实验一 蛋白质的两性反应及等电点的测定[2]
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（6）0.01 mol/L醋酸溶液。 （8）0.02 mol/L氢氧化钠溶
• （3）0.01％溴甲酚绿指示剂。（4）0.02 mol/L盐酸溶液。 • （5）0.10 mol/L醋酸溶液。 • （7）1.00 mol/L的醋酸溶液 液。
2、仪器 （1）恒温水浴箱 （2）温度计 （3）100 mL容量瓶 （4）50 mL容量瓶 （5）吸量管 （6）试管 （7）试管架等
不同的蛋白质等电点不同，可利用溶解度来 测定其等电点。向各种不同pH值的缓冲溶液中加 入酪蛋白，以沉淀出现最多的缓冲液的pH值为酪 蛋白的等电点。
等电点时，蛋白质以兼性离子存在，容易沉淀析出。
源自文库
三、试剂和器材
1、试剂
• （1）0.5%酪蛋白溶液
•
（2）酪蛋白乙酸钠溶液：称取纯酪蛋白0.25克，加蒸馏水 20毫升及1.00 mol/L氢氧化钠溶液5毫升(必须准确)，摇荡使 酪蛋白溶解。然后加1.00 mol/L醋酸5毫升(必须准确)，倒人 50毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀，结果是酪蛋 白溶于0.10 mol/L乙酸钠溶液中，酪蛋白的浓度为0.5%。
剂 i ]
四、操作方法
• （一）蛋白质的两性反应
•
•
1、取1支试管，加0.5％酪蛋白溶液20滴和0.01%溴甲酚绿指 示剂5—7滴，混匀。观察溶液呈现的颜色，并说明原因。
2、用细滴管缓慢加入0.02 mol/L盐酸溶液，随滴随摇，直至 有明显的大量沉淀发生，此时溶液的pH按近于酪蛋白的等电点。 观察溶液颜色的变化。 3、继续滴入0.02 mol/L盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色的变 化．并说明原因。 4、再滴入0.02 mol/L氢氧化钠溶液进行中和，观察是否出现 沉淀，解释其原因。继续滴入0.02 mol/L氢氧化钠溶液，为什么 沉淀又会溶解？溶液的颜色如何变化? 说明了什么问题？
剂 i ]
• •
（二）酪蛋白等电点的测定 1、取7支粗细相近的干燥试管， 编号后按下表的顺序准确地加入各 种试剂。加入每种试剂后应混合均
剂 i ]
匀。
试 管 编 号 蒸馏水 1.00 mol/L 加 醋酸 入 0.10 mol/L 试 醋酸 剂 (ml 0.01 mol/L 醋酸 ) 酪蛋白乙酸 钠 溶液最终pH 沉淀出现情况
剂 i ]
• 该实验要求各种试剂的浓度和加入量 必须相当准确。实验中应严格按照定 量分析的操作进行。
• 思
考
题
• 何谓蛋白质的等电点？ • 在等电点时蛋白质的溶解度为什么 最低？请结合你的实验结果和蛋白 质的胶体性质加以说明。
剂 i ]
1 3.2 0.8
剂 i ]
2 － －
4.0 － 1.0 4.1
3 2.0 －
2.0 － 1.0 4.4
4 3.0 －
1.0 － 1.0 4.7
5 3.5 －
0.5 － 1.0 5.0
6 1.5 －
－ 2.5 1.0 5.3
7 2.75 －
－ 1.25 1.0 5.6
－ －
1.0 3.8
• 2、静置约20分钟，观察每支试管中溶 液的混浊度，以一，十，十十，十十 十，十十十十符号表示沉淀的多少。 根据观察结果指出哪一个pH是酪蛋白 的等电点？
实验一 蛋白质的两性反应 及等电点的测定
一、实验目的
1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、初步学会测定蛋白质等电点的方
法。
3、学会正确使用吸量管吸量试液。
二、实验原理
蛋白质分子除含有一定的自由氨基和羧基外， 还含有酚基、巯基、胍基、唑基等，因此，蛋白 质和氨基酸一样也有两性电离的性质。在溶液中， 蛋白质的解离状态受溶液酸碱度影响，酸性溶液 中蛋白质解离成阳离子，碱性溶液中则解离成阴 离子。等电点时，蛋白质分子所携带的正负电荷 相等，以兼性离子存在，在电场中不向正负电极 移动，在溶液中溶解度最小，容易沉淀析出。
• （3）0.01％溴甲酚绿指示剂。（4）0.02 mol/L盐酸溶液。 • （5）0.10 mol/L醋酸溶液。 • （7）1.00 mol/L的醋酸溶液 液。
2、仪器 （1）恒温水浴箱 （2）温度计 （3）100 mL容量瓶 （4）50 mL容量瓶 （5）吸量管 （6）试管 （7）试管架等
不同的蛋白质等电点不同，可利用溶解度来 测定其等电点。向各种不同pH值的缓冲溶液中加 入酪蛋白，以沉淀出现最多的缓冲液的pH值为酪 蛋白的等电点。
等电点时，蛋白质以兼性离子存在，容易沉淀析出。
源自文库
三、试剂和器材
1、试剂
• （1）0.5%酪蛋白溶液
•
（2）酪蛋白乙酸钠溶液：称取纯酪蛋白0.25克，加蒸馏水 20毫升及1.00 mol/L氢氧化钠溶液5毫升(必须准确)，摇荡使 酪蛋白溶解。然后加1.00 mol/L醋酸5毫升(必须准确)，倒人 50毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀，结果是酪蛋 白溶于0.10 mol/L乙酸钠溶液中，酪蛋白的浓度为0.5%。
剂 i ]
四、操作方法
• （一）蛋白质的两性反应
•
•
1、取1支试管，加0.5％酪蛋白溶液20滴和0.01%溴甲酚绿指 示剂5—7滴，混匀。观察溶液呈现的颜色，并说明原因。
2、用细滴管缓慢加入0.02 mol/L盐酸溶液，随滴随摇，直至 有明显的大量沉淀发生，此时溶液的pH按近于酪蛋白的等电点。 观察溶液颜色的变化。 3、继续滴入0.02 mol/L盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色的变 化．并说明原因。 4、再滴入0.02 mol/L氢氧化钠溶液进行中和，观察是否出现 沉淀，解释其原因。继续滴入0.02 mol/L氢氧化钠溶液，为什么 沉淀又会溶解？溶液的颜色如何变化? 说明了什么问题？
剂 i ]
• •
（二）酪蛋白等电点的测定 1、取7支粗细相近的干燥试管， 编号后按下表的顺序准确地加入各 种试剂。加入每种试剂后应混合均
剂 i ]
匀。
试 管 编 号 蒸馏水 1.00 mol/L 加 醋酸 入 0.10 mol/L 试 醋酸 剂 (ml 0.01 mol/L 醋酸 ) 酪蛋白乙酸 钠 溶液最终pH 沉淀出现情况
剂 i ]
• 该实验要求各种试剂的浓度和加入量 必须相当准确。实验中应严格按照定 量分析的操作进行。
• 思
考
题
• 何谓蛋白质的等电点？ • 在等电点时蛋白质的溶解度为什么 最低？请结合你的实验结果和蛋白 质的胶体性质加以说明。
剂 i ]
1 3.2 0.8
剂 i ]
2 － －
4.0 － 1.0 4.1
3 2.0 －
2.0 － 1.0 4.4
4 3.0 －
1.0 － 1.0 4.7
5 3.5 －
0.5 － 1.0 5.0
6 1.5 －
－ 2.5 1.0 5.3
7 2.75 －
－ 1.25 1.0 5.6
－ －
1.0 3.8
• 2、静置约20分钟，观察每支试管中溶 液的混浊度，以一，十，十十，十十 十，十十十十符号表示沉淀的多少。 根据观察结果指出哪一个pH是酪蛋白 的等电点？
实验一 蛋白质的两性反应 及等电点的测定
一、实验目的
1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、初步学会测定蛋白质等电点的方
法。
3、学会正确使用吸量管吸量试液。
二、实验原理
蛋白质分子除含有一定的自由氨基和羧基外， 还含有酚基、巯基、胍基、唑基等，因此，蛋白 质和氨基酸一样也有两性电离的性质。在溶液中， 蛋白质的解离状态受溶液酸碱度影响，酸性溶液 中蛋白质解离成阳离子，碱性溶液中则解离成阴 离子。等电点时，蛋白质分子所携带的正负电荷 相等，以兼性离子存在，在电场中不向正负电极 移动，在溶液中溶解度最小，容易沉淀析出。