EDU检测细胞增殖

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MTT检测法
MTT检测法主要反映细胞的能量代谢,是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法, 其原理是在活细胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的 甲(Formazan),生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比。
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测法
EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)
Cell-Light™ EdU 检测原理
在DNA合成过程中,EdU可取 代脱氧胸腺嘧啶核苷(T)插 入DNA链。
Ribobio
EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)
Cell-Light™ EdU 检测特点
•无需DNA变性 •小分子检测 •高效反应活性 •更灵敏、更准确
•EdU能够结合其他荧光 标记进行一系列分析:
•细胞增殖
•细胞周期 •细胞凋亡
NFKB
•细胞表型
•信号通路
•细胞毒性
•靶点激活
Ribobio
除双重标记研究细胞增殖外,还能够结合细胞周期染料、信号通路 相关蛋白标记(如P65抗体)等同时进行多重标记,在细胞水平进行系 统性定量检测,直接获取细胞多维信息,深入开展细胞增殖、细胞周 期、细胞毒性、DNA复制及修复、信号通路等方面的研究。
Ribobio
Cell-Light™ EdU 结果检测
能够适合多种研究方式: 1)荧光显微镜 2)激光共聚焦显微镜 3)高内涵筛选分析 4)流式细胞仪分析 5)酶标仪(带荧光)
能够适用与多层次分析: 1)样品:固定细胞、组织切片------生物荧光 显微镜和激光共聚焦显微镜 2)样品:细胞悬浮液-------流式细胞仪分析
4
EEUURRNNAA标标记记技技术术的的原原理理
5
EU RNA标记技术的应用
Ribobio
Ribobio
Cell-LightTM EdU DNA 标记技术
广州市锐博生物科技有限公司
Email:sales-cd@ribobio.com
电话:028-81391685/13679094941
Cell-Light™ EdU 核酸标记技术
EdU
Ribobio
Cell-Light™ EdU 检测特点
• 非放射性同位素检测 • 无需DNA变性 • 无需破细胞壁(植物) • 无需抗体 • 实验方法简单,操作时间大幅缩短 • 小分子检测,更加灵敏、准确 • 能够结合其它标记进行多参数检测,如
• 其它抗体 • 细胞周期分析的其它染料 • 其它标记
C10311 Cell-LightTM EdU 流式细胞仪检测试剂盒 Tel: 028-81391685、13679094941
Ribobio
Cell-Light™ EdU 动物实验 3) 在组织水平上EdU对增殖细胞的标记
Ribobio
EdU适用于人、小鼠、大鼠等活体注射,全面分析组织或器官的细胞 增殖情况,适用于石蜡或冰冻组织切片检测,对活体无副作用。
锐博生物
EdU & EU 核酸标记技术
——细胞核酸标记新技术
锐博生物 聂忠清
广州市锐博生物科技有限公司
Email:sales-cd@ribobio.com
电话:028-81391685、13679094941
1
主要内容
1
EdU 核酸标记技术的原理
2
EdU 核酸标记技术的应用
3
EEddUU技技术术与与传传统统技技术术的的比比较较
基于免疫荧光技术的技术,靠抗原
抗体结合发光的方式检测。
Br
BrdU检测方法
BrdU抗体
Br
Br
无法与 BrdU结合
Br
BrdU抗体分子太大,无法
直接与DNA中的BrdU结合,需
Br
进行DNA变性处理。
Ribobio
BrdU检测方法
Br
抗体分子太大,很难与DNA 中的BrdU轻松地结合,实验需要 进行DNA变性,如酸解或酶解以 暴露出DNA双链其中的BrdU。
Cell-LightTM细胞增殖检测方法基于 EdU与Apollo®荧光染料的完美结合准确检 测新合成的DNA,简单,快速,准确。
EdU只有BrdU抗体大小的1/500,在 细胞内更容易扩散,不需要严格的样品 变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避 免了样品损伤,有助于在组织、器官的 整体水平上观测细胞增殖的真实情况, 具有更高的灵敏度和更快的检测速度。
孵育或注射 腹腔注射 腹腔注射
孵育 肌肉注射
孵育
相关文献* Salic, A. (2008) Proc Natl Acad
Scientific poster ASCB 2007 BioProbes 57
Scientific poster ASCB 2007 No published reference
C10313 Cell-LightTM EdU 高内涵 检测试剂盒
Tel: 028-81391685、13679094941
Cell-Light™ EdU 周期分析
----流式细胞仪分析细胞周期
细胞增殖和细胞周期是评价细胞代 谢、生理和病理状况的重要指标,该试 剂盒通过检测渗入的EdU及细胞核染料, 借助流式细胞仪检测出新合成的DNA及总 DNA含量,分析细胞增殖情况,并根据 DNA含量随着细胞周期的不同而发生的变 化来准确区分细胞周期的不同阶段。
检测相关荧光光谱图:
Ribobio
Apollo ® 567 光谱图 Apollo ® 643 光谱图 Hoechst33342光谱图
Cell-Light™ EdU 细胞增殖检测
1) 在细胞水平上EdU对增殖细胞的标记
Ribobio
利用EdU检测细胞新合成的DNA,同时结合细胞核标记物进行双重或 多重标记,判断增殖细胞的种类,增殖速度,全面分析增殖细胞的定 位、分布。
效的染色标记,而且容易把没有反应的多余荧光分子从细胞中洗干净;
2)发射光波长较长------细胞、组织的自发荧光背景干扰低;
3)通用性好------荧光显微镜、流式细胞仪一般都能检测;
4)高特异性染色------只会对新合成DNA或者RNA进行染色,不会同细胞内的其它
分子反应和结合。
Cell-Light™ EdU检测荧光光谱分析
图5 采用EdU标记干细胞进行示踪实验
文献实例:
EdU标记ADSC细胞移植情况(红色: EdU;蓝色:DAPI;绿色:α-SMA抗 体)
5) Lin G, Wang G, et al. Cytotherapy. 2010.(细胞示踪)
C10314 Cell-LightTM EdU DNA Proliferation in vivo Detection
EdU (5-ethynyl-2’-deoxyuridine,5-乙炔 基-2’脱氧尿嘧啶核苷)
Ribobio
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,其 乙炔基团在天然化合物中很少见,在细 胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子 中,基于EdU与染料的共轭反应可以高效 快速地检测细胞增殖,可以有效地检测 处于S期的细胞百分数。
C10312 Cell-LightTM EdU 荧光显微镜 检测试剂盒
Tel: 028-81391685、13679094941
Cell-Light™ EdU 细胞增殖检测
2) EdU 对植物增殖细胞的标记检测----无需破壁
Ribobio
植物细胞的细胞壁有着保护的作用,尽管消化酶能够消化细胞壁, 但也容易带来一些杂质,甚至破环细胞形态,基于抗体的BrdU检测方法 往往无法满足客户需求。但是EdU和Apollo染料分子很小,能够轻易地透 过细胞壁屏障,只需普通的固定和透化步骤,无需DNA变性及免疫反 应,能够准确地检测各种植物细胞增殖情况。
Ribobio
•细胞培养 •用Cell-Light™ EdU孵育样品
•细胞固定 •Cell-Light™ EdU的检测
•图像采集分析
Cell-LightTM EdU检测方法示意图
Cell-Light™ EdU 检测荧光特性
检测相关荧光技术参数:
Ribobio
Apollo®荧光染料的特点:
1)分子小------只有BrdU抗体的1/500,能够很容易地进入DNA超螺旋结构中进行高
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与 细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团, 使C E成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶 联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时,CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其 荧光强度是亲代细胞的一半。这样,在一个增殖的细胞群中,各连续代细胞的荧光强度呈
利用EdU检测小鼠小肠组织的细胞增殖切片
C10314 Cell-LightTM EdU DNA Proliferation in vivo Detection
Tel: 028-81391685、13679094941
Ribobio
Cell-Light™ EdU 细胞示踪
4)EdU 细胞示踪实验
EdU不仅能应用于细胞增殖的检测,还能进行细胞示踪实验,示 踪标记时间长达6周,远胜于BrdU,用于细胞移植,观察其治疗机 制如分化、迁移、存活、体内分布等。
参考文献:
Kotogány E, Dudits D, et al. 2010 Jan 28;6(1):5.
C10310 Cell-LightTM EdU DNA Cell Proliferation Kit
Tel: 028-81391685、13679094941
Cell-Light™ EdU多重联合检测
Ribobio
Cell-Lightwk.baidu.com EdU 试验流程
检测方法简便,只需三步即可分 析细胞增殖数据: 1)EdU孵育样品; 2)细胞固定化; 3)Apollo®染料检测EdU。
Tips:
1.建议使用50μM EdU培养基孵育,但您可 以在预实验时根据细胞类型和实验目的,以 一系列浓度(10~100μM)的EdU培养基孵育进 行优化,细胞能太密,一般60%-70%。 2.不同细胞类型之间有一定差异,可以先做 一个时间梯度,找出合适的孵育时间。 3.由于细胞之间的差异,最佳EdU的终浓度 和培养时间可根据具体实验调整,(50μM EdU 培养基用细胞培养液以1:2000的比例稀释 EdU溶液)。 4. EdU孵育时间>24小时宜采用较低浓度, 而EdU孵育时间<45分钟宜采用较高浓度。 5.EdU检测和DNA染色草种、孵育注意避光。 6.固定好的细胞,不染色,在4℃可存放1个 月。组织切片如暂不检测就不要脱蜡。
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Cell-Light™ EdU
不同动物的EdU用量参考
Ribobio
物种 Mouse
Rat Zebrafish larva
Zebra Finch Flatworm (marine)
规格 100 μg 160 μg 400 μM 50–80 μg/12 hours 100 μM
Br
DNA变性后,BrdU才能与 其抗体进行结合
C10314 Cell-LightTM EdU DNA Proliferation in vivo Detection
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Ribobio 细胞增殖传统检测方法
胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法
胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的碱基,也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记 TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程,通过测定细胞的放射性强度, 可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。
对递减,利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。 Brdu检测法
Brdu中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合 成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗Brdu单克隆抗体,ICC染色,显示增 殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研 究细胞动力学有重要意义。
放射性同位素检测方法
缺点: •不能结合其他标记进行多 重标记分析 • 操作复杂,有较大危险性
Tritiated (3H) thymidine
这是细胞增殖最早的检 测方法,是基于放射性同位 素的检测方法。
Ribobio
BrdU检测方法
Ribobio
Br
Br
Br
BrdU (5-bromo-2'-deoxyuridine)
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