绿豆芽愈伤组织诱导培养实验报告
生物工程中游技术实验
--植物组织、器官培养的研究
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绿豆芽愈伤组织诱导培养实验
【摘要】本实验以MS＋2,4-D为基本培养基,添加NAA或6-BA,对绿豆芽材料进行体外培养,诱导形成愈伤组织。结果表明,在一定浓度范围内,NAA和6-BA对绿豆芽的诱导有促进作用。不同激素组合培养下，绿豆芽外植体形成愈伤组织的类型不同,其色泽、细胞的形态结构显著不同。其中，细胞分裂素和生长素的组合诱导芽及芽的增殖效果最好，MS+6-BA(6mg/L)+NAA(0.4mg/L)培养基最适。
【关键词】绿豆芽；组织培养；愈伤组织；6-BA；2,4-D；NAA;全能性
一、前言
细胞工程(Cell engineering) 是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。其常用技术手段有植物组织培养，植物体细胞杂交、动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。根据细胞类型的不同，可以把细胞工程分为植物细胞工程和动物细胞工程两大类。本文主要综述细胞工程中植物细胞工程的植物组织培养这一技术手段。植物组织培养技术的应用范围包括快速繁殖、培育无病毒植物，通过大规模的植物细胞培养来生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等。
植物组织培养，诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。在植物组织培养中，由于植物细胞具有全能性,即植物的体细胞具有母体植株全部遗传信息并会发育成为完整的个体。因而,每一个植物细胞可以像胚胎细胞一样,经离体培养再生成植株。随着细胞工程技术的不断发展,植物细胞和组织培养这一细胞工程技术也无例外地得到发展,目前已在许多植物上,特别是在农林生产实践中得到了广泛应用。尤其在林木优良品种和无性系的快速繁殖方面进展较快。统计资料显示,目前全世界已有6000多种植物细胞和组织培养成株。实验证实,植物叶肉细胞、茎尖、根尖、花粉、胚、胚乳等细胞或组织均可以再生成植株。
本试验旨在利用NAA和6-BA的组合调控来诱导绿豆芽的愈伤组织，加深对植物外植体消毒、接种的无菌操作技术，学习外植体愈伤组织诱导的方法。
6-BA为细胞分裂素，主要作用是促进芽的形成,也可以诱导愈伤组织发生。如果超过0.1毫克就会抑制发根，超过0.5毫克则完全不发根。NAA是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。2,4-D是一种人工合成的植物生长激素。
二、材料与方法
2.1 实验仪器、试剂和材料：
2.1.1 器具
超净工作台、光照培养箱、刻度烧杯（1000ml）、小烧杯若干、量筒（1000ml、50ml）、容量瓶（500mL 、250mL）、棕色试剂瓶（500mL、100mL）、药勺、玻棒、洗耳球、洗瓶、电炉、不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯、无菌吸水纸、一次性手套、记号笔、标签纸，滴管、电子天平（感量为0.0001g）、一般天平（感量为0.1g）、高压灭菌锅、pH计（pH试纸），三角烧瓶（100mL）、称量纸、数码相机等。
2.1.2 材料和培养基
绿豆芽
愈伤组织诱导培养基均为MS+2,4-D 1.0mg/L+(0~6mg/L)6-BA+(0~1mg/L) NAA （MS培养基配制见表1，激素配制见表2）。
诱导愈伤组织培养基均以MS培养基为基本培养基，根据处理不同，附加不同种类及浓度的植物生长调节物质(NAA、2,4-D、6-BA等)。另加蔗糖30g/L，调节pH值为5.8左右，分装于三角瓶中，每瓶25ml，灭菌后冷却备用。其植物生长调节剂配比如表3。
表1 MS培养基母液的配制
表2 植物生长调节物质的配制
表3 配制1000mL MS培养基成分的用量
2.2 实验方法和步骤：
2.2.1 愈伤组织培养
2.2.1.1 准备工作
接种前，用75%酒精棉球或20g/L新洁尔灭擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台台面适当位置（培养基中的生长物质各浓度见表3），打开超净工作台紫外灯，照射20-30min后关闭，然后打开风机，约10min后，再开日光灯可进行无菌操作。
2.2.1.2 外植体表面消毒
将绿豆芽在自来水下冲洗干净，用小刀切去外围组织，切成小段置于50 mL
烧杯中，用75%酒精浸泡30 s后，立即除去乙醇。移入含有1-2滴吐温20的0.1% HgCl2（或10％次氯酸钠）溶液中浸泡5 min，用无菌水洗3次，无菌纸吸干水分后，置于经灭菌处理过的垫有无菌纸的培养皿中。使用镊子和解剖刀时，应先在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后，再将绿豆芽切成约0.5 mm3的小块。以上操作都要求在酒精灯火焰旁进行。注意外植体切割时，动作要快，否则会造成失水而影响生长。为防止操作时失水也可在培养皿中滴几滴无菌水，然后将无菌苗置于其中进行切割。操作人员必需严格按无菌操作规则完成这些步骤，否则会造成外植体污染。
2.2.1.3 接种
将切好的绿豆芽段接种至盛有培养基的果酱瓶中，每瓶接种2－3粒，快速封口，贴上标签，注明姓名、接种日期、培养基名称和培养材料名称。整理、清洁超净工作台台面。
2.2.1.4 培养
光照12h/d,光照度1500~2000LX，温度25±1℃。大约15~25d后，果酱瓶中的外植体就可以胀大，形成愈伤组织。经常观察外植体的生长变化或污染情况，并在培养一段时间后统计外植体的污染率以及愈伤组织的诱导率。
三、实验结果与分析
3.1实验结果
3.1.1愈伤组织诱导情况
实验中，接入培养基中的136段绿豆芽，经6个星期连续培养、观察发现：总共接入外植体136个，在光照培养条件下，实际形成了58个愈伤组织。
表4 绿豆芽愈伤组织诱导情况统计表
愈伤组织诱导率（%）= 实际形成愈伤组织/接种外植体数。
3.1.2部分实验图片
愈伤组织生长良好，以下是部分的实验图片：
第一周绿豆芽无明显变化
3.2结果分析
愈伤组织的形成是植物外植体材料、培养基成分和外界环境条件诸因素互相作用的复杂过程，可分为诱导、细胞分裂、细胞分化三个时期。外植体的类型及其生理状态、接种时的放置方式等直接影响着愈伤组织的数量和质量。外植体的幼嫩程度也影响着愈伤组织的再生能力。培养基成分中，生长素和细胞分裂素对愈伤组织的诱导、增殖及其再生影响最大。另外，不同培养阶段使用的配比也发生变化。如诱导愈伤组织阶段可适当加大生长素的比例，由愈伤组织诱导芽时则需加大分裂素比例促进芽的分化。外界环境条件的影响主要有光照、温度、湿度、培养基渗透压等。
第二周绿豆芽变
透明，并且可见外植体有少许的增大 第三周绿豆芽明显膨胀，且少数绿豆芽变黄，开始形成愈伤组织。 第四周绿豆芽诱导
形成愈伤组织，愈伤组织胀大，结构疏松，不均匀，为橙黄色。
实验表明，低浓度的BA(0~2mg/l)不能诱导芽的分化,随着6-BA浓度的升高,渐渐有厚而透明的芽出现。就诱导芽产生及分化时,要求高水平的6-BA浓度,在实验中,6-BA浓度在6mg/l时达到了最好的效果。NAA低浓度(0.1mg/l)的生长素有利于芽的分化;随着生长素浓度的增高,愈伤组织生长量也有所增加,但当培养基中含有5mg/LNAA时,则诱导形成根,芽的分化受到抑制。这表明,在愈伤组织的形成过程中,生长素起着决定性作用,而在芽分化过程中,细胞分裂素起着重要的作用。因此,在愈伤组织的诱导和芽分化过程中,选用合适的细胞分裂素与生长素的组合,并控制其比例是十分重要的。
本次诱导愈伤组织形成实验中，有部分材料污染，但愈伤组织的诱导率较高。总结原因可能有以下几点：
本次实验愈伤组织诱导有小部分被污染，其中污染的可能原因是：无菌室清洁度不够；接种时绿豆芽组织暴露时间过长。另外，也有可能是操作者本身没进行消毒，在实验过程中碰触到绿豆芽段。
四、实验小结
植物的器官组织与完整植株分离后，如果供给合适的营养和生长调节物质即适宜的生长环境，它们在离体条件下由于受到伤害的刺激以及生长调节物质的诱导，可恢复细胞分裂和生长分化的能力。因此植物的离体组织、器官、细胞或原生质体在无菌和适宜的人工培养条件下培养，能够产生愈伤组织，并长成为一株完整植物体。
激素是培养基中诱导芽分化的关键物质,对植物组织培养的成败起着决定性的作用。在本实验中绿豆芽外植体通过一个高水平的细胞分裂素(6-BA6mg/l)和一个低水平的生长素(IAA0.4mg/l)的组合诱导形成芽,这与茎尖外植体培养的结果一致。
植物不同的器官和组织，对离体培养的反映是不同的，其形态发生的能力也是不同的。外植体的种类是影响组织培养效果的主要因素之一。即使是相同的器官，由于其生理学或发育年龄的差异，也会影响形态发生的类型及方式。外植体的年龄对组织的再生能力有很大的影响，越幼嫩就越容易获得再生植株。外植体的选择和处理对褐变有较大影响，幼龄材料酚类化合物含量少,而成龄材料比较多。
植物组织培养的成功与否决定于外植体的制备、无菌操作和人工培养环境。
外植体的制备是能否建成离体繁殖系要过的第一关。制备外植体的原则是无菌和有活性，无菌是外植体植被的要求，有杂菌带入培养基会造成微生物污染，而阻滞甚至杀死外植体。有活性是外植体制备的前提，无活性的外植体的培养在植物组织培养中是无意义的。
无菌操作是贯穿于整个组织培养过程的一门关键技术，甚至可以说组织培养的前提就是无菌。事实上外植体的制备过程就是无菌处理过程，而其后的一系列操作都是在无菌环境下进行的，实验室中经常使用的无菌操作设备是超净工作台。无菌操作者的操作手法和习惯也是无菌操作成功与否的关键，通常进行无菌操作的实验人员也要经过严密的无菌操作训练并建立严格的“无菌概念”。
能否把植物组织培养做到满意的人工调控，关键在于人工培养环境。人工培养环境是整个组织培养的难点和重点，也是近百年来植物生理学家一直探讨和研究的重要话题。
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观察绿豆芽的生长过程
观察绿豆芽的生长过程 一、目的 观察种子发芽的过程，了解植物发芽、生长所需要的条件。 二、方法 选择绿豆种子，采取土壤培植等方法，观察种子发芽、生长的全过程。 三、实验过程与观察结果 1、2013年8月11日9时30分，准备绿豆种子的种植环境，将土壤放置到一个盆中，浇水使土壤变得湿润。把盆放到阳光下照射半天，使多余的水分蒸发，保证土壤满足种植绿豆种子的条件。 用铲子在土壤中刨出细的沟槽，把绿豆种子放到沟槽中，并用土壤覆盖。 2、2013年8月12日7时30分， 观察：发现一些种子已经涨破皮肤，露出小白点，既是嫩芽。 拍照一张： 3、8月13日20时30分，绿豆长出1厘米左右的豆芽，芽瓣是嫩绿色的，绿色豆壳挂在芽瓣边，芽根浅浅地扎在土壤里。 根据土壤的干燥程度，喷水一次。 拍照一张： 4、8月14日7：30，观察，绿豆芽已茁壮成长为约3厘米高的豆苗，两片细长的叶子，弯弯的，绿绿的，每颗豆苗叶子上还挂这两瓣豆壳。 观察拍照： 5、8月15日，观察：径柱已长到6-7cm,叶子张开，已成浅绿色。
拍照： 6、8月16日：观察，每棵豆芽都长到了10cm以上，但细细的，径是白色的，叶子有3-4片，仍然是长条型的，浓浓的绿色。 拍照： 四、收获与体会
经过近两周的观察实验，我收获不小。体会了植物生长过程中需要适宜的温度、水份和空气、营养成分。 植物学特征：绿豆属豆科，种子无胚乳，有两片子叶和胚。胚由胚根、胚轴和胚芽组成。子叶着生点以下的为下胚轴。绿豆芽食用的主要部分为下胚轴和子叶。生长过程大致可分为4个时期： ①胚根生长期：种子吸胀萌动后胚根伸出种壳，芽体约为种子长度的1/2。 ②胚轴生长期：幼芽长为种子长度的2-2.5倍。 ③胚根伸长期。 ④胚轴、胚根同时生长期：胚根与轴生长所需养料由子叶供给。绿豆在发芽时的灰分、脂肪、蛋白质、淀粉在逐渐减少，还原糖在发芽第二天开始增加，以后继续递增，维生素C、氨基酸不断增加，纤维质也增加。 豆芽生长的环境条件：在豆芽生产过程中，淋水有供水、排污、调温和供氧的作用。豆粒吸胀后培育豆芽，太强的呼吸作用会使豆芽生长过速，胚轴瘦弱，纤维多，因此须控制温度、减少空气流通、增加二氧化碳含量，最适宜豆芽生长的气体成分为：氧气10%、二氧化碳10%、氮气80%。即需要减少氧含量，增加空气中二氧化碳的浓度，但又不可过浓，以免伤害豆芽，因此需通过淋水、覆盖增加压力等措施进行气体调节。低浓度的乙烯能促进胚轴加粗，控制胚根生长。遮光有利于保温、保湿、控制气体交流，更有利于薄壁组织的发育。 五、延伸学习
组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一、实验目的 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法； 2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理（一）植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下， 能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分 化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。（三）组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 （四）培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 （一）培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l） 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积） 表3.配制母液所需的药品及称取量
愈伤组织诱导及观察
实验二愈伤组织诱导及观察 一.实验目的 通过愈伤组织诱导的操作，使同学们了解进行植物组织培养时的一些关键操作技术和方法，如外植体的选择、培养基母液配制、使用液配制、分装灭菌、外植体表面消毒、接种、培养、愈伤组织诱导原理和方法以及接种后污染率，愈伤组织诱导率的统计与观察。使同学们能够亲身体会、了解激素对外植体的作用，还使同学们了解无菌培养的无菌操作，清楚植物体的带菌部位等。 二.实验内容 （一）、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织就是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。 愈伤组织的形成 从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。 起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号：2011192017 姓名：李鹏
植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
小麦愈伤组织的诱导
小麦愈伤组织诱导与其再生培养体系的建立 前言：小麦属于禾本科植物，麦粒在植物学上称为颖果，在种子学上则称为种子，通常称为小麦。麦粒皮色有红白之分，红皮的叫红麦，白皮的叫白麦。由于品种和受环境影响不同，红皮小麦又有深红色和红褐色；白皮小麦又有白色、乳白色或黄白色之分。 一：目的及意义 我国小麦目前的状况有以下几点：1 我国是农业大国，小麦面积4亿亩、产量9000万吨左右，分别占世界总量的 12%和18%，均居世界第一位。2 我国春小麦主要分布在东北、西北及华北北部。据中国粮油信息中心的数据显示，预计中国 03/04市场年度（7月至次年6月）春小麦播种面积仅为190万公顷，较上年度减少5％，这是多年来中国春小麦种植面积首次低于200万公顷；预计03/04年度春小麦产量为580万吨，较02/03年度下降7.48%。我国的小麦种植面积不断的减小，总产量也在不断减少。由于我国目前存在的状况，农业大国，主产小麦，但小麦的产量的质量都不是很好，种植面积又在减少，本研究主要是提高小麦的产量和质量。 二：综述国内外对小麦的研究状况 2.1 小麦愈伤组织诱导及原生质体的分离与纯化张小红，闵东红，邵景侠（西北农林科技大学，陕西杨凌712100） 试验方法：以普通小麦的幼穗和幼胚为外植体进行了愈伤组织诱导，及由幼胚愈伤组织进行了原生质体分离和纯化试验，研究了幼穗和幼胚外植体及低温预处理等因素对愈伤组织诱导的影响，在原生质体分离中研究了酶浓度和配比、酶解时间及蔗糖浓度等因素对幼胚愈伤组织原生质体游离和纯化的影响。结果表明：小麦幼穗离体培养时，以1.0~1.5 cm长度的幼穗有利于愈伤组织的诱导；小麦幼穗和幼胚外植体采后低温储藏时不易超过3 天，时间太长会影响愈伤组织诱导；2.0%纤维素酶＋0.5%果胶酶+0.6 M甘露醇分离原生质体较好，最佳酶解时间为 4~6 h，原生质体产量和活力较高。 2.2 小麦愈伤组织诱导及其植株再生研究进展王廷璞，陈荃，崔爱明，刘瑞媛，马伟超 （天水师范学院生命科学与化学学院，甘肃天水741001） 试验方法：小麦组织培养体系的建立与完善是应用植物基因工程改良小麦品质的重要基础和保证，综述了近年来小麦愈伤组织诱导及植株再生的研究情况。研究资料表明：小麦组织培养中，不同来源和不同生理状态的小麦外植体（幼胚、幼穗、花药、成熟胚、叶、根等），在愈伤组织诱导和获得再生植株的能力方面均显示了优点和不足。不足之处是在生产过程中，不断受到生物、非生物等因素的胁迫，严重影响其产量及品质。 2.3小麦愈伤组织诱导及其再生能力影响因素的研究贾海燕, 王洪刚 ( 山东 农业大学农学院, 山东泰安 271018) 试验方法：以农艺性状较好的24 份小麦品种( 系) 为材料, 筛选出了愈伤组织诱导率高且植株再生能力强的基因型材料山农995604 和F281- 10, 在此基础上对影响愈伤组织的分化能力以及较长时间保持分化能力的因素进行了研究。结果表明, 在愈伤组织的继代过程中, 保持较高浓度的2, 4- D, 或对愈伤组织进行交替继代培养有利于较长时间保持其再生能力。最佳取材时间在开花后15d 左右,
教科版五年级科学上册：《观察绿豆芽的生长》参考教案
观察绿豆芽的生长 教学目标： 1、知识与技能：植物的生长离不开阳光、空气和水。 2、过程与方法：设计绿豆芽生长需要阳光、水、空气的实验，用对比实验的方法观察，记录影响植物生长的条件。 3、情感、态度、价值观：意思到生物的形态结构、生活习性同它们的生活环境是相适应的。 教学重点：通过实验分析，植物生长离不开的因素有哪些 教学难点：在设计对比实验中严格控制变量，并注意收集实验数据用事实说话。教学准备：实验记录表，三四天前做好的绿豆芽，盒子、烧杯 板书设计： 绿豆的生长需要哪些条件 阳光 水分 空气 教学过程 一、承接上一课，学生把绿豆种在土壤中，交流自己把绿豆种在土壤中的情况和发现 1、说说自己种下的绿豆芽生长的怎样了。 学生描述自己的绿豆长势情况，再看看别人的，进行比较 2、为什么大家的绿豆芽生长的不一样呢，怎样才能让绿豆芽生长的更好呢？ 3、讨论影响绿豆芽生长的因素，教师随机板书。 学生依据自己的经验，可能会提出绿豆生长需要阳光、水等，并让学生说出推测的理由是什么 （意图：让学生把绿豆移植到土壤中，就是让学生获取一定的感性认识，为研究绿豆的生长需要的条件奠定基础）
二、实验一：绿豆芽生长需要阳光吗？ 1、讨论：绿豆种子发芽可以不需要阳光，那么绿豆芽的生长需要阳光吗？ 2、该怎样来设计对比实验呢？ 重点指导： （1）我们只能改变哪些条件？不改变哪些条件？ （2）两组的绿豆芽需要一样多吗？ （3）改变了条件是不是对绿豆芽生长产生了影响，我们怎样才能知道？ 3、学生完成实验方案，交流。 4、提供实验记录表，引导学生做好观察记录。（采用图画和文字记录下绿豆芽的高度、茎叶的颜色，茎的粗细等） 三、实验二：绿豆芽生长对水的需求 1、拿出事前做的绿豆芽对水需求的实验，让学生进行观察。教师介绍实验：在一个盘子里铺上几层吸水纸，把5粒刚发芽的绿豆并排放在吸水纸上，保持吸水纸一端湿润。 2、讨论：这5粒绿豆种子的生存的环境有什么不同？不同的环境对绿豆种子会产生怎样的影响？为什么我们这样推测？仔细观察还有什么发现？ 3、概括：植物的生长需要一定的环境，当环境改变后它们会努力的适应环境的变化。 四、观察更多的植物适应环境的图片 1、比较香蕉、松树、仙人掌的叶的不同。 2、香蕉、松树、仙人掌分别生长在什么地方？ 3、这三种植物的叶同它们的生活环境有什么关系？ 4、说说平时还看见有关植物适应环境的例子。 记录单1：例如：
愈伤组织的诱导和培养
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223 愈伤组织的诱导和培养 一、实验目的及意义 植物愈伤组织的诱导和培养在植物科学的基础研究和应用研究中都有重要的意义。通过本次实验，可以初步掌握植物外植体材料消毒、接种的无菌操作技术，愈伤组织的诱导方法和愈伤组织继代培养的方法。 二、实验原理 植物组织与细胞培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择适当的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得植物组织培养，成功的基本前提和重要保证。由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织（callus）。植物生长调节剂如2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等是诱导外植体形成遇上组织的重要因素。 三、实验仪器与药品 超净工作台，酒精灯，镊子，剪刀，解剖刀，75%乙醇，酒精消毒棉 材料：烟草无菌苗，甘薯无菌苗 四、实验步骤 1.按下表分别配制培养基
将配置的四种培养基分别分装入20个培养瓶，高温灭菌后水平放置凝固 2.接种前，将实验所需器具放入超净工作台，打开紫外灯灭菌20~30min，关闭紫外灯，开启通风开关。洗手后用酒精喷洒消毒手、手臂、实验材料及培养基外部等进入超净工作台的部分。进入超净工作台，用酒精棉擦拭台面（手勿伸出工作台），台面完全风干后点燃酒精灯。 3.接种开始时，将镊子及手术刀在酒精中浸泡，并在酒精灯外焰上烧炽片刻，充分冷却。取幼嫩的烟草（甘薯）叶片，用手术刀切割成小片，再用镊子将其接种至相应的培养基上，每瓶接种3~5片，封口后取出超净工作台，标注姓名、日期、培养基和接种材料。 4.将上述培养材料常温暗培养，每隔7天观察一次，并记录培养情况 五、实验结果
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验 李永吉 12101705 12青年农场主班 第一部分：培养基母液的配制 通过配制母液过程了解植物外植体立体培养所需各种营养成分及激素种类，掌握培养基母液配制的方法。之所以要配制培养基母液，是因为考虑到在配制培养基时使用更方便、操作更简化、用量更准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，所以我们在配制培养基之前将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别量取各种母液即可。 实验所需用具器材有：电子天平（检测灵敏度0.0001g ）、pH 计、托盘电子秤（检测灵敏度0.01g ）、冰箱、烧杯（1000mL 、500mL 、250mL 、50mL ）、量筒（2000mL 、1000mL 、100mL 、50mL ）、试剂瓶（1000mL 、250mL 、150mL ）、药匙、玻璃棒 实验所需药品试剂有：蒸馏水、1N HCl 、1N NaOH 、95%酒精、各种所需化学药品（分析纯） 实验内容： 1、无机大量元素母液的配制（20倍） 按培养基配方所需量，将各种化合物称量扩大20倍，用托盘电子秤称取，并用200mL 蒸馏水溶解于250mL 烧杯中，如溶解缓慢，可稍加热。CaCl2单独用100mL 纯水溶解。溶解后将以上溶液倒入容量瓶中定容至1000mL 。倒入试剂瓶中并贴好标签，保存于冰箱冷藏。 MS 无机大量元素母液配制 2、无机微量元素母液配制 按培养基配方所需量，将各种化合物称量扩大200倍，用托盘电子秤称取，并用200mL 蒸馏水溶解于250mL 烧杯中，。溶解后将以上溶液倒入容量瓶中定容至500mL 。倒入试剂瓶贴好标签，保存于冰箱。 母液 名称 化合物名称 配方规定量（g/L ） 贮备液的倍数 配制母液称取量/g 母液体积/mL 配一升培养基时取母液量/mL 大 量 元 素 NH 4NO 3 1.65 20 33 1000 50 KNO 3 1.9 38 CaCl 2 0.332 6.64 MgSO 4.7H 2O 0.37 7.4 KH 2PO 4 0.17 3.4
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。 关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织 1.材料与方法 1.1实验材料：大豆子叶 1.2实验试剂与仪器 （1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液 （2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。 1.3实验方法 1.3.1培养基的配制与灭菌 1.3.1.1 配制培养基的准备阶段 （1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份，7.5g 蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份（烧杯不要清洗）；
（3）剪小圆纸片40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。 （4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。 1.3.1.2 配制培养基 （1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂 实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL 激素的加样量(ml) 编号培养基配置 6-BA NAA KT 2,4-D 1 MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L) 0.5 0.25 2 MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L) 1.0 0.5 3 MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.5 4 MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0. 5 1.0 （2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml； （3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH 调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。 （5）用相同的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。 1.3.1.3高压湿热灭菌 （1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌
实验1 愈伤组织的诱导
实验1 愈伤组织的诱导 1、实验目的 （1）学习植物材料表面灭菌的常规方法； （2）了解接种的无菌操作技术； （3）学习诱导植物器官形成愈伤组织的方法。 2、实验原理 植物组织培养是应用无菌操作的方法，培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得组织培养成功的前提和重要保证。 由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，可以通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织。 3、实验仪器和试剂 仪器：超净工作台、光照培养箱、酒精灯、打火机、记号笔、脱脂棉、75%酒精及棉球。 无菌器材：无菌吸水纸（定性滤纸）、灭菌培养皿、无菌水、镊子、解剖刀。 植物材料：直根胡萝卜、烟草叶片。 试剂：95%乙醇、0.1%氯化汞。 培养基：MS+1mg/L 2,4-D+30g/L蔗糖+10g/L琼脂,pH5.8 4、实验步骤 （1）接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯及接种间紫外灯，照射约30 min，然后关闭紫外灯，通风20 min后，打开日光灯即可进行无菌操作。 （2）外植体预处理：将胡萝卜根用流动的自来水冲洗干净，用小刀削去其表皮1-2mm，切成大约15-20mm厚的块段。 （3）以75%乙醇棉将手擦试一遍。以下操作全部在无菌条件下进行。
（4）外植体消毒：用0.1%的升汞消毒1min-3min（烟草叶片消毒10秒钟左右）,然后用无菌水中漂洗3次，每次2分钟。 （5）将胡萝卜片放入垫有无菌滤纸的培养皿中，一手用消毒好的镊子固定胡萝卜，一手用灭菌后的解剖刀切除胡萝卜块段截面的表面部分，余下部分切成包含形成层的长、宽约5mm，厚约5mm的小块。在完成切割后，将解剖刀和镊子放入95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后，放回原处，待冷却后即可使用。注意：在每一次使用镊子、解剖刀后，都要对其消毒一次。 （6）接种：在酒精灯焰附近处，用无菌镊子夹取胡萝卜薄片并迅速半插入琼脂培养基上，每皿放4-5片，注意将近根尖的一面接触培养基。将培养皿口在酒精灯焰上小心地轻转灼燎数秒，立即用封口膜封好瓶口。 （7）培养：将接种后的三角瓶放到光照培养箱中，在25℃下的黑暗中培养3-4周。 5、结果记录与分析 （1）接种1周-10天后，调查、计算污染率： 污染率(%)=污染的材料数/接种材料数×100% （2）每周观察并记录胡萝卜外植体产生愈伤组织的情况，包括出现愈伤组织前培养物的形态，愈伤组织出现的时间以及愈伤组织的形态特征（愈伤组织的颜色、质地等），4周后调查、计算愈伤组织诱导率： 诱导率（%）=形成愈伤组织的材料数/接种材料数×100% 6、思考题 （1）分析影响愈伤组织诱导的主要因素。 （2）以胡萝卜为材料为什么要强调要切取含有形成层部分，胡萝卜其它部分（如茎、叶、花）能否诱导出愈伤组织？ 实验二真菌菌丝DNA提取 1实验目的 学习利用CTAB法少量提取真菌菌丝体DNA，同时掌握在DNA提取中各
植物组织培养实验报告
实验一植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后
绿豆芽发芽实验报告
绿豆芽发芽实验报告 篇一：绿豆种子发芽的实验报告 绿豆种子发芽的研究报告 学习《种子发芽实验》这一课，老师要求我们自己动手做一个“绿豆种子发芽”的小实验。我做的是“绿豆种子发芽必须要水”这个实验。在老师的指导下，我完成了这个科学小实验。 一．实验计划： 我们提出的问题：绿豆种子发芽必须要有水吗？ 我们的推测：绿豆种子发芽必须要有水。 两个组相同的条件：温度、空气、各三粒大小相同的绿豆种子。两个组不同的条件：水 实验的方法：让一组绿豆种子得到水，保持湿润，叫实验组；让一组绿豆种子得不到水，保持干燥，叫对照组。这个实验至少有两个小组同时进行。 二．实验准备： 1. 种子：6粒饱满、颜色和大小基本一致的绿豆 2. 材料：两个一次性纸杯、纸巾2张、牙签、水 3. 场地：窗台 4. 环境温度：25℃左右。 三．实验过程： 1. 在两个一次性纸杯里垫上纸巾，用牙签各按三个小
洞。 2. 在纸巾的小洞上各放三粒绿豆。 3. 在一个纸杯里的纸巾上滴水标注为1号杯，另一个纸杯里不滴水标注为2号杯。 4. 将两个杯子放在窗台上。 5. 坚持每天观察种子的变化，及时补充实验组的水分，并记录自己的发现。 四．观察记录： 10月1日12:00 准备材料 XX年10月1日12时：今天，我把绿豆种子分别放入了两个垫有纸巾的一次性纸杯中，在1号纸杯中放入了少量的水，2号杯不加水。这时两个纸杯中的绿豆种子没有什么区别都是深绿色的，米粒般大小，边上还有一点儿白白的小条。 XX年10月2日11时：今天，1号纸杯的绿豆像是喝足了水，膨胀的很大，变成了一个个“绿胖子”，肚子滚圆滚圆的，好像饱涨得马上要裂开来似的，颜色由深绿色变为浅绿色。其中有两个“绿胖子”的肚子已经开了个小口，在白色的小口里长出了一丁点儿约2毫米的小芽，那就是胚根吧。可2号杯里的绿豆没有任何变化。 XX年10月2日17时：1号杯两个“绿胖子”的白色口子又裂开了点，胚根约有3毫米多了，其它三个“绿胖子”还在蓄势待发中。2号杯没有动静。
愈伤组织诱导及观察
一.实验目的 通过愈伤组织诱导的操作，使同学们了解进行植物组织培养时的一些关键操作技术和方法，如外植体的选择、培养基母液配制、使用液配制、分装灭菌、外植体表面消毒、接种、培养、愈伤组织诱导原理和方法以及接种后污染率，愈伤组织诱导率的统计与观察。使同学们能够亲身体会、了解激素对外植体的作用，还使同学们了解无菌培养的无菌操作，清楚植物体的带菌部位等。 二.实验内容 （一）、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织就是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。 愈伤组织的形成 从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。 起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧等)和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件
把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加
黄豆芽微核实验报告材料
生态工程学院 遗传学设计性实验报告 题目：黄豆根尖微核技术系别：生态工程学院 专业班级：生物科学2012级 组员姓名：孟迎、罗廷、何忠平 蔡国宪、丁琴 姓名：罗廷 学号：28111201029 指导教师：蹇黎 完成时间： 2015 年 6月11日
黄豆根尖微核实验报告 一、实验目的 1、了解环境诱变物对微核产生的原理。 2、掌握微核试验技术。 3、了解毒理遗传学在环境监测中的应用及意义 二、实验原理 微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期由于不能向两极移动而游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，可在它附近看到若干个圆形的结构，游离于主核之外直径大约是细胞直径的1/20到1/5，这就是微核。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们需要有一套高度灵敏、技术简单的测试系统来监视环境的变化。微核产生的概率可与诱变因子的剂量成正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 随着经济发展、经济总量增加，废水排放总量增长迅速，污染物排放总量超过水环境容量，尤其在一些人口密集、企业密布或重污染企业分布较多的区域。水质恶化问题已经比较突出；饮用水水源地有机污染日渐严重，饮用水安全问题已经显现，人民群众生产、生活受到影响。利用毕节市流仓河道河水以黄豆萌发的芽作为实验材料进行微核测试，一方面可准确的显示各种处理诱发植物畸变的效果，另一方面可用于当今发展地区对河道污染程度的间接反应和监测。
小学科学教案：《观察绿豆芽的生长》教案
《观察绿豆芽的生长》教案 教学目标： 1、知识与技能：植物的生长离不开阳光、空气和水。 2、过程与方法：设计绿豆芽生长需要阳光、水、空气的实验，用对比实验的方法观察，记录影响植物生长的条件。 3、情感、态度、价值观：意思到生物的形态结构、生活习性同它们的生活环境是相适应的。 教学重点：通过实验分析，植物生长离不开的因素有哪些 教学难点：在设计对比实验中严格控制变量，并注意收集实验数据用事实说话。教学准备：实验记录表，三四天前做好的绿豆芽，盒子、烧杯 板书设计： 绿豆的生长需要哪些条件 阳光 水分 空气 教学过程 一、承接上一课，学生把绿豆种在土壤中，交流自己把绿豆种在土壤中的情况和发现 1、说说自己种下的绿豆芽生长的怎样了。 学生描述自己的绿豆长势情况，再看看别人的，进行比较 2、为什么大家的绿豆芽生长的不一样呢，怎样才能让绿豆芽生长的更好呢？ 3、讨论影响绿豆芽生长的因素，教师随机板书。 学生依据自己的经验，可能会提出绿豆生长需要阳光、水等，并让学生说出推测
的理由是什么 （意图：让学生把绿豆移植到土壤中，就是让学生获取一定的感性认识，为研究绿豆的生长需要的条件奠定基础） 二、实验一：绿豆芽生长需要阳光吗？ 1、讨论：绿豆种子发芽可以不需要阳光，那么绿豆芽的生长需要阳光吗？ 2、该怎样来设计对比实验呢？ 重点指导： （1）我们只能改变哪些条件？不改变哪些条件？ （2）两组的绿豆芽需要一样多吗？ （3）改变了条件是不是对绿豆芽生长产生了影响，我们怎样才能知道？ 3、学生完成实验方案，交流。 4、提供实验记录表，引导学生做好观察记录。（采用图画和文字记录下绿豆芽的高度、茎叶的颜色，茎的粗细等） 三、实验二：绿豆芽生长对水的需求 1、拿出事前做的绿豆芽对水需求的实验，让学生进行观察。教师介绍实验：在一个盘子里铺上几层吸水纸，把5粒刚发芽的绿豆并排放在吸水纸上，保持吸水纸一端湿润。 2、讨论：这5粒绿豆种子的生存的环境有什么不同？不同的环境对绿豆种子会产生怎样的影响？为什么我们这样推测？仔细观察还有什么发现？ 3、概括：植物的生长需要一定的环境，当环境改变后它们会努力的适应环境的变化。 四、观察更多的植物适应环境的图片 1、比较香蕉、松树、仙人掌的叶的不同。 2、香蕉、松树、仙人掌分别生长在什么地方？ 3、这三种植物的叶同它们的生活环境有什么关系？ 4、说说平时还看见有关植物适应环境的例子。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，
实验二 植物组织培养2-愈伤组织的诱导
中国海洋大学实验报告 2015 年 4 月23 日姓名###云年级BBB专业UUUUUU学号HHHHHHHHHHHH 课程细胞工程学实验题目植物愈伤组织诱导实验 一、实验目的 1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理； 2、掌握植物组织接种培养的整个无菌操作的过程； 3、熟悉超净工作台的使用。 二、实验原理 植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。超净工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备。 三、实验仪器试剂 1、仪器：镊子、解剖刀、烧杯、酒精灯、试剂瓶、含有培养基的培养瓶、培养皿、金属盘、记号笔 2、用品：胡萝卜、75%酒精、10%次氯酸钠、无菌水 四、实验步骤： （1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用准备好的自来水冲洗后,用酒精棉擦拭取材部位表面, 于70%酒精中浸沾数秒钟。 （3）将材料放入已灭菌的100ml试剂瓶中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。 （5）弃次氯酸钠浸泡液，用准备的无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。 （6）将已灭菌的植物材料置于平板内，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm 厚的薄片，弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散。 （7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。 （8）在培养瓶下部的培养基高度位置作记号。 （9）将接种后的三角瓶，培养于25℃光照条件下20天左右. （10）实验结束后用过的仪器等恢复原样，清洁实验台面，一切东西归位。 五、实验现象及结果 （1） 刚开始正常生长，从第二节实验课开始直至实验课结束，持续观察中发现组织块