人巨细胞病毒pp65抗原检测

研究目的
了解 HCMVpp65 抗原检测在免疫功能低下者临床 HCMV疾病预测或早期诊断中的价值。 了解 HCMVpp65 抗原检测在监测疾病活动性和 指 导CMV““亚临床感染抗病毒”治疗中的价值。 应用 HCMVpp65 抗原检测分析免疫抑制病人 CMV 感染的危险因素
试验原理
用免疫荧光标记的单克隆抗体检测CMV的低基质磷蛋 白 pp65。
阳性细胞数多少可以帮助判断和预测CMV症状性感染 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低，
CMV感染的危险因素
CMV感染组DRI评分大多>20 合并细菌或感染
病程长、未正规治疗的狼疮
三 PP65检测在监测血液肿瘤化疗后和 再障病人中CMV感染中的应用
发热的血液肿瘤化疗后和再障病出现CMV感染发病 率和死亡率均很高 幼稚细胞多，分化程度低，无抗病毒作用或病毒 作用很弱，可能是病毒活动性复制的更主要的原 因 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低
pp65的特点
* CMV病毒复制的早期蛋白，它出现于病毒感染的早 期，在细胞感染后3－4小时即开始出现
* 是CMV病毒含量最丰富的蛋白 * 其功能是将病毒的DNA锚定在受感染细胞的核膜上 * 在胞浆的高尔基体内合成,然后运回核内。
CMV PP65抗原血症检测
（一)分离白细胞及制片
(二)
固定和打孔
(三)
计 11 25 36 接受 TBI 组的 CM V 感染发病率明显高于未接受组。
GVH D 与 CM V 感染的关系 G V H D pp65 抗原阳性 13
无G V H D 3
计 16
pp65 抗原阴性 4 16 20 计 17 19 36 发生 GVH D 组的 CM V 感染发病率明显高于未发生组。
人巨细胞病毒pp65抗原检测
监测免疫抑制病人的CMV感染·
* 人巨细胞病毒（CMV）感染甚为普遍 * 人巨细胞病毒（CMV）感染是免疫功能低下者的常见机 会感染 * 器官移植后活动性HCMV感染率为20-70%，如发生CMV肺 炎，死亡率可达80-90% * CMV还有抑制机体免疫功能的作用，CMV感染可增加真菌 和其他机会感染发生率， * 还可能造成异基因移植物的损害。
免疫荧光染色
(四)、读片和结果判断
五、CMV 感染的分类和定义 活动性 CMV 感染的定义为血中出现 PP65 阳性白细胞，即出现抗原血症 CMV 病的定义为：抗原血症出现后 7 天之内出现下述症状者 白细胞≤3000/mm 9 血小板《75×10 /L； 单核细胞增多，异淋> 10%; 视网膜炎； CXR 示间质性肺炎和低氧血症，无其他原因解释者； 肝炎（肝功异常、肝脾肿大），无其他原因解释者； 移植物功能异常 大脑病变/神经系统异常/多神经炎 无症状感染：PP65 抗原血症阳性，无上述临床表现。
自身免疫病 6 血液病 计 1 21
4 ( 67% ) 12 ( 60% )
3 周内感染 7. 7％ 3 周－2 月感染 54. 8% 2 个月以上感染 38. 46％
alloPBSCT allo-BMT BMT+PBSCT AUTOPBSCT
16 14 12 10 8 6 4 2 0 » Õ ¼ ß À ý Ê ý Ð È ¸ ¾
首次pp65抗原阳性细胞 计数 1 2－3 4－10 >10
发病/活动性感染 例数 1/1 5/5 5/百度文库 2/2
由于病例数少，无法进行COX‘S比例危险性分析.
PP65在监测自身免疫病病人CMV感染中的应用
发热的自身免疫病病人出现CMV感染发病率和死亡率均 很高，CMV感染可能是重要的致病原
较之白细胞减少机体免疫状态异常和这种异常未被有效 控制，可能是病毒活动性复制的更主要的原因
SLE 患者中 CM V 感染者和 CM V 病者的年龄构成 感染/ 发病例数 <1 年 1－5 年 >5 年
病程 感染/ 发病 感染/ 发病
发病 5 年以上的狼疮病人既往 CTX 的用量与 CM V 感染的关系如表 C T X 用量 >10 克 感染 非感染 总计 0 5 5 <10 克 7 1 8 总计 7 6 13
合并细菌或其他感染者CMV感染率高，感染可由 多种炎症因子触发
结论
人巨细胞病毒 pp65白细胞抗原血症检测可 作为免疫功能低下者活动性 CMV感染或HCMV疾 病的预测指标
骨髓移植后或激素冲击 / 化疗后发热患者 PP65 抗原血症出现开始抗病毒治疗可明显降 低死亡率。
CMV感染与多种临床危险因素有关
P<0. 01
FK 506 用药 未用药 pp65 抗原阳性 pp65 抗原阴性 合计 6 0 6 10 20 30 16 20 36 P<0. 01
使用 FK506 组 CM V 感染率明显高于未使用组。
Ç Á Ñ Ù ² ´ ¸ Ð ¾ È 6% Þ Ö Î ¢ ´ ׸ Ð ¾ È 6%
CMV² ¡ Þ Ö Î ¢ × ´ ¸ Ð È ¾ Ç Á Ñ Ù ´ ² ¸ Ð È ¾ CMV² ¡ 88%
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 ¸ ¾ Ï ú ¸ Ð È ¾ Þ Ï Î ¸ ¾ ú ¸ Ð È ¾ pp65Ñ ô Ð Ô pp65Ò õ Ð Ô
TBI 与 CM V 感染的关系 T B I 10 1 未用 T B I 3 22 计 13 23 P<0. 01
pp65 抗原阳性 pp65 抗原阴性
* 目前对器官移植后CMV病的重点是预防，包括预防性抗 病毒或针对CMV亚临床感染(Preemptive)抗病毒治疗治疗
* 早期检测活动性HCMV感染是pre-emptive治疗的 前提条件
* CMV常规病毒培养(CCC)往往需4周才能获阳性结果,对早期 诊断帮助不大 * CMV特异性抗体IgM，在严重免疫抑制患者可不出现或延迟 出现。 * 人巨细胞病毒 pp65 白细胞抗原血症较特异性抗体IgM 阳性 早出现30天1。优点是可定量检测，5小时内可出结果。
30 25 20 15 10 5 0 ALLO£ ­ P/B AUTO-PBSCT » Õ ¼ ß × Ü Ê ý î ¶ » ¯ Ð Ô ¸ Ð È ¾ CMV² ¡
次 pp65 抗原阳性细胞数与 CM V疾病危险性 首次 pp65 抗原阳性细胞 CM V PP65 抗原阳性细胞 计数 例数 1 1/ 1 2－3 5/ 5 4－10 5/ 6 >10 2/ 2 由于病例数少，无法进行 CO X‘ S 比例危险性分析.
5
讨论 一pp65抗原血症检测 直接检测病毒蛋白的方法不受机体免疫功 能的响，在检测免疫抑制病人的CMV活动性感 染时尤其有用. 其检出率明显高于血清学方法 特点为快速（手工操作4-5小时）、敏感 性高（活动性感染80-90%，CMV病99-100%） 和较高的特异性（77-95%）、可以定量测试 用其指导治疗明显降低了死亡率
系 一例行 A l l o-PBSCT 的病人两次抗原血症与症状和 I gM的时间关 I gM 症状 1 症状 2
抗原血症 1
抗原血症 2
移植后时间 首次 pp65 抗原血症出现于移植后 59 天，2 天后出现喘憋、低氧血症，经更 昔洛韦治疗 13 天后症状消失，抗原血症转阴，此时 I gM才开始出现弱阳性，此后 I gM持续阳性。移植后 6 个月，再次出现喘憋、低氧血症，查 pp65 抗原血症转阳, 经更昔洛韦治疗 7 天后症状消失、抗原血症转阴。
发病 5 年以上的狼疮患者既往 C T X 的用量>10 克组的发病率低于 用量<10 克组。
发病 5 年以上的狼疮患者既往 C T X 的用量>10 克组的发病率低于 用量<10 克组。 入院后是否接受激素和/ 或 CTX 冲击治疗对发病率的影响 冲击 未冲击 总计 M P M P＋C T X C T X 感染 2 3 1 11 17 非感染 6 2 2 13 23 8 总计 5 16 3 24 40 P>0。05
在骨髓移植中，可在发病早期诊断，亚临床感染 的检出率偏低，应寻求更好的预测方法，或调整诊 断标准
不能检测新毒株和抗原决定簇有变异的毒株
治疗后抗原血症转阴的病人少部分会复发，应结 合更好的监控疗效的方法
一 PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的 应用1 －－－早期诊断
* 骨髓移植后早期用 IGM 来诊断 CMV 感染将 贻误治疗 * pp65 抗原检测可用于早期诊断，甚至预 测发病 * 如果能在骨髓重建的早期检测到对CMV的 细胞免疫或体液免疫异常或抑制则能更准 确地预测CMV感染。
病人的百分比 A 100％ B
C 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 移植后天数
A 骨髓数量重建 B 配型完全符合者 T细胞功能重建 C 配型不完全符合者 T细胞功能重建
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用 2
－ 骨髓移植后CMV感染的危险因素 CD34＋细胞分选
3；
( 三) 患者一般资料见表 性别 男 骨髓移植 自身免疫病 血液系统肿瘤 17 2 23 女 13 38 7 34. 1± 6. 99 45. 8± 17. 1 36. 7± 10. 2 36 40 30 年龄 X＋SD 总数
试验结果
骨髓移植 病人总数 PP65 抗原阳性( % ) CM V病 CM V I gM阳性 36 16 ( 44. 4% ) 15/ 16 2/ 16
GVHD(FK506)
TBI
合并其他病原体感染
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用3 －－治疗时间 细胞数多者和少者症状性感染的发病率是相近的
90％的症状性感染首次阳性抗原血症的PP65阳性 细胞数 <10个/1.5×10（1－7） 我们认为这组病人只要发现阳性细胞即应治疗
首次pp65抗原阳性细胞数与CMV疾病危险性
P
入院后是否接受免疫抑制剂冲击治疗对发病率无显著影响。
发病组 pp65 抗原阳性细胞数与无症状感染组阳性细胞数比较 发病 <100 >100 总计 3 5 8 无症状感染 8 1 9
5
11 6 17 P< 0. 01
发病组 pp65 抗原阳性细 胞数>100/ 1. 5x10 PM N L，无症 状感染 组阳性 细胞 数 <100/ 1. 5 x 10 PM N L。如下表
自身免疫病 40 17 ( 42. 5% ) 11/ 17 1/ 17
血液病 30 8( 26. 6% ) 7/ 8 1/ 8
总计 106 41( 38. 3% ) 33( 80. 4% ) 4( 9. 75% )
治疗情况及死亡率 治疗人数 死亡 ( % ) 骨髓移植 14 2 ( 14. 2%) 1 ( 16. 6% ) 0 ( 0) 3 ( 13. 6% ) 未治疗人数 2 11 7 20 死亡( % ) 2 ( 100% ) 6 ( 50% )