芽孢杆菌活菌数及芽孢数检测方法
饲料中细菌cfu统计方法(饶正华)
饲料中细菌cfu统计方法（饶正华）| [<<][>>]CFU即为菌落形成单位，是平板计数法的常用单位。
平板计数法是检测饲料中细菌总数、活酵母数、芽孢杆菌数及乳酸菌数的常用方法之一，因此CFU值的准确与否直接关系到产品的质量好坏。
微生物平板计数的通常方法为每个样品用3个稀释度，每个稀释度常做3个重复，但如何对平板菌落进行正确计数、3个稀释度以哪一个稀释度进行计数以及微生物检测允许误差等问题，在饲料标准中并未有所规定，而这些问题与CFU统计值的准确性是密切相关的。
1 菌落统计方法1．1 平板选择细菌常选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落计数标准。
每一稀释度采用两个平板菌落的平均数，如两个平板其中一个有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长平板作为该稀释度的菌落数，如片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全板菌落数。
1．2 计数方法作平板菌落计数时，一般无用肉眼观察，用钢笔或蜡笔在平板上进行点数，必要时可借助于放大镜检查有无遗漏的微小菌落。
在计数出各平板菌落数后，求出同一稀释度菌落的平均数。
表1 平板上菌落数对应的标准差平板上菌落数(个/皿)30≤x≤50x≤99100≤x≤300标准差(±)10.020.050.0如三个重复分别为43、32、46，则平均值为40．3，（x-x）2分别为72.9、68．89、32.49，δ＝± 7．37，写成±7．4（一）。
将检验所得的标准差作修约处理，与标准规定的允许误差作比较，只要越出规定的极限数值都判定为不符合标准要求，示例见表2。
表2 菌数的测定误差与判定示例稀释平板菌落数(个/皿)检测中允许的误差(δn-1)平板菌落数测定值(个/皿)是否符合要求重复1重复2重复3平均值标准差(δn-1)30 ≤x≤50 ±1 0.042614750.0±0.0(-)符合40605050.0±10.0符合40605150.3±0.0不符(+) 37635050.0±13.0不符51≤x≤99 ±2 0.061868276.3±3.4(+)符合57554953.7±4.2(-)符合906310285.0±0.0(-)符合915910585.0±3.6(-)不符100≤x≤300 ±50.010*********.7±4.0(+)符合298206286263.3±0.0(+)不符297206287263.3±0.0(-)符合300174286253.3±9.1(-)不符3 菌落计数①应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告；②如有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，视两稀释液测定值之比来决定，如其比值小于2，应报告其平均数；如大于2，则报告其中较小的数字；③如所有稀释度的平均菌落数均大于30 0，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；④如所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；⑤如所有稀释度均无菌落生长，则以小于①乘以最低稀释倍数报告；⑥如所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
02地衣芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程
文件名称地衣芽孢杆菌活菌数的测定操作规程文件编号HC-SOP-002编制人编制日期年月日颁发部门审核人审核日期年月日印制份数批准人批准日期年月日生效日期年月日分发部门质量管理部、生产部目的：建立地衣芽孢杆菌活菌数含量的测定标准操作规程范围：本方法适用于的地衣芽孢杆菌活芽孢的测定责任人：QC内容：1.仪器与工具：电子天平、生物显微镜、摇床、18×180mm试管、500ml三角瓶、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管2．试剂与试液：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、无菌蒸馏水、吐温80等。
3.检测培养基配方：牛肉膏3g、蛋白胨10g、琼脂16g、葡萄糖5g、蒸馏水1000ml，调至PH7.2，121℃灭菌30min。
4.检测步骤：4.1 菌液制备：采样量不少于500g，从所采的样品中精确称取10.00g试样，加入已灭菌的带玻璃珠（玻璃珠在70个左右）的500ml锥形瓶中，再加入30ml已灭菌的无菌水，在摇床上200r/min摇动30min，再补加60mL已灭菌的无菌水，在摇床上200r/min摇动30min，即成母液的菌悬液。
4.2 用1ml无菌吸管吸取1ml上述母液的菌悬液，加入9ml无菌水混匀成1：1×101稀释的菌悬液，这样依此稀释，直至得到1：106；1：107；1：108；1：109等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。
4.3 用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液1ml，加至已灭菌的平皿中，再加入50℃左右的培养基，向每个培养平皿中倒入约12ml培养基，混合均匀，待凝固后，倒置于38℃的恒温培养箱内培养36h—42h。
每个样品取3个连续适宜稀释度，每个稀释度重复3次，同时加入无菌水的空白对照，每个稀释度取5个到10个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察识别后计数菌落。
5.菌落计数： 5.1 以平板上出现30个——300个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数。
5.2 当只有一个稀释度，其平均菌落数在30个——300个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。
酪酸梭状芽孢杆菌
摘要酪酸梭状芽孢杆菌，存在于人和畜禽肠道内，分类归属于梭菌属，为革兰氏阳性厌氧杆菌，是一种益生菌。
酪酸梭状芽孢杆菌作为微生态制剂，本身能形成内生芽孢，具有耐高温、耐酸、耐胆盐、耐部分抗生素等特性，目前广泛应用于调理人体肠胃的整肠类药品，能大幅降低肠炎的发病率，对菌群失调引起的腹泻，抗生素相关的肠炎，便秘等均有良好疗效，且无任何毒副作用。
此外酪酸梭状芽孢杆菌作为兽药和饲料添加剂，比非芽孢类活菌制剂有显著的优势。
由于酪酸梭状芽孢杆菌制剂有以上的诸多优良特点，本论文采用酪酸梭状芽孢杆菌做为研究对象。
与此同时，随着环境保护要求的日趋严重，资源枯竭，节约资源迫在眉睫。
为了节约电能，节约成本，避免用离心的方法沉降微生物，寻找酪酸梭状芽孢杆菌絮凝的最佳物质，最佳浓度有着重要及实际意义。
本实验根据各种物质对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝机理不同，以寻找最适合的絮凝剂。
主要对比微生物自身沉降，三种不同的壳聚糖絮凝，生物絮凝制剂，硅藻土，沸石粉及碳酸钙对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝效果，采用梯度对比实验，进行单因素浓度分析，通过絮凝后对上清液中活菌体浓度的来比较絮凝的效果，以优化出合适的絮凝剂及其最适使用浓度。
经过一系列的实验表明，壳聚糖（DAC≥90%）在其浓度为0.1%时对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝效果最好，代替离心沉降微生物的方法，并达到节约能源节约时间，人力的目的。
关键词：酪酸梭状芽孢杆菌；微生物絮凝；最适浓度AbstractClostridium butyricum is a kind of probiotics. It is Attributed to Clostridium, a Gram-positive anaerobic bacillus. It can generate endogenous spore. Clostridium butyricum has strong ability to resist high temperatures, low pH and some antibiotics. Clostridium butyricum is widely used in human health as gastrointestinal medicine. It can significantly reduce the incidence of colitis caused by diarrhea, antibiotic-associated colitis, constipation, etc. So this paper adopts the butyric acid clostridium as research object.At the same time, as the requirement of environmental protection has become increasingly serious, resource depletion, save resources is imminent.In order to save power, save costs, avoid to use the method of centrifugal sedimentation microbes, looking for butyric acid clostridium flocculation of best material, the best concentration has important and practical significance.This experiment according to various substances of butyric acid clostridium flocculation mechanism is different, to find the most suitable flocculant. Microbial subsidence of main contrast, three different types of chitosan flocculation, biological flocculating agents, diatomite, zeolite powder and calcium carbonate of butyric acid clostridium flocculation effect, gradient is used to contrast experiment, the concentration of single factor analysis, through after flocculation of live bacteria concentration in the supernatant fluid to compare the effect of flocculation, in order to optimize the suitable concentration of flocculating agent and its optimal use.After a series of experiments showed that chitosan (DAC 90% or higher) in the concentration of butyric acid was 0.1% of clostridium flocculation effect is best, instead of the microbial centrifugal sedimentation method, and achieve energy conservation to save time and manpower.Key words: Clostridium butyricum; Microbial flocculation; The optimal concentration目录序言 ................................................................................................................................................... - 1 -第1章实验材料 (4)1.1菌种来源 (4)1.2主要原材料 (4)1.3主要实验仪器 (5)1.4培养基 (5)第2章实验方法 (6)2.1培养方法 (6)2.2溶液的配制及浓度 (6)2.3检测方式 (6)2.3.1原始菌液，上清液中活菌数及芽孢数的检测方法 (6)2.3.2数据的处理 (7)2.4实验方法 (7)2.4.1壳聚糖(DAC≥90%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (7)2.4.2壳聚糖(DAC≥85%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (7)2.4.3水溶性壳聚糖对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (7)2.4.4生物絮凝剂对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (8)2.4.5硅藻土对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (8)2.4.6沸石粉对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (8)2.4.7碳酸钙对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (8)2.4.8离心对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (9)2.4.9絮凝剂的优化实验 (9)第3章结果与讨论 (10)3.1有机絮凝剂对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝效果 (10)3.1.1壳聚糖(DAC≥90%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (10)3.1.2壳聚糖(DAC≥85%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (11)3.1.3水溶性壳聚糖对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (12)3.1.4生物絮凝剂对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (13)3.1.5离心絮凝酪酸梭状芽孢杆菌 (14)3.1.6絮凝剂的优化—壳聚糖(DAC≥90%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (14)3.2无机絮凝剂对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝效果 (15)3.2.1硅藻土对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (15)3.2.2沸石粉对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (16)3.2.3碳酸钙对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (17)3.2.4絮凝剂的优化—硅藻土对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (18)第4章结论 (20)参考文献 (21)致谢 (22)序言1. 酪酸梭状芽孢杆菌简介酪酸梭状芽孢杆菌(Clostridium butyricum)，即丁酸梭状芽孢杆菌。
活菌培养计数检验方法
1
2
3
4
5
6
……
稀释级别
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
……
3.2.5用无菌刻度吸管从 管内吸取1ml混匀后的菌液样本，加至 管内。
3.2.6将 管依照前面方法在手掌上用力振敲80次混匀，再吸取出1ml加入 管内，依照此方法，直至最后一管。
3.2.7选择适稀释度试管，以吸取其中混合均匀的菌液1ml加入无菌平皿中，每一稀释度接种3个平皿，需接种3个不同稀释度，平皿加样前，应先按组编号，以免弄混。
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A.0
活菌计数检验方法
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生效日期
2020/01/02
3.3.3到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0~4℃，但不得超过24小时。
3.3.4计数时应选取菌落数在30~300之间的平板。
3.3.4.1若有两个稀释度均在30~300之间时，应以二者的比值（比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值）决定，比值小于或等于2时，以两个稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均值报告菌数；比值大于2但不超过5时，以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数；当出现比值大于5时或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明原因再行检查。
3.2.8将冷至40℃～45℃的熔化营养基倒入已加入样液的平皿中，每平皿15～20ml。
3.2.9将平皿盖好立刻轻轻摇动均匀，平放于台上，待琼脂凝固后，翻转平皿，使底朝上，置35±2℃恒温箱内培养。
3.3观察、计数和报告
3.3.1每日观察细菌生长情况，培养至48小时计算最终结果的菌落数。
【doc】枯草芽孢杆菌发酵培养基优化培养实验
枯草芽孢杆菌发酵培养基优化培养实验枯草芽孢杆菌发酵培养基优化培养实验吴俊罡张秉胜刘吉华秦贵江王梅雪张红霞庚涛(大连翔大生物技术研究中心有限公司)摘要本文从生产实际出发,针对生产用菌种,通过对培养基碳源,氮源等的选择及配比的正交实验,得出最适培养基.关键词:枯草芽孢杆菌芽孢率活菌数培养基前言枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是我国农业部允许作为饲料添加剂的两种芽孢杆菌之一.其已被越来越多地研制成饲用微生态制剂.因其制剂是无毒,无残留,无污染的"绿色"添加剂,故具有广阔的发展前景,并已在畜牧业,饲料行业广泛应用,显示了巨大的社会效益和生态效益.枯草芽孢杆菌具有很强的蛋白酶,脂肪酶,淀粉酶等活性,能产生抗菌素,在动物肠道内具有较强生物夺氧能力.这些特性对促进动物营养的消化吸收,提高动物的饲料转化率和防病促进生长起到重要作用.现阶段的工业化生产中,常存在着发酵周期长,芽孢形成率低,成本高等问题,对此我们对发酵培养基进行了优化实验,以提高枯草芽孢杆菌的产量并降低生产成本.材料与方法材料菌种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis),翔大生物技术研究中心有限公司保存.主要试剂牛肉膏,蛋白胨,氯化钠,葡萄糖,淀粉,硫酸锰,葡萄糖等.主要设备P270普通摇床,303AB一3隔水式培养箱,1600倍微生物显微镜,PHS一25G型酸度计,50升高级发酵罐,电热干燥箱等.检测方法活菌计数采用平皿活菌计数法,芽孢率采用芽孢染色后显微镜下计数比较.检测培养基:牛肉膏0.3%,蛋白胨1%,葡萄糖1%,氯化钠0.5%,琼脂2%菌种处理安培管菌种活化:用无菌吸管吸取0.3--0.5毫升无菌水滴入安培管,轻轻震荡使冻干菌体溶解成悬浮状,取0.1--0.2毫升菌悬液涂于上肉汤培养基平皿上,37℃培养36小时.菌种筛选:挑取少许活化后菌落划线于促芽孢形成培养基(土壤浸出液1000毫升,牛肉膏6可克, 蛋白胨5克,琼脂20克,pH7.0～7.2)平皿上,37℃培养20小时左右取出,选大菌落挑到装有4.5毫升无菌水的试管中,震荡均匀后置120oC干燥箱中加热20分钟,再涂布于促芽孢形成培养基的平皿上培养,反复多次.最后选取平皿上的大菌落转接到促芽孢培养基的试管斜面上,37℃培养箱培养l3～15 小时拿出放入4~C冰箱保存备用.筛选前后种子作对比:从冰箱中拿出筛选前后的种子斜面各1支,分别接入装有肉汤培养基的三角瓶中,在37℃,每分钟195转的摇床上振动培养,每3小时涂片观察一次,培养36小时记录活菌数和芽孢率. 此过程重复3次.培养基选择首先选择四种不同培养基进行摇瓶培养比较,观察菌数和芽孢形成情况.培养基的配制:①号培养基:淀粉0.15%+葡萄糖0.5%+尿素0.1%+磷酸氢二钾0.3%+磷酸二氢钾0.15%+硫酸镁0.05%+酵母膏0.02%+氯化铁0.01%+碳酸钙0.01%+大豆粕1%;②号培养基:淀粉0.15%+葡萄糖0.5%+尿素0.1%+磷酸氢二钾0.3%+磷酸二氢钾0.15%+硫酸镁0.05%+酵母膏0.02%+氯化铁0.01%国外畜牧学——猪与禽第23卷第3期2003年5月?31'+碳酸钙0.01%+大豆粕1%+淀粉0.3%+3.08%浓度的硫酸锰溶液0.1%.③号培养基:牛肉膏0.3%+蛋白胨1%+葡萄糖1%+氯化钠0.5%;④号培养基:牛肉膏0.3%+蛋白胨1%+葡萄糖1%+氯化钠0.5%+淀粉0.3%+3.08%浓度的硫酸锰溶液0.1%;以上所有各种培养基的pH均调为7.0～7.2.以上每种培基各做三瓶,装液量100毫升/500毫升三角瓶,用四层纱布和牛皮纸包扎置立式压力蒸汽消毒器中于121℃灭菌20分钟,取出备用.摇瓶种子制备:将在冰箱保存的种子在无菌室内接入肉汤培养基中,在37℃,每分钟195转的摇床上振荡培养12小时.接种和培养:培养好的种子液以10%接种量分别接入四种不同培养基中37℃振荡培养,每隔12小时检测一次,36小时结束培养.此过程重复3 次.正交实验:我们将上述摇瓶结果相对较好的②号培养基作为基本培养基,设计了四个因素,三个水平的正交实验,以进一步优化培养基配比(培养36 小时测活菌数).正交实验设计见表1(所用培养基中其它营养成分不变).表1正交实验设计简表发酵罐实验以摇床正交实验得出的最佳培养基进行50升发酵罐培养,并与肉汤培养基进行对比.发酵罐培养的有关条件如下:定容30升,加消泡剂3‰,用NaOH溶液调pH值到7.5～8.0(注:因为灭菌后pH约下降0.5～1.0),培养121'112灭菌20分钟,培养温度37'112,搅拌转速200转/分钟,起始气流量比1:0.5.当芽孢率达到80%以上时,发酵结束.此实验重复两次.结果和讨论菌种处理结果从菌种优化的三次结果看:经优化后在相同的培养时间内(36小时)芽孢形成率由原先的约38% 提高到约96%,活菌数也由17.7亿/毫升提高到28.6亿/毫升.菌种处理结果见图1.处理前芽孢形成率(%)菌种处理结果处理后臼活菌数(亿/毫升)摇床实验的结果摇床实验所确定的四种培养配方依据是:①号培养基为普遍应用于培养细菌的培养基配方,③号培养基为经验配方,②号和④号培养基配方是在①,③号培养基的基础上分别添加0.3%的淀粉和添加30.8ppm浓度的硫酸锰而成.通过本试验证明锰离子,淀粉对芽孢形成有促进作用.②号培养基配比要明显优于其它三种培养基配比,培养到36小时芽孢率可达到95%以上,活菌数可达到27亿/毫升,故我们选择②号培养基作为基本培养基进行正交实验.摇床实验的结果见表2.表2摇床实验的结果培养基和检测项目培养时间(小时)122436培养基①芽孢率(%)活菌数(亿魔升)培养基②芽孢率(%)活菌数(亿魔升)培养基③芽孢率(%)活菌数(亿魔升)培养基④芽孢率(%)活菌数(亿魔升)个别芽孢约40约8026.2518.615.4个别芽孢约50约10027.1528.4526.2个别芽孢约50约8015.7519.112.25个别芽孢个别芽孢约2514.3619.2511.75正交实验结果表3显示了正交实验的结果.由表可见,影响因素为:MnSO4>豆粕>淀粉>葡萄糖;适宜条件为:葡萄糖1.5%,淀粉0.2%,豆粕3%,Mn-SO40.1%,磷酸氢二钾0.3%,磷酸二氢钾0.15%,.32.国外畜牧学——猪与禽第23卷第3期2003年5月∞∞∞∞加0目硫酸镁0.05%,酵母膏0.02%,氯化铁0.01%,碳酸钙0.01%.表3正交实验的结果发酵罐实验结果以摇床正交实验得出的最佳培养基进行50升发酵罐培养,与肉汤培养基培养的两次比较实验,结果基本稳定.采用优化培养基的培养结果比肉汤培养基有很大提高,主要体现在:①发酵周期缩短了24～26小时,在发酵生产中降低了能耗,且可提高年产量;②最终活菌数提高了约54.7%.芽孢形成比率高,菌体死亡率较优化前低24.7%.图2显示了两种培养基两次培养结果的对比.结论适合该菌株发酵的培养基配比为:葡萄糖1.5%,淀粉0.2%,豆粕3%,MnS040.1%,磷酸氢二钾0.3%,磷酸二氢钾0.15%,硫酸镁0.05%,酵母膏0.02%,氯化铁0.01%,碳酸钙0.01%.(参考文献7篇略)一◆l:了||I::||l:||.一-.一一./'一■——一一'———◆..-,一t一▲v..一.一二'.一一一.～.?:::!::,6l014182226303438424648培养时间,时)注:芽孢率1,活茵数1,芽孢率2,活茵数2代表两次肉汤培养基配方发酵培养结果;芽孢率3,活茵数3,芽孢率4,活茵数4代表优化的培养基配方发酵培养结果.图2两种培养基培养结果的对比代邮:257000鲁东营IZl区河滨路东营力大王农畜产公司于勇510000广州天河广汕路高唐科技产业园廖益平我们已将你们买的书寄出,但被邮局退回了,原因是"原写地址不详",希望你们见此通知后速与《国外畜牧学——猪与禽》编辑部联系.谢谢!国外畜牧学——猪与禽第23卷第3期2003年5月?33?∞舳∞∞∞∞加m0晕。
枯草芽孢杆菌活菌计数方法
枯草芽孢杆菌活菌计数法
1．实验器材
培养箱，超净台，灭菌锅
90mm培养皿，玻璃涂布棒，三角瓶，5ml、1ml、100µl移液枪及枪头，试管架，试管，无菌水（器具耗材均需提前高温高压灭菌）。
2．实验方法
1）配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
蛋白胨1%
牛肉膏0.3%
氯化钠0.5%
葡萄糖1%
琼脂2%
121℃高压灭菌20分钟。
2）接种
a）将已灭菌的营养琼脂培养基倒入已干灭好的培养皿中，约25mL/90mm培养皿，待凝固后备用。
b）以准确称取检样0.1g（或1.00mL）放入含有100mL无菌水的玻璃三角瓶中，充分溶解，即配制成1：1000的稀释液。
c）取0.1mL 1：1000的稀释液注入含有9.9mL无菌水离心管中，涡旋混匀，此为10-5的稀释液。
d）按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一个1mL无菌吸头，根据对样品菌落生长情况的预实验，选择合适的稀释
度，最终选择10-7，10-8，10-9 三个稀释梯度。
e）吸取0.25mL稀释液于营养琼脂平板上，用涂布器将菌液涂布均匀，每个稀释度做3个平皿，倒置于30℃恒温培养箱中，培养24h 后取出，计算平板内枯草芽孢杆菌总数目，乘以稀释倍数，即得每克试样所含枯草芽孢杆菌总数。
3 计数
计算平板内枯草芽孢杆菌总数目，乘以稀释倍数，即得每克试样所含枯草芽孢杆菌总数。
地衣芽孢杆菌活菌颗粒检测标准
地衣芽孢杆菌活菌颗粒检测标准
地衣芽孢杆菌活菌颗粒检测标准主要包括以下几个方面：
1. 外观：应呈浅黄色颗粒状，无明显杂质。
2. 微生物限度：每克颗粒中应含有不少于亿个地衣芽孢杆菌活菌。
3. 安全性检测：如急性毒性、长期毒性等，以确保产品安全。
4. 稳定性检测：检查产品在不同温度、湿度等条件下的稳定性。
5. 卫生指标：如铅、砷、汞等有毒物质含量，应符合相关卫生标准。
6. 质量标准研究：确定产品的质量标准，包括颗粒大小、水分、pH值、干燥失重等指标。
7. 药效学研究：研究地衣芽孢杆菌活菌颗粒的药效学性质，以评估其治疗效果。
8. 药代动力学研究：研究地衣芽孢杆菌活菌颗粒在人体内的吸收、分布、代谢和排泄情况。
9. 临床试验：进行临床试验，以评估地衣芽孢杆菌活菌颗粒的有效性和安全性。
请注意，这些标准仅为一般性指导，具体检测标准可能会因不同的生产商、产品类型和用途而有所不同。
在实际操作中，还需参考相关法律法规和产品说明书，以确保准确、安全地检测地衣芽孢杆菌活菌颗粒。
芽孢的理化性质、芽孢率的定性与定量检测方法
芽孢杆菌定性定量检测方法近年来，微生态制剂在调控动物体内微生态平衡等方面的研究和应用正逐步深入，我国现在已经允许使用的安全微生物有很多种，枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）因具有稳定性好、抗性强、复活率高等自身优势，成为研究和应用较多的菌种之一。
它在目标动物肠道中，通过生物夺氧作用，拮抗致病微生物，并产生多种消化酶和多种营养物质，调节消化道健康，增强动物体的免疫功能，预防疾病的发生，达到促进目标动物的生长、提高饲料的转化率的目的。
在微生态制剂检测中芽孢杆菌的数量以及芽孢率是衡量微生态制剂产品质量的重要指标。
本文旨在介绍芽孢杆菌的特点及其快速、简便的定性、定量检测芽孢杆菌的方法。
一、枯草芽孢杆的理化性质枯草芽孢杆菌菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色（见图1），在液体培养基中生长时，常形成皱褶。
需氧菌。
单个细胞微米、着色均匀。
无荚膜，全身鞭毛能活动。
革兰氏阳性菌，芽孢微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大（显微形态见图2）。
图1 枯草芽孢杆菌平板菌落图2 枯草芽孢杆菌显微形态二、芽孢孢子的定性检测1、染色基本方法如下：（1）取微生态制剂样品1g，加入99mL无菌水，充分摇匀，37℃ 20-30min；（2）用接种环，取菌液，涂于载玻片，风干固定；（3）在涂菌液加入%孔雀绿饱和水溶液，染色10分钟后，用水冲洗至无绿色即可，再用%品红液染色1min，水冲洗、风干后镜检（100倍油镜加香柏油1滴）。
2、结果判断：芽孢孢子呈绿色，营养体呈红色。
三、芽孢孢子的定量检测1、血球计数板法（1）原理：利用血球计数板在光学显微镜下，查出芽孢个数，再用公式计算出1克样品中含芽孢个数。
（2）仪器：血球计数板（25×16格），光学显微镜，刻度吸管，三角瓶，振荡器和玻璃球。
（3）方法和步骤：?a、取样及样品制备：称取待测样品1克（精确到克）装入盛有99毫升水的三角瓶中，然后用振荡器或加玻璃球摇匀，使菌液均匀分布。
菌种测定方法
菌种测定方法(总7页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--附录 A（规范性附录）枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌、植物乳杆菌的计数和杂菌率的测定A.1 原理每个活菌在适宜的培养基和良好的生长条件下，经过合适的培养时间可繁殖成一个肉眼可见的菌落，通过对菌落数量的统计，便可计算出相应样品的单位活菌数。
A.2 培养基除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682规定的三级水或相当纯度的水。
按本标准规定的方法配制培养基或购买商品化的产品。
A.2.1 枯草芽孢杆菌培养基A.2.1.1 成分营养琼脂 33g；蒸馏水 1000mL。
A.2.1.2 制法将33g营养琼脂溶解于蒸馏水中，定容至1000mL；121℃灭菌20min。
A.2.2 酿酒酵母菌培养基A.2.2.1 成分孟加拉红培养基；蒸馏水 1000mL。
A.2.2.2 制法将孟加拉红培养基溶解于蒸馏水中，定容至1000mL；121℃灭菌20min。
A.2.3 植物乳杆菌培养基A.2.3.1 成分蛋白胨 10g；牛肉膏 10g；酵母提取物 5g；磷酸氢二钾 2g；柠檬酸三铵 2g；乙酸钠5g；葡萄糖 20g；吐温-80 1mL；七水硫酸镁；四水硫酸锰；琼脂粉 20g；灭菌碳酸钙 3g；蒸馏水 1000mL。
A.2.3.2 制法将上述试剂依次溶解于蒸馏水中，七水硫酸镁和四水硫酸锰单独用蒸馏水溶解后混入前述溶液中，最后加入琼脂粉，定容至1000mL；121℃灭菌20min。
A.2.4 麦康凯培养基A.2.4.1 成分蛋白胨 17g；脙胨 3g；猪胆盐（或牛、羊胆盐） 5g；氯化钠 5g；琼脂 17g；蒸馏水1000mL；%结晶紫水溶液 10mL；%中性红水溶液 5mL。
A.2.4.2 制法A.将蛋白胨、脙胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正。
将琼脂加入600mL蒸馏水中，加热溶解。
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程
蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程一、引言蜡样芽孢杆菌是一种常见的微生物，其活菌数含量的测定对于粮食、食品和医药行业具有重要意义。
本文档旨在提供一份蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程，以确保测定结果准确可靠。
二、仪器与试剂- 无菌培养基- 自动培养箱- 显微镜- 十倍镜- 干燥烘箱- 无菌分注器- 离心机- 紫外灯三、操作步骤1. 准备工作- 清洗并消毒所有使用过的实验器材。
- 配制无菌培养基，确保培养基的质量符合要求。
2. 样品处理- 将待测样品加入适量的无菌水中，并通过搅拌均匀。
- 取适量的处理后的样品，通过无菌分注器加入无菌培养基中。
3. 培养- 将含有待测样品的无菌培养基均匀涂布于一片无菌培养基平板上。
- 将平板放入自动培养箱中，设置适当的温度和培养时间进行培养。
4. 菌落计数- 取出培养完毕的平板，使用显微镜和十倍镜对菌落进行观察和计数。
- 记录菌落数，得到待测样品中蜡样芽孢杆菌的菌落形成单位（CFU）。
5. 活菌数计算- 将菌落计数结果乘以相应的稀释倍数，得到待测样品中蜡样芽孢杆菌的活菌数含量。
6. 结果确认- 将结果与标准值进行比较，确保测定结果准确可靠。
四、风险提示- 操作过程需保持无菌操作，避免污染。
- 使用紫外灯时需注意安全，避免直接照射眼睛和皮肤。
五、总结蜡样芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程是确保测定结果准确可靠的重要工作。
按照本文档的要求进行操作，能够有效地保证测定的准确性，并为粮食、食品和医药行业的安全生产提供科学依据。
枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程
枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程一、实验器材准备1.带有盖子的培养皿2.加满蒸馏水的试管3.注射器及针头4.培养基、琼脂、葡萄糖、干燥棉签5.无菌铲子6.无菌尖嘴瓶7.显微镜、移液器、平板振荡器等二、样品的采集和处理1.选择代表性的土壤样品，并在24小时内用无菌探针采集5个不同位置的样品。
2.将每个样品混合均匀，取适量的土壤放入无菌容器准备使用。
三、菌液的制备1.取一个含有褐青素盐琼脂（PDA）培养基的无菌尖嘴瓶，将葡萄糖加入培养基中，按照比例加入适量的样品。
2.将培养基瓶密封并用高压灭菌器进行高温高压灭菌，杀死培养基中的已有细菌。
3.灭菌后将培养基倒入带有高度透明度的培养皿中，使其凝固。
四、制备样品的稀释液1.用蒸馏水装满试管。
2.将试管密封并用高压灭菌器进行高温高压灭菌，避免试管中的无菌水受到外界污染。
五、稀释菌液1.使用无菌针头在凝固的培养皿上划线。
2.采用无菌技术，将针头刺入活菌样品中，然后点在琼脂上。
3.在培养皿上划线的其他位置也同样操作。
4.将培养皿倒置在25°C温度下放置24-48小时，直到菌落生长到适当大小。
六、菌液的计数1.使用无菌铲子在菌落上刮取一小段。
2.将刮取物重新悬浮在无菌试管中。
3.按照适当的比例将菌液和蒸馏水混合，制备一系列的稀释液。
4.取稀释液的适量放在培养皿中，使其均匀覆盖整个琼脂表面。
5.将培养皿密封并放置在25°C下培养3-5天。
6.在培养皿上观察并计数活菌数量。
七、结果的统计和计算1.统计每个培养皿上的活菌数目，计算平均值。
2.根据样品的稀释倍数、培养皿中的活菌数目和悬液中的总体积，计算出每克样品中活菌的数量。
八、数据记录和分析1.将实验过程中的数据记录清晰，并进行相关的数据分析和比较。
2.结果的可靠性可以通过加入对照组进行验证，确保实验结果的准确性。
九、实验安全注意事项1.在实验过程中要严格遵守无菌操作的原则，避免外界污染。
2.注意实验室卫生，保持实验环境整洁。
多粘芽孢杆菌检测方法
多粘芽孢杆菌检测方法一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基：酵母浸膏培养基配方：蔗糖：1.0%酵母浸膏：0.45%KH2PO4:0.05%MgSO4：0.05%NaCl：0.05%琼脂粉：2%--2.5%PH：7.2--7.42. 培养条件：温度：33℃-37℃；时间：24--30小时。
二、检测与计数方法1. 系列稀释取250ml锥形瓶一个，加入适量玻璃珠，100ml无菌水，3滴吐温80（分散剂：分散菌团用），塞上棉塞并放入到70℃水浴锅中预热，待锥形瓶中水温达到70℃后，称取适量样品加入锥形瓶中，摇匀，70℃水浴20分钟。
水浴结束后迅速冷却到30—40℃左右，上旋转式摇床200 r/min充分振荡40 min，即成母液菌悬液（基础液）。
2. 用10mL无菌移液管分别吸取10mL上述母液菌悬液加入90 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。
3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1ml (菌悬液加入量)，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。
4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。
5. 菌落计数以出现20—300个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
有效菌平均菌落数（x）在20—300之间时，则以该菌落数计算。
有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数：nm = x kv1/(m0v2) ×10-8或 nv = x kv1/(v0v2) ×10-8（1）式中：nm —质量有效活菌数，亿/gnv —体积有效活菌数，亿/mLx—有效菌落平均数，个k —稀释倍数v1—基础液体积， mLv2—菌悬液加入量， mLv0—样品量， mLm0—样品量， g重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上，因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来，这点与液态发酵产品不同。
5-芽孢杆菌检测试验方法
芽孢杆菌检测试验方法所用的分析天平，移液管，滴定管，容量瓶等玻璃器皿按有关检定规定定期校正。
所用的水，在未注明其他要求量，均指蒸馏水或去离子水，所用的试剂，在未注明规格时，均为分析纯(A.R)4.1 感官指标：4.1.1 感官特性：从抽取的样品中，取适量倒在白纸或玻璃板上，在光线充足的条件下，观察颜色和状态，并品尝滋味，闻其气味。
4.1.2 过筛率：随机抽取500 g样品，取40目和20目的筛子，将样品取出100g 称重，过筛，再次称重，计算过筛率。
过筛后的总质量过筛率=-----------------×100%过筛前的总质量4.2菌种鉴别4.2.1菌落形态：培养24小时，暗白色或浅黄色圆形菌落，中央有小突起，不透明，表面干燥，菌落易挑起。
4.2.2 镜检菌体形态：0.5-0.6*2.5-3.5微米，杆状，中生芽孢、即使孢囊膨大、也不显著。
4.2.3 革兰氏染色：革兰氏阳性菌。
4.3 芽孢杆菌活菌总数4.3.1仪器、设备、试剂和培养基a.分析天平，感量为0.01g；b.恒温水浴锅；c.震荡器；d.高分辨力相差显微镜；e.湿热灭菌锅；f.超净工作台；g.研钵；h.血球计数板，XB-K-25；i.血球计数板专用盖玻片，20mm×20mm；j.加样枪；k.各类玻璃器皿。
9ml0.85%的无菌生理盐水试管，80ml 0.85%的无菌生理盐水的三角瓶，30ml 0.85%的无菌生理盐水的三角瓶，空的500ml三角瓶（内装10～15颗玻璃珠），空的20ml的刻度试管，1ml吸管，培养基配方：营养琼脂粉38g，蒸馏水1000ml。
上述物品，121℃，30分钟蒸汽灭菌后备用。
在超净工作台上将灭好菌的营养琼脂倒平皿，每个大约20ml，放在紫外灯下吹风1小时，然后放在工作台面过夜，第二天备用。
4.3.2 预处理：准确称取样品 1.00克，将其全部转入一只已消毒的直径约10厘米的研钵中，从上述30ml 0.85%的无菌生理盐水三角瓶中取出约5ml水加入研钵，研磨10分钟，然后使用无菌生理盐水将其全部转移到空的20ml的刻度试管中，定溶至20ml，用振荡器震荡2分钟，将其全部震荡均匀。
芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程
目的：建立芽孢杆菌活菌数含量的测定标准操作规程范围：本方法适用于的芽孢杆菌活芽孢的测定责任人：QC内容：1.仪器与工具：电子天平、生物显微镜、摇床、18×180mm试管、500ml三角瓶、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管2．试剂与试液：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌蒸馏水、吐温80等。
3.检测培养基配方：牛肉膏3g、蛋白胨10g、琼脂16g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml，调至PH7.2，121℃灭菌30min。
4.检测步骤：4.1 菌液制备：采样量不少于500g，从所采的样品中精确称取10.00g试样，加入已灭菌的带玻璃珠（玻璃珠在80个左右）的500ml锥形瓶中，加入30ml已灭菌的无菌水，在摇床上200r/min摇动30min，再加入60ml已灭菌的无菌水，在摇床上200r/min摇动30min，即成母液的菌悬液。
4.2 用1ml无菌吸管吸取1ml上述母液的菌悬液，加入9ml无菌水混匀成1：1×101稀释的菌悬液，这样依此稀释，直至得到1：106；1：107；1：108；1：109等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。
4.3 用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液1ml，加至已灭菌的平皿中，再加入50℃左右的培养基，向每个培养平皿中倒入约12ml培养基，混合均匀，待凝固后，倒置于36℃的恒温培养箱内培养18h—24h。
每个样品取3个连续适宜稀释度，每个稀释度重复3次，同时加入无菌水的空白对照，每个稀释度取5个到10个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察识别后计数菌落。
5.菌落计数： 5.1 以平板上出现30个——300个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数。
5.2 当只有一个稀释度，其平均菌落数在30个-300个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。
5.3若有两个稀释度，其平均菌落数30个-300个之间时，应按两者菌落总数之比值来决定。
若其比例小于2应计数两者的平均数，若大于2则计数其中稀释较小的菌落总数。
地衣芽孢杆菌发酵过程的优化
地衣芽孢杆菌发酵过程的优化吴俊罡阎英凯刘吉华王梅雪(大连开发区松岚街11号,大连翔大生物技术有限公司）本文通过对培养基配方的调整和发酵培养过程中对发酵工艺的调整，从而节约生产中成本，提高了产量，通过实验所得的工艺条件不但大大降低了成本而且使产量在原有的基础上有了大幅度的提高，极大的提高了产品的市场竞争力。
关键词：地衣芽孢杆菌发酵抗生素作为饲料添加剂，在畜禽防疫方面虽起到积极的作用，但近10多年来由于科学水平的提高，国外饲料业和饲养业中很多人反对用抗菌素做饲料添加，这是因为抗菌素在预防性应用时，其化学残留污染肉、蛋、奶；另外，抗菌素会抑制和杀死肠道内的有益菌群，造成肠道正常菌群生态失调，导致疫病的发生，出现二重感染，有害于人畜健康。
鉴于此，国内外专家学者对研究开发微生态制剂用于畜禽养殖日趋关注，从而也促进了这一产业的迅猛发展，国内用于制作微生态添加剂的主要是一些芽孢菌类和乳酸菌类，但长期以来生产成本一直居高不下，对企业的发展造成了障碍，本文阐述了如何通过对地衣芽孢菌发酵过程进行优化，来提高产量，降低生产成本。
１材料与方法１.1材料１.1.1菌种地衣芽孢杆菌（Bacillus lichenniformis），大连翔大生物技术研究中心保存。
１.1.2主要试剂：淀粉、豆汁、硫酸锰、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等。
１.1.3主要设备：控温摇床、蒸汽消毒器、托盘式扭力天平、显微镜、发酵罐等。
１.２方法１.2.1检测方法活菌计数采用平皿活菌计数法，芽孢率采用芽孢染色后显微镜下计算。
１.2.2 摇瓶正交实验１.2.2.1 以一适合生产的经验培养基为基础进行正交试验经验培养基为：淀粉1.0％尿素0.2％磷酸氢二钾0.6％磷酸二氢钾0.3％酵母膏0.04％硫酸镁0.1％硫酸锰0.02％豆汁1.0％1 0.5 0.5 0.01 0.022 0.5 1.0 0.02 0.043 0.5 1.5 0.03 0.064 1.0 0.5 0.03 0.065 1.0 1.0 0.02 0.046 1.0 1.5 0.01 0.027 1.5 0.5 0.03 0.048 1.5 1.0 0.01 0.069 1.5 1.5 0.02 0.02注：每种配方中再加：尿素0.2％磷酸氢二钾0.6％磷酸二氢钾0.3％硫酸镁0.1％１.2.3发酵罐培养实验１.2.3.1以常用细菌培养基作为对照培养基（牛肉膏0.3%蛋白胨1.0%氯化钠0.5%PH7.0～7.5）操作如下：用蒸汽对培养基进行灭菌，121℃灭菌20分钟，然后换空气保压，同时进行冷却，当温度达到最适培养温度（37℃）时将通气比调至1:0.5，接入种子，开动搅拌为200rpm，开始进行发酵培养(培养期间罐压要保持在0.04~0.06Mpa)，随着菌体的不断生长溶氧值也逐渐发生变化，因此需调通气比和搅拌转数使溶氧值相对值不低于20％以下（由于设备限制一般调通气比不超过1:1）。
芽孢杆菌活菌数及芽孢数检测方法
芽孢杆菌活菌数及芽孢数检测方法1主题内容与适用范围本方法规定了芽孢杆菌总数的测定方法；本方法适用于测定微生物制剂中芽孢杆菌总数。
2方法提要芽孢杆菌总数是指水样在一定条件下培养后(培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等)所得1mL水样所含菌落的总数。
按本方法规定所得结果只包含一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的芽孢杆菌菌落总数。
3 培养基与试剂3.1 营养琼脂成分蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g，琼脂20g，水1000mL。
3.2 制法: 将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.2，分装于玻璃容器中(如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤)，经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
3.3生理盐水的制备：按总体积的0.9%称量NaCl并混合均匀，然后用移液枪或移液管吸取9ml生理盐水加入到试管中，并在121℃灭菌20min备用。
4 仪器高压蒸汽灭菌器，干热灭菌箱，培养箱，36±1℃，电炉，天平，冰箱，pH计，灭菌试管，平皿(直经9cm)、刻度吸管等。
5活菌计数方法5.1 取固体样品5.0g，溶于95mL蒸馏水(此时稀释20倍)，加入适量已灭菌玻璃珠，于200rpm摇床中振荡20min。
5.2 用移液枪从锥形瓶取1ml样品液至装有9ml无菌水的试管中，逐步稀释至适当梯度。
5.3 吸取0.2mL适当稀释梯度的菌液放入对应平板中，用已灭菌的涂布棒来回涂匀。
5.4 涂匀的平板置于30℃培养箱中培养20~30h，待长出清晰可见的菌落，进行计数。
6菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿一半，而其余一半中菌落数发布又很均匀，则可将此平皿计数后乘2 以代表全皿菌落数。
微生物总数检测方法(芽孢杆菌)
微生物总数检测方法（芽孢杆菌）一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基：营养琼脂配方：以北京路桥营养琼脂为例，按说明上配制需营养琼脂3.3克，水100毫升。
（尽量避免使用牛肉膏蛋白胨培养基）2. 培养条件：温度：33℃-37℃；时间：18--24小时。
二、检测与计数方法1. 梯度稀释取250ml锥形瓶一个，加入适量玻璃珠，100ml无菌水，3滴吐温80（分散剂：分散菌团用），塞上胶塞并放入到70℃水浴锅中预热，待锥形瓶中水温达到70℃后，称取适量样品加入锥形瓶中，摇匀，70℃水浴20分钟。
水浴结束后迅速冷却到30—40℃左右，上旋转式摇床200 r/min充分振荡40 min，即成母液菌悬液（基础液）。
2. 用10mL无菌移液管分别吸取10mL上述母液菌悬液加入90 mL无菌水中，按1:10进行梯度稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。
3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1ml (菌悬液加入量)，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃涂布棒将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。
4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。
5. 菌落计数以出现20—300个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
有效菌平均菌落数（x）在20—300之间时，则以该菌落数计算。
有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数：nm = x kv1/(m0v2) ×10-8或 nv = x kv1/(v0v2) ×10-8（1）式中：nm —质量有效活菌数，亿/gnv —体积有效活菌数，亿/mLx—有效菌落平均数，个k —稀释倍数v1—基础液体积， mLv2—菌悬液加入量， mLv0—样品量，mLm0—样品量， g重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上，因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来，这点与液态发酵产品不同。
地衣芽孢杆菌的检测方法
地衣芽孢杆菌的检测1、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。
1.1恒温培养箱：37℃±1℃。
1.2冰箱：2℃～5℃。
1.3天平：感量为0.1g。
1.4均质器及无菌均质袋、均质杯。
1.5振荡器。
1.6无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
1.7无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。
1.8无菌培养皿：直径90mm。
1.9显微镜：10倍～100倍。
1.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
1.11恒温水浴箱80℃±1℃。
2、培养基和试剂2.1 营养琼脂培养基2.1.1 营养琼脂培养基成分蛋白胨10.0g 牛肉膏3.0g 氯化钠5.0g 琼脂16.0g 蒸馏水1000mL 2.1.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，补足蒸馏水至1000mL，于25℃时调节pH 至7.2±0.2，分装于适宜容器中，121℃灭菌30min。
2.2营养肉汤培养基2.2.1营养肉汤培养基成分蛋白胨10.0g 牛肉膏3.0g 氯化钠5.0g 蒸馏水1000mL2.2.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，补足蒸馏水至1000mL，于25℃时调节pH 至7.2±0.2，分装于适宜容器中，121℃灭菌30min。
2.3无菌生理盐水2.3.1成分氯化钠8.5g 蒸馏水1000mL2.3.2制法称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
2.4 革兰氏染色2.4.1结晶紫染色液2.4.1.1 成分结晶紫1g 95%乙醇20 mL 1%草酸铵水溶液80 mL2.4.1.2制法将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
2.4.2革兰氏碘液2.4.2.1 成分碘1g 碘化钾2g 蒸馏水300mL2.4.2.2 制法将碘与碘化钾先行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后再加蒸馏水至300mL。
芽孢杆菌的检测方法
芽孢杆菌的检测方法韩雪;张兰威【摘要】内生芽孢是目前所知的最具抗性的生命活体结构.它对许多处理(包括热、紫外线)都有很强的抗性,这与它的特殊结构有关.这种特性使其能经巴氏杀菌而残存于乳中,因此把芽孢数及耐热芽孢数、嗜冷菌作为原料奶检验项目之一,能较全面地评判原料奶的质量.根据芽孢的特性,本文对目前芽孢检测的各种方法进行了综述,以期为芽孢的快速检测提供依据.【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2007(028)001【总页数】4页(P347-350)【关键词】芽孢;原料乳;检测;2,6-吡啶二羧酸【作者】韩雪;张兰威【作者单位】东北农业大学食品学院,黑龙江,哈尔滨,150030;哈尔滨工业大学食品科学与遗传工程研究院,黑龙江,哈尔滨,150086【正文语种】中文【中图分类】工业技术347※专题论述食品科学2007, Vol.28, No.01[51]ANDREWS L S, PARK D L, CHEN Y P.Low temperature pasteuriza- tiontoreducetheriskofVibrioinfectionsfromrawshell-stockoysters[J].FoodAdditives andContaminants, 2000,19(7): 787.[52]CALIK H,MORRISSEY M T, RENO P, et al.Effect of high-pressure processing onVibrioparahaemoly ticusstrainsin pureculture and芽孢杆菌的检测方法韩雪1，张兰威2,*(1.东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨 150030 ；2.哈尔滨工业大学食品科学与遗传工程研究院，黑龙江哈尔滨150086)摘要：内生芽孢是目前所知的最具抗性的生命活体结构。
它对许多处理(包括热、紫外线)都有很强的抗性，这与它的特殊结构有关。
耐热芽孢杆菌检测方法
耐热芽孢杆菌检测方法耐热芽孢杆菌是一种常见的食品中毒细菌，能够在高温条件下存活并产生毒素，对人体健康造成严重威胁。
因此，对于食品中的耐热芽孢杆菌的检测方法变得尤为重要。
本文将介绍几种常用的耐热芽孢杆菌检测方法。
一、传统培养法传统培养法是最常见的耐热芽孢杆菌检测方法之一。
该方法需要将待测食品样品制备成适当的浓度，接种于含有适宜培养基的培养皿中，然后在适当的温度下孵育一段时间。
耐热芽孢杆菌会在培养基上生长并形成典型的菌落。
通过观察菌落的形态、颜色等特征，可以初步判断是否存在耐热芽孢杆菌。
二、PCR法PCR法是一种快速、敏感的耐热芽孢杆菌检测方法。
该方法通过扩增耐热芽孢杆菌的特异DNA片段来进行检测。
首先，需要提取食品样品中的总DNA，然后使用特定引物进行PCR扩增反应。
最后，通过凝胶电泳等技术对PCR产物进行分析，判断是否存在耐热芽孢杆菌。
三、免疫学方法免疫学方法是一种常用的耐热芽孢杆菌检测方法。
该方法利用特异性抗体与耐热芽孢杆菌产生特异性结合反应，通过观察或检测结合后的信号来确定样品中的耐热芽孢杆菌含量。
免疫学方法具有灵敏度高、快速、简便等优点，可以应用于大批量样品的检测。
四、生化方法生化方法是通过检测耐热芽孢杆菌产生的特定代谢产物来进行检测。
例如，通过测定耐热芽孢杆菌产生的酶活性、气体生成等特征来判断是否存在耐热芽孢杆菌。
生化方法可以提供较快的结果，但对于样品的处理和操作要求较高。
五、基因测序方法基因测序方法是一种高通量、高灵敏度的耐热芽孢杆菌检测方法。
该方法通过对样品中的DNA进行测序，然后通过比对数据库中的耐热芽孢杆菌基因组信息来判断样品中是否存在耐热芽孢杆菌。
基因测序方法可以提供较准确的结果，但需要较长的分析时间和较高的成本。
耐热芽孢杆菌检测方法包括传统培养法、PCR法、免疫学方法、生化方法和基因测序方法等。
不同的方法具有各自的优缺点，可以根据实际需要选择适合的方法进行检测。
在进行耐热芽孢杆菌检测时，应注意操作规范，避免交叉污染，确保结果的准确性和可靠性，以保障食品安全和人体健康。
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芽孢杆菌活菌数及芽孢数检测方法
1主题内容与适用范围
本方法规定了芽孢杆菌总数的测定方法；
本方法适用于测定微生物制剂中芽孢杆菌总数。
2方法提要
芽孢杆菌总数是指水样在一定条件下培养后(培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等)所得1mL水样所含菌落的总数。
按本方法规定所得结果只包含一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的芽孢杆菌菌落总数。
3 培养基与试剂
3.1 营养琼脂成分
蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g，琼脂20g，水1000mL。
3.2 制法: 将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.2，分装于玻璃容器中(如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤)，经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
3.3生理盐水的制备：按总体积的0.9%称量NaCl并混合均匀，然后用移液枪或移液管吸取9ml生理盐水加入到试管中，并在121℃灭菌20min备用。
4 仪器
高压蒸汽灭菌器，干热灭菌箱，培养箱，36±1℃，电炉，天平，冰箱，pH计，灭菌试管，平皿(直经9cm)、刻度吸管等。
5活菌计数方法
5.1 取固体样品5.0g，溶于95mL蒸馏水(此时稀释20倍)，加入适量已灭菌玻璃珠，于200rpm摇床中振荡20min。
5.2 用移液枪从锥形瓶取1ml样品液至装有9ml无菌水的试管中，逐步稀释至适当梯度。
5.3 吸取0.2mL适当稀释梯度的菌液放入对应平板中，用已灭菌的涂布棒来回涂匀。
5.4 涂匀的平板置于30℃培养箱中培养20~30h，待长出清晰可见的菌落，进行计数。
6菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿一半，而其余一半中菌落数发布又很均匀，则可将此平皿计数后乘2 以代表全皿菌落数。
然后再求该稀释度的平均菌落数。
7 不同稀释度的选择及计数方法
7.1 首先选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
7.2有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数。
若大于2 则报告其中稀释度较小的菌落总数。
若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数。
7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
7.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接近30或300
的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
7.6 若所有稀释度的均无菌落生长，则以〈1乘以稀释倍数报告之。
7.7 菌落计数的报告: 菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。