血液一般检验-血涂片制备和染色

第二章 血液一般检验
瑞氏染色法（Wright’s stain）
■ 瑞氏染料:酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成 的复合染料。 瑞氏染液是瑞氏染料溶于甲醇而成。
■ 细胞染色原理：物理吸附作用； 化学亲和作用。
■ 染色易受pH影响：偏酸环境染色偏红，偏碱 环境偏蓝。
第二章 血液一般检验
Wright染色血细胞着色的原理
推片角度小、血滴未完全展开即开始推片 时血膜偏长；推片角度大、血滴太小时血 膜偏短
血膜无尾部
血滴太大
两侧无空隙
推片太宽或血滴展开太宽
血膜偏厚或偏薄
血滴大、血液黏度高、推片角度大、推片 速度快，血膜厚；相反则血膜偏薄
第二章 血液一般检验
二.血涂片染色
染料
染料
性质
碱性染料 阳离子染料
常见品种
亚甲蓝、天 青、苏木素
不良血涂片
刷尖，推片边缘不光滑 用力不均，厚薄不均
血滴展开不均匀
血量多，血滴未展开
载玻片有油腻
玻片中间未干燥
角度大, 速度快, 太厚, 太短
第二章 血液一般检验
血涂片质量问题及可能的原因
血涂片质量问题
原因
不规则的间断和尾部过长 推片污染、推片速度不均匀、载玻片污染
有空泡（空洞）
载玻片被油脂污染
血膜偏长或偏短
血涂片制备操作要求
◆涂片前：载玻片中性、洁净、无油腻，边缘无破碎。 血液标本推荐用非抗凝静脉血或毛细管血，也可 用EDTA抗凝静脉血。 标本采集后4小时内制片。
◆涂片中：控制好血滴量、推片速度和角度。 血滴越大、推片角度大、速度越快，血膜越厚
◆涂片后：血涂片需及时干燥、固定，妥善保存 。
第二章 血液一般检验
作用
细胞内的酸性成分结 合，用于细胞核染色
酸性染料 阴离子染料
伊红Y、伊红 与细胞内碱性成分结
B
合并染色
复合染料 同时具有阴离 Wright染料 细胞染色后可获得红
子型、阳离子 、 Giemsa 蓝分明、色泽艳丽的
型的染料
染料
染色效果
第二章 血液一般检验
染色方法
■瑞氏染色法（Wright’s stain） ■吉姆萨染色法（Giemsa’s stain） ■瑞氏-吉姆萨复合染色法
瑞氏染液2～5滴，染 0.5～1min。 加等量或稍多的缓冲液，混匀，染
10～15min。
流水冲去染液，干后镜检。
第二章 血液一般检验
Wright染色法染色结果
正常血膜外观为淡紫红色。 镜下RBC和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱性颗粒染紫 黑色，中性颗粒染淡紫红色，细胞核染紫红色。
第二章 血液一般检验
Wright染色法质量保证 血涂片的染色效果与血涂片中细胞数量 、血膜厚度、染液质量、染色时间、染液 浓度、pH等密切相关，在染色的全过程（ 前、中、后）均需严格按要求操作，否则 将导致染色效果不佳。
第二章 血液一般检验
Wright染色法质量保证---染色前
■血涂片：血涂片血膜厚度、细胞数量要恰当。 血膜彻底干透后方可染色。 涂片后1小时内染色。
第二章 血液一般检验
血涂片的制备方法
薄血膜推片法
制 手工涂片法
备
厚血膜涂片法
方
法 自动涂片法
第二章 血液一Βιβλιοθήκη Baidu检验
手工薄血涂片法
取EDTA抗凝血
滴血约 50μl
推片
干燥
第二章 血液一般检验
第二章 血液一般检验
第二章 血液一般检验
第二章 血液一般检验
两玻片的角度以30-45°为宜，轻轻将双凹片向 前匀速推进，即涂成血液薄膜。
成分
着色原理
碱性物质 与伊红结合染成红色，该物质称为嗜酸性物质，如血红蛋白及嗜酸性颗粒 等
酸性物质 与亚甲蓝结合而染成蓝紫色，该物质称为嗜碱性物质，如淋巴细胞胞质及 嗜碱性颗粒等
中性颗粒 呈等电状态，与伊红、亚甲蓝均结合，染成淡紫红色，该物质称为嗜中性 物质
细胞核
主要由DNA和碱性强的组蛋白等组成，后者与伊红结合染成红色，但因细 胞核中含有少量的弱酸性物质，与亚甲蓝作用染成蓝色，因含量太少 ，蓝色反应极弱，故细胞核染成紫红色
第二章 血液一般检验
血涂片制备的质量保证
疟原虫检查血涂片要求
1）厚血膜：血量4.0～5.0μl，位于右1/3处，直径0.8～1.0cm，外出圆形厚薄 均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。 2）薄血膜：血量1.0～1.5μl，位于1/2～1/3处，外观舌状厚薄均匀，无划痕。
第二章 血液一般检验
第二章 血液一般检验
第二章
血液一般检验
第二章 血液一般检验
第一节 血涂片制备和染色
第二章 血液一般检验
本节内容
一.血涂片制备
◆载玻片要求 ◆血涂片制备方法 ◆方法学评价 ◆质量保证
二.血涂片染色
◆染料 ◆染色方法 ◆方法学评价 ◆质量保证
第二章 血液一般检验
一.血涂片的制备
载玻片的要求
新玻片上有游离碱质，须清洗后使用。 使用时切勿用手触及玻片表面。
30~45°
血涂片
第二章 血液一般检验
第二章 血液一般检验
手工厚血涂片法
第二章 血液一般检验
全自动推片染片机
根据HCT可以设定8个水平的推片方案
第二章 血液一般检验
血涂片制备的方法学评价
方法 薄血膜推片法
厚血膜涂片法
评价
用血量少、操作简单，临床应用最广，主要用于观察血细 胞形态及仪器法检测结果异常时的复查。某些抗凝剂可使 血细胞形态发生变化，分类时应注意鉴别。白细胞减低患 者的标本经离心后取棕黄层（有核细胞和血小板集中层） 涂片，可提高异常细胞的阳性检出率。
红细胞
①原始红细胞和早幼红细胞胞质含有较多的酸性物质，与亚甲蓝亲和力强 ，故染成较浓厚的蓝色
②晚幼红细胞和Ret含有酸性物质和碱性物质，可同时与亚甲蓝和伊红结 合，故染成红蓝色或灰红色
③成熟红细胞的酸性物质完全消失，只与伊红结合，染成橙红色
第二章 血液一般检验
Wright染色步骤
用蜡笔在已干的血膜两端划线。
对疟原虫、微丝蚴等的阳性检出率高。
仪器自动涂片法 血涂片中细胞分布均匀、形态完好，且推片与染色可和血 液分析仪构成流水线作业，适用于大批量标本的处理。但 需要较高的投入。
第二章 血液一般检验
血涂片制备的质量保证
总体要求：血膜由厚到薄逐渐过度 ，应厚薄适宜，头、体、尾分明
良好血涂片的“标准”
①血膜至少长25mm，至玻片两 侧边缘的距离约为5mm。 ②血膜边缘要比玻片边缘窄，且 边缘光滑，适用于油镜检查。 ③血细胞从厚区到薄区逐步均匀 分布，末端呈方形或羽毛状。 ④血膜末端无粒状、划线或裂隙。 ⑤在镜检区域内，白细胞形态应 无人为异常改变。 ⑥无人为污染。