血凝、血凝抑制试验
血凝及血凝抑制试验的应用
血凝及血凝抑制试验的应用血凝现象是指血液由流动的液体状态变成不能流动的凝胶状态的过程。
这种现象在医学领域具有重要意义，可用于血液凝固机制的研究、血液疾病和血栓性疾病的检测和诊断等。
而血凝抑制试验则是一种通过检测血凝因子的抗凝活性，评估血液抗凝系统功能的一种方法。
血凝现象在医学中应用广泛。
血凝机制的研究可以帮助人们更好地了解血液凝固的生理过程，从而对止血和血栓性疾病的发病机制有更深入的认识。
血凝检测在医学诊断中具有重要价值，例如在手术前对患者的凝血功能进行评估，以避免手术中大出血的风险。
血液疾病如凝血障碍、血小板减少等以及血栓性疾病如心肌梗死、脑血栓等均可通过血凝检测进行诊断和病情监测。
血凝抑制试验是一种检测血凝因子抗凝活性的方法。
该方法的基本原理是当血液中存在某种物质（如抗体）时，会抑制血凝因子的活性，从而阻止血液凝固。
通过检测这种物质的含量，可以评估血液抗凝系统的功能。
血凝抑制试验在临床上应用广泛，可用于检测和诊断各种凝血性疾病和免疫系统疾病，如血友病、系统性红斑狼疮等。
血凝及血凝抑制试验在医学领域中具有广泛的应用价值。
对于医生来说，了解血凝现象和血凝抑制试验的原理和应用，可以更准确地诊断和治疗各种血液疾病和血栓性疾病。
随着科学技术的不断发展，血凝检测技术和方法的不断完善和提高，其在医学领域的应用也将越来越广泛和重要。
本文将探讨定向遗忘中提取抑制的机制，并分析其成功提取引起抑制的案例。
简要介绍定向遗忘和提取抑制的概念，然后介绍基础知识点，包括抑制遗忘和提取抑制的作用。
接下来，详细介绍定向遗忘中提取抑制的机制，最后分析一个实际案例，阐述该机制的成功应用。
当我们遇到一个新概念或事物时，通常需要对其进行记忆。
然而，记忆并不总是准确无误的，有时甚至会遗忘某些信息。
定向遗忘便是一种有目的地遗忘特定信息的记忆过程。
与此当我们试图回忆某些信息时，也会受到抑制的影响，导致信息无法成功提取。
提取抑制是一种自我保护机制，可以避免不必要的回忆，从而减轻大脑的负担。
血凝和血凝抑制实验
3、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul
4、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分 钟
5、结果判定
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血凝效价测定
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结果判定标准
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 ％凝集；
以出现＋＋（50％凝集）的抗原最高稀释 倍数为该抗原的血凝价（1:128）？？？ 。
25ul 1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一 个血凝单位。
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血凝抑制试验
1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/128×4=1:32）
2、在血凝板上1－12孔内各加入25ul生理盐水；
3、在第1孔内加入被检血清25ul，然后倍比稀释至第 10孔，最后弃25ul；
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注意事项
• 1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢， 以免损坏红细胞（表现为分离是上清液为淡 红色，正常情况第一次分离后上清液为淡黄 色，之后直至清亮为清洗干净）。
• • 2、在吸取过程中一定要将中间的白细胞层吸
取干净。
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1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 ％凝集；
2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而 稍向孔底集中，即75％凝集；
3、 ＋＋：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块， 即50％凝集；
4、 ＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四 周稍有凝集块，即25％凝集；
5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即 无凝集。
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血凝与血凝抑制实验-
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• 病变特点: • 全身的粘膜和浆膜出血，突出病变在
消化道。 • A.腺胃粘膜水肿，粘膜上的乳头及其
周围有出血点，间有溃疡。 • B.腺胃与肌胃、腺胃与食道交界处粘
膜可见到出血点或出血带。
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C.小肠、直肠、泄殖腔粘膜充血、出血或有坏 死, D.盲肠扁桃体出血。
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血凝价的判定
以出现＋＋（50％凝集）的抗原最高稀释 倍数为该抗原的血凝价（1:128）。 50ul 1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一 个血凝单位。
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血凝抑制试验
1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/128×4=1:32） 2、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水； 3、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第 11孔，最后弃50ul； 4、第1－12孔内加入4单位抗原50ul（第12孔为病毒对 照）； 5、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul； 6.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 6.结果判定
颈，角弓反张，倒地不能起立。
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• 病变: 喉头及气管粘膜水肿，出血、充血、 并有大量粘液，
• 肺呈紫黑色（肺出血性炎症）。 • 硬脑膜下树枝状充血，并有出血点。 • 心冠、脂肪有出血点。 • 发病率高，死亡率较低。
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（4）、慢性型（非典型ND）
母鸡: 轻者只表现产蛋率下降（约10-30%），产软
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皮下脂肪出血
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脑膜充血出血 卵黄性腹膜炎
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有的病鸡表现眼结膜炎
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（3）、亚急性型（非典型ND，以侵害呼吸 道为主）也称肺脑炎型:
血凝HA和血凝抑制试验HI
HA值可用于评估血液凝固功能和血栓形成风险
试验方法
添加标题
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添加标题
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试验材料：抗凝剂、试管、离心机、凝血因子活性检测试剂等。
试验原理：通过观察血液凝固过程，检测血浆中凝血因子的活性。
试验步骤：采集血液样本，加入抗凝剂，离心分离血浆，加入凝血因子活性检测试剂，观察血液凝固时间并记录结果。
不同点：血凝HA试验只能判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，而血凝抑制试验HI不仅可以判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，还可以检测抗凝物质的具体类型和浓度。
试验方法的比较
血凝HA试验：通过观察血凝块的形成和溶解过程，检测抗凝物质的存在和含量
操作简便性：血凝HA试验操作相对简单，而血凝抑制试验HI需要更多的样本和操作步骤
参考值：血凝HA试验结果的参考值一般为阴性或阳性，具体参考值因不同病毒而异。
临床意义
用于诊断血栓栓塞性疾病
评估血液高凝状态的风险
辅助诊断易栓症等血栓前状态
监测抗凝治疗的效果
02
血凝抑制试验HI
试验原理
血凝抑制试验HI是一种检测病毒抗体的方法，通过与特异性抗体结合，抑制病毒的凝集活性，从而检测出病毒抗体。
临床意义
用于诊断疾病：血凝抑制试验HI可以用于诊断多种疾病，如流感、麻疹等病毒感染性疾病，以及疟疾、血友病等出血性疾病。
监测治疗效果：通过血凝抑制试验HI，可以监测治疗效果，评估病情进展和预后。
指导治疗：血凝抑制试验HI的结果可以指导治疗，例如在输血时，通过血凝抑制试验HI可以确定最佳的输血量。
流行病学调查：血凝抑制试验HI还可以用于流行病学调查，了解疾病的流行趋势和分布情况。
试验意义：用于检测凝血因子活性，评估血液凝固功能，协助诊断凝血障碍相关疾病。
实验四血凝和血凝抑制试验课件
02
实验材料
实验器材
01
02
试管
用于血样的采集、分离和反应 。
吸管
用于吸取试剂和血样。
03
离心机
用于血样的分离。
04
显微镜
用于观察血凝现象。
实验试剂
生理盐水
用于稀释血样和作为反应介质 。
抗血清
用于血凝抑制试验，针对特定 病毒或细菌。
凝血酶
促使血液凝固的酶。
抗凝剂
如肝素，防止血液凝固。
实验样本
出了抗体滴度与病毒滴度之间的关系。这一发现有助于评估抗体治疗效
果和制定抗病毒治疗方案。
05
注意事项与安全须知
实验安全须知
01
实验操作应在专业人员 的指导下进行，确保安 全。
02
实验过程中应穿戴实验 服和防护眼镜，避免意 外伤害。
03
实验器材应保持清洁， 避免交叉污染。
04
实验废弃物应按照规定 进行处理，避免对环境 和人体造成危害。
血凝抑制试验
利用抗体与相应抗原结合后，抑 制红细胞发生凝集的现象。
实验步骤
准备试剂和器材：包括抗 原、抗体、红细胞、生理 盐水等。
制备不同浓度的抗原溶液。
取适量红细胞，加入不同 浓度的抗原溶液中，观察 红细胞是否发生凝集。
记录实验结果，分析数据， 得出结论。
对于血凝抑制试验，先加 入抗体，再加入抗原溶液， 观察红细胞是否发生凝集。
实验结果
实验结果一
实验结果三
血凝试验中，不同稀释度的病毒液与 红细胞混合后，红细胞迅速凝结成块， 形成明显的血凝现象。
通过比较不同稀释度的病毒液与加入 特异性抗体后的血凝抑制情况，可以 得出抗体滴度与病毒滴度之间的关系。
血凝HA和血凝抑制试验课件
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3. 热灭活法
3.1鸡血清
取100µL血清样品放入一灭菌离心管中；
各取100µL阳性血清和阴性血清加入到另2个灭 菌离心管中；
56℃水浴30min。
3.2 其它禽类血清
血清用鸡的红细胞处理后，分别取100µL样品、 阳性血清、阴性血清放入灭菌离心管中，56℃水 浴30min。
4000转离心1min；
取出上清，进行HI试验；
用阳性对照血清和阴性对照血清验证处理的彻底性
用于消除除鸡以外的其它禽类的血清非特异性反应。
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2.RDE（受体裂解酶）消除法 2.1试剂： RDE：用20mL无菌PBS稀释，小量分装，-20℃保存一周，注
意避免反复冻融； PBS： pH7.5，4℃保存； 阳性对照血清； 阴性对照血清。 2.2方法： 2.2.1鸡血清 加3倍体积的RDE到1倍体积的血清中； 充分混合； 56℃水浴30-60min; 加入6倍体积于血清体积的PBS。 2.2.2其它禽类血清 依据用RDE处理鸡血清方法处理后，继续按下列方法进行：用
三、实验步骤 （以禽流感为例, 参照禽流感防治 技术规范）
1 阿氏（Alsevers）液配制 称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化
钠0.42g, 加蒸馏水至100mL, 散热溶解后调pH值至6.1, 69kPa 15min高压灭菌, 4℃保存备用。
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•2 1%鸡红细胞液的制备
Hale Waihona Puke 全不凝集能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高
稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位
血凝和血凝抑制试验
血凝和血凝抑制试验一些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(Hemagglutination，HA)。
正粘病毒和副粘病毒是最主要的红细胞凝集性病毒；其他病毒包括披膜病毒、细小病毒、某些肠道病毒和腺病毒等也有凝集红细胞的作用，但常要求比较严格的反应条件，例如一定的pH范围等。
各种病毒的血凝素性质不尽相同。
某些病毒可在很广的pH条件下呈现血凝作用，某些病毒则只在很窄的pH范围内才能凝集红细胞。
某些病毒的血凝作用具有温度依赖性，也就是只在一定温度范围内才出现血凝现象；但另一些病毒却可在4℃、室温和37℃呈现同样的血凝作用。
病毒凝集的红细胞种类，也随病毒种类而不同，例如某些病毒主要对人和禽的红细胞呈现凝集作用，另一些病毒则可凝集豚鼠或大鼠等的红细胞。
当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以封闭病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触，这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(HemagglutinationInhibition，HI)，也称为血凝抑制反应。
血凝的原理因病毒而有所不同，如痘病毒对鸡红细胞发生凝集作用并非是病毒的本身，而是痘病毒的产物类脂蛋白的作用。
而流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。
病毒的血凝现象大致可以分为可逆转型、不可逆转性、凝集条件严格型三类。
血凝和血凝抑制试验有常量法和微量法两种，目前国内外广泛使用的都是微量法，各要素用量均为25ul，微量法省时、省料、高效。
以下简要介绍本次试验的主要内容，详细内容参见各国标。
各实验室所采用的HA和HI试验程序不同，下面的例子是应用V型微量板进行的试验，两种方法反应总体积都为75ul，本试验所用试剂为如下：1.生理盐水：用蒸馏水或去离子水配制成0.85％NaCl溶液，高压灭菌备用。
2.红细胞悬液：采鸡血液，加于倍量的红细胞保存液-阿氏液中，置4℃普通冰箱保存，可用一个月。
血凝与血凝抑制试验(附思考题及答案)
五、结果判定
• 血凝试验：根据血凝价稀释病毒悬液 • 血凝抑制试验：血凝抑制试验效价：出现完全血凝抑制时的最高
血清稀释度。
Байду номын сангаас
六、思考题
• 1、血凝价判定偏高或者偏低对血凝抑制价的判定结果有什么 影响？
• 若血凝价判定偏高，即稀释的倍数偏高，使得病毒浓度未达 到要求的4个血凝单位，则需要中和病毒的血清更少，即血清 的稀释倍数更大，因此结果会偏高。
将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液备 用 • 0·85%生理盐水 • 鸡血清
四、实验步骤
• （一）血凝试验 • 1～12孔加入生理盐水 • 第一孔加入50ul病毒悬液，倍比稀释至第11孔 • 1～12孔加入1%的红细胞50ul • 震荡后置于37度恒温箱25～30min后，观察结果 • 病毒的血凝价？ • 病毒的血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。
血凝和血凝抑制试验
安尧o
一、实验目的
• 1、掌握病毒血凝与血凝抑制试验的原理。 • 2、掌握试验的设计、操作步骤和结果的判定。
二、实验原理
• 血凝试验（HA）：
• 血凝抑制试验（HI）：
• 某些病毒能够使动物的红细胞发 生凝集现象。
• 红细胞凝集的本质是抗原-抗体 反应，红细胞表面存在凝集原
• 在病毒悬液中加入特异性抗体
• 2、血凝和血凝抑制试验的应用？ • 血凝试验可以检测某种病毒是否具有凝集红细胞的能力，测
定病毒的血凝价、滴度，血凝抑制试验可以检测抗体是否有 效，抗体的效价。
请在此处添加标题
• （二）血凝抑制试验 • 1～11孔加入25ul生理盐水 • 第1孔加待检血清25ul，倍比稀释至第10孔 • 1～11孔加入25ul4个血凝单位的病毒悬液 • 1～12孔加入1%红细胞50ul • 震荡后置37度恒温箱25~30min观察结果。 • 红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点
血凝与血凝抑制试验原理
血凝与血凝抑制试验原理
血凝与血凝抑制试验是一种常用的血液凝血功能检测方法，用于评估体内凝血系统的功能状态。
血凝试验原理：
血凝试验通常采用活化部分凝血时间（APTT）或凝血酶时间（TT）来衡量血液凝血的能力。
在血凝试验中，通过向血浆中加入一定量的凝血酶原激活体（如凝血酶），观察血浆在特定条件下形成凝块的时间。
正常血液凝固功能良好的人，凝血时间较短，血浆在凝血酶原激活体的作用下能很快形成凝块。
血凝抑制试验原理：
血凝抑制试验是为了检测某些抗凝物质（如抗凝血酶、抗凝血酶原等）对凝血系统的抑制作用。
在血凝抑制试验中，首先向血浆中加入一定量的凝血酶原激活体，观察血浆在特定条件下形成凝块的时间。
然后再加入待测的血凝抑制物质，在不同浓度下观察凝血时间的变化。
如果抗凝物质的浓度越高，凝血时间延长的程度越大，则说明该抗凝物质对凝血系统的抑制作用越强。
血凝与血凝抑制试验的原理即通过衡量血浆的凝血时间来评估凝血系统的功能状态或抑制物质的抑制能力。
血凝实验和血凝抑制实验报告
血凝实验和血凝抑制实验报告一、引言血液凝固是维持人体生命活动的重要生理过程之一。
当人体受到损伤时，血液会迅速凝固形成血块，以阻止出血。
然而，血液凝固过程的异常可能导致血栓形成，进而引发心脑血管疾病。
因此，准确评估血液凝固功能对于疾病预防和治疗至关重要。
二、血凝实验血凝实验是一种常用的临床实验方法，用于评估血液的凝固功能。
该实验主要通过测量血液在一定时间内凝固的程度来获得结果。
常见的血凝实验包括凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血小板计数和纤维蛋白原测定等。
1. 凝血酶原时间（PT）凝血酶原时间是评估外源凝血系统的功能的指标。
该实验通过观察血浆中凝血酶原转化为凝血酶所需的时间来测定。
正常情况下，PT 的时间范围为11-13秒。
若PT延长，则可能存在凝血因子活性降低或凝血因子缺乏的情况。
2. 活化部分凝血活酶时间（APTT）活化部分凝血活酶时间是评估内源凝血系统的功能的指标。
该实验通过观察血浆中凝血酶形成所需的时间来测定。
正常情况下，APTT 的时间范围为25-35秒。
若APTT延长，则可能存在凝血因子活性降低或凝血因子缺乏的情况。
3. 血小板计数血小板计数是评估血小板功能的指标。
血小板是血液中的细小细胞片段，主要参与血液凝固过程。
正常情况下，血小板计数在150-450×10^9/L之间。
若血小板计数过低，则可能导致出血倾向。
4. 纤维蛋白原测定纤维蛋白原是血液凝固过程中的重要物质，参与形成纤维蛋白凝块。
纤维蛋白原测定可以评估纤维蛋白原的含量。
正常情况下，纤维蛋白原的浓度在2-4 g/L之间。
若纤维蛋白原浓度过低，则可能导致凝血功能异常。
三、血凝抑制实验血凝抑制实验是一种检测血液凝固抑制功能的方法。
该实验主要评估抗凝血酶、抗纤维蛋白聚合酶等物质对血液凝固过程的抑制作用。
1. 抗凝血酶实验抗凝血酶是一种重要的抗凝物质，可以抑制凝血酶的活性。
抗凝血酶实验通过测定血浆中抗凝血酶的活性来评估抗凝血酶功能。
血凝和血凝抑制实验
实验三血凝和血凝抑制实验一、实验目的与要求掌握血凝和血凝抑制实验操作及应用二、实验内容H5亚型猪流感抗体检测与分析三、实验步骤（一）血凝（HA）试验1、用微量移液枪在微量反应板的第一排1-12孔均加入50μLPBS，换枪头；2、吸取50μL抗原，加入第一孔，反复吹打5次混匀；3、从第一孔吸取50μL加入第二孔，吹打混匀吸取50μL加入第三孔，如此稀释至第11孔，从第11孔吸取50μL丢弃，第12孔作为红细胞对照；4、各孔均加入50μL0.5%鸡红细胞悬液（已充分摇匀）；5、轻轻混匀，室温25℃静置20min观察结果；（二）血凝抑制（HI）试验1、血清样品处理：先加150μL胰酶溶液于300μL血清中，56℃水浴灭活30min 后冷却至室温；加900μL高碘酸钾，混合，室温孵育15min；加900μL丙三醇盐溶液，混合，室温孵育15min；加750μL生理盐水混合，4℃保存；2、根据HA试验中测定的HI抗原效价配制4单位抗原；3、在微量反应板第5-8排的2-11孔加入25μLPBS，第12孔加入50μLPBS；4、吸取50μL血清（编号为2-4血清、阳性血清、编号为1-4血清、阴性血清）加入第1孔，混匀后吸取25μL于第二孔，混匀后吸25μL于第三孔，依次稀释至第11孔，第11孔混匀后弃去25μL；5、各排前11孔均加入4单位抗原25μL，第12孔作为红细胞对照，室温下25℃静置30min；6、各孔均加入50μL0.5%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻摇匀，室温下25℃静置30min。
四、实验结果及分析血凝（HA）试验，从第三个孔开始显示“滴泪”第一排为阳性对照第二排为阴性对照第三排，血清5-6第四排，血清6-6参考文献[1]GB/T 27535-2011，猪流感HI抗体检测方法[S].。
血凝抑制试验原理
血凝抑制试验原理
血凝抑制试验是一种检测抗凝血功能的实验方法。
其原理是通过观察某种物质对血液凝固过程的影响，来判断该物质的抗凝血效果。
在血凝抑制试验中，首先从受试者的静脉或指尖采集一定量的新鲜全血。
然后将血液放入一种试验管中，加入适量的抗凝剂，如肝素或柠檬酸钠。
接下来，加入激动剂，如胶原或凝集素，以促使血液开始凝固。
同时，加入需要测试的抗凝物质。
血液开始凝固时，血小板会聚集并黏附在血管内壁上，最终形成血凝块。
然而，如果所加入的抗凝物质具有抗血凝的效果，它会阻止血小板的聚集和凝血因子的活化，从而抑制了血凝块的形成。
观察试管内的血液变化，若血液凝聚程度较低或完全没有凝结，则说明所测试的物质具有良好的抗凝效果。
相反，如果血液凝聚程度较高，则说明该物质对血凝过程没有明显的抑制作用。
血凝抑制试验广泛应用于临床诊断和药物研发领域。
通过检测不同物质对血液凝固的影响，可以评估患者的凝血功能，判断其是否存在凝血系统的异常。
同时，该试验也为开发新型抗凝药物和评估其抗凝效果提供了重要的参考依据。
血凝和血凝抑制试验
3. 4.
பைடு நூலகம்
0.85%生理盐水。 生理盐水。 生理盐水 被检血清，采自被检鸡的健康血清。 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、操作步骤
（一）血凝试验（HA） 血凝试验（ ）
1. 在血凝板第一排的 在血凝板第一排的1~12孔加入 孔加入50µl生理盐水。 生理盐水。 孔加入 生理盐水 2. 在第1孔中加入 病毒抗原， 在第 孔中加入50µl病毒抗原，反复吸取混匀 孔中加入 病毒抗原 后吸50µl到第 孔，如此倍比稀释直到第 孔， 到第2孔 如此倍比稀释直到第10孔 倍比稀释直到第 后吸 到第 混匀后弃50µl； 最后两孔 （ 11、 12） 为红细 ； 最后两孔（ 、 ） 混匀后弃 胞对照。 胞对照。
25 25 25 50
25 25 25 50
25 25 25 50
25 25 25 50
25
弃 50µl /
50 / / 50
25 50
注： 11孔为病毒对照 应该完全凝集， 12孔为细胞对照 孔为病毒对照， 孔为细胞对照， 1) 第 11 孔为病毒对照 ， 应该完全凝集 ， 第 12 孔为细胞对照 ， 应该完全沉积到孔底，只有当对照成立时试验结果方有效。 应该完全沉积到孔底 ， 只有当对照成立时试验结果方有效。 以红细胞100 凝集的稀释度为判定终点。 100% 2) 以红细胞 100% 凝集的稀释度为判定终点 。 血凝抑制滴度大 于等于1 为阳性，小于1 为阴性，等于2 为可疑。 于等于1：24为阳性，小于1：22为阴性，等于23为可疑。
病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开， 2 ） 病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开 ， 血凝素呈游离状态，例如天花 牛痘、 天花、 血凝素呈游离状态，例如天花、牛痘、鼠痘等 病毒，它们的凝集现象是可逆的。 病毒，它们的凝集现象是可逆的。 3 ） 脑炎病毒 、 口蹄疫病毒等 ， 凝集红细胞的条 脑炎病毒、 口蹄疫病毒等， 件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择， 件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择， 同时还要掌握反应的pH和温度等。 同时还要掌握反应的pH和温度等。 pH和温度等
血凝与血凝抑制试验
动物生产 632023.1出栏的时间一般在24月龄左右，体重达到600公斤以上就要及时出栏进行屠宰。
屠宰过程中要放血完全，胴体要在0～4℃室温条件下进行排酸，然后进行分割。
高档牛肉要严格按照程序进行分割，胴体能分割出规定的数量与高质量的高档牛肉块。
一般分为高档的红肉和高档的大理石花纹肉，它们的市场价格比较高，使养殖户的经济效益有很大的提高。
作者简介:李晓辉(1983-)，男，硕士，兽医师。
研究方向：畜牧生产技术。
尚丽娟(1982-),女,硕士,高级畜牧师。
研究方向：畜牧生产技术。
血凝与血凝抑制试验高 波（瓦房店市动物疫病预防控制中心，辽宁 瓦房店 116300）HA是血凝试验，HI是血凝抑制试验。
HI试验广泛应用于各大养殖禽基地检测禽流感病毒各亚型抗体。
做好此试验对提高养殖业生产、增加经济效益有决定性的作用。
2022年7月20日，接到盲样比对任务，共6份样品，试验具体操作步骤如下。
1 PPS的制作PPS磷酸盐缓冲剂一袋加入两升的纯化水，之后制好待用，pH7.2。
2 红细胞的配制采集单位内4只无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡血液与等体积阿氏液混合均匀，用pH7.2，0.01摩尔/升的PPS洗涤，每次用2000转离心5分钟，取出后用吸管吸出上清液弃去，再加入工作用PPS，这样洗涤3次，最后一次吸出上清液后要把红细胞表面的少量白细胞吸出弃掉。
洗涤后用一毫升的红细胞配99毫升的PPS配制成工作用的红细胞悬液，4℃保存备用。
3 血凝HA试验操作方法 在90℃微量反应板中，每孔加入0.025毫升PPS。
第一孔加入0.025毫升抗原依次做0.025毫升的对被稀释至第11孔。
每孔加入0.025毫升PPS。
每孔加入0.025毫升红细胞悬液。
将反应板在振荡器上振荡1～2分钟，混合反应物在室温23℃静置30分钟后，观察结果。
将反应板倾斜60°观察红细胞流淌状态，完全无眼泪样流淌的最高稀释倍数为血凝效价。
血凝抑制实验报告三篇
血凝抑制实验报告三篇（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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红细胞凝集试验（HA）与红细胞凝集抑制试验（HI）
一、实验用设备：
1、离心机 1台*（3000转离心红细胞）
2、冰箱 1台*（存放抗原）
3、振荡器 1台*（振荡96孔V型板）
4、抗原新城疫（ND）、减蛋（EDS）、流感（AI）抗原，从正规厂家进。
5、96孔V型板稀释血清清洗后可重复使用
6、八道移液器 1把（5-50微升稀释血清）
7、吸头和八道移液器配套使用，清洗后重复使用）
8、积液槽配制4个单位抗原及盛放生理盐水加样用
9、一次性采血管采血用
10、2毫升注射器采血用
11、红细胞非免疫鸡心脏采血或免疫鸡也可，但需离心5次后使用。
12、柠檬酸三钠配制3.8％抗凝剂用
13、重铬酸钾配制清洁液用
14、硫酸配制清洁液用
15、吸管 1毫升、10毫升
16、吸耳球和吸管配套使用
17、针头 9*13（采雏鸡）、9*25（采大鸡）
18、蒸馏水当地买。
清洗96孔V型板、吸头用
19、10毫升离心管离心红细胞用（塑料制）
20、生理盐水做血清稀释液用、配制4单位抗原
二、实验前的准备：
1.抗原：从指定厂家购买稳定浓缩抗原。
2.抗凝剂的配制：用天平称量
3.8克柠檬酸三钠，溶入100ml生理盐水中，待溶解完全后即可使用。
3.1％红细胞悬液：由鸡心脏或翅静脉采血，放入加有抗凝剂的离心管内（按抗凝剂：全血＝1：2的比例），迅速混匀。
在离心机中以3000转/分离心5分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加生理盐水，慢慢混合均匀，再在离心机中3000转/分离心5分钟，弃去上清液，再加生理盐水混匀，如此反复离心4～5次，最后一次离心后的红细胞，弃去上清液，即为红细胞泥。
放入4℃冰箱中可保存2—3天。
使用时用1ml 吸管吸取0.1ml红细胞泥，然后加入9.9ml的生理盐水，此即1%红细胞悬液。
现用现配。
4.被检血清：每只鸡心脏或翼下采血0.5-1ml,静置或离心，待血清析出后备用。
5.吸管清洁液的配制：使用1%的稀硫酸溶液。
水10公斤，硫酸100毫升，将硫酸慢慢倒入水中，不断搅拌，操作时必须戴手套，口罩。
6.96孔V型板和微量滴头清洁液的配制：重铬酸钾79克，水1000ml，硫酸100ml，将重铬酸钾磨碎，溶解于水中，然后慢慢加入硫酸100ml，不断搅拌，切不可将重铬酸钾水溶液倒入硫酸中，以防爆炸，操作时必须戴手套，口罩。
7.血清稀释液：为灭菌的生理盐水。
三、实验过程：
原理：某些病毒（如新城疫、减蛋、流感）能够与鸡红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现
象。
这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制试验（HI）。
应用：1、检测血清中的抗体水平，确定免疫时机。
2、免疫后及时监测，确认免疫效果。
3、辅助诊断病毒性疾病。
包括血凝（HA）试验、抗原校正和血凝抑制（HI）试验三步：
（一）血凝（HA）试验：采用96孔V型反应板，测定抗原效价
1、首先用微量移液器向反应板的每孔加生理盐水25微升。
2、用微量移液器吸取待测抗原25微升于第一孔中并挤压6次混合，后吸出25微升至第2孔，依次倍比稀释到第11孔，弃去25微升。
3、微量移液器再吸取1%红细胞悬液依次加入各孔，每孔25微升。
4、置于微量振荡器上振荡1分钟。
5、室温静置30分钟后观察结果。
6、结果观察：将反应板倾斜成45度角，沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。
能使鸡红细胞完全凝集的抗原的最高稀释倍数，称为该抗原滴度红细胞凝集效价。
即沉淀的前一孔即为该抗原的效价。
如彩图1所示第8孔红细胞为完全凝集，说明该抗原效价为1：256。
彩图1：
图1 抗原效价为1：256
（二）4单位抗原校正：
1、根据抗原效价结果配制相应比例的抗原稀释液：即4单位抗原。
例：上图1：抗原效价为1：256，HI试验时，25微升抗原稀释液内须含4个凝集单位，则应将抗原作256/4=64倍稀释。
即取0.1毫升抗原，加入6.4毫升生理盐水。
2、首先用微量移液器向反应板的第二孔至第六孔加生理盐水25微升。
第一孔不加。
3、用微量移液器吸取4单位抗原25微升分别加入第一孔、第二孔中，从第二孔开始挤压6次混合，后吸出25微升至第3孔，依次倍比稀释到第5孔，弃去25微升。
4、用微量移液器再吸取1%红细胞悬液依次加入1-6孔，每孔25微升。
5、于微量振荡器上振荡1分钟。
6、室温静置30分钟后观察结果。
7、结果观察：第一、二、三孔为完全凝集，第四孔红细胞为50%沉淀，第五孔为对照完全沉淀，如果出现以上结果，表明所配4单位抗原准确，校正成立。
如彩图2所示。
彩图2：
图2 前三孔为红细胞完全凝集，第四孔为红细胞50％凝集，第五孔为红细胞完全沉淀，说
明该次抗原校正成立
（三）血凝抑制（HI）试验：每排孔检查1份血清。
步骤如下：
1.用微量移液器先加25微升生理盐水于各孔中。
2.用微量移液器吸取待检血清25微升置于第1孔中，然后倍比稀释至第11孔，弃去25微升。
最后一孔不稀释，为红细胞对照。
3.用微量移液器吸取配制好的抗原，每孔25微升。
4.置于微量振荡器上振荡1分钟，混合均匀。
5.室温静置20分钟。
6.用微量移液器吸取1%红细胞悬液于每孔各加25微升。
7.置于微量振荡器上振荡1分钟，混合均匀。
8.室温静置40分钟后观察结果。
四、结果判定：
1）判定结果：以完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释度为该血清的HI滴度，以2的指数表示。
如彩图2所示：
彩图2：
图3 上图抗体结果从上至下依次为：8/7/8/9/8/7/7/6
2）判定标准：
1.新城疫抗体：育雏育成鸡在7以上，产蛋鸡在9以上。
2.H5抗体：抗体值在6以上。
3.H9抗体：抗体值在7以上。
注：低于以上标准，则需要进行免疫。
3)免疫后抗体规律
一般活疫苗免后7-10天产生抗体，2-3周抗体到达峰值，可以维持2个月。
灭活疫苗免后10-15天产生抗体，3-4周抗体到达峰值，可以维持3-4个月。
五、实验后的用具处理：
1、96孔V型反应板的清洗：
新反应板可直接放入清洁液中浸泡24小时，用过的反应板先用流水冲净孔中的反应物，然后泡在清洁液中，24小时后捞出，甩掉清洁液，放入流水中冲洗干净后，在蒸馏水中冲洗一遍，甩干，摆放在恒温箱中，烤干备用。
属塑料制品，70℃以下烤干。
2、微量滴头的清洗：
新滴头直接放入清洗液中浸泡，用过的用清水冲洗掉滴头中的血清后浸泡在清洁液中，最少浸泡24小时，捞出后用流动水冲洗掉滴头内外的清洁液，然后在蒸馏水中冲洗一遍，甩干，放入恒温箱中烤干，备用。
属塑料制品，70℃以下烤干。
3、吸管及积液槽的清洗：
将吸管及积液槽直接浸泡在清洁液中，24小时后捞出，用流动水冲洗干净后在蒸馏水中再冲洗一遍，甩干，吸管放入高温干燥箱中160℃干燥1—2小时后备用，玻璃制品可高温烤干。
积液槽放入恒温箱中烘干。