血液肿瘤与检测 ppt
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
在PCR时加入荧光标记的复制终止剂，比如ddA,ddT,ddC,ddG（相应于 4种碱基）
-
8
骨髓增生异常综合征（MDS）
-
9
白血病
• 白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因 为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织 中大量增殖累积，并浸润其他组织和器官，同时正常造血受抑制。
• 按白血病细胞的分化成熟程度及自然病程，可分为急、慢性白血 病。
• 按病变细胞系列分类，包括髓系的粒、单、红、巨核系和淋巴系 的T和B细胞系。
通过骨髓细胞学可以了解骨髓中各种细胞数量、细胞形态、有无异 常细胞等，从而协助诊断疾病、疗效观察、判断预后。
骨髓穿刺：采取骨髓液
骨髓活检：特制的穿刺针取一小块骨髓组织
-
21
免疫学(Immunology)
•根据不同种类的细胞以及细胞在不同分化阶段表达的抗原差异， 通过免疫学方法识别抗原从而检测细胞类型及数量。 粒细胞成熟过程。
•检测项目： 融合基因筛查、基因表达检测、基因序列突变检测
-
27
• 定性分析 • 做什么？ 1. 融合基因筛查
• 怎么做？
Blood Sample
RNA
cDNA
RNA Extraction RT
QRT- PCR
-
28
• 定量分析 • 做什么？ 1. 融合基因 2. 基因表达
• 怎么做？
பைடு நூலகம்
Blood Sample
-
5
造血干细胞的分化
-
6
淋巴造血系统肿瘤
•骨髓增生异常综合征（MDS） •白血病（AML、ALL、CML、CLL） •淋巴瘤 (HL、NHL) •多发性骨髓瘤（MM） •骨髓增生性疾病（MPN）(CML、ET、PV、PMF)
-
7
骨髓增生异常综合征（MDS）
• 骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS)是起源于造 血干细胞的一组异质性髓系克隆性疾病，特点是髓系细胞分化及 发育异常，表现为无效造血、难治性血细胞减少、造血功能衰竭， 高风险向急性髓系白血病（AML）转化。
• 临床上常按组织病理学改变将其分为非霍奇金淋巴瘤（NHL）和 霍奇金淋巴瘤（HL）两类
-
12
淋巴瘤
-
13
多发性骨髓瘤
• 多发性骨髓瘤（MM）是浆细胞恶性增殖的结果。 • 其特征为骨髓浆细胞异常增生伴有单克隆免疫球蛋白（M蛋白）
过度生成，极少数患者可以是不产生M蛋白的未分泌型MM。
-
14
浆细胞病（多发性骨髓瘤）
-
22
-
23
流式细胞术
利用细胞特异抗原，通过流式细胞仪对血细胞种类、数量等特征进 行分析，从而协助诊断疾病。
-
24
细胞遗传学(Cytogenetics)：染色体核型分析
t(9;22)(q32;q23.2) in CML
-
25
分子生物学(Molecular)
2R2G 阴性细胞
1R1G2F阳性细胞
• 临床上常将白血病分为急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性髓细 胞白血病（AML）、慢性粒细胞白血病（CML）、慢性淋巴细胞 白血病等（CLL）。
-
10
白血病（leukemia）
淋
巴
ALL
系
L
CLL
髓 系 AML M
急性白 血病A
CML
慢性白
-
血病 C
11
淋巴瘤
• 淋巴瘤（lymphoma）起源于淋巴结和淋巴组织，其发生大多与 免疫应答过程中淋巴细胞增殖分化产生的某种免疫细胞恶变有关， 是免疫系统的恶性肿瘤。
RNA
cDNA
RNA Extraction RT
QRT- PCR
-
29
荧光基团
荧光检测元件
扩增曲线图： 横坐标：扩增循环数（Cycle）； 纵坐标：荧光强度每个循环进行一次荧光信号的收集
-
30
• 突变分析
Sanger测序、SNE
-
片段分析
31
• Sanger测序
确定一条染色体片断上的碱基顺序。 Sanger法：
淋巴造血系统肿瘤及检测
肿瘤的概念
•概念： 在机体各种致瘤因素的作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对
其生长的正常调控，与正常组织相比，其增生和分化异常，导致克隆性 增生而形成的新生物，常形成肿块。 •特性： 1.获得不断增殖的能力→相对无限制性自主性生长； 2.失去正常分化成熟的能力→异常的形态、代谢和功能。
-
15
骨髓增生性疾病
•骨髓增生性疾病指分化相对成熟的一系或多系骨髓细胞不断地克 隆性增殖所致的一组肿瘤性疾病，也称骨髓增殖性肿瘤（MPNs）。 •MPN可分为慢性粒细胞白血病（CML），真性红细胞增多症 （PV），原发性血小板增多症（ET），原发性骨髓纤维化 （PMF）。（是造血干细胞异常克隆而引起的成纤维细胞反应性增 生）
FISH（荧光原位杂交技术）, 是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞
内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交，检测基因变异情况。
BCR/ABL融合，典型的阳性细胞信号模式为1R1G2F，由于断裂点位置不同,以
及基因缺失，还可能出现其它阳性信号模式。
-
26
分子生物学(Molecular)
•检测方法： RQ-PCR, Sanger测序、二代基因测序、片段分析
淋巴造血系统肿瘤？
-
2
我国死亡率前十位恶性肿瘤
-
3
• 胚造胎血期（系中统胚叶/造组血织期）：卵黄囊、肝、脾
• 胎儿期（肝脾造血期）：肝、脾、骨髓、胸腺、淋巴结 • 出生后（骨髓造血期）：骨髓、淋巴结生成淋巴细胞和浆细胞
-
4
血细胞的发育与成熟
• 造血细胞的生长发育是一个连续不断的复杂过程，造血器官内的各种 造血细胞，按一定的规律发育成为各种成熟的血细胞，然后释放入血 循环中。
• 细胞形态学(Morphology)：骨髓穿刺、骨髓活检 • 免疫学(Immunology): 流式细胞术 • 细胞遗传学(Cytogenetics)：染色体核型分析 • 分子生物学(Molecular) :FISH、突变分析（PCR、片段分析、基
因测序）
-
20
细胞形态学(Morphology)
-
16
骨髓增生性疾病
-
17
骨髓增 生异常 综合征
MD S
AM 急性髓细
-
18
急性白血病(AML、ALL) 骨髓增生异常综合征(MDS)
慢性白血病(CML、CLL) 淋巴瘤(HL、NHL) 多发性骨髓瘤(MM) 骨髓增生性疾病(CML、PV、ET、PMF)
-
19
淋巴造血系统肿瘤的检测
• 淋巴造血系统肿瘤精确的诊断分型是正确选用化疗方案的前提。 目前国际上通用的是MICM分型。
-
8
骨髓增生异常综合征（MDS）
-
9
白血病
• 白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因 为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织 中大量增殖累积，并浸润其他组织和器官，同时正常造血受抑制。
• 按白血病细胞的分化成熟程度及自然病程，可分为急、慢性白血 病。
• 按病变细胞系列分类，包括髓系的粒、单、红、巨核系和淋巴系 的T和B细胞系。
通过骨髓细胞学可以了解骨髓中各种细胞数量、细胞形态、有无异 常细胞等，从而协助诊断疾病、疗效观察、判断预后。
骨髓穿刺：采取骨髓液
骨髓活检：特制的穿刺针取一小块骨髓组织
-
21
免疫学(Immunology)
•根据不同种类的细胞以及细胞在不同分化阶段表达的抗原差异， 通过免疫学方法识别抗原从而检测细胞类型及数量。 粒细胞成熟过程。
•检测项目： 融合基因筛查、基因表达检测、基因序列突变检测
-
27
• 定性分析 • 做什么？ 1. 融合基因筛查
• 怎么做？
Blood Sample
RNA
cDNA
RNA Extraction RT
QRT- PCR
-
28
• 定量分析 • 做什么？ 1. 融合基因 2. 基因表达
• 怎么做？
பைடு நூலகம்
Blood Sample
-
5
造血干细胞的分化
-
6
淋巴造血系统肿瘤
•骨髓增生异常综合征（MDS） •白血病（AML、ALL、CML、CLL） •淋巴瘤 (HL、NHL) •多发性骨髓瘤（MM） •骨髓增生性疾病（MPN）(CML、ET、PV、PMF)
-
7
骨髓增生异常综合征（MDS）
• 骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS)是起源于造 血干细胞的一组异质性髓系克隆性疾病，特点是髓系细胞分化及 发育异常，表现为无效造血、难治性血细胞减少、造血功能衰竭， 高风险向急性髓系白血病（AML）转化。
• 临床上常按组织病理学改变将其分为非霍奇金淋巴瘤（NHL）和 霍奇金淋巴瘤（HL）两类
-
12
淋巴瘤
-
13
多发性骨髓瘤
• 多发性骨髓瘤（MM）是浆细胞恶性增殖的结果。 • 其特征为骨髓浆细胞异常增生伴有单克隆免疫球蛋白（M蛋白）
过度生成，极少数患者可以是不产生M蛋白的未分泌型MM。
-
14
浆细胞病（多发性骨髓瘤）
-
22
-
23
流式细胞术
利用细胞特异抗原，通过流式细胞仪对血细胞种类、数量等特征进 行分析，从而协助诊断疾病。
-
24
细胞遗传学(Cytogenetics)：染色体核型分析
t(9;22)(q32;q23.2) in CML
-
25
分子生物学(Molecular)
2R2G 阴性细胞
1R1G2F阳性细胞
• 临床上常将白血病分为急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性髓细 胞白血病（AML）、慢性粒细胞白血病（CML）、慢性淋巴细胞 白血病等（CLL）。
-
10
白血病（leukemia）
淋
巴
ALL
系
L
CLL
髓 系 AML M
急性白 血病A
CML
慢性白
-
血病 C
11
淋巴瘤
• 淋巴瘤（lymphoma）起源于淋巴结和淋巴组织，其发生大多与 免疫应答过程中淋巴细胞增殖分化产生的某种免疫细胞恶变有关， 是免疫系统的恶性肿瘤。
RNA
cDNA
RNA Extraction RT
QRT- PCR
-
29
荧光基团
荧光检测元件
扩增曲线图： 横坐标：扩增循环数（Cycle）； 纵坐标：荧光强度每个循环进行一次荧光信号的收集
-
30
• 突变分析
Sanger测序、SNE
-
片段分析
31
• Sanger测序
确定一条染色体片断上的碱基顺序。 Sanger法：
淋巴造血系统肿瘤及检测
肿瘤的概念
•概念： 在机体各种致瘤因素的作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对
其生长的正常调控，与正常组织相比，其增生和分化异常，导致克隆性 增生而形成的新生物，常形成肿块。 •特性： 1.获得不断增殖的能力→相对无限制性自主性生长； 2.失去正常分化成熟的能力→异常的形态、代谢和功能。
-
15
骨髓增生性疾病
•骨髓增生性疾病指分化相对成熟的一系或多系骨髓细胞不断地克 隆性增殖所致的一组肿瘤性疾病，也称骨髓增殖性肿瘤（MPNs）。 •MPN可分为慢性粒细胞白血病（CML），真性红细胞增多症 （PV），原发性血小板增多症（ET），原发性骨髓纤维化 （PMF）。（是造血干细胞异常克隆而引起的成纤维细胞反应性增 生）
FISH（荧光原位杂交技术）, 是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞
内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交，检测基因变异情况。
BCR/ABL融合，典型的阳性细胞信号模式为1R1G2F，由于断裂点位置不同,以
及基因缺失，还可能出现其它阳性信号模式。
-
26
分子生物学(Molecular)
•检测方法： RQ-PCR, Sanger测序、二代基因测序、片段分析
淋巴造血系统肿瘤？
-
2
我国死亡率前十位恶性肿瘤
-
3
• 胚造胎血期（系中统胚叶/造组血织期）：卵黄囊、肝、脾
• 胎儿期（肝脾造血期）：肝、脾、骨髓、胸腺、淋巴结 • 出生后（骨髓造血期）：骨髓、淋巴结生成淋巴细胞和浆细胞
-
4
血细胞的发育与成熟
• 造血细胞的生长发育是一个连续不断的复杂过程，造血器官内的各种 造血细胞，按一定的规律发育成为各种成熟的血细胞，然后释放入血 循环中。
• 细胞形态学(Morphology)：骨髓穿刺、骨髓活检 • 免疫学(Immunology): 流式细胞术 • 细胞遗传学(Cytogenetics)：染色体核型分析 • 分子生物学(Molecular) :FISH、突变分析（PCR、片段分析、基
因测序）
-
20
细胞形态学(Morphology)
-
16
骨髓增生性疾病
-
17
骨髓增 生异常 综合征
MD S
AM 急性髓细
-
18
急性白血病(AML、ALL) 骨髓增生异常综合征(MDS)
慢性白血病(CML、CLL) 淋巴瘤(HL、NHL) 多发性骨髓瘤(MM) 骨髓增生性疾病(CML、PV、ET、PMF)
-
19
淋巴造血系统肿瘤的检测
• 淋巴造血系统肿瘤精确的诊断分型是正确选用化疗方案的前提。 目前国际上通用的是MICM分型。