活菌计数技术
活菌数的测定方法
活菌数的测定方法
一、直接计数法：
1.显微镜计数法：将样品通过适当稀释后涂布在平板上，然后在显微
镜下直接观察，将显示出的活菌数量进行计数。
2.罗氏计数室法：将适当稀释后的样品放在罗氏计数室中，通过显微
镜下观察菌落数并计数，然后根据稀释倍数计算活菌数。
3.涂布法：将稀释后的样品均匀涂布在琼脂平板上，在适宜温度下培
养一段时间，然后观察并计算菌落的数量。
二、间接计数法：
1.白细胞计数法：用白细胞计数板进行白细胞计数，由于白细胞数与
活菌数有一定的相关性，可以通过白细胞计数的结果进行推算。
2.生物标志物法：通过检测样品中特定的生物标志物，如ATP、葡萄
糖等，间接反映出活菌的数量。
3.代谢产物测定法：通过测定样品中的代谢产物（如氧气消耗量、二
氧化碳产生量等），间接推测出活菌的数量。
以上是常见的活菌数测定方法，不同的方法适用于不同的实际应用场景。
在选择测定方法时，需要考虑样品类型、检测目的、测定时间和精确
度等因素。
另外，为了提高测定结果的准确性，还需要严格控制实验条件，如温度、湿度、培养时间等。
最后，需要注意的是，活菌数的测定方法只能提供大致数量，无法直
接得到准确的数值。
因此，在进行活菌数测定时，需要结合其他的检测方
法和数据进行综合分析。
微生物活菌计数方法
杂菌数 亿/g
细菌杂菌 (亿 / g ) 10 8 19 .3 10 4
100 0.19 10 .10 0.1
重复 1 2 3 菌落 平均数
稀释倍数 （霉菌在马丁培养基 上） 103 104 105 6 / / 7 / / 8 / / 7.0 /
3
/
霉菌数 个/g 0.69×106
两个稀 释倍数 度菌落 数之比 / / / 1.1 2.5 / /
菌数 亿 /g,mL 25.3 3.2 0.38 0.30 / 0.032 0.015
无法数 无法数 无法数 313 289 无法数 32 15 315 38 32 136 5 3
3.2 标准差
标准差(Standard Deviation) ：各数据偏离平均数的距离 （离均差）的平均数，它是离差平方和平均后的方根。用δ表 示。标准差体现随机变量取值与其期望值的偏差。 标准 NY411-2000 固氮菌肥料的7.2.6.2。
浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正 比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表 示样品菌液浓度。根据浊度计算出细菌的数量。该方法一 般可以估计出细菌的数量级。
经常用于一些特殊的微生物的快速计数，如光合细菌和
藻类的测数。但是由于该方法仅能估测菌数，不能准确定 量，而且由于一些颗粒和添加剂的作用，不能正确反映该 样品的质量，所以在质检过程中不予采用。
微生物活菌平板计数方法和技术
微生物肥料和食用菌菌种质检中心 曹凤明
微生物计数方法种类
1. 2. 3.
直接计数法 核酸计数法 活菌计数法（培养法）
MPN（Most-Probable-Number ）最大可能数法 混菌法 平板技术法
活菌计数实验报告稀释蜂蜜
活菌计数实验报告稀释蜂蜜
1、直接计数法：
这是一种非常简单的检测方法，我们可以利用计数板或计数仪直接得出活菌数目。
2、活菌稀释蜂蜜计数板：
首先制备活菌悬液，蜂蜜取一定体积的样品活菌悬液置于活菌计数板的计数池内，用显微镜观察计数。
根据计数室刻度内的活菌数，计算样品中的含菌数。
特点：所需设备简单，测定结果较准确，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征。
不能区分是否为活菌，不能区分活活菌和死活菌。
单位：个/mL计算方法：
（1）25×16的计数板：
每毫升活菌数量=（100小格内的细胞数/100）×400×1000×稀释倍数。
（2）16×25的计数板：
每毫升活菌数量=（80小格内的细胞数/80）×400×1000×稀释倍数。
3、电子计数器计数法：
电子计数器也属于直接计数法，其工作原理类似于血细胞分析仪，测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个活菌，当一个活菌通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在
电子记录装置上。
计数单位：x个/mL。
特点：该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为活菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
活菌计数操作方法
活菌计数操作方法
活菌计数是一种用于确定样品中活着的微生物数量的技术。
下面是一种常见的活菌计数操作方法：
1. 准备培养基：选择适当的培养基，根据需要添加适当的营养物质和抑制微生物生长的物质。
2. 取样：从样品中取一定量的液体或固体样品。
对于液体样品，可以直接取样；对于固体样品，需要将其加入适量的缓冲液中进行均匀分散。
3. 稀释：将取样的液体稀释为一系列不同浓度的溶液。
这样做是为了确保培养基中的微生物数量处于可计数范围内。
4. 接种：将已稀释的样品溶液分别加入培养皿或培养瓶中，然后将培养皿或培养瓶密封。
5. 培养：将密封的培养皿或培养瓶放置在适当的温度和湿度下进行培养。
不同的微生物需要不同的温度和环境条件。
6. 计数：在培养一定时间后，使用显微镜或其他计数装置进行活菌的观察和计数。
活菌通常会产生可见的生长。
7. 计算：根据每个培养皿或培养瓶中观察到的活菌数量，结合稀释倍数和取样量，计算出原始样品中的活菌数量。
注意事项：
- 操作过程需要做好无菌操作，以防止细菌的交叉感染。
- 操作要求精确和细致，避免误差的出现。
- 需要根据需要选择适当的物品和仪器来进行实验。
- 操作过程中应注意安全，避免对自身和他人造成伤害。
三种细菌计数方法的比较
三种细菌计数方法的比较细菌计数是微生物学中一项重要的实验技术，用于确定细菌菌群的数量。
在微生物学研究、医学和食品工业等领域中，细菌计数方法的准确性和可行性非常关键。
目前，常用的三种细菌计数方法包括直接计数法、密度计数法和滴定计数法。
本文将对这三种方法进行比较，包括原理、优缺点和适用范围。
直接计数法是通过显微镜观察，直接计算视野中的细菌数量来进行计数的方法。
该方法简单快捷，不需要进行培养过程。
其中，常用的直接计数方法有暗视野法、荧光显微镜法和流式细胞术。
这些方法可以直接观察到不同形态和大小的细菌，并且可以获得准确的结果。
此外，直接计数法还可以用于测定活菌和死菌的比例，对于评估细菌的生物活性非常有用。
然而，直接计数法对设备要求较高，需要专业的显微镜和技术操作，而且适用于底浓度的细菌样本。
与直接计数法相比，密度计数法是细菌计数中常用的一种方法。
该方法通过将细菌样本适当稀释至能观察到单个菌落形成的数量范围，并在琼脂培养基上培养并计数菌落的数量来确定细菌的数量。
密度计数法的优点是适用于各种样品类型，并且可以进行定量计数。
此外，该方法还可以通过调整稀释倍数来适应不同细菌的菌落形成能力。
但是，密度计数法需要进行培养过程，时间较长，并且无法区分活菌和死菌。
滴定计数法是通过逐渐稀释细菌悬液，将其滴定到琼脂培养基上，然后通过滴定液的颜色变化或者生长的细菌落的数量来确定细菌的数量。
与密度计数法类似，滴定计数法也需要进行培养过程。
但是，滴定计数法具有简单、快捷、经济的特点。
同时，滴定计数法可以通过改变滴定液浓度来适应不同样本中细菌的菌落形成能力，并且可以计算出细菌的最概然数。
然而，滴定计数法对于有颜色的样本适用性较差，因为颜色会干扰滴定液的颜色变化。
此外，滴定计数法无法区分活菌和死菌。
综上所述，三种细菌计数方法各自有其优点和局限性。
直接计数法可以获得准确的结果，适用于底浓度的细菌样本，但要求设备和技术较为专业。
密度计数法能够进行定量计数，适用于各种样品类型，但需要进行培养过程。
活菌计数法
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平板法
上述平皿法还可以将稀释的菌液取 0.2ml 加到已制备好的平板上，然后用无菌涂棒将 菌液涂布整个平板表面，放入适宜温度下培 养，计算菌落数，再按上公式计算出每毫升 原菌液的所含活菌总数。
薄膜过滤法
原理：将供试液通过已灭菌的膜过滤器。然后将滤 膜置于适宜培养基上培养，计算长出的菌落数。
操作：取相当于每张滤膜含1g、1ml 或10cm2 供试 品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤； 若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供 试液1ml 进行试验。用pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓 冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜。冲洗后取出滤 膜，菌面朝上贴于适宜培养基平板上培养。
每毫升原菌液活菌数＝同一稀释度三个以上重复平皿
菌落平均数×稀释倍数× 5
❖ 注意： 此法可因操作不熟练造成污染，或因 培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不 稳定。但由于该方法能测出样品中微量的菌 数，仍是常用的一种测定细菌数的有效方法。 细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此 法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物。
活菌计数法
活菌计数的方法
❖ 平皿法 ❖ 平板法 ❖ 薄膜过滤法 ❖ 比浊法
平皿法
原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条 件下可以通过生长形成菌落。
操作：将待测样品经一系列 10 倍稀释，然后选择 三个稀释度的菌液，分别取 0.2ml 放入无菌平皿， 再倒入适量的已熔化并冷至 45℃ 左右的培养基， 与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培 养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式 计算出原菌液的含菌数：
平板分离技术与活菌计数
实验六平板分离技术与活菌计数实验报告一．实验目的1.掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化徽生物的基本操作技术。
2．初步观察来自土壤中的三大类群微生物的菌落形态特征。
3．学习平板菌落计数的基本原理和方法,并掌握其基本技能。
二．实验原理值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。
因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显徼镜检测个体形态特征等综合考虑。
有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
平板分离法主要有：①平板划线分离法，②稀释涂布平板法。
后者除能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。
平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上；经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。
统计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。
由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖面成，有的可能来自2个或多个细胞。
因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位（colony-forming unit, CFU）取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。
平板菌落计数法虽然操作较繁琐，结果需要培养一段时间才能获得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该方法能直接反映样品中活细胞数量，所以被广泛用于生物制品(如活菌制剂)、食品、饮料、水（包括水源水）以及多类产品等质量检测与控制的标准方法。
快速细菌自动稀释仪和自动菌落计数仪则提供快速准确的结果。
土壤是微生物生存的大本营，所含徼生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可以从中分离﹑纯化获得许多有价值的菌株。
本实验将采用3种不同的培养基从土壤中分离不同类型的徽生物。
统计活菌数目的方法
统计活菌数目的方法
统计活菌数目是微生物学研究中的一项重要工作，它可以帮助
我们了解微生物在不同环境条件下的生长繁殖情况，为我们提供科
学依据，指导我们进行微生物的应用和管理。
下面将介绍几种常用
的统计活菌数目的方法。
首先，最常见的方法是平板计数法。
平板计数法是通过将待测
样品均匀涂布在琼脂平板上，然后进行培养，最后根据菌落的形成
情况来进行统计。
这种方法简单易行，可以直接得到微生物的数量，是实验室中常用的一种方法。
其次，滤膜法也是一种常用的统计活菌数目的方法。
滤膜法是
将待测样品过滤到滤膜上，然后将滤膜放置在含有适宜培养基的琼
脂平板上进行培养，最后进行菌落计数。
这种方法适用于含有大量
微生物的样品，可以避免样品中微生物的聚集现象，得到更加准确
的结果。
另外，流式细胞术也是一种现代化的统计活菌数目的方法。
流
式细胞术是通过将待测样品中的微生物染色，然后通过流式细胞仪
进行检测，最后得到微生物数量的统计结果。
这种方法操作简便，
速度快，可以对微生物进行快速准确的检测，适用于大批量样品的统计。
除了上述方法外，还有一些其他的统计活菌数目的方法，如膜过滤法、MPN法等。
这些方法各有特点，可以根据具体的实验要求和样品特点进行选择。
综上所述，统计活菌数目的方法有很多种，每种方法都有其适用的范围和特点。
在进行微生物统计工作时，我们应该根据具体的实验要求和样品特点，选择合适的方法进行统计，以保证结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的方法对大家有所帮助，谢谢阅读！。
活菌培养计数方法
活菌培养计数方法1.2 它也是衡量很多工作效果的一把尺子。
比如说在环境治理中，想要知道治理措施对微生物群落的影响，活菌计数能给我们答案。
这就如同在农田里，农民伯伯要知道地里有多少害虫，才能判断防治措施有没有用，活菌计数就是这样一个判断微生物相关工作成效的关键手段。
二、活菌培养计数的常见方法2.1 平板菌落计数法。
这是个经典的方法，就像老祖宗传下来的手艺一样靠谱。
把样品稀释后，接种到琼脂平板上，让细菌们在平板上“安营扎寨”，一个细菌经过繁殖就会形成一个菌落。
然后我们就像数星星一样去数这些菌落，再根据稀释倍数算出原来样品中的活菌数量。
不过这个方法也有点小麻烦，就像绣花一样，得小心操作，不然容易出错。
比如说稀释的时候手抖了一下，那结果可能就差之毫厘谬以千里了。
2.2 液体稀释法。
这个方法有点像玩猜数字的游戏。
把菌液进行一系列的稀释，然后接种到液体培养基中。
观察哪个稀释度的培养基最后有细菌生长，哪个没有。
通过这种方式来推算出原来菌液中的活菌数量。
但是这个方法有时候就像雾里看花，不是那么直观，得有一定的经验才能准确判断结果。
2.3 膜过滤计数法。
这个方法就像是用筛子筛东西一样。
把样品通过特定的滤膜，细菌就被留在滤膜上了，然后把滤膜放到培养基上培养，最后数菌落。
这个方法对于那些菌量比较少的样品特别适用，就像大海捞针的时候，这个方法能让你更容易找到那根针。
3.1 操作过程要严格无菌。
这是重中之重，就像士兵上战场要带好武器一样。
一旦有杂菌混入，那就会像一颗老鼠屎坏了一锅粥，结果就完全不可信了。
所以在操作的时候，要像做手术的医生一样小心翼翼，从培养基的制备到接种的每一个环节，都不能马虎。
3.2 培养条件要合适。
不同的细菌就像不同的植物，有的喜欢阳光，有的喜欢阴凉。
细菌对温度、湿度、氧气等条件都有要求。
如果培养条件不合适，就像把热带植物种到寒带一样，细菌可能长不好或者干脆不长，那计数结果肯定也是不准确的。
简述一种活菌计数方法
简述一种活菌计数方法引言活菌计数是一种常用的微生物实验技术，用于定量检测样品中活着的微生物细胞数量。
活菌计数方法的选择和实施对于食品、医药、环境和农产品等领域的微生物研究和质量控制至关重要。
本文将简要介绍一种常见的活菌计数方法，并对其原理和步骤进行说明。
原理一种常见的活菌计数方法是平板计数法，也称为表面计数法。
该方法基于假设，即每一个菌落抱有着一个活细菌。
该方法的核心步骤是将待测菌液均匀地涂布在培养基平板表面上，经过一定时间后，观察并计数菌落的数量。
计数结果可以通过菌落形态和颜色进行初步鉴定，进一步鉴定需要进行镜检、荧光检测以及生化试验等。
实施步骤以下是平板计数法的一般实施步骤：1. 准备培养基根据待测微生物的特性和需求，选择合适的培养基。
一般情况下，常用的培养基包括琼脂培养基、牛肉膏和肉汤等。
2. 涂布培养基使用酒精灯或火种，将培养皿和不锈钢镊子进行消毒。
取出培养皿，将待测菌液均匀地涂布在培养基平板表面上。
可以使用吸管、针筒或震荡器等工具来实现均匀涂布，确保菌液分布均匀、培养基平整。
3. 培养将涂布好的培养基放置在适宜的温度和湿度下，让细菌进行生长。
通常情况下，细菌培养需要在恒温培养箱内进行，温度和时间根据目标菌株的特性选择。
4. 计数经过一段时间，通常为24-48小时，观察培养皿表面的菌落。
使用放大镜、计数器或计数盘等工具，对菌落进行计数。
注意避免重复计数和遗漏计数，以提高准确性。
5. 数据分析根据计数结果，可以计算得到待测样品中的活菌数。
通过统计学方法，可以计算出可信的活菌数量区间，以反映样品中的微生物负载水平。
结论平板计数法是一种常见且易于实施的活菌计数方法。
该方法在微生物研究和质量控制中具有广泛应用，可用于食品安全、医药研发、环境监测等领域。
但该方法也存在一些局限性，例如不适用于复杂样品的计数（如含有大量细菌的食品），以及可能导致细菌聚集和均匀性差异等问题。
因此，在实践中，需要根据具体情况选择合适的活菌计数方法，并结合其他技术手段进行验证和补充，以得到准确可靠的活菌计数结果。
活菌技术的检测方法有几种
活菌技术的检测方法有几种活菌技术是一种重要的生物技术，用于检测和定量活菌的含量。
活菌是指具有生物活性的细菌、真菌或酵母等微生物。
活菌技术的检测方法主要有以下几种。
首先，最常见的方法是菌落计数法。
这种方法通过将待测样品在培养基上进行稀释，然后在固体培养基上培养一段时间，观察并计数形成的菌落数量。
菌落的数量与原液中的活菌数量成正比，因此可以通过菌落的数量来估计活菌的含量。
这种方法简单易行，但需要一定的培养基和培养时间。
其次，荧光染色法也是常用的方法之一。
这种方法利用荧光染料如乙酰乙酸酯酯化酶（FDA）或荧光素酶（Luciferase）染色细菌，并在荧光显微镜下观察。
活菌会显示出明亮的荧光信号，而死菌则不会。
通过计数荧光阳性的细菌数量，可以得到活菌的含量。
这种方法快速、灵敏，但对设备和染料有一定的要求。
另外，还有流式细胞术。
这种方法利用流式细胞仪对待测样品中的细胞进行快速和精确的计数。
在流式细胞仪中，细胞会被单个通过激光束，并通过检测细胞的荧光或散射信号来确定细胞的数量和特征。
通过设定特定的参数，可以区分出活菌和死菌，并计算活菌的含量。
这种方法高通量、准确，但仪器和专业知识要求较高。
最后，还有PCR法。
这种方法利用聚合酶链式反应（PCR）扩增待测样品中的细菌DNA或RNA，然后通过检测扩增产物的数量来估计活菌的含量。
PCR法可以快速、准确地检测少量的活菌，具有高度的敏感性和特异性。
但是，PCR法需要特定的引物和酶，对设备和实验条件有较高的要求。
总之，活菌技术的检测方法主要包括菌落计数法、荧光染色法、流式细胞术和PCR法。
这些方法各有优劣，可以根据实际需要选择合适的方法进行活菌的检测和定量。
随着科学技术的不断发展，相信未来还会有更多更高效的活菌检测方法被开发出来。
统计活菌数目常用方法
统计活菌数目常用方法
统计活菌数目常用方法有：
1. 流式细胞术：通过将细菌样本稀释，并利用流式细胞仪测量细菌在流速下通过细胞孔的数目，以估计活菌数目。
2. 表面计数：将细菌样本均匀涂布在培养基上，并进行恰当的培养条件。
然后使用显微镜观察并计数活菌的数目。
3. 过筛法：通过过滤细菌样本，使较大的细胞被滤去，只保留较小的活菌，然后将过滤膜培养，并进行活菌的计数。
4. 冷冻储存法：将细菌样本冷冻保存，并在适当的时间间隔内解冻一部分样本，并进行适当的培养条件下计数活菌的数目。
5. 颜色指示剂法：使用特定的染色剂或化学试剂，可与活菌进行反应并产生特定颜色的变化，然后通过测量颜色变化的强度或浓度来估计活菌的数目。
注意：以上方法仅为常见且常用的细菌活菌数目统计方法，实际操作中可能还会有其他方法和技术的应用。
活菌计数的方法及在药典中的应用
活菌计数法在药典中的应用 平皿法 薄膜过滤法
用稀释液稀释成1∶10、1∶102、 1∶103 等稀释级的供试液。
一、 平皿法
方法 取供试液1ml，置直径90mm 的无菌平皿中，注入15～20ml 温
度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母 浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种 培养基至少制备2 个平板。 凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2 个平板，均不得有菌 生长。
阴性对照试验 取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基， 培养和计数 除另有规定外，细菌培养3 天，霉菌、酵母菌培养5 天。
逐日观察菌落生长情况；点计菌落数。必要时，可适当延长培养时间 至7 天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点 计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报 告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的 菌落数不能相差1 倍或以上。
注
膜过滤法
膜过滤法是当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海 水或饮用水等样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并 经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上 ( 或一定面积中 ) 的 细菌数
比浊法
比浊法原理是在一定范围内，菌的悬液中细胞浓度与混浊度成 正比。即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以借 助于分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光 密度 (O ． D ． ) 表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓 度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。微生物计数法， 发展迅速，现有多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置 等方法。
基本操作：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
微生物的分离与活菌计数
微生物的分离与活菌计数实验二微生物的分离与活菌计数06级生科三班葛茜 40608136一.实验目的1、掌握倒平板的方法2、几种常用分离纯化微生物的基本操作技术3、学习平板菌落计数的基本原理和方法二.实验原理1 微生物的分离与纯化是指从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程2 分离纯化微生物的常用方法(1) 简易单细胞挑取法: 可以直接得到纯培养。
它需要特制的显微操纵器来分离单细胞，或直接在普通显微镜下利用低倍镜分离单孢子的方法。
(2) 平板分离法: 选择适合于目标微生物生长的培养基 ; 设计获取单菌落的有效方法 ;可确认纯培养3 活菌计数将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数4 涂布平板法是指摄取少量梯度的稀释菌悬液，置于以凝固的无菌平板培养基表面，然后用无菌的涂布棒把菌液均匀的涂布在整个平板的表面，经培养后，在平板培养基表面会形成许多独立分布的单菌落，然后挑取典型菌落进行移接到斜面。
5涂布平板法是使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀.混合平板法操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好.三.实验器材1.材料:土壤2.培养基:牛肉膏蛋白胨培养基3.仪器或其他用具:无菌培养皿，盛有9ml无菌水的试管，1ml移液器，玻璃涂布器，恒温培养箱四.实验步骤1 采样取表层以下5-10cm处的土样，放入灭菌的袋中备用，或放在4 ?冰箱中暂存。
2 倒平板(无菌操作)将培养基加热溶化，待冷至55-60?倒入培养基于无菌培养皿中，从桌沿慢慢推入摇匀待冷却，每个约倒15ml3 制备土壤稀释液(无菌操作)(1) 制备土壤悬液将5g土溶于45ml无菌水，振摇约20min,使土壤与水充分混匀，可加入玻璃珠促进土壤分散溶解，(2)梯度稀释用移液枪移取1ml土壤悬液于9ml无菌水以此类推制成10-2 、10-3、10-4，10-5等不同稀释度的土壤溶液 4 平板分离单菌落(无菌操作)(1) 平板划线(各用10-2、10-3、10-4、10-5浓度)在培养皿底用记号笔划分为四个面积不同的区域，且各角为120。
微生物活菌计数方法
微生物活菌计数方法
微生物活菌计数是一种定量的方法，用于确定给定环境样品中存在的活跃的微生物的数量。
常用的微生物活菌计数方法有以下几种：
1. 平板计数法：将样品制备成不同稀释度的溶液，均匀分配到琼脂平板上，放置在适当的条件下培养，通过计算每个平板上菌落的数量，以得出样品中微生物的活跃数量。
2. 液体计数法：将样品制备成一系列稀释度的液体悬浮液，分别在培养基中培养一定时间后，使用显微镜观察计数室进行计数。
3. 膜过滤法：将样品通过膜滤器，并将膜滤器放置在含有适宜营养物的琼脂平板上培养，通过计算每个平板上菌落的数量，以得出样品中微生物的活跃数量。
4. 流式细胞计数法：使用流式细胞术来计数活跃的微生物。
通过将样品中的微生物标记上荧光染料，并通过流式细胞仪进行计数和分析。
在进行微生物活菌计数时，需要注意样品的制备过程、培养条件的控制以及计数过程中的技术操作等因素，以保证结果的准确性和可重复性。
同时，根据目标微生物的特性和分布情况，选择合适的计数方法和适宜的培养条件也是非常重要的。
活菌数量计算公式
活菌数量计算公式活菌数量计算公式是微生物学实验中常用的计算方法之一。
活菌数量通常表示为CFU（Colony Forming Unit）/mL或g，是指1mL（或1g）液体或食品样品中的生长能力活细菌数量。
微生物学实验的目的是检测不同物质中的菌落总数，以评估食品的质量和卫生状况。
活菌数量计算公式包括两部分：菌落总数的计数和活菌数量的计算。
以下是详细解释。
1. 菌落总数的计数：a. 食品样品的处理：首先需要将食品样品处理成适合菌落生长的状态。
通常，用稀释液稀释食品样品，分别加入不同的无菌平板培养基，将处理好的样品分别均匀涂抹在平板上，在运输过程中需注意保存条件。
b. 平板培养：将处理好的样品在适宜的温度下进行培养，促进菌落的生长。
c. 菌落计数：菌落生长后，需要手动计数。
每个菌落都要视为1CFU，然后将所有可见的菌落数相加以得到总菌落数。
菌落计数需要进行重复实验，以确保结果的准确性，通常使用平均数法来计算得到最终结果。
2. 活菌数量的计算：a. 活菌的定义：在进行菌落计数时，只有活菌才能算作CFU。
活菌是指具有生长和繁殖能力的细菌。
b. 活菌数量计算公式：活菌数量可以通过如下公式进行计算：CFU/mL（或g）= 菌落总数 / （分离液的体积 x 稀释倍数）例如，如果在1 mL（或g）的食品样品中，分别种植了100个菌落，用30 mL的分离液进行稀释，在菌落计数后得到稀释液中菌落总数为100，那么活菌数量可以通过以下公式计算得出：CFU/mL（或g）= 100 / (1 x 30) = 3.33 CFU/mL（或g）公式前半部分是总菌落数，后半部分是分离液的体积与稀释倍数的乘积。
因此，由于菌落的稀释、分布和生长等因素的影响，活菌数量的计算需要注意这些方面。
需要注意的是，在进行实验之前，需要了解菌落生长和稀释液制备的理论知识，仔细进行操作并注意卫生和安全问题。
此外，实验结果可能受到试剂、培养基和装备等因素的影响，因此需要进行严格的实验控制，确保结果的准确性。
活菌计数参考材料
细菌计数参考材料一、检样稀释1、以无菌操作用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液。
2、另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。
3、根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。
二、基本原理平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。
三、器材大肠杆菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基，1ml无菌吸管，无菌平皿，盛有9ml 无菌水的试管，试管架和记号笔等。
四、操作步骤1、编号：取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-6、10-7各2套。
另取7支盛有9ml 无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10－7。
2、稀释用1ml无菌吸管精确地吸取1ml大肠杆菌悬液放入10-1的试管中，注意吸管尖端不要碰到液面，另取1支吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。
换一支吸管自10-1试管吸1ml放入10-2试管中，吸吹三次，……其余依次类推。
整个稀释过程如图Ⅷ-3。
3、取样用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-6、10-7的稀释菌液0．1ml，对号放入编好号的培养皿中。
4、计数培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度三个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×10 一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。
活菌计数应注意什么
活菌计数应注意什么活菌计数是一种用来测定特定样品中活跃菌落数量的方法。
它是微生物学中常用的一种分析手段，被广泛应用于食品、药品、饮料等各个领域。
在进行活菌计数时，需要注意以下几个方面：首先，选择合适的培养基。
不同菌种对培养基的要求不同，为了获得准确的结果，应选择适合目标菌种生长的培养基。
此外，培养基的成分应均匀分布，并具有足够的营养物质满足细菌的生长需求。
其次，样品的采集和处理要规范。
在采集样品时，要避免外界的污染，以免影响到结果的准确性。
对于液体样品，应使用无菌技术进行采样，并确保样品从采集到测定前保持在低温环境下，以尽量减少活菌数量的变化。
对于固体样品，应从各个部位均匀采样，并尽快送到实验室进行分析。
另外，培养条件的控制也是十分重要的。
菌落的形成需要适宜的温度、湿度和氧气含量等条件。
在进行活菌计数时，应根据目标菌种的生长特性，选择合适的培养温度和培养时间。
同时，还要提供适量的氧气和水分，以促进菌落的形成和生长。
此外，长时间的培养也可能导致菌落的过度生长，从而影响到活菌计数结果的准确性，因此需要合理控制培养时间。
在进行活菌计数时，还需要注意细菌的离子状态。
细菌在培养基中分布是非常不均匀的，有的细菌聚集成簇，有的则分散在培养基中。
因此，在进行活菌计数时，要进行适当的稀释，以保证每个菌落都能够被分开计数。
此外，还要注意避免溢出或传染其他菌种，以免造成结果的偏差。
最后，实验的重复性和准确性也需要注意。
为了充分了解样品中活菌的分布情况，应进行多次重复实验，以确保结果的可靠性。
此外，还需要注意消除操作过程中的误差，减少实验中可能产生的干扰因素，以提高结果的准确性。
总之，活菌计数是一种重要的微生物分析技术，正确进行活菌计数需要注意选择合适的培养基，规范样品的采集和处理，合理控制培养条件，注意细菌的离子状态，重视实验的重复性和准确性。
只有在注意这些关键点的基础上，才能获得准确可靠的活菌计数结果。
统计活菌数目的方法
统计活菌数目的方法在微生物学研究中，统计活菌数目是一个非常重要的工作。
活菌数目的准确统计可以帮助科研人员了解微生物的生长情况、抗菌药物的疗效以及环境中微生物的分布情况。
因此，科研人员需要掌握一些准确、可靠的方法来进行活菌数目的统计。
本文将介绍几种常用的统计活菌数目的方法。
首先，最常用的方法是平板计数法。
这种方法是将待测样品均匀涂布在富营养培养基的平板上，然后在适宜的条件下培养一定时间，待菌落形成后进行计数。
这种方法简单易行，且结果准确可靠，因此被广泛应用于微生物学研究中。
其次，膜过滤法也是一种常用的统计活菌数目的方法。
这种方法适用于水样、空气样等微生物含量较低的样品。
具体操作是将待测样品通过特制的滤膜，然后将滤膜放置在富营养培养基的平板上进行培养，最终统计菌落的数量。
膜过滤法可以有效地集中微生物，提高检测的灵敏度，是一种非常实用的统计方法。
另外，流式细胞术也被广泛应用于活菌数目的统计。
这种方法利用流式细胞仪对微生物进行快速、自动化的检测和计数。
流式细胞术具有高通量、高精度的特点，可以在短时间内完成大量样品的检测，因此在临床诊断和环境监测中得到了广泛的应用。
除了上述方法，还有一些新兴的技术被引入到活菌数目的统计中，例如荧光显微镜技术、基因测序技术等。
这些新技术在提高统计准确性的同时，也大大提高了统计的效率。
总的来说，统计活菌数目的方法多种多样，每种方法都有其适用的场景和特点。
科研人员在选择统计方法时，应根据实际情况和研究目的进行合理的选择，以确保统计结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的方法可以对大家有所帮助。
测定活菌数量的方法
测定活菌数量的方法活菌数量检测是微生物学研究的重要组成部分，它可以确定某物中的微生物的优势或有害性状态。
活菌数量的检测可以帮助更好地了解生物的行为和影响，也可以验证实验室或医学研究中与微生物关联的现象。
活菌数量检测采用不同的技术，包括微生物培养、荧光原位杂交、定量PCR等技术，但最常用的方法是培养方法。
该方法的基本原理是，使用适宜的培养基培养指定的微生物，并根据在培养基上发育的培养层中微生物形成的范围来统计细菌个体数量。
培养方法包括混合平衡培养（MBC）和最小活性极限（MAC）培养。
混合平衡培养将培养基调节到处于均衡状态，从而激活所有活菌，而最小活性极限培养则将培养基优化至少活动的因子，以激活少数生存污染物。
当指定的微生物在添加到培养基中的适宜条件下发育时，它会增殖并形成一个或多个集逐。
每行表示一个微生物菌群，每行的数量则表示该菌群的数量。
一旦计数完成，结果就可以根据被测物中活菌个体数量的结果来解释。
活菌数量检测对细菌分离，鉴定和鉴别微生物很有帮助，可以更准确地分析细菌的优势和害处方面。
此外，它还可以用于研究细菌的抵抗机制、传播和控制等，从而为解决医学、公共卫生和实验室诊断中面临的微生物研究问题提供有用的信息。
活菌数量检测是食品安全研究，食品源头识别和质量研究中最重要的一项内容。
它可以帮助我们确定某种微生物浓度、有害物质或其他潜在污染物。
此外，活菌数量检测还是病原体诊断研究、感染控制和农业生产力控制方面的重要检测方法。
总之，活菌数量检测是微生物研究的一项重要技术，由于其灵活性和可靠性，它已经在许多不同的领域得到广泛应用，包括公共卫生、环境监测、农业科学、病原体诊断、药物研究等等。
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摘自《消毒技术规范》2002版（中华人民卫生部）第25-27页
2.1.1.3 活菌培养计数技术
2.1.1.
3.1 适用范围
测定细菌悬液、菌片、采样液等样本中含有活菌的数量。
2.1.1.
3.2 试验器材
（1）刻度吸管（1.0ml 、5.0ml ）。
（2）稀释液：见附录A 。
（3）营养琼脂培养基：见附录A 。
（4）电动混合器
2.1.1.
3.3 操作程序
本规范要求在杀菌试验中的活菌培养计数统一使用倾注法。
其操作程序如下。
（1）对菌悬液可直接进行培养计数。
对菌片、采样棉拭与小型固体样本等，应将其上的细菌洗下成为菌悬液后进行培养计数。
洗菌时，一般以稀释液为洗液。
具体方法如下: 取含 5.0ml 稀释液无菌试管，对菌片或小型固体样本直接投入即可，对棉拭则将其采样端剪入管内，每管一份样本。
而后，用电动混合器混合20s （或在手掌上用力振敲 80 次），将菌洗下形成菌悬液。
以上操作应严格按无菌要求进行。
（2）将试管按需要数量分组排列于试管架上， 每管加入 4.5ml 稀释液。
各组由左向右，逐管标上 10-1、10-2、10-3......等。
（3）将菌悬液样本在用电动混合器混合20s （或在手掌上用力振敲 80次），随即吸取 0.5ml 加至 10-1 管内。
（4）将 10-1 管依前法用电动混合器混合20s （或在手掌上用力振敲 80次），混匀，再吸取出0.5ml 加入10-2 管内。
如此类推，直至最后一管。
必要时，还可作某稀释度的1:1或1:4稀释。
（5）选择适宜稀释度试管（以预计生长菌落数每平板为 15cfu ～300cfu 者为宜），吸取其中混合均匀的悬液 1.0ml 加于无菌平皿内。
每一稀释度接种 3个平皿。
一般需接种2个～3个不同稀释度。
平皿加样前，应先按组编号，以免弄混。
（6）将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿15ml ～20ml 。
（7）将平皿盖好，即刻轻轻摇动混匀，平放于台上。
待琼脂凝固后，翻转平皿，使底向上，置37℃温箱内培养。
（8）每日观察细菌生长情况。
培养至规定时间（细菌繁殖体为 48h ，白色念珠菌与细菌芽孢为 72h ），计数最终结果的菌落数。
（9）对菌片和采样棉拭洗液的活菌培养计数，先按各试验要求处理（如去除残留消毒剂等），而后取其最终样液按上法进行培养计数。
（10）计数菌落时，一般以肉眼观察，必要时用放大镜检查。
以菌落数在15cfu ～300cfu 的平板为准，每个稀释度 3 个平板生长菌落数全合乎上述标准，则以该3个平板的菌落平均值作为结果；若有2个符合上述标准，则以该合格的两个平板菌落的平均值为结果。
但对黑曲霉菌活菌计数及杀灭试验时，平板菌落数应在15cfu ～100cfu 之间。
对估计菌量极少的样本（如消毒处理后样本），在培养计数时可不作稀释，即使平板菌落数未达15时，亦可用其计算最终结果。
将求得的平均菌落值，再乘以稀释倍数，即得每毫升原样液中的菌量。
菌量单位为cfu 。
2.1.1.
3.4 活菌计数中技术操作误差的测定
试验者在活菌计数中因技术操作而引起的菌落数误差率（平板间、稀释度间）不宜超过10%。
对误差率的自检，可按以下公式计算。
（1）平板间误差率计算公式：
%100⨯=平板间菌落平均数
平板间菌落数平均差平板间误差率
平板数的绝对值之和各平板菌落数平板间菌落平均数平板间菌落数平均差)(-=
平板数
各平板菌落数之和平板间菌落平均数=
（2）稀释度间误差率计算公式：
%100⨯=
稀释度间菌落平均数
稀释度间菌落数平均差稀释度间菌落数误差率 稀释度数
的绝对值之和各稀释度菌落数稀释度间菌落平均数稀释度间菌落平均差)(=
稀释度数
和各稀释度平均菌落数之稀释度间菌落平均数=
2.1.1.
3.5 注意事项 （1）严格无菌操作，防止污染。
（2）认真检查试验器材有无破损（要特别注意试管底的裂痕和破洞），以防丢失样本和污染环境。
（3）注意菌液的均匀分散。
（4）稀释或取液时要准确，尽量减少吸管使用中产生的误差。
（5）每吸取一个稀释度样液，必须更换一支吸管，以减少误差。
（6）样液接种于平皿后应尽快倾注营养琼脂培养基，避免样液干燥于平皿上，影响结果的准确性。
（7）倾注时琼脂培养基温度不得超过45℃，以防损伤细菌或真菌。
倾注和摇动时，动作应尽量平稳，以利细菌分散均匀，便于计数菌落。
勿使培养基外溢，以免影响结果的准确性和造成环境的污染。
（8）为提高试验成功率，最好先用浊度计对原菌液含菌量做出估计，尽可能在首次试验时所取的有限稀释范围内（2个～3个 稀释度）即有长菌在 15cfu ～300cfu 之间的平板。
（9）结果计算时，必须弄清稀释倍数，以免计算错误。