EDU检测细胞增殖
edu细胞增殖实验原理
edu细胞增殖实验原理
细胞增殖实验是一种用于研究生物细胞生长的基础实验。
它是通
过在适宜的培养条件下，通过定期观察和计数细胞的数量和形态变化，来研究细胞分裂和生长的过程。
在实验中，通常采用细胞培养技术，将细胞种植在营养丰富的培
养基中，确保细胞具有足够的营养和生长条件。
然后在特定时间点，
使用显微镜观察细胞的增殖情况，计数细胞数量和评估其形态变化。
细胞增殖实验的主要原理是通过研究不同条件下细胞增殖的变化，来推测影响细胞生长和正常功能的因素。
例如，可以研究不同营养成
分对细胞生长的影响，探索某些药物或遗传学变异对细胞增殖和功能
的影响等。
在实验过程中，需要注意一些因素以保证实验结果的准确性和可
靠性。
首先，需要使用高品质的培养基及其他细胞培养试剂，以确保
细胞生长环境的稳定性和一致性。
此外，还需定期检查细胞培养条件，包括温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度等环境参数。
同时，还需用显
微镜进行精确地观察和定量测量细胞生长状态，以保证实验数据的准
确性和可重复性。
总之，细胞增殖实验是生物学研究中最基础的实验之一。
通过定
量和定性地研究细胞生长和分裂的变化，可以得出某些生化、生物物
理和遗传学方面的结论，这对深入理解细胞功能和疾病发生机制有重
要意义。
细胞增殖检测的常见方法
细胞增殖检测的常见方法细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础，是生物体的重要生命特征。
检测细胞在培养基或组织中的生长速率，对于细胞生长和分化研究至关重要。
在药物开发过程中也常被用于评估药物的毒性和对癌细胞生长的抑制情况。
细胞增殖检测通常是基于DNA含量或细胞代谢实现的，主要的研究方向为对活细胞的代谢活性的检测（基于CCK-8、WST、XTT、MTT等）及对DNA合成的检测（基于BrdU、EdU），可通过体内成像、微孔板或流式细胞术检测等多种技术进行细胞示踪。
以下是常见的三种方法：使用四唑盐进行代谢活性检测通过添加四咪唑盐到细胞中可进行线粒体内酶代谢活性的测定。
活细胞能将四咪唑盐（如CCK-8、MTT、XTT、WST-1）还原成有色的甲瓒或甲瓒盐（Formazan），可通过分光光度计或酶标仪进行检测。
其中Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是由同仁化学研究所（Dojindo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，CCK-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。
具体是利用四唑盐——WST-8，它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料。
WST-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST-1高。
测定ATP水平检测细胞增殖活细胞需要不断以ATP的形式输入自由能，因此通过检测ATP的增加水平可检测细胞增殖。
例如sigma的ATP Bioluminescence Assay Kit HS II及ATP Bioluminescence Assay Kit CLS II)是通过经典的荧光素酶发光对ATP检测定量的试剂盒。
前者主要应用于高灵敏度检测极低浓度ATP的实验，后者主要应用于当有持续信号产生而需要高重复性结果的实验。
MTT,CCK 8,BrdU,EdU细胞增殖检测原理
MTT，CCK 8，BrdU，EdU细胞增殖检测原理MTT，CCK 8，BrdU，EdU细胞增殖检测原理MTT又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
CCK-8Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。
细胞增殖越多越快，则颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅。
对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
CCK-8的原理跟MTT其实是相同的，不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤，因此可以减少一定的误差。
其他优点就是重复性优于MTT;对细胞毒性小;为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
但是CCK-8比MTT的价格要贵不少。
具体操作步骤BrdUBrdu，即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)，活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。
EDU细胞增殖检测
荧光显微镜检测方法(以96孔板，A549贴壁细胞为例)细胞培养取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。
药物处理(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。
EdU标记1.1 用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50μM EdU培养基；注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度(1~10μM)；2)如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；3)配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
表1 EdU培养基及染色反应液的使用量参考注：1)*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2)悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。
1.2 每孔加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基；注：1)最佳孵育时间与细胞周期相关(表2)，大多数细胞系均可采用2小时孵育时间；2)EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育时间内的营养物质持续供给(表1)；1.3 PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。
注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。
表2 EdU孵育时间设定参考注：1)EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h孵育时间。
孵育时间越长，细胞增殖数量就越多；2)*考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，具体实验的细胞群体细胞周期会有所变化。
表3细胞实验EdU孵育浓度及时间参考注：如果您有采用BrdU进行实验的经验，可以参照BrdU实验的相关参数进行EdU实验。
细胞固定化2.1 每孔加入50μL 细胞固定液(即含4% 多聚甲醛的PBS)室温孵育30分钟，弃固定液；注：1)低浓度的多聚甲醛有利于细胞结构的保持，当需要抗体染色时，需采用Triton X-100透化细胞以利于抗体进入细胞内。
细胞增殖检测方法
细胞增殖检测方法
细胞增殖是细胞数量的增加和分裂的过程，对于检测细胞增殖的方法有很多种。
以下是一些常见的细胞增殖检测方法：
1. 细胞计数：通过显微镜观察和手工计数细胞数量，或使用自动化细胞计数仪进行细胞计数。
2. 细胞增殖染料：使用细胞增殖染料，如溴化乙锭（BrdU）或五溴乙酰胺（EdU），将其添加到培养基中，然后检测细胞摄取或转化这些染料的程度，以评估细胞增殖。
3. MTT试验：MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基-2H-四唑酮）试验通过测量细胞的代谢活力来评估细胞增殖。
MTT试剂会被活细胞还原为紫色的甲基噻唑咪唑离子，可以使用分光光度计测量产生的紫色产物的吸光度来确定细胞的增殖能力。
4. 细胞周期分析：通过流式细胞术检测细胞的DNA含量，可以确定细胞处于哪个细胞周期阶段，并评估细胞的增殖能力。
5. 细胞增殖标记：通过使用荧光标记物或融合蛋白来标记增殖细胞。
例如，使用荧光标记的抗体来检测细胞核内的增殖相关标记物，如Ki-67。
6. 实时细胞分析：使用实时细胞分析系统，如X-Celligence系统，可以通过记录电极传感器阻抗的变化来监测细胞的生长和扩张情况，从而评估细胞增殖。
这些方法可以单独或结合使用，以获得更全面和准确的细胞增殖信息。
EdU细胞增殖检测法的操作教程（附文献）
EdU细胞增殖检测法的操作教程（附文献）细胞增殖的能力是评价细胞、代谢、生理、病理状况、细胞活性、基因毒性等的重要指标之一。
细胞增殖虽然与多种因素有关，比如细胞代谢活性、与细胞增殖相关的蛋白表达、ATP的浓度等等，但是检测细胞增殖现象的zui直接zui准确的方法就是用荧光探针直接检测遗传物质DNA的合成，这种方法是研究细胞增殖、信号通路、DNA修复及分化等等方向常用的方法。
目前，基于DNA的合成原理，人们zui初开发了工具是BrdU染色法, 但是这种方法操作耗时长，往往需要过夜处理细胞，操作繁杂，比如需要DNA变性、抗原修复以及抗原抗体反应等操作，后来在BrdU的基础上，人们开发出了革命性的探针--EdU，这种方法不需要繁杂的操作，节约时间，且反应更灵敏和准确。
并且与MTT/WST-1或者CCK-8这种依靠化学显色法只能得到一个折线图的方法相比，EdU 细胞增殖检测法可以得到高清细胞增殖现象数据图，可视化展示数据、更直观、更具视觉效果!EdU的检测原理是什么？EdU可以说是一款革命性的细胞增殖状态检测方法与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比，EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。
EdU细胞增殖检测法的操作教程一、首先用 EdU 来标记细胞注意:本实验样本是Hela 细胞，如果使用其它类型的细胞，实验可能需要做调整。
建议 EdU 起始浓度是10 µM，或者根据细胞类型设置几个梯度预实验摸索zui佳EdU浓度，再进行正式实验。
1.在六孔板里的盖玻片上培养细胞，使其生长至所需密度后处理细胞；2.用 10 mM EdU 溶液在无血清培养基中制备 2x EdU 工作溶液；3.预热 2x EdU 溶液，然后将 2x EdU 溶液添加到等体积含有实验细胞的培养基中，获得 1x EdU 溶液。
细胞增殖 检测方法
细胞增殖检测方法细胞增殖是指细胞在生物体内不断分裂和繁殖的过程，是生物体生长和发育的基础。
检测细胞增殖的方法有很多种，以下将详细介绍几种常见的细胞增殖检测方法。
首先，细胞计数法是最常用的细胞增殖检测方法之一。
细胞计数法主要通过显微镜观察和数数的方式，计算细胞的数量来反映细胞增殖的情况。
可以通过细胞染色或细胞标记技术使细胞在显微镜下更易于观察和区分。
细胞计数法通常需要使用专业的细胞计数仪或显微相机来帮助实施，具有操作简单、结果准确等特点。
其次，MTT法是一种在体外细胞培养中常用的细胞增殖检测方法。
MTT法基于细胞中还原剂细胞线粒体呼吸将黄色硫代唑盐（MTT）还原为紫色的可溶性产物，最后通过比色法测定细胞数目和细胞活力。
MTT法操作简单、结果稳定可靠，广泛应用于药物筛选和细胞增殖研究中。
另外，细胞增殖标记法是通过标记DNA合成阶段的细胞来检测细胞增殖的方法。
常见的细胞增殖标记法有Brdu法和EDU法。
这两种方法都是通过标记新合成的DNA分子来反映细胞增殖情况，Brdu法利用抗体检测Brdu标记的DNA，而EDU法则利用稳定的EDU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷）分子和荧光染料的结合来检测标记的DNA。
由于这两种方法都需要使用荧光染料或抗体检测，因此需要显微镜或流式细胞仪等设备来进行检测。
此外，细胞增殖检测还可以通过测定细胞凋亡（细胞死亡）来间接反映细胞增殖情况。
细胞凋亡是细胞自身程序性死亡的一种形式，常使用TUNEL（DNA末端标记术）法或Annexin V/PI双染法来检测细胞凋亡。
这些方法通过标记DNA 断裂或细胞膜破损来区分凋亡细胞和正常细胞，并通过荧光染料或抗体检测来反映细胞凋亡的程度。
细胞凋亡的明显增加往往意味着细胞增殖的受抑制。
总的来说，细胞增殖检测方法的选择应根据具体实验的目的、条件和资源来决定。
不同的方法各有优势和局限性，需要结合实际情况进行选择。
在细胞增殖检测中，细胞计数法是最常用的方法，MTT法和细胞增殖标记法是常见的体外检测方法，而通过检测细胞凋亡来间接反映细胞增殖情况也是一种有效的方法。
EdU法细胞增殖检测——Brdu方法的革命性突破
EdU法细胞增殖检测——Brdu方法的革命性突破细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。
其中EdU检测方法是zui新的细胞增殖检测方法。
一、什么是细胞增殖呢？细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。
单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。
多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。
二、细胞增殖的意义和方式意义：细胞增殖是生活细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征。
细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
方式：真核生物的分裂依据过程不同有三种方式，有有丝分裂，无丝分裂，减数分裂。
其中有丝分裂是人、动物、植物、真菌等一切真核生物中的一种zui为普遍的分裂方式，是真核细胞增殖的主要方式。
减数分裂是生殖细胞形成时的一种特殊的有丝分裂。
三、关于EdU检测方法EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。
与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。
细胞增殖伴随着多细胞生物生命体运作的一生，越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测，关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。
那么到目前为止，研究细胞增殖有哪些手段呢？EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。
EdU（5-溴-2-脱氧尿嘧啶）试剂盒是一种嘧啶类似物，可以在DNA合成期整合入DNA双链。
通过以上原理图的对比，大家不难发现，EdU法检测细胞增殖，无须抗体，无变性步骤，保持细胞形态和DNA完整性，是一种简单，可靠，省事的创新方法。
edu dab法
关于EdU和DAB法，它们在不同的领域中有着不同的应用。
EdU是一种胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，可以在DNA合成过程中掺入，被用于检测细胞的增殖。
通过EdU与随后的点击反应，可以将EdU标记为生物素，再结合辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，最后通过DAB显色，实现简单、快速、高灵敏地检测细胞增殖。
这种方法可以检测到细胞或组织样品中单个的增殖细胞，也可以对细胞或组织样品总体的细胞增殖情况进行定量检测。
细胞增殖能力的检测是评估细胞活性、基因毒性和抗肿瘤药物效果等的基本方法。
EdU法基于EdU掺入和后续的点击反应，无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高，是一种在BrdU 法基础上升级换代的新方法，将会逐步取代BrdU法。
而DAB则是一种由3,3'-二氨基联苯胺组成的化学物质，通常用作染料和颜料。
在许多化学反应中，DAB可以作为显色剂，用于标记特定的化学反应产物。
因此，EdU和DAB法在生物学和化学领域中都有应用，但它们的应用范围和目的不同。
在生物学中，EdU主要用于检测细胞的增殖，而DAB则用作化学反应的显色剂。
检测细胞增殖能力的方法
检测细胞增殖能力的方法细胞增殖能力是生物学和医学研究中极为重要的指标，它反映了细胞的生长、繁殖和生命活力。
本文将详细介绍几种常用的检测细胞增殖能力的方法，以供研究者参考。
一、MTT法MTT法（甲基噻唑基四唑法）是一种经典的检测细胞增殖的方法。
其原理是利用活细胞内的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为蓝紫色的甲臜，甲臜的量与活细胞数成正比。
具体步骤如下：1.将细胞接种于96孔板中；2.加入MTT溶液，培养一定时间；3.弃去上清，加入DMSO溶解甲臜；4.使用酶标仪测定吸光度，判断细胞增殖能力。
二、CCK-8法CCK-8法（细胞计数试剂盒-8）与MTT法类似，但操作更简便，毒性更低。
CCK-8试剂在细胞内被还原后生成橙色的甲臜，通过测定吸光度可以评估细胞增殖能力。
三、EdU法EdU法（5-乙炯基-2"-脱氧尿嘧啶法）是一种新兴的细胞增殖检测方法。
EdU是胸腺嘧啶类似物，可以代替胸腺嘧啶插入到DNA中。
通过荧光显微镜或流式细胞仪检测EdU标记的DNA，可以评估细胞增殖情况。
四、Brdu法Brdu法（5-溴脱氧尿嘧啶法）与EdU法类似，也是一种检测细胞增殖的经典方法。
Brdu在细胞周期中代替胸腺嘧啶插入DNA，通过免疫荧光或免疫组化方法检测Brdu标记的DNA，从而评估细胞增殖能力。
五、细胞计数法细胞计数法是最直接的检测细胞增殖能力的方法。
通过细胞计数板或流式细胞仪对细胞进行计数，可以直接得到细胞数量，从而判断细胞增殖能力。
六、其他方法除了以上几种方法外，还有其他检测细胞增殖能力的方法，如：1.克隆形成实验：通过测定细胞克隆的形成数量来评估细胞增殖能力；2.细胞周期分析：利用流式细胞仪检测细胞周期各阶段的细胞比例，间接反映细胞增殖能力；3.报告基因法：通过构建带有报告基因的细胞株，检测报告基因的表达水平来评估细胞增殖能力。
综上所述，检测细胞增殖能力的方法多种多样，研究者可以根据实验需求和条件选择合适的方法。
EDU实验步骤
EdU细胞增殖(细胞成像)EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，通过基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及药物的细胞增殖筛选实验。
荧光显微镜检测方法(以96孔板，A549贴壁细胞为例)细胞培养取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。
药物处理(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。
EdU标记1.1 用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50μM EdU培养基；注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度(1~10μM)；2)如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；3)配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
注：1)*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2)悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。
1.2 每孔加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基；注：1)最佳孵育时间与细胞周期相关(表2)，大多数细胞系均可采用2小时孵育时间；2)EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育时间内的营养物质持续供给(表1)；1.3 PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。
注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。
注：1)EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h孵育时间。
EdU-647细胞增殖检测试剂 protocol
EdU-647细胞增殖检测试剂1、配制2X的EdU工作液：由于EdU工作液是与培养液等体积加入到孔板中，推荐的EdU终浓度为10μM (1X)，用细胞培养液1:500稀释EdU (10mM)即可得到2X的EdU工作液(20μM)。
2、将37ºC预热的2X的EdU工作液(20μM)，等体积加入6孔板中，使6孔板中的EdU终浓度变为1X。
继续孵育细胞2小时。
3、EdU标记细胞完成后，去除培养液，（离心1200rpm，6min，去上清），加入1ml固定液（4%PFA）4、去除固定液（离心），每孔用1ml PBS洗涤细胞2次，每次5分钟离心。
5、去除洗涤液，每孔用1ml通透液(含0.3% Triton X-100的PBS)，室温孵育15分钟。
6、去除通透液，每孔用1ml PBS洗涤细胞2次，每次5分钟。
7、配制Click Additive Solution：对于C0081S，用1.3ml去离子水溶解一管Click Additive，混匀至全部溶解，即为Click Additive Solution；8、配制Click反应液。
10sample：Click Reaction Buffer-4.3ml；CuSO4-200ul；Azide 647-10ul；Click AdditiveSolution-500ul。
9、去除上一步骤中的洗涤液。
每孔加入0.5ml Click反应液，轻轻摇晃混匀。
室温避光孵育30分钟。
10、细胞核染色：1X Hoechst 33342溶液的配制：○1按1:1000比例用PBS稀释Hoechst 33342(1000X)。
○2吸除洗涤液后，每孔加1X Hoechst 33342溶液1ml，室温避光孵育10分钟。
○3吸除1X Hoechst 33342溶液。
用PBS洗涤2次，每次5分钟。
11、上机检测。
细胞增殖凋亡检验方法汇总
细胞增殖、凋亡-检测方法汇总1.直接计数法面单粗暴、傻瓜式的检查方法！利用计数板或计数仪得出细该数目•然后对数目逬行比较。
方法需要对不同时间原的细胞分别固定•而后在光疑下计数,可绘制出细胞生长曲线。
而具不足之处在于无法区分壇蓿细胞与非增殖抵胞，下适合样品奴星參和评估特定亚群的情况。
2「H・TdR渗入法OH腺龜碇核百(TdR )是DNA持有的滅基「也是DNA合成的必需物氐用同位素中标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体渗入DNA合成代谢过程,通过液体闪烁计数器可迴走细胞的放射性强虐，间接放映出细胞增殖情况。
该方法优点在于敏感性高”客观性强,盍每性好.但是爲要一走设备集件，也存在放时性核素污染问题。
3、Brdu/EdU检测法Brdu&EdU均是胸腺嚅睫的衍生物r均可代替胸腺嚅噪在DNA合成期掺入细胞中。
不同的是J Brdu检测法可利用B「du专性抗体和具他細胞标记物对细'进行双重染色,可判断増殖细胞的种类及増殖速度，不仅适用于体外实验也能用于活体实验。
这个方法最大的缺点需要变性DNA才能与抗体结合,破坏了DNA双链结构r导致染色弥散、准确性降低等问题。
EdU检测法则基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性r适用于细胞増殖、细胞标记示踪筈方IEI的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,®田胞内很容易就扩散,无需DNA变性。
rdU与EdU检测优缺点综合比较BrdU EdU 检测分子大很小检测方式免疫反应化学反应影响其他标记是否DNA变性需要不需要实验时间过夜 2.5小时检测灵敏度一般灵敏4、WITT检测法&CCK8检测法MTT检测法反映细胞的能臺代谢「是检测细胞増殖活力的一种简便准确方法°其原理是在活纟田胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解为蓝紫色的水不溶性的甲瓒(Formazan ),并沉积在细胞中(死细胞无此功能。
细胞增殖 检测方法
细胞增殖检测方法
细胞增殖是指细胞数量的增加。
检测细胞增殖可以通过多种方法，其中常用的方法包括：
1. 细胞计数：使用显微镜观察细胞培养物中的细胞数量，并通过计数来得出细胞增殖情况。
2. 晶紫染色法：晶紫染色可以染色细胞核，通过观察染色后细胞数量的增加来判断细胞增殖情况。
染色后的细胞可以在显微镜下观察，并可以使用图像处理软件进行图像分析。
3. DNA含量分析：细胞增殖时DNA含量也会增加，可以通过荧光染料如荧光素琥珀酰胺（Propidium Iodide）染色，使用流式细胞仪来分析DNA含量。
4. 噻吩蓝染色法（MTT法）：MTT法使用噻吩蓝（MTT）染料可以评估细胞活性和增殖能力。
活细胞将MTT染料转化为紫色的内盐，通过溶解细胞并测量溶液的吸光度来确定细胞增殖情况。
5. 细胞增殖标记物：细胞增殖标记物如脱氧尿苷（BrdU）或5-乙酰基-2'-脱氧尿苷（EdU）可以被细胞吸收并集成到新合成的DNA中。
这样，在染色时可以使用抗-BrdU或抗-EdU抗体染色，并通过观察标记物阳性细胞的数量来评估细胞增殖情况。
以上方法都可以用于检测细胞增殖情况，选择适合实验需求的方法进行研究。
需要注意的是，不同的方法可能具有不同的准确性和敏感性，因此在实验设计和数据分析过程中需要谨慎操作。
细胞增殖检测新技术
细胞增殖检测新技术——EdU 取代BrdU直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一，是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法，其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物——BrdU进行检测。
因为在细胞周期的S期，和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中，再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合，就能够检测到DNA复制活跃的细胞。
但BrdU有一大缺点，就是需要变性DNA后才能与抗体结合，但这就破坏了DNA双链结构，影响了其他染料的结合染色，导致染色弥散，准确性降低等问题。
哈佛大学医学院细胞生物学家Adrian Salic 就认为：“为了能够暴露BrdU的抗原表位，必须用高浓度的盐酸，乙酸或酶解，但经历了如此严重的处理后，细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。
”事实上，现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生——EdU检测。
EdU （5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷）也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见，在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析，可以有效地检测处于S期的细胞百分数。
与传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法相比，更简单，更快速，更准确。
EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性（酸解、热解、酶解）处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。
Adrian Salic特别强调：“与传统的免疫荧光染色不同，EdU反应能在几分钟内完成，且不需要进行严格的样品变性处理，使得组织成像更简单易行。
”细胞增殖检测方法基于Ed U与Apollo？荧光染料的完美结合准确检测新合成的DNA，简单，快速，准确。
这种检测方法非常快速，且只需简单的几个步骤，因此也适用于高通量筛选试验，如在药物筛选中检测加药后细胞的活力。
抗肿瘤药物筛选——细胞水平实验丨Edu细胞增殖检测
抗肿瘤药物筛选——细胞水平实验丨Edu细胞增殖检测细胞水平的细胞增殖是生物医学领域非常重要的表型，对细胞增殖的检测是检验药物对肿瘤细胞影响的最主要检测手段。
作为细胞水平检测增殖现象的传统方法，cck8比色法，Edu细胞增殖检测在细胞增殖检测中被广泛应用。
一、传统的肿瘤治疗方法1.外科手术治疗2.放射线治疗3.化学药物治疗众所周知，化疗会产生很多不良反应，比如：骨髓抑制(血细胞减少)、胃肠道反应、脱发、发热、皮疹、心脏毒性、肝脏毒性、神经毒性、泌尿道毒性、局部静脉炎、致畸、致突变、致癌等等。
那么持续不断地寻找更好的抗肿瘤药物势在必行。
天然产物在新药及新药先导化合物的发现中起着不可替代的作用，是结构新颖和作用独特的抗肿瘤化合物的重要来源。
美国国立癌症研究所(NCI)从1955年开始从天然产物中筛选抗肿瘤药物。
目前世界上被批准广泛使用的抗肿瘤药物中,50 %以上来源于天然产物。
那么问题来了~如何进行抗肿瘤药物的筛选？以及主要用到哪些实验方法？实际上，抗肿瘤药物的筛选体系复杂，涉及到宏观到微观水平的一系列实验。
在这里小编，就简要梳理一下抗肿瘤筛选的关键流程吧：二、动物水平的筛选流程：三、细胞水平的筛选①抑制肿瘤细胞增殖实验②诱导肿瘤细胞分化实验③诱导肿瘤细胞凋亡实验④抗肿瘤血管生成实验⑤肿瘤多药耐药性逆转实验⑥抗肿瘤侵袭和转移实验⑦诱导肿瘤细胞自噬实验四、抑制肿瘤细胞增殖实验细胞水平检测增殖现象的传统方法主要有：1）cck8比色法；2）Edu细胞增殖检测；1）cck8比色法CCK8是基于WST-8的一种细胞增殖检测方法，WST-8是一种水溶性四唑盐，常用于评估细胞的代谢活性。
在中性pH值及中间电子受体存在的情况下，被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的蓝/紫色甲臜产物（formazan）。
生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。
用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
edu实验解读
EDU实验是一种用于研究细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的技术。
通过EDU实验，可以定量测定细胞增殖速率和细胞周期，还可以研究细胞分化和细胞凋亡等现象。
在EDU实验中，通常会在特定的培养条件下，将标记有EDU的核苷酸引入细胞中，通过与DNA的结合，标记出DNA复制的区域。
随后，通过一系列的固定、洗涤和染色步骤，使用抗体检测出标记的DNA区域，最终通过显微镜观察和图像分析技术，对细胞的增殖情况进行定量分析。
通过EDU实验，可以获得许多有价值的信息，例如细胞增殖速率、细胞周期各时相的长度、细胞分化的方向和程度、细胞凋亡的发生和分布等。
这些信息对于理解细胞生命活动的规律和机制具有重要的意义，对于研究疾病的发生和发展机制、药物研发和癌症治疗等领域也具有广泛的应用价值。
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Ｂｒｄｕ中文全名５－溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在ＤＮＡ合 成期（Ｓ期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Ｂｒｄｕ单克隆抗体，ＩＣＣ染色，显示增 殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研 究细胞动力学有重要意义。
ＭＴＴ检测法
ＭＴＴ检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法， 其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的ＭＴＴ分解成兰紫色的 甲（Ｆｏｒｍａｚａｎ），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比。
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（ＣＦＳＥ）检测法
C10311 Cell-LightTM EdU 流式细胞仪检测试剂盒 Tel: 028-81391685、13679094941
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Cell-Light™ EdU 动物实验 3) 在组织水平上EdU对增殖细胞的标记
Ribobio
EdU适用于人、小鼠、大鼠等活体注射，全面分析组织或器官的细胞 增殖情况，适用于石蜡或冰冻组织切片检测，对活体无副作用。
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Cell-Light™ EdU 试验流程
检测方法简便，只需三步即可分 析细胞增殖数据： 1）EdU孵育样品； 2）细胞固定化； 3）Apollo®染料检测EdU。
Tips:
1.建议使用50μM EdU培养基孵育，但您可 以在预实验时根据细胞类型和实验目的,以 一系列浓度(10~100μM)的EdU培养基孵育进 行优化，细胞能太密，一般60％－70％。 2.不同细胞类型之间有一定差异，可以先做 一个时间梯度，找出合适的孵育时间。 3.由于细胞之间的差异，最佳EdU的终浓度 和培养时间可根据具体实验调整,(50μM EdU 培养基用细胞培养液以1：2000的比例稀释 EdU溶液)。 4. EdU孵育时间>24小时宜采用较低浓度， 而EdU孵育时间<45分钟宜采用较高浓度。 检测和DNA染色草种、孵育注意避光。 6.固定好的细胞，不染色，在4℃可存放1个 月。组织切片如暂不检测就不要脱蜡。
效的染色标记，而且容易把没有反应的多余荧光分子从细胞中洗干净；
2）发射光波长较长------细胞、组织的自发荧光背景干扰低；
3）通用性好------荧光显微镜、流式细胞仪一般都能检测；
4）高特异性染色------只会对新合成DNA或者RNA进行染色，不会同细胞内的其它
分子反应和结合。
Cell-Light™ EdU检测荧光光谱分析
C10314 Cell-LightTM EdU DNA Proliferation in vivo Detection
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Ribobio 细胞增殖传统检测方法
胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）渗入法
胸腺嘧啶核苷（ＴｄＲ）是ＤＮＡ特有的碱基，也是ＤＮＡ合成的必需物质。用同位素３Ｈ标记 ＴｄＲ即３Ｈ－ＴｄＲ作为ＤＮＡ合成的前体能掺入ＤＡＮ合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度， 可以反映细胞ＤＡＮ的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。
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Cell-Light™ EdU 结果检测
能够适合多种研究方式： 1）荧光显微镜 2）激光共聚焦显微镜 3）高内涵筛选分析 4）流式细胞仪分析 5）酶标仪（带荧光）
能够适用与多层次分析： 1）样品：固定细胞、组织切片------生物荧光 显微镜和激光共聚焦显微镜 2）样品：细胞悬浮液-------流式细胞仪分析
4
EEUURRNNAA标标记记技技术术的的原原理理
5
EU RNA标记技术的应用
Ribobio
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Cell-LightTM EdU DNA 标记技术
广州市锐博生物科技有限公司
Email：sales-cd@
电话：028-81391685/13679094941
Cell-Light™ EdU 核酸标记技术
基于免疫荧光技术的技术，靠抗原
抗体结合发光的方式检测。
Br
BrdU检测方法
BrdU抗体
Br
Br
无法与 BrdU结合
Br
BrdU抗体分子太大，无法
直接与DNA中的BrdU结合，需
Br
进行DNA变性处理。
Ribobio
BrdU检测方法
Br
抗体分子太大，很难与DNA 中的BrdU轻松地结合，实验需要 进行DNA变性，如酸解或酶解以 暴露出DNA双链其中的BrdU。
EdU
Ribobio
Cell-Light™ EdU 检测特点
• 非放射性同位素检测 • 无需DNA变性 • 无需破细胞壁(植物) • 无需抗体 • 实验方法简单，操作时间大幅缩短 • 小分子检测，更加灵敏、准确 • 能够结合其它标记进行多参数检测，如
• 其它抗体 • 细胞周期分析的其它染料 • 其它标记
孵育或注射 腹腔注射 腹腔注射
孵育 肌肉注射
孵育
相关文献* Salic, A. (2008) Proc Natl Acad
Scientific poster ASCB 2007 BioProbes 57
Scientific poster ASCB 2007 No published reference
EdU (5-ethynyl-2’-deoxyuridine，5-乙炔 基-2’脱氧尿嘧啶核苷)
Ribobio
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其 乙炔基团在天然化合物中很少见，在细 胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子 中，基于EdU与染料的共轭反应可以高效 快速地检测细胞增殖，可以有效地检测 处于S期的细胞百分数。
Br
DNA变性后，BrdU才能与 其抗体进行结合
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（ＣＦＳＥ）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与 细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团， 使Ｃ Ｅ成为一种良好的细胞标记物。ＣＦＳＥ进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶 联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，ＣＦｓＥ标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其 荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈
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Cell-Light™ EdU 细胞增殖检测
2) EdU 对植物增殖细胞的标记检测----无需破壁
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植物细胞的细胞壁有着保护的作用，尽管消化酶能够消化细胞壁， 但也容易带来一些杂质，甚至破环细胞形态，基于抗体的BrdU检测方法 往往无法满足客户需求。但是EdU和Apollo染料分子很小，能够轻易地透 过细胞壁屏障，只需普通的固定和透化步骤，无需DNA变性及免疫反 应，能够准确地检测各种植物细胞增殖情况。
利用EdU检测小鼠小肠组织的细胞增殖切片
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Cell-Light™ EdU 细胞示踪
4)EdU 细胞示踪实验
EdU不仅能应用于细胞增殖的检测，还能进行细胞示踪实验，示 踪标记时间长达6周，远胜于BrdU,用于细胞移植，观察其治疗机 制如分化、迁移、存活、体内分布等。
检测相关荧光光谱图：
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Apollo ® 567 光谱图 Apollo ® 643 光谱图 Hoechst33342光谱图
Cell-Light™ EdU 细胞增殖检测
1) 在细胞水平上EdU对增殖细胞的标记
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利用EdU检测细胞新合成的DNA，同时结合细胞核标记物进行双重或 多重标记，判断增殖细胞的种类，增殖速度，全面分析增殖细胞的定 位、分布。
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Cell-Light™ EdU
不同动物的EdU用量参考
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物种 Mouse
Rat Zebrafish larva
Zebra Finch Flatworm (marine)
规格 100 μg 160 μg 400 μM 50–80 μg/12 hours 100 μM
图5 采用EdU标记干细胞进行示踪实验
文献实例：
EdU标记ADSC细胞移植情况（红色： EdU；蓝色：DAPI；绿色：α-SMA抗 体）
5) Lin G, Wang G, et al. Cytotherapy. 2010.(细胞示踪)
C10314 Cell-LightTM EdU DNA Proliferation in vivo Detection
参考文献：
Kotogány E, Dudits D, et al. 2010 Jan 28;6(1):5.
C10310 Cell-LightTM EdU DNA Cell Proliferation Kit
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Cell-Light™ EdU多重联合检测
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•细胞培养 •用Cell-Light™ EdU孵育样品
•细胞固定 •Cell-Light™ EdU的检测
•图像采集分析
Cell-LightTM EdU检测方法示意图
Cell-Light™ EdU 检测荧光特性
检测相关荧光技术参数：
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Apollo®荧光染料的特点：
1）分子小------只有BrdU抗体的1/500,能够很容易地进入DNA超螺旋结构中进行高