儿HCMV感染后可刺激人体产生体液免疫反应,因此,通过ELISA法检测血清中特异性HCMV-IgM、HCMV-IgG抗体可间接证实体内是否有HCMV感染。
其中,血清IgM抗体因发生于感染早期,故IgM抗体阳性被认为是HCMV活动性感染的指标;而血清IgG抗体阳性则表明患儿曾有HCMV感染史[6],若HCMV-IgG滴度升高4倍以上则提示有HCMV活动性感染。
PP65抗原检测在预防肾移植术后巨细胞病毒感染中的价值
[1] SZC ZE PU R A A , W E STM O R E LA N D D , V IN O G R A D O V A Y , et al. E valuation of m olecular techniques in prediction and diagnosis of cytom egalovirus disease in im m unocom prom ised patients [J]. H ealth Technology A ssessm ent, 2006, 10(10): 6-7.
11/37) C M V - PP65 抗原阳性, 均给予更昔洛韦抗病毒治疗, 11 例患者中 3 例( 8.1% , 3/37) 发 展 成 巨 细 胞 病 毒
病 , 均 发 生 于 停 用 或 未 采 用 更 昔 洛 韦 时 ; 另 外 26 例 患 者( 70.3% , 26/37) PP65 抗 原 始 终 阴 性 , 随 访 3 个 月 无 巨
Hospital, Central South University, Changsha, Hunan 410011, P.R.China)
Abstr act: 【Objective】 To study the value of cytomegalovirus PP65 antigen detection in the prophylaxis and treatment of cytomegalovirus disease after renal transplantation. 【Methods】A study was conducted in 37 cases of renal allograft recipients. Patients received CMV- PP65 antigen detection regularly. 【Results】 Eleven patients (29.7%, 11/37) were CMV- PP65 antigen positive and had to receive anti- virus treatment with ganciclovir. Three pa- tients developed to CMV disease and all the 3 cases happened when ganciclovir were withdrawed. Other 26 patients (70.3%, 26/37) were CMV- PP65 antigen negative anytime and no CMV disease happened during 3 months′follow- up. 【Conclusion】Cytomegalovirus PP65 antigen detection in renal allograft recipients played an important role in the diagnosis, treatment and especially the prophylaxis of CMV disease.
监测HCMV活动性感染的一种新方法——HCMV PP65抗原血症检测
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活动性感染 的一种新方 法一 H M P 5 原血症检测 c vP6 抗
第6
监 测 HCMV 活 动 性 感 染 的 一 种 新 方 法 一 HC V P 6 M P 5抗 原 血 症 检 测
李 敏 综述 季育华 审校 ( 上海第二医科大学附属瑞金 医院检验科 , 上海 202 ) 005
据 检 出 阳染 细胞 数 来 判 断 H MV激 活 程 度 , 为 疾 C 作
病 的诊 断 以及 疗 效 的观 察 指标 H 。
整 个 检 测 包 括 3部 分 : 用 一 定 分 子 大 小 的 ① D xa s m etn(i a公 司 ) r g 分离 出 P L 并 调 整 细 胞 浓 度 MN s
但 以 后 的 大 量 研 究 结 果 证 实 该 抗 原 是 分 子 量 为 61) 5 1 的一 种 低 基 质 磷 酸 化 蛋 白即 P 6 。尽 管 能检 < P5
出 HC V P 6 M P 5抗 原 的 外 周 血 细 胞 群 比较 多 , 单 如
H MV的激活 , 时 以予 抗病 毒 药 物 治疗 , 免疫 功 C 适 对
立 的 种种 方 法均 需 与此 结果 作对 照 。 13 H M P 5抗 原 血症 检 测 方 法 . C V P 6 H MV P 6 C P5
抗原 血症 检 测 法 即用 针 对 H MVP 6 C P5的单 克 隆 抗 体, 通过 免疫 酶染 技 术 或免 疫 荧 光 技 术 检 测 外 周 血
应, 即病 毒 本 身导 致 的细 胞 损 伤 和 病 毒 诱 导 的免 疫 病 理损 伤外 , 还极 易 激发 宿 主 受 损 于 细 菌 、 菌 、 真 原 虫 以及其 他 病毒 的双 重感 染 。
CMVPP65抗原检测及临床意义
• 通过动态监测CMVpp65抗原的表达水平,可以评 估病情的进展和治疗效果,指导临床治疗方案的 调整。
流行病学调查
• CMVpp65抗原检测可以用于流行病学调 查,了解CMV的感染率和流行趋势,为预 防和控制感染提供依据。
03 CMVpp65抗原检测的临 床意义
诊断CMV感染
诊断准确性
CMVpp65抗原检测能够准确快速地 检测出CMV感染,尤其在病毒血症期, 其阳性率较高,有助于早期诊断。
区分病原体
CMVpp65抗原检测可以与其他病毒 引起的疾病相区分,如EB病毒、巨细 胞病毒等。
监测治疗效果
评估抗病毒治疗
通过监测CMVpp65抗原水平,可以 评估抗病毒治疗的效果,指导临床调 整治疗方案。
监测复发
对于已经接受治疗的患者,定期监测 CMVpp65抗原有助于发现病毒复发, 及时采取干预措施。
CMVpp65抗原检测及临床意义
目 录
• 引言 • CMVpp65抗原检测方法 • CMVpp65抗原检测方法 • CMVpp65抗原检测的临床意义 • CMVpp65抗原检测的局限性 • 展望
01 引言
目的和背景
CMVpp65抗原检测在临床上的应用价值
探讨CMVpp65抗原检测在临床上的应用价值,包括其在诊断、治疗和预防CMV感染方 面的作用。
1 2
疫苗研发
研究更有效的CMV疫苗,降低感染风险和疾病 负担。
抗病毒药物
开发新的抗病毒药物,提高治疗效果和降低副作 用。
3
个体化治疗
根据患者的具体情况制定个体化的预防和治疗方 案,提高治疗效果和患者生活质量。
提高公众对CMV感染的认识和预防意识
01
02
03
骨髓巨细胞病毒晚期抗原pp65检测在动脉粥样硬化性缺血性脑血管疾病中的应用价值
病情 进 展 的 重要 原 因 。 粥 样 不 稳 定 斑 块 是 导 致 缺 血 性 脑 血 管 病的危险因素之一 , 巨细 胞 病 毒 潜 伏 感 染 再 激 活 引起 粥样 斑 块 不稳 定 , 急 性 缺 血 性 脑 血 管 事 件 有 密 切 关 系 。有 文 献 指 出 , 与 人感 染 巨 细胞 病 毒后 , 先 侵 袭 骨 髓 基 质 细 胞 和 造 血 干 细 胞 , 首
rm n离 心 7ri 心 半 径 8a 倒 掉 上 清 液 , 淀 物 加 入 少 /i n离 a m, 沉
许 T S液 , 荡 , 匀 制 成 1 5 O / 白细 胞 悬 液 , 片 , B 震 混 . ×1 L 涂 烘
干, 甲醛 固定 ( 可置 一4℃ 保存 )3 过 氧 化 氢 阻 断 内源 性 过 氧 , 化 物 酶 反 应 。一 抗 为丹 麦 DAK 公 司 生 产 的 鼠抗 人 巨 细 胞 病 0 毒 抗 原 p 6 单 克 隆抗 体 c0 cl 孵 育 4 i, B p5 1 /l , 0r n T S液 冲 洗 3 a 次 , 次 5ri; 每 n 二抗 为 上海 GeeT c itc n l yC mp n a n ehBoeh oo o a y g Lmi d 供 的羊 抗 鼠 免 疫 球 蛋 白 多 聚 体 分 子 , 育 3 n i t 提 e 孵 0mi, T S液 冲 洗 3次 , 次 5ri; B染 色 , 木 素 复 杂 , 酸 乙 B 每 n DA a 苏 盐 醇 分 化 。光 镜 下 观 察 ,p 5阳 性 细 胞 为 红 棕 色 , p6 阴性 细 胞 为 蓝 色 。 阳性 细 胞 数 大 于 1 / 0 个 50 0个 细 胞 判 为 阳性 结 果 。2 静 )
HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用价值
中国现代医药杂志2018年5月第20卷第5期 MMJC,May 2018,Vol 20,No.579DOI :10.3969/j.issn.1672-9463.2018.05.023HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用价值于锰锰 李小芹作者单位:450000 河南郑州,郑州大学附属儿童医院消化内科人巨细胞病毒(HCMV )感染为儿科常见病、多发病,属于疱疹病毒科β属,是一种具有潜伏性的双链DNA 病毒,当免疫功能发育不全或者减弱后,HCMV 原发性或者潜伏-再激活感染就会使患者表现出黄疸、肝脾肿大、咳嗽、发热及贫血等临床症状,因上述临床症状不具备特异性,因此对患者开展早期HCMV 感染活性诊断意义重大。
有文献指出,HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染中有明显价值[1]。
现选择2014年7月~2017年7月在我院就诊的疑似HCMV 感染患儿为研究对象,探讨HCMV-PP65抗原检测对其诊断价值,报道如下。
1 材料与方法1.1一般资料 选择2014年7月~2017年7月于我院就诊的疑似HCMV感染患儿为研究对象,共200例。
男116例,女84例。
年龄2.5月~5.14岁。
按照卫计委颁布的关于HCMV 感染诊断方案,最终确诊为感染者共计104例。
排除其余类型感染。
分别使用HCMV-PP65抗原检验、化学发光法、FQ-RCR 法对200例患儿进行检测。
1.2设备与试剂 化学发光仪,荧光定量PCR 仪,荧光显微镜。
HCMV-PP65抗原检验试剂盒,DNA 提取试剂盒,化学发光免疫分析试剂盒,FQ-PCR 检验试剂盒。
1.3样本收集及检测 在患儿监护人知情同意前提下,收集受试者空腹静脉血5.0ml 进行检验,均分为2份。
其中1份进行3.0ml ED-TA-K2抗凝,开展PP65检测。
样本收集完成后6h 内对PMNLs 细胞进行分离。
另取1份2.0ml 促凝,以3 000r/min 离心,分离血清和血浆。
HCMV pp65抗原血症和UL83基因检测对肾移植术后HCMV感染的诊断价值
11 1 病 例 资 料 ..
收集 2 0 0 8年 1 1月 ~2 0 0 9年 7
月在 安徽 医科 大学第 一 附属 医院及武 警安徽 省 总 队 医院定期 随访 肾移植 术后 患者 7 7例 , 中男 4 其 0例 , 女3 7例 , 龄 2 7 年 0~ 4岁 , 均 3 . 平 7 5岁 。所 有 患 者
为 1. %。其中 1 95 6例临床诊断为 H MV感染 , 中 7例为 C 其
症状性感染 , 为无症状 性感 染。 阳性 符合率 7 % , 9例 5 阴性
符合率 9 % 。H M p 5检 测 的 阳性 率 与 P R检测 的 阳 4 C V p6 C
性率 比较 ,a p 值 为 0 8 6 Kpa .2 (>0 7 ) 差 异有 显著 性 ( .5 , P< 00 )说 明两种方 法检测结 果一致 性较好 。结论 .1, 外 周血 白细胞 p6 p5抗原 血症实 验和 P R技术 的联 合应 用对 监测 C H MV活动性感染 、 C 临床疗 效及预后 更加客观 、 准确 。
术后 均用 环孢 素 A( F . 6 或 K5 )+骁 悉 +强 的松 三 0
主题 词
自由词
巨细胞病 毒 ; 巨细胞 病毒感 染/ 断 ; 诊 肾移植 ; 聚合
p6 p5抗原血症 ; L 3 因 U8 基 R6 2 R 67 R5 2 9 ; 9 . 1 9 ; 1 ; 1. 3 R 32 1
・
9 0’ 5
安徽 医科 大学学报
A t U i rtt dc aiA h i 0 1Sp 4 ( ) c nv saiMei nl n u a ei s i s 2 1 e ;6 9
HC p S抗 原 血 症 和 U 8 基 因检 测 对 MV p 6 L3 肾移植 术后 HC MV感染的诊断价值
人巨细胞病毒 pp65基因片段的原核表达及鉴定
连接 , 转化 B I 2 1 , 筛选 。 对 重 组 质 粒 进 行 诱 导 表 达 , 采用E L I S A 间接 法 鉴 定 纯 化 的 GS T/ p p 6 5融 合 蛋 白 的 抗 原 性 进 住 鉴 定 。 结 果 目的 蛋 白 经诱 导后 表 达 于上 清液 中 , 经鉴 定 目的蛋 白具 有 预 期 的 抗 原 活 性 。 结 论 关键词 : 人 巨 细胞 病 毒 ; p G E X 一 4 T 1质粒 ; 表达 ; 鉴 定
D OI : l 0 . 3 9 6 9 / j . i s s n . 1 6 7 3 — 4 1 3 0 . 2 O 1 5 . 1 6 . 0 2 2 文献 标 识 码 : A 文章编号 : 1 6 7 3 4 1 3 0 ( 2 0 1 5 ) 1 6 — 2 3 4 4 — 0 3
・
2 3 44 ・
国际检验 医学 杂志 2 0 1 5年 8 月第3 6 卷第 1 6期
I n t J I . a b Me d , A u g u s t 2 0 1 5 , Vo 1 . 3 6 , N o . 1 6
・
论
著 ・
人 巨细胞 病 毒 p p 6 5基 因片段 的原 核表 达及 鉴 定
i d e n t i f y i n g t he ex pr e s s e d Pr ot e i n. Me t ho d s Ac c o r di n g t o t he g e ne s e q ue nc e o f H CM V PP6 5 on Ge n e ba n k a n d t he ge n e s e qu e nc e
人巨细胞病毒pp65特异性抗体测定在原发感染诊断中的应用
塑 皇壁整
生 旦筮 2 鲞笫 期- J r lf ioe adn co,eIne20 ,02N . o n c bs n ftnSD【 r 07vl ,03 u aoM r Ie i eb
人 巨细 胞 病 毒 p 6 异 性 p 5特 抗 体 测 定 在 原 发 感 染 诊 断 中 的应 用
p6 GA 。尿标本常规处理后 接种 人胚 成纤 维 ( F 细胞进 行病 毒分离 , p5I I g H ) 观察 H MV特异性 细胞病变效应 (P ) 聚合酶链反 C CE ,
应 (c ) P R 试验 检测细胞培养 物 U_3 因, I 基 8 间接免疫荧光试验 检测细胞玻 片 H M C V抗原 。并将病 毒分离 结果 同血清 学方法进 行 比较 。结果 4 o例标本 中, M阳性 l 例 ,g I g 3 I G阳性 3 , 中, I 阳性 4 , 0例 其 仅 例 病毒 分离结果 亦为 阳性 , 可诊断 为原发感 染 ;0例 IG阳性 标本 中, 3 s 2种抗 体均为阳性 9例( A组 )其 中, A , 5例 I<5 %, 0 病毒 分离结果均 为阳性 , 判断 为原 发感染 ; 例 1 A 在 5 %与 6 %之间 , l 0 0 为可疑 原发感 染 , 需要进一 步鉴定 ; 例 A >6 %, 3 I 0 判断为继发感染 。I s G阳性 2 例 ( )其 中仅 3例 1 B组 , (42 %) I 0 但病毒分离结果为阴性 , 1 .9 A <5 %, 提示患者不久前 曾发生 H M C V原发感染 , 特异性 I 抗体 已经转 阴 , g M 病毒进 入潜
n i d vd y a s y a p r me I as y w ih u e rti・ e au i a e t a t o y a i t sa w e fr d. s s a hc s s p oen d n tr g n s ln w t df a o f a n y ・ n e b i s o g n ao g i a mo i c t n o h i i n e z mel k d i
CMV_PP65抗原检测及临床意义
巨细胞病毒抗原血症(CMVpp65)检测的操 作步骤(CMV BriteKit,MCA Development, The Netherlands)
• 基本原理是检测分子量65KD的基质磷蛋白 (pp65),该蛋白位于外周血白细胞的核仁内。
• 分离白细胞(EDTA-K3抗凝的静脉血2-5ml) • 细胞计数即浓度调整,3.0106/ml • 细胞离心涂片及固定。 • 染色,IIF法,第一抗体是抗CMVpp65单抗,
第二抗体是羊抗鼠免疫球蛋白荧光抗体。 • 读片及结果判断
CMVPP65阳性
CMV PP65阳性意义
• CMV活动性感染,并可在出现临床症状 前检测到。
• 做为疗效观察的指标。
CMV PP65阳性治疗
• 更昔洛韦,ganciclovir
标本的采集
• EDTA-K3抗凝的静脉血2-5ml(白细胞过 低患者,如 200个/mm3,需要采集5- 10ml抗凝的静脉血。
CMV PP65抗原检测及临床意义
巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)
• CMV是疱疹病毒家族(EB病毒,HSV-1型和2型, VZV,人类疱疹病毒6、7、8型)成员之一。系 双链DNA病毒。
• CMV感染方式包括三种,即产前(先天性的), 产时和产后感染。
• 发达国家成人C差异,中国90%以上。
• 时间:周1或周4送标本(检验科病毒室, 新楼3段2层)。
应用PP65抗原血症检测COPD患者的巨细胞病毒感染
应用PP65抗原血症检测COPD患者的巨细胞病毒感染赖异;李雯;蔡红;刘志敏【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2004(28)11【摘要】目的探讨慢性阻塞病肺疾病(COPD)患者中巨细胞病毒(CMV)感染及其临床意义.方法采用免疫过氧化物酶法测定70例COPD患者外周血白细胞HCMV-PP65抗原,同时用ELISA方法检查血清HCMV-IgG,IgM.结果 COPD组CMV-IgG 阳性率和正常对照组相比无显著差异,COPD组CMV-IgM阳性率为15.7%,CMV-PP65阳性率为20%,均显著高于对照组(P<0.05),且随着COPD病情加重,CMV-IgM及CMV-PP65抗原血症阳性率亦逐步增加.结论 (1)在COPD患者中CMV-PP65抗原血症是一个很好地反映CMV活化感染的指标.(2)在中、重度COPD患者中存在一定程度CMV活化感染,应引起重视.【总页数】2页(P986-987)【作者】赖异;李雯;蔡红;刘志敏【作者单位】贵州省人民医院干医科,贵阳,550002;华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科;贵州省人民医院干医科,贵阳,550002;贵州省人民医院干医科,贵阳,550002【正文语种】中文【中图分类】R373【相关文献】1.急性脱髓鞘脑病患者人巨细胞病毒pp65抗原血症检测的临床意义 [J], 姚建华;李芳;何俊瑛;付宝生;杨国峰;彭立威2.荧光定量PCR和外周血白细胞pp65抗原血症实验对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测 [J], 严晓敏;唐勤;陈明;孙则禹3.检测巨细胞病毒(CMV)DNA 及其即刻早期抗原、pp65和pp67在肾移植受者术后巨细胞病毒感染早期诊断中的价值 [J], 罗灿峤;莫木琼;钟觉民;吴国华;吴兴平4.PP65抗原血症检测法在发热患儿巨细胞病毒感染中的诊断价值 [J], 陆燕凤;李伟5.PP65抗原血症检测法在发热患儿巨细胞病毒感染中的诊断价值 [J], 陆燕凤; 李伟因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
HCMV(PP65)抗原血症检测在HCMV 感染疾病中的应用价值
HCMV(PP65)抗原血症检测在HCMV 感染疾病中的应用价值巩忠;李震中;何俊瑛;高玉林【期刊名称】《脑与神经疾病杂志》【年(卷),期】2005(013)001【摘要】@@ 人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染相当普遍,在我国人群中感染率高达80%~100%.一旦发生HCMV感染常终身带毒,免疫功能正常时,感染常无症状,病毒潜伏持续存在,当机体抵抗力下降时,可引起病毒激活感染,导致严重损伤和疾病.HCMV感染对宿主有两方面的负反应,除病毒本身导致的细胞损伤和病毒诱导的免疫病理损伤外,还极易激发宿主受细菌、真菌、原虫以及其它病毒的感染,从而导致双重感染,对人类健康造成极大威胁.在感染早期给予特异性的抗病毒药物治疗可显著降低HCMV疾病出现的频率和严重性,因此早期、快速、精确地诊断HCMV 激活感染十分重要.HCMVPP65抗原血症检测技术的建立和发展不仅使上述要求得以实现,而且对于监测HCMV病的发生发展及制定正确的治疗方案具有重要价值.【总页数】3页(P80-82)【作者】巩忠;李震中;何俊瑛;高玉林【作者单位】050000,石家庄,河北医科大学第二医院神经内科;050000,石家庄,河北医科大学第二医院神经内科;050000,石家庄,河北医科大学第二医院神经内科;050000,石家庄,河北医科大学第二医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R742.1【相关文献】1.监测HCMV活动性感染的一种新方法-HCMV PP65抗原血症检测 [J], 李敏;季育华2.儿童抽动-秽语综合征HCMV pp65抗原检测的临床意义 [J], 卢银平;董继华;刘朝3.HCMV(pp65)抗原血症-肝、肾移植术后巨细胞病毒感染监测的分析 [J], 王政禄;印志琪;李卉;李林;史瑞;张淑英;沈中阳4.HCMV pp65抗原血症和UL83基因检测对肾移植术后HCMV感染的诊断价值[J], 谢栋栋;林政;施浩强;吴琼;王明丽;陈磊;唐亮;廖贵益;于德新5.HCMV抗原(pp65)血症检测技术诊断活动性HCMV感染 [J], 张长品因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
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发病 5 年以上的狼疮患者既往 C T X 的用量>10 克组的发病率低于 用量<10 克组。
发病 5 年以上的狼疮患者既往 C T X 的用量>10 克组的发病率低于 用量<10 克组。 入院后是否接受激素和/ 或 CTX 冲击治疗对发病率的影响 冲击 未冲击 总计 M P M P+C T X C T X 感染 2 3 1 11 17 非感染 6 2 2 13 23 8 总计 5 16 3 24 40 P>0。05
阳性细胞数多少可以帮助判断和预测CMV症状性感染 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低,
CMV感染的危险因素
CMV感染组DRI评分大多>20 合并细菌或感染
病程长、未正规治疗的狼疮
三 PP65检测在监测血液肿瘤化疗后和 再障病人中CMV感染中的应用
发热的血液肿瘤化疗后和再障病出现CMV感染发病 率和死亡率均很高 幼稚细胞多,分化程度低,无抗病毒作用或病毒 作用很弱,可能是病毒活动性复制的更主要的原 因 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低
5
讨论 一pp65抗原血症检测 直接检测病毒蛋白的方法不受机体免疫功 能的响,在检测免疫抑制病人的CMV活动性感 染时尤其有用. 其检出率明显高于血清学方法 特点为快速(手工操作4-5小时)、敏感 性高(活动性感染80-90%,CMV病99-100%) 和较高的特异性(77-95%)、可以定量测试 用其指导治疗明显降低了死亡率
首次pp65抗原阳性细胞 计数 1 2-3 4-10 >10
发病/活动性感染 例数 1/1 5/5 5/6 2/2
由于病例数少,无法进行COX‘S比例危险性分析.
PP65在监测自身免疫病病人CMV感染中的应用
发热的自身免疫病病人出现CMV感染发病率和死亡率均 很高,CMV感染可能是重要的致病原
较之白细胞减少机体免疫状态异常和这种异常未被有效 控制,可能是病毒活动性复制的更主要的原因
GVHD(F
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用3 --治疗时间 细胞数多者和少者症状性感染的发病率是相近的
90%的症状性感染首次阳性抗原血症的PP65阳性 细胞数 <10个/1.5×10(1-7) 我们认为这组病人只要发现阳性细胞即应治疗
首次pp65抗原阳性细胞数与CMV疾病危险性
3;
( 三) 患者一般资料见表 性别 男 骨髓移植 自身免疫病 血液系统肿瘤 17 2 23 女 13 38 7 34. 1± 6. 99 45. 8± 17. 1 36. 7± 10. 2 36 40 30 年龄 X+SD 总数
试验结果
骨髓移植 病人总数 PP65 抗原阳性( % ) CM V病 CM V I gM阳性 36 16 ( 44. 4% ) 15/ 16 2/ 16
30 25 20 15 10 5 0 ALLO£ P/B AUTO-PBSCT » Õ ¼ ß × Ü Ê ý î ¶ » ¯ Ð Ô ¸ Ð È ¾ CMV² ¡
次 pp65 抗原阳性细胞数与 CM V疾病危险性 首次 pp65 抗原阳性细胞 CM V PP65 抗原阳性细胞 计数 例数 1 1/ 1 2-3 5/ 5 4-10 5/ 6 >10 2/ 2 由于病例数少,无法进行 CO X‘ S 比例危险性分析.
P<0. 01
FK 506 用药 未用药 pp65 抗原阳性 pp65 抗原阴性 合计 6 0 6 10 20 30 16 20 36 P<0. 01
使用 FK506 组 CM V 感染率明显高于未使用组。
Ç Á Ñ Ù ² ´ ¸ Ð ¾ È 6% Þ Ö Î ¢ ´ ׸ Ð ¾ È 6%
CMV² ¡ Þ Ö Î ¢ × ´ ¸ Ð È ¾ Ç Á Ñ Ù ´ ² ¸ Ð È ¾ CMV² ¡ 88%
免疫荧光染色
(四)、读片和结果判断
五、CMV 感染的分类和定义 活动性 CMV 感染的定义为血中出现 PP65 阳性白细胞,即出现抗原血症 CMV 病的定义为:抗原血症出现后 7 天之内出现下述症状者 白细胞≤3000/mm 9 血小板《75×10 /L; 单核细胞增多,异淋> 10%; 视网膜炎; CXR 示间质性肺炎和低氧血症,无其他原因解释者; 肝炎(肝功异常、肝脾肿大),无其他原因解释者; 移植物功能异常 大脑病变/神经系统异常/多神经炎 无症状感染:PP65 抗原血症阳性,无上述临床表现。
系 一例行 A l l o-PBSCT 的病人两次抗原血症与症状和 I gM的时间关 I gM 症状 1 症状 2
抗原血症 1
抗原血症 2
移植后时间 首次 pp65 抗原血症出现于移植后 59 天,2 天后出现喘憋、低氧血症,经更 昔洛韦治疗 13 天后症状消失,抗原血症转阴,此时 I gM才开始出现弱阳性,此后 I gM持续阳性。移植后 6 个月,再次出现喘憋、低氧血症,查 pp65 抗原血症转阳, 经更昔洛韦治疗 7 天后症状消失、抗原血症转阴。
自身免疫病 6 血液病 计 1 21
4 ( 67% ) 12 ( 60% )
3 周内感染 7. 7% 3 周-2 月感染 54. 8% 2 个月以上感染 38. 46%
alloPBSCT allo-BMT BMT+PBSCT AUTOPBSCT
16 14 12 10 8 6 4 2 0 » Õ ¼ ß À ý Ê ý Ð È ¸ ¾
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 ¸ ¾ Ï ú ¸ Ð È ¾ Þ Ï Î ¸ ¾ ú ¸ Ð È ¾ pp65Ñ ô Ð Ô pp65Ò õ Ð Ô
TBI 与 CM V 感染的关系 T B I 10 1 未用 T B I 3 22 计 13 23 P<0. 01
pp65 抗原阳性 pp65 抗原阴性
* 目前对器官移植后CMV病的重点是预防,包括预防性抗 病毒或针对CMV亚临床感染(Preemptive)抗病毒治疗治疗
* 早期检测活动性HCMV感染是pre-emptive治疗的 前提条件
* CMV常规病毒培养(CCC)往往需4周才能获阳性结果,对早期 诊断帮助不大 * CMV特异性抗体IgM,在严重免疫抑制患者可不出现或延迟 出现。 * 人巨细胞病毒 pp65 白细胞抗原血症较特异性抗体IgM 阳性 早出现30天1。优点是可定量检测,5小时内可出结果。
人巨细胞病毒pp65抗原检测
监测免疫抑制病人的CMV感染·
* 人巨细胞病毒(CMV)感染甚为普遍 * 人巨细胞病毒(CMV)感染是免疫功能低下者的常见机 会感染 * 器官移植后活动性HCMV感染率为20-70%,如发生CMV肺 炎,死亡率可达80-90% * CMV还有抑制机体免疫功能的作用,CMV感染可增加真菌 和其他机会感染发生率, * 还可能造成异基因移植物的损害。
自身免疫病 40 17 ( 42. 5% ) 11/ 17 1/ 17
血液病 30 8( 26. 6% ) 7/ 8 1/ 8
总计 106 41( 38. 3% ) 33( 80. 4% ) 4( 9. 75% )
治疗情况及死亡率 治疗人数 死亡 ( % ) 骨髓移植 14 2 ( 14. 2%) 1 ( 16. 6% ) 0 ( 0) 3 ( 13. 6% ) 未治疗人数 2 11 7 20 死亡( % ) 2 ( 100% ) 6 ( 50% )
pp65的特点
* CMV病毒复制的早期蛋白,它出现于病毒感染的早 期,在细胞感染后3-4小时即开始出现
* 是CMV病毒含量最丰富的蛋白 * 其功能是将病毒的DNA锚定在受感染细胞的核膜上 * 在胞浆的高尔基体内合成,然后运回核内。
CMV PP65抗原血症检测
(一)分离白细胞及制片
(二)
固定和打孔
(三)
在骨髓移植中,可在发病早期诊断,亚临床感染 的检出率偏低,应寻求更好的预测方法,或调整诊 断标准
不能检测新毒株和抗原决定簇有变异的毒株
治疗后抗原血症转阴的病人少部分会复发,应结 合更好的监控疗效的方法
一 PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的 应用1 ---早期诊断
* 骨髓移植后早期用 IGM 来诊断 CMV 感染将 贻误治疗 * pp65 抗原检测可用于早期诊断,甚至预 测发病 * 如果能在骨髓重建的早期检测到对CMV的 细胞免疫或体液免疫异常或抑制则能更准 确地预测CMV感染。
P
入院后是否接受免疫抑制剂冲击治疗对发病率无显著影响。
发病组 pp65 抗原阳性细胞数与无症状感染组阳性细胞数比较 发病 <100 >100 总计 3 5 8 无症状感染 8 1 9
5
11 6 17 P< 0. 01
发病组 pp65 抗原阳性细 胞数>100/ 1. 5x10 PM N L,无症 状感染 组阳性 细胞 数 <100/ 1. 5 x 10 PM N L。如下表
合并细菌或其他感染者CMV感染率高,感染可由 多种炎症因子触发
结论
人巨细胞病毒 pp65白细胞抗原血症检测可 作为免疫功能低下者活动性 CMV感染或HCMV疾 病的预测指标
骨髓移植后或激素冲击 / 化疗后发热患者 PP65 抗原血症出现开始抗病毒治疗可明显降 低死亡率。
CMV感染与多种临床危险因素有关
病人的百分比 A 100% B
C 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 移植后天数
A 骨髓数量重建 B 配型完全符合者 T细胞功能重建 C 配型不完全符合者 T细胞功能重建
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用 2
- 骨髓移植后CMV感染的危险因素 CD34+细胞分选
SLE 患者中 CM V 感染者和 CM V 病者的年龄构成 感染/ 发病例数 <1 年 1-5 年 >5 年
病程 感染/ 发病 感染/ 发病
发病 5 年以上的狼疮病人既往 CTX 的用量与 CM V 感染的关系如表 C T X 用量 >10 克 感染 非感染 总计 0 5 5 <10 克 7 1 8 总计 7 6 13