western转膜条件
western转膜条件
western 转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA 转膜时间：60~90 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min 就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。
蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin & AKT 蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径：0.45 PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100 V转膜时间：60~70 min设备名字是“ Bio-Rad mini ”。
蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12 V 转膜时间：30-40 min 设备：“ Bio-Rad mini ” 建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。
蛋白来源：293T 细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95 KD & 35 KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90 V-110 V ，控制电流不要超过300 mA。
转膜时间：70 min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
20kd 转膜条件
20KD 转膜条件转膜（Western blotting）是一种用于检测特定蛋白质在凝胶电泳后是否存在于样品中的技术。
"20kD"指的是分子量约为20千道尔顿（kDa）的目标蛋白。
转膜条件需要根据实验的具体需求和所使用的膜材料来调整，以下是一些通用的转膜条件：1. 转膜时间：通常情况下，转膜时间取决于蛋白的大小和转移效率。
对于小分子量的蛋白（如20kD），转膜时间可能需要较短，比如1小时左右，以避免过度转膜导致大分子蛋白的丢失。
2. 转移电压：电压的选择通常基于实验的规模（如小规模或大型凝胶）和转膜系统。
对于小规模凝胶，常用的电压是80-100V；而对于大型凝胶，可能需要更高的电压，例如200-300V，以缩短转膜时间。
3. 转移缓冲液：最常用的转移缓冲液是含有甲醇的Tris-甘氨酸缓冲液（TGB），甲醇有助于紧密结合蛋白和膜，并提高转膜效率。
缓冲液的pH值通常为8.3。
4. 转膜膜材料：对于小分子量的蛋白质，通常推荐使用聚偏氟乙烯（PVDF）膜，因为它具有较高的亲蛋白性和较强的结合能力。
5. 转膜系统：根据实验室的设备和资源，可以使用湿式转膜系统或半干式转膜系统。
湿式转膜系统通常提供更均匀的转移效果，适合于对转膜质量要求较高的实验。
6. 转膜后处理：转膜完成后，需要使用封闭液（如5%脱脂牛奶或BSA）封闭膜上未被蛋白质占据的部位，以减少非特异性结合。
7. 检测方法：根据目标蛋白的性质选择合适的检测方法，如化学发光、荧光或酶标记等。
需要注意的是，上述条件仅供参考，实际操作中应根据实验目的和所用材料的具体特性进行优化。
例如，某些情况下可能需要在较低的电压下延长转膜时间，或者在转移缓冲液中加入SDS以提高小分子蛋白的转移效率。
此外，转膜效率也受到样品量、凝胶浓度、膜的孔径大小等因素的影响。
因此，建议进行预实验以确定最佳的转膜条件。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式【原创实用版】目录1.WB 转膜的定义和作用2.WB 转膜条件公式的构成3.如何应用 WB 转膜条件公式4.WB 转膜的常见问题和解决方法正文一、WB 转膜的定义和作用WB（Western Blot）转膜，又称为蛋白质转移，是蛋白质电泳技术中的一个重要步骤。
在 WB 实验中，将电泳分离后的蛋白质样品从聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）转移到尼龙膜（Nylon）或其他固相支持物上，以便进行进一步的检测和分析。
这一过程可以实现对蛋白质的定性和定量分析，为研究蛋白质的表达和功能提供有力依据。
二、WB 转膜条件公式的构成WB 转膜条件公式主要包括以下几个参数：1.转膜液：常用的转膜液为磷酸缓冲液（pH 7.4），能保持膜的稳定性和电荷特性。
2.转膜电压：转膜电压是驱动蛋白质从凝胶向膜转移的动力，通常选择在 50-100V 之间。
过高的电压可能导致蛋白质丢失或降解，过低的电压则可能影响转膜效率。
3.转膜时间：转膜时间取决于蛋白质的大小、电荷和转膜液的离子强度等因素。
一般来说，转膜时间越长，蛋白质转移的量越多，但也可能导致非特异性吸附增加。
通常转膜时间为 30 分钟至 2 小时不等。
4.转膜温度：转膜温度一般在 4-50 摄氏度之间选择。
温度过高可能导致蛋白质变性，影响转膜效果；温度过低则可能使转膜过程过于缓慢。
三、如何应用 WB 转膜条件公式在实际操作中，可以根据实验目的和蛋白质特性，结合转膜条件公式选择合适的转膜条件。
以下是一个简单的示例：假设我们研究的蛋白质分子量为 50kDa，带负电荷。
根据其大小和电荷特性，我们可以选择如下转膜条件：转膜液：磷酸缓冲液（pH 7.4）转膜电压：75V转膜时间：1 小时转膜温度：37 摄氏度四、WB 转膜的常见问题和解决方法在 WB 转膜过程中，可能会遇到一些问题，如蛋白质转移不充分、背景较高等。
针对这些问题，可以采取以下措施进行解决：1.提高转膜电压和时间，以增加蛋白质转移量。
操作篇：westernblot之转膜
操作篇：westernblot之转膜转膜篇1. 转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。
切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。
将切好的硝酸纤维素膜置于水上浸 2 h 才可使用。
要领：（1）用镊子捏住膜的一边轻轻置于有超纯水的平皿里，要使膜浮于水上，只有下层才与水接触。
这样由于毛细管作用可使整个膜浸湿。
若膜沉入水里，膜与水之间形成一层空气膜，这样会阻止膜吸水；（2）个人感觉其实转膜之前浸湿一下就ok 了，没有多大问题，可能按照上述操作结果会更好。
2. 在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。
3. 将夹子打开使黑的一面保持水平。
在上面垫一张海绵垫，用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。
在垫子上垫三层滤纸，一手固定滤纸一手用玻棒擀去其中的气泡。
要领：（1）「用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡」，要领：一手擀另一手要压住垫子使其不能随便移动。
（2）「在上面垫一张海绵垫」要领：可三张纸先叠在一起在垫于垫子上。
个人感觉就垫 1 张滤纸也没问题。
4. 要先将玻璃板撬掉才可剥胶，撬的时候动作要轻，要在两个边上轻轻的反复撬。
撬一会儿玻璃板便开始松动，直到撬去玻板。
除去小玻璃板后，将浓缩胶轻轻刮去（浓缩胶影响操作），要避免把分离胶刮破。
小心剥下分离胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。
将膜盖于胶上，要盖满整个胶（膜盖下后不可再移动）并除气泡。
在膜上盖3 张滤纸并除去气泡。
最后盖上另一个海绵垫，擀几下就可合起夹子。
整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。
膜两边的滤纸不能相互接触，接触后会发生短路。
要领：（1）「要在两个边上轻轻的反复撬」要领：应该边撬边用流水缓缓冲洗（2）「直到撬去玻板」要领：撬时一定要小心，胶很易裂，要用巧劲（3）转移液含甲醇，操作时要戴手套，实验室要开门以使空气流通。
（4）最后做成的「三明治」千万不能形成短路，不然有可能会短路烧坏转膜装置（价格不菲，尤其是进口的），第一次做的应请老手指教。
western转膜条件
western转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA转膜时间：60~90 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。
蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin & AKT蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径：0.45 PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100 V转膜时间：60~70 min设备名字是“Bio-Rad min i”。
蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12 V转膜时间：30-40 min设备：“Bio-Rad mini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。
蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95 KD & 35 KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。
转膜时间：70 min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：smad3蛋白分子量：54 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16 KDa and 42 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3 A。
Western快速转膜液(Powder)说明书
Western 快速转膜液(Powder)产品简介：碧云天生产的Western 快速转膜液(Powder)，即Western Rapid Transfer Buffer (Powder)，是一种粉末形态的安全无毒的用于Western 时湿法快速转膜的缓冲液。
本产品转膜快速。
使用本快速转膜液时，在400mA 恒流转膜约20-25分钟即可将聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白转移至PVDF 膜或硝酸纤维素膜(NC 膜)等印迹膜上，并且产热少，转膜效果好。
而相同的条件下使用传统的转膜液需要转膜更长时间。
本产品安全无毒害。
本产品为预混粉末(powder)，使用前需要用水和乙醇配制，但无需调节pH 值。
本产品不含有毒有害组分，也无需使用剧毒的甲醇等试剂。
本快速转膜液的转膜效果与传统转膜液一致或略优。
本快速转膜液与传统转膜液在转膜前后的效果比较请参考图1。
图1.Western快速转膜液与传统转膜液在转膜前后的对比效果图。
上图为使用本快速转膜液的效果图，下图为使用传统转膜液的效果图，转移电极芯组件中放置两个转移三明治夹进行转膜，仅用内置冰盒进行降温。
凝胶为BeyoGel™ Plus PAGE 预制胶(Hepes, 4-20%, 15孔) (P0524)，凝胶厚度为1.5mm ；蛋白分子量标准分别为彩色预染蛋白质分子量标准(10-180kD) (P0068/P0069)和BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) (P0071/P0072)，上样量为6μl ；传统的转膜液为Western 转膜液(P0021A/B)；PVDF膜为PVDF 膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.45μm) (FFP33)；转膜设备为MiniBlot™蛋白转膜系统(E6050)；转膜电源为BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)。
实际转膜效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式（原创实用版）目录1.WB 转膜的定义和目的2.WB 转膜的常用方法3.WB 转膜的条件公式4.WB 转膜的注意事项5.总结正文一、WB 转膜的定义和目的WB（Western Blot）转膜，又称为免疫印迹转膜，是一种将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）转移到固相支持物上的技术。
其主要目的是为了将电泳分离得到的蛋白质样品，转移到固相载体上，以便于进行后续的免疫学检测和分析。
二、WB 转膜的常用方法WB 转膜常用的方法有以下几种：1.湿式转膜：湿式转膜是最常用的 WB 转膜方法，其主要原理是利用电场和分子渗透作用，将蛋白质从凝胶中转移到固相载体上。
2.干式转膜：干式转膜则是通过暴露于干燥的气氛中，使得凝胶中的蛋白质与固相载体上的抗体结合，然后再进行洗涤和检测。
3.半干式转膜：半干式转膜则是湿式转膜和干式转膜的结合，一部分采用湿式转膜，一部分采用干式转膜。
三、WB 转膜的条件公式在进行 WB 转膜时，需要控制的条件包括：1.转膜缓冲液：转膜缓冲液的 pH 值、离子强度和蛋白酶抑制剂的浓度等，都会影响到蛋白质的转膜效果。
2.转膜时间：转膜时间过长或过短，都会影响到蛋白质的转膜效果。
3.转膜温度：转膜温度一般控制在 12-18℃，温度过高或过低都会影响到蛋白质的转膜效果。
4.固相载体：固相载体的选择和处理，也会影响到蛋白质的转膜效果。
四、WB 转膜的注意事项在进行 WB 转膜时，需要注意以下几点：1.保持实验操作的无菌性，以防止细菌污染。
2.选择合适的转膜时间和温度，避免过度转膜或转膜不足。
3.选择合适的固相载体，并正确处理和封闭。
4.使用高质量的转膜缓冲液，避免缓冲液中蛋白酶的干扰。
五、总结WB 转膜是蛋白质研究中常用的技术，其操作需要注意控制转膜缓冲液、转膜时间、转膜温度和固相载体等条件。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式（实用版）目录1.WB 转膜的概念2.WB 转膜的步骤3.WB 转膜条件公式的含义4.WB 转膜条件公式的计算方法5.WB 转膜的注意事项正文一、WB 转膜的概念WB（Western Blot）转膜，又称为 Western Blot 转印，是一种将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）转移到硝酸纤维素膜（NC 膜）上的实验技术。
通过 WB 转膜，可以进一步对蛋白质进行检测和分析。
二、WB 转膜的步骤WB 转膜主要分为以下几个步骤：1.制备蛋白质样品：首先需要从生物组织或细胞中提取蛋白质，并进行电泳分离。
2.制备转膜液：转膜液的主要成分是缓冲液和甲醇，可以根据需要添加其他试剂，如 Tween-20 等。
3.转膜：将电泳分离后的聚丙烯酰胺凝胶放入转膜液中，连接电源进行转膜。
4.固定和封闭：转膜完成后，将 NC 膜放入固定液中固定，然后用封闭液封闭。
5.抗体孵育：加入特异性抗体，进行孵育。
6.检测：加入二抗，进行化学发光或放射性检测。
三、WB 转膜条件公式的含义WB 转膜条件公式是指在 WB 转膜过程中，用于计算转膜时间和电流的公式。
其目的是为了使蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到硝酸纤维素膜上，并在转移过程中保持蛋白质的生物活性。
四、WB 转膜条件公式的计算方法WB 转膜条件公式的计算方法主要取决于以下几个因素：1.转膜时间：转膜时间通常根据聚丙烯酰胺凝胶的厚度和电泳分离的分子量范围来确定。
一般转膜时间为 1-2 小时。
2.电流：电流大小取决于聚丙烯酰胺凝胶的电荷量和转膜液的电阻。
通常情况下，电流为 1-2mA/cm。
3.转膜液的 pH 值：转膜液的 pH 值对蛋白质的电荷有影响，因此需要控制在适宜范围内，一般为 6.5-8.5。
4.甲醇浓度：甲醇浓度对蛋白质的溶解度有影响，一般为 20%-50%。
五、WB 转膜的注意事项1.在转膜过程中，要保持恒定的温度和湿度。
2.避免在转膜过程中剧烈震动或长时间中断电流。
western转膜条件
western转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA转膜时间：60~90 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。
蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin & AKT蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径：0.45 PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压 100 V转膜时间：60~70 min设备名字是“Bio-Rad mini”。
蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压 12 V转膜时间：30-40 min设备：“Bio-Rad mini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。
蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95 KD & 35 KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压 90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。
转膜时间：70 min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：smad3蛋白分子量：54 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16 KDa and 42 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3 A。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式摘要：一、前言二、WB 转膜条件的公式介绍1.WB 转膜条件公式背景2.公式内容3.公式意义三、WB 转膜条件公式的应用1.在实验中的应用2.在科研中的作用四、结论正文：一、前言WB（Western Blot，免疫印迹法）是一种在分子生物学中广泛应用的技术，用于检测蛋白质的表达和纯化。
在实验过程中，掌握合适的转膜条件至关重要。
WB 转膜条件公式作为一种理论依据，对实验结果有着直接影响。
本文将详细介绍WB 转膜条件公式及其应用。
二、WB 转膜条件公式介绍1.WB 转膜条件公式背景WB 转膜条件公式是基于膜的电阻抗、蛋白质的分子量和电荷等因素推导出来的。
这个公式可以帮助我们预测蛋白质在电场作用下通过聚丙烯酰胺凝胶的速率，从而为实验提供指导。
2.公式内容WB 转膜条件公式如下：R = (M * Q) / (2 * V * L)其中，R 代表电阻抗，M 代表蛋白质的分子量，Q 代表蛋白质的电荷，V 代表凝胶的电压，L 代表凝胶的厚度。
3.公式意义通过这个公式，我们可以了解到在特定条件下，不同分子量的蛋白质在电场中的迁移速率。
实验过程中，可以通过调整电压、凝胶厚度等条件，优化转膜效果。
三、WB 转膜条件公式的应用1.在实验中的应用在WB 实验过程中，转膜条件对实验结果至关重要。
通过WB 转膜条件公式，可以预测不同条件下的蛋白质迁移情况，从而选择合适的实验条件。
此外，公式还可以帮助我们分析实验结果，找出可能存在的问题。
2.在科研中的作用WB 转膜条件公式在科研中也有重要作用。
通过对公式的研究，可以加深对蛋白质转膜机制的理解，为进一步优化实验条件提供理论依据。
四、结论WB 转膜条件公式是分子生物学实验中一个重要的理论工具，能够帮助我们预测和优化实验条件。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式摘要：一、前言二、WB转膜条件的公式介绍1.WB转膜条件的含义2.公式推导过程3.公式中各参数的意义三、WB转膜条件公式的应用1.预测蛋白质分子量2.分析蛋白质翻译后修饰3.在实验设计中的应用四、WB转膜条件公式的局限性1.蛋白质结构的复杂性2.实际操作中可能存在的误差五、结论正文：一、前言Western Blot（WB）技术是生物化学和分子生物学中常用的一种实验方法，用于检测蛋白质的表达和翻译后修饰。
在WB实验中，转膜条件对实验结果具有重要影响。
本文将介绍一种WB转膜条件公式，帮助理解和优化实验条件。
二、WB转膜条件公式介绍1.WB转膜条件的含义WB转膜条件是指在实验过程中，蛋白质从凝胶电泳系统转移到固相支持物（例如聚偏氟乙烯膜）的条件。
这些条件包括电流、电压、时间等参数。
2.公式推导过程WB转膜条件公式是基于电流、电压和时间的关系推导出来的。
在实际操作中，通过改变电流、电压或时间来优化实验条件。
3.公式中各参数的意义公式中的参数包括电流（I）、电压（V）和时间（t）。
电流表示通过凝胶的电流强度，单位为安培（A）；电压表示凝胶和固相支持物之间的电势差，单位为伏特（V）；时间表示转膜过程所需的时间，单位为秒（s）。
三、WB转膜条件公式的应用1.预测蛋白质分子量通过WB转膜条件公式，可以预测蛋白质在转膜过程中的迁移率，从而预测其分子量。
这对于蛋白质的分离和鉴定具有重要意义。
2.分析蛋白质翻译后修饰WB转膜条件公式可以帮助研究者分析蛋白质翻译后修饰（如磷酸化、糖基化等）对其迁移率的影响。
这有助于深入了解蛋白质的功能和调控机制。
3.在实验设计中的应用在WB实验设计中，可以通过调整电流、电压和时间等参数来优化实验条件，从而获得更可靠的实验结果。
四、WB转膜条件公式的局限性1.蛋白质结构的复杂性WB转膜条件公式基于蛋白质的电荷和分子量进行预测，但忽略了蛋白质结构的复杂性。
因此，在实际应用中可能存在一定的误差。
western blot 大蛋白转膜条件
Western blot是一种分析蛋白质的实验技术，它通过分析蛋白质在凝胶中的迁移和捕获来检测特定蛋白质的存在和浓度。
在进行Western blot分析时，大蛋白的转膜条件是非常重要的，它直接影响着实验结果的准确性和可重复性。
1. 背景介绍西方博Lot实验作为一种重要的蛋白质分析技术，在生物科学研究中得到了广泛的应用。
Western blot通过分析蛋白质在凝胶中的迁移和捕获来检测特定蛋白质的存在和浓度。
在Western blot实验中，样品首先需要通过SDS-PAGE凝胶电泳进行分离，然后转移到膜上，最后用抗体进行特定蛋白质的检测。
而大蛋白的转膜条件对Western blot 实验的结果起着关键的作用。
2. 大蛋白大蛋白通常指的是相对分子质量较大的蛋白质，其分子量一般在100kDa以上。
这类蛋白质在Western blot实验中转膜时往往会面临一些特殊的挑战，比如易于聚合、迁移速度较慢等问题，因此需要在转膜条件中予以特别考虑。
3. 转膜条件的重要性合适的转膜条件是确保大蛋白转膜效果的关键。
只有在适当的条件下，大蛋白才能迅速而均匀地从凝胶中转移到膜上，避免出现聚合和不均匀转膜等问题，从而保证Western blot结果的准确性。
4. 转膜条件的优化为了得到最佳的转膜效果，实验者需要在转膜条件上进行一系列的优化实验。
具体来说，可以对转膜膜的种类、孔隙大小、电泳缓冲液的成分和pH值、电场强度、转膜时间等因素进行系统的优化。
另外，选择合适的转膜设备和相关试剂也是提高转膜效率的关键。
5. 转膜膜的选择转膜膜是影响大蛋白转膜效果的重要因素之一。
常用的转膜膜有聚偏氟乙烯(PVDF)膜和硝化纤维素(NC)膜。
PVDF膜具有较好的耐性和机械规整性，适用于转膜大蛋白；而NC膜则对一些亲脂性较强的蛋白质有更好的结合效果。
实验者可以根据具体实验需要选择合适的转膜膜。
6. 电泳缓冲液的优化电泳缓冲液的成分和pH值对蛋白质的迁移速度和迁移效果有直接影响。
wb 70kd转湿转条件
wb 70kd转湿转条件
在蛋白质印迹（Western Blot，简称WB）中，70KD（千道尔顿）的蛋白
质转膜至湿转膜膜上通常需要以下条件：
1. 准备转膜液：根据所使用的转膜膜的规格，准备适量的转膜液。
常用的转膜液包括硝化纤维转膜液和尼龙膜转膜液。
2. 准备凝胶和膜：将凝胶放在玻璃板中，然后将湿转膜膜与凝胶紧密接触。
确保凝胶和膜之间没有气泡。
3. 转膜：将组装好的凝胶和膜放入转膜液中，确保转膜液完全覆盖凝胶和膜。
将转膜仪设置为恒流模式，设置适当的电流和时间进行转膜。
通常情况下，70KD的蛋白质转膜时间在1-2小时之间。
4. 洗膜：转膜结束后，将膜从凝胶上剥离下来，用洗膜液清洗，以去除未转印的蛋白质。
5. 封闭和抗体孵育：将清洗后的膜用适当的封闭液封闭，然后加入一抗进行孵育。
一抗的选择应根据实验目的而定。
6. 显色和检测：孵育结束后，清洗膜并加入二抗进行孵育。
最后加入显色剂进行显色反应，并使用成像系统检测蛋白质条带。
请注意，以上仅为一般性步骤和注意事项，具体操作应根据实验需求和所用试剂盒的说明书进行。
western转膜条件
western转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA转膜时间：60~90 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。
蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin & AKT蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径：0.45 PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100 V转膜时间：60~70 min设备名字是“Bio-Rad mini”。
蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12 V转膜时间：30-40 min设备：“Bio-Rad mini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。
蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95 KD & 35 KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。
转膜时间：70 min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：smad3蛋白分子量：54 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16 KDa and 42 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3 A。
western转膜条件
western转膜条件蛋白来源：总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70KDWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400mA转膜时间：60~90minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15min 就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。
蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin&AKT蛋白分子量：65KD&56KDWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100V转膜时间：60~70min设备名字是“Bio-Radmini”。
蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65KD&55KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12V转膜时间：30-40min设备：“Bio-Radmini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。
蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95KD&35KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90V-110V，控制电流不要超过300mA。
转膜时间：70min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：smad3蛋白分子量：54KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16KDaand42KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120V恒压转膜时间：90min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72KD，42KD和22KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜，两张膜。
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式摘要：1.WB 转膜的概述2.WB 转膜的条件公式3.WB 转膜的实际应用正文：一、WB 转膜的概述WB（Western Blot）转膜是一种常用的生物技术实验方法，主要用于将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳转移到尼龙膜上。
这一过程是蛋白质研究、表达和检测的关键步骤，为后续的蛋白质鉴定和分析提供了重要的基础。
二、WB 转膜的条件公式WB 转膜的条件公式通常包括以下几个关键因素：1.转膜液：转膜液的成分和浓度对蛋白质的转移效率至关重要。
一般采用含有20% 甲醇、7% 醋酸和1%SDS 的缓冲液作为转膜液。
2.转膜时间：转膜时间与蛋白质的大小、电泳分辨率以及转膜液的浓度等因素有关。
通常情况下，转膜时间为60-90 分钟。
3.转膜温度：适宜的转膜温度有利于蛋白质的快速转移。
一般采用40-50℃的恒温箱进行转膜。
4.电压：适当的电压可以保证蛋白质在电场作用下快速转移。
通常电压设置为100-200V。
5.尼龙膜：尼龙膜的选择对蛋白质的转移效果和检测灵敏度有很大影响。
常用的尼龙膜有PVDF、硝化纤维素等。
三、WB 转膜的实际应用WB 转膜在生物科学研究中具有广泛的应用，主要包括：1.蛋白质表达水平分析：通过比较不同实验组和对照组的蛋白质转膜结果，可以评估蛋白质表达水平的差异。
2.蛋白质亚基分析：通过转膜实验可以检测蛋白质亚基的存在和相对比例。
3.蛋白质修饰分析：WB 转膜可以用于检测蛋白质的翻译后修饰，如磷酸化、糖基化等。
4.蛋白质互作研究：通过转膜实验可以筛选与目标蛋白质相互作用的蛋白质。
总之，WB 转膜作为蛋白质研究中的关键技术手段，其条件公式的掌握对于实验的成功与否至关重要。
WB快速转膜液的使用方法及步骤
WB快速转膜液的使用方法及步骤WB（Western blot）快速转膜液主要用于Western blot实验中的蛋白电泳转膜步骤，下面是其详细的使用方法及步骤：一、实验前准备：1.将WB快速转膜液从-20℃冷冻保存条件迅速转移到4℃冷藏保存条件下，使其溶解均匀，放置2小时。
2.取出所需的PVDF或NC膜，并用TBST缓冲液浸泡20分钟，去除其中的有机溶剂。
二、电泳结束后进行转膜：1.关闭电泳仪电源，在电泳槽中小心取出胶片和蛋白质凝胶。
2.使用无菌镊子或无菌手套，将蛋白质凝胶上胶及下胶用纸快速剥离，并在电泳槽中洗净。
3.高分子量蛋白质在脱胶缓冲液中洗2次，10分钟/次；低分子量蛋白质在脱胶缓冲液中洗1次，10分钟。
4.将含有蛋白质的凝胶快速转移到已浸泡在TBST缓冲液中的PVDF（或NC）膜上。
5.如有需要，先用标尺切割PVDF（或NC）膜，使其与凝胶大小相匹配。
三、转膜条件：1.将蛋白质凝胶和膜夹在两片不含泡沫的海绵之间，并同时将其与孔板或纸张夹在一起。
2.通过应用约100V的恒定电流进行转膜。
用正极连接电源端口上的红色插孔，负极连接黑色插孔。
3.根据样品大小和此前实验数据，预计转膜时间一般为1-2小时。
如果处理过的样品非常大，转膜时间可能需要延长。
四、将洗膜：1.在转膜完成后，将膜快速从转膜装置中取出，用冷缓冲液迅速冲洗转印膜以去除残余的凝胶。
2.将膜放入含有5%脱脂奶粉的TBST中的封闭沉淀液中，封闭30-60分钟。
五、主要试剂的准备：1. 酶标仪AB染色液准备：根据需要的体积，按照1：50的稀释比例将染色缓冲液（5x）稀释成1x稀释液中。
例如，对于20ml AB染色液，需要将0.4 ml染色缓冲液稀释成20 ml 1x稀释液。
2.抗体溶液准备：将所选择的一抗或二抗按照所需体积稀释成1xTBST中的合适浓度。
六、探测步骤：1.将膜与所选择的抗体孵育，通常在4℃下过夜。
2.将膜置于摇床上，与所选择的一抗或二抗孵育30分钟。
wb大分子转膜条件和时间
wb大分子转膜条件和时间
大分子转膜是一种常用的实验技术，用于将大分子（如蛋白质、DNA等）从一个细胞膜转移到另一个细胞膜中。
转膜条件和时间取
决于具体的实验目的和所使用的转膜方法，以下是一般常见的大分
子转膜条件和时间的讨论：
1. 转膜方法，常用的大分子转膜方法包括电穿孔法、热激转膜法、化学法等。
每种方法都有其特定的条件和时间要求。
2. 转膜条件，转膜条件包括转膜缓冲液的配制、pH值、离子
浓度、温度等因素。
这些条件对于保持大分子的结构和功能至关重要。
3. 转膜时间，转膜时间取决于所使用的转膜方法和具体实验需求。
一般来说，转膜时间会根据试剂的扩散速度和大分子的大小来
确定。
4. 转膜膜材料，选择合适的转膜膜材料也是非常重要的。
常见
的转膜膜材料包括聚碳酸酯膜、硝酸纤维素膜等。
5. 实验目的，不同的实验目的可能需要不同的转膜条件和时间。
例如，如果需要最大限度地保持大分子的活性，则转膜条件和时间
需要更加精细地控制。
总的来说，大分子转膜条件和时间需要根据具体的实验要求来
确定。
在进行大分子转膜实验时，要仔细选择合适的转膜方法和条件，并根据实验目的进行合理的时间安排，以确保实验的准确性和
可重复性。
Western blot 转膜及膜的选择
Western blot 转膜及膜的选择转膜： 经过PAGE电泳分离后的蛋白质样品需要经过“转膜”步骤——从PAGE 胶转移到膜上固定，才能用各种方法进行Western Blot的检测和显色，而且为了防止没有电场的情况下已经分离的蛋白条带扩散，转移要尽快进行转膜的首要是选膜。
在转移膜上显色其实就像是画家在画布上作 画一样，不光要有好的画笔和颜料，适合的画布也是相当之重要。
Western Blotting亦是如此，没有选择好合适的转移膜是无法做出漂亮的结果的。
因此，选择适合的转移膜，要让转移“膜”高一尺，帮衬而不是阻碍到我们的实 验。
Western Blot印迹常用的转移膜主要是硝酸纤维素膜（Nitrocellulose Blotting Membranes，NC）和PVDF膜（Polyvinylidene-Fluoride） ，此外也有用尼龙膜、DEAE纤维素膜做蛋白印迹。
具体哪种膜适合于哪些实验呢？选择的根据主要有：a.膜与目的蛋白分子的结合能力（也就是单位面积的膜 能结合蛋白的载量），以及膜的孔径（也就是拦截蛋白的大小）；b.不影响后续的显色检测（也就是适和用于所选的显色方法，信噪比好）；c.如果后继实验有 其他要求，比如要做蛋白测序或者质谱分析，还要根据不同目的来挑选不同的转移膜，就像国画要选择宣纸，油画要挑亚麻布或薄棉扣布一样。
转膜 是对western blot最终结果影响最大的一步，转膜质量的好坏直接决定了实验结果的好坏。
转膜的影响因素不多，主要有膜的选择、转印方法和实验操作三个方面。
首先是膜的选择问题。
膜的选择主要从实验目的和实验要求来考虑。
例如，要做分子量小于20kDa的小蛋白，0.45um的NC膜是不可取的，因为这样可能会使得蛋白因透过膜孔而造成膜结合的目的蛋白量不确定，从而影响到最终结果的可靠性。
而如果所分离的蛋白需要进行测序，则非PVDF膜不可，因为只有PVDF 膜才能经受住严酷的清洗条件。
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w e s t e r n转膜条件蛋白来源：RAW264.7总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70KDWB用膜类型、孔径：0.45NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400mA转膜时间：60~90minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，?曾经因为失误，转了15min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。
蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin&AKT蛋白分子量：65KD&56KDWB用膜类型、孔径：0.45PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100V转膜时间：60~70min设备名字是“Bio-Radmini”。
蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65KD&55KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12V转膜时间：30-40min设备：“Bio-Radmini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。
?蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95KD&35KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90V-110V，控制电流不要超过300mA。
转膜时间：70min?蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；?实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：smad3蛋白分子量：54KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转Bio-Rad?蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16KDaand42KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120V恒压转膜时间：90min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72KD，42KD和22KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26A，两张膜0.3A。
转膜时间：90min设备：“Bio-Radmini”建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。
?蛋白来源：大鼠PBMC蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：55KDWB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜转膜方式（恒流）：湿转转膜时间：60-90min设备：“Bio-Radmini”建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了其它按照常规就好了??其实0.22的膜一般不怕转过头以我们的经验，转膜时间、电压其实?也有很大范围的调整，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过??一张膜转，17KD的和170KD的，按照170KD的条件，17KD的转膜也很好的。
蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：大于250kDWB用膜类型、孔径：milliporePVDF膜0.45um转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A。
转膜时间：180min设备：“Bio-Rad”建议：电转保持电压在70V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。
蛋白来源：白血病细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：28KDWB用膜类型、孔径：0.45的NC膜转膜方式（恒流）：湿转，90min，0.25A设备：“Bio-Rad”建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。
但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。
?蛋白来源：肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200KDaWB用膜类型、孔径：milliporePVDF膜0.45um转膜方式（恒压、恒流）：120v恒压转膜时间：120min转膜设备：湿转Bio-Rad建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。
蛋白来源：胰腺β细胞蛋白名称（可保密）：******蛋白分子量：90-130KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：250mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转蛋白来源：原核表达蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：38KDWB用膜类型、孔径：0.45NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100V转膜时间：120min蛋白来源：心脏蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：220kDa，130kDa，70kDa，41kDaWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70v120min，180min，5-6h转膜设备：伯乐湿转建议改进方向（可选）：40kDa一下，70v，60-90min足够，40-70kDa90-120min 即可。
70-120kDa，70v，120-180min足够，120-180kDa，180-240min，180kDa以上建议6h。
蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：53KDWB用膜类型、孔径：PVDF膜0.45um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：80V100min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：β-actin蛋白分子量：42WB用膜类型、孔径：PVDF膜0.45um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：504h转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：脑组织蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16KD、27KD、32KD、42KDWB用膜类型、孔径：PVDF0.22um转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒流1mA/cm2或2mA/cm2转膜时间：不定转膜设备：北京六一仪器建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。
在预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。
通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。
这样有的5分钟就转完了，不用多浪费时间。
并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期）的关系并不稳定，单纯依靠时间有时会有问题。
蛋白来源：CHOcell蛋白名称（可保密）：酶原蛋白分子量：40KDWB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜（Biorad）转膜方式（恒压）：100V，湿转，转膜时间：60min。
设备：Tanon（上海天能）建议：1.?转膜液现用现配，用完倒掉。
2.?转膜时间，电压可以适当调整。
分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。
蛋白来源：Hepg2蛋白名称（可保密）：EGFR蛋白分子量：170kdWB用膜类型、孔径：pvdf0.45转膜方式（恒压、恒流）：24V转膜时间：2个半小时转膜设备：伯乐半干转蛋白来源：肝癌细胞蛋白名称：HIF-1α蛋白分子量：120kDWB用膜类型、孔径：NC膜转膜方式（恒压）：80伏，湿转转膜时间：150分钟设备：“Bio-Radmini”建议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。
转膜均现配先用，不重复利用。
转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。
经李春红染色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。
该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36kD。
蛋白来源：心肌细胞总和膜蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：128KD，100，60，55，43KDWB用膜类型、孔径：NC膜0.2um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70V200min转膜设备：湿转Bio-Rad建议：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70V电压下，电流约154mA。
甲醇可以加到150ml。
对大分子量如200KD转膜时间延长6-8h。
蛋白来源：肺脏蛋白名称（可保密）：ICAM-1蛋白分子量：85~110KDWB用膜类型、孔径：0.22NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA转膜时间：120min设备名字Bio-Radmini一抗用的santacruz1mL包装的。
比例调整到1：800做出很好的条带。
?效价会一直降低的。
去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。
蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16KDaWB用膜类型、孔径：0.2umPVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：0.2A恒流转膜时间：65min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：28KDaWB用膜类型、孔径：0.2umPVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：0.25A恒流转膜时间：60min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：80KDWB用膜类型、孔径：0.45umPVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：半干转移系统恒流，勿超过0.85mA/cm2，同时转多张膜电流需累加（串联）转膜时间：60-90min设备：Bio-Rad其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，那么转移的时间就短一些，反之，则长一点；蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。
蛋白来源：人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白蛋白名称（可保密）：***蛋白分子量：17--116kdWB用膜类型、孔径：PVDF膜0.45um转膜方式（恒压、恒流）：恒流200mA转膜时间：3h转膜设备：湿转北京六一24Dmini蛋白来源：COCOS7293T蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：80725652482518KDWB用膜类型、孔径：0.45umPVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转90V电流约为230--280mA之间。
两张膜串联叠加。
转膜时间：40min设备：Bio-Rad法码西亚蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：30-60KDaWB用膜类型、孔径：pallNC膜0.45um转膜方式（恒压、恒流）：恒流0.85-1mA/平方厘米膜转膜时间：60-90min转膜设备:北京六一半干转建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。