花粉储藏及花粉生命力的测定
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉是植物生殖过程中非常重要的一环，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
花粉生活力测定方法是通过一系列的实验和观察，来评估花粉的生长和发育能力，从而为植物的繁殖提供科学依据。
本文将介绍几种常见的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和爱好者有所帮助。
首先，传统的花粉生活力测定方法是通过染色观察花粉管的生长情况。
首先，将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察花粉管在一定时间内的生长情况，通过显微镜观察花粉管的长度和形态，从而评估花粉的生活力。
这种方法简单直观，但需要显微镜等设备，且操作较为繁琐。
其次，现代的花粉生活力测定方法中，常用的是荧光显微镜观察法。
通过将花粉与特定的荧光染料结合，使花粉在荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号，从而可以清晰地观察花粉管的生长情况。
这种方法操作简便，观察效果明显，对于大规模的花粉生活力测定具有很大的优势。
另外，还有一种常见的花粉生活力测定方法是通过花粉萌发率来评估花粉的生活力。
这种方法是将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察一定时间内花粉的萌发情况，通过统计萌发的花粉数量来评估花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在较短的时间内获取较为准确的结果。
除了上述几种方法外，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，如分子生物学技术的应用、电子显微镜的观察等，这些方法在花粉生活力测定领域也取得了一些重要的进展。
综上所述，花粉生活力测定是植物繁殖和生长研究中的重要内容，而花粉生活力的准确测定则需要科学、准确的方法。
不同的方法各有优劣，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择适合的方法进行花粉生活力的测定，从而为植物繁殖和生长研究提供可靠的数据支持。
希望本文介绍的几种常见的花粉生活力测定方法对相关领域的研究者和爱好者有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的花粉生活力测定方法被发展和应用。
花粉的形态观察及生活力测定
实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料百合、金鱼草、菊花等花粉。
三、仪器及药品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。
四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力测定方法是一种评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的指标。
它通过采用定量和定性的方法来测定人体对花粉的反应和影响，以便为患者提供相应的治疗和干预措施。
下面我将详细介绍花粉生活力测定方法的原理和步骤。
首先，花粉生活力测定方法需要进行花粉源的采集和制备。
花粉源可以是空气中的自然环境采集或人工培养的花粉。
采集后，需要将花粉样本进行处理和制备，包括去除杂质和保持花粉的活力。
其次，花粉生活力测定方法中常用的技术是皮试和血清学检测。
皮试是一种常用的检测方法，主要通过在患者皮肤表面划一道小口，然后将一定浓度的花粉溶液滴在皮肤上，观察皮肤是否出现过敏反应，如红肿、瘙痒等。
这种方法简单快捷，可以初步筛查患者的过敏反应。
血清学检测是通过采集患者的血液样本，检测血清中花粉特异性IgE抗体水平来评估过敏反应的程度。
常用的检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA），这些方法可以检测到血液中特定花粉过敏原的抗体水平，并根据抗体浓度的高低来评估患者的过敏程度。
除了皮试和血清学检测，还可以进行生活质量评估。
这是一种主观的方法，通常通过问卷调查的方式，询问患者对花粉过敏的影响程度和日常生活质量的变化。
问卷通常包括患者的症状、疾病活动、工作和学习能力、社交活动和睡眠质量等方面的评估，以便评估花粉过敏对患者生活的影响。
最后，花粉生活力测定方法可以通过统计分析和数据处理来得出评估结果。
根据皮试和血清学检测的结果、生活质量评估和患者的症状表现等，可以综合评估花粉过敏的程度和生活质量的变化。
这些评估结果可以帮助医生为患者制定个性化的治疗方案，包括药物治疗、免疫疗法和生活调整等。
综上所述，花粉生活力测定方法是评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的一种指标。
通过采用皮试和血清学检测、生活质量评估等方法，可以全面分析患者的过敏反应和生活质量的变化，为患者提供针对性的治疗和干预措施。
这种方法对于花粉过敏的预防和管理具有重要的临床意义。
育种技术实验
实验一花粉生命力测定目的在经过一段时间储藏的花粉或使用远地花粉时,则必须测定,便于杂交成果的分析与研究。
通过实验, 要求学生掌握花粉生命力测定的方法。
药品及用具测微尺、显微镜、毛笔、载玻片、盖玻片、恒温箱、玻璃铅笔、蔗糖、蒸馏水、硼酸液、联苯胺、苯酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
方法步骤1、方法可分三类: 间接法、直接法、染色法。
2、直接法（1）原理（2）将花粉直接在清洁的同种植物的柱头上, 并且作好隔离工作, 然后观察其雌花之发育, 如果胚珠能够正常发育成种子, 则说明花粉具有生命力,否则, 就没有生命力。
（3）步骤第一步: 将花粉直接授在清洁的同种另一植株花的柱头上, 并作好隔离。
隔1--3天采集已授过粉的柱头, 固定于开水或F.A.A液中。
第二步：染色剂的配置:配置1%苯胺兰溶液、配置0.5%苯胺兰乳酸酚。
A．染色镜检3、花柱固定在开水中, 并于水中煮烂, 而后放在1%苯胺兰水溶液或0.5%苯胺兰乳酚中染色24小时,把花柱撕开,盖上盖玻片,用大姆指轻压。
镜检,若花粉具有生命力,即可观察到花粉管伸入柱头组织,若花粉不具生命力,即无花粉管伸入柱头组织.4、间接法（1）原理（2）借人为创造的特定条件使花粉萌发, 鉴定花粉生命力。
（3）硼酸液培养法配置10、50PPM的硼酸溶液。
用毛笔取少量花粉播入已盛硼酸的清洁小瓶并加盖, 放入恒温箱内培养。
5、取出小瓶充分摇动均匀, 用吸管吸一滴于载玻片凹槽内, 迅速盖上盖玻片固定花粉粒, 然后至于显微镜下观察。
6、观察2-----4个载玻片, 每凹面随机观察5个视野计算发芽率。
7、染色法过氧化物酶测定法（1）原理（2）这是借助于测定花粉内过氧化氢酶活性强弱来确定花粉生命力的方法, 在活的花粉内过氧化氢酶存在, 它可以促进过氧化物放氧分解, 这些刚被放出来的活性氧容易使还原剂氧化, 在本实验中所用的无色的联苯胺和苯酚都是还原剂, 但它们被氧化后确表现红色或玫瑰红色, 如果花粉是活的, 那么这个反应很快, 则花粉都被染成红色或玫瑰红色, 如果花粉是死的, 则这一反应迟迟不能进行, 花粉也就保持原色。
实验三 主要树种花粉形态
实验三主要树种花粉形态、花粉贮藏及花粉生命力测定（一）实验目的通过本实验，掌握主要树种花粉的形态，花粉储藏及花粉生命力测定的方法及其原理。
（二）实验材料与药剂配制供测定树种的花粉、硫酸、氯化钙、蔗糖、葡萄糖、蒸馏水、凡士林、乳酸、苯胺兰、联苯胺、α一苯酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂等。
染色剂的配制：A 配制1%苯胺蓝水溶液。
将1克苯胺蓝溶于100ml的蒸馏水中。
B 配制0.5%苯胺蓝乳酸酚。
先以一份酚溶解在一份蒸馏水内，然后加入甘油、乳酸各一份做成苯胺蓝乳酸酚。
固体培养基：10g的10%蔗糖（或者葡萄糖）+2克的2%琼脂+100ml 水加热至琼脂完全融化为止。
用纱布过滤冷凝就得出固体培养基。
液体培养液：以千分之一的硼酸代替蒸馏水，加5％葡萄糖，加热溶解，最好煮沸几分钟达到消毒目的即可。
（三）实验工具载玻片，盖玻片，解剖针，毛笔，干燥器，小试管或指形管，脱脂棉，花粉筛，标签，玻璃铅笔、显微镜、冰箱、培养皿．悬滴载玻片。
（四）实验方法及步骤1 树木花粉一般形态（1）花粉壁：花粉有两层壁（内壁和外壁）。
外壁是角质化的，有几层组成，一般为三层，表面是光滑的或者呈波浪形（凸起或者凹下），有的还具有各种雕纹（纹饰）；内壁是果胶质的，花粉粒经过酸或碱处理后，内壁都被溶解掉，内壁是由透明的玻璃状物质组成的，最易吸水膨胀。
（2）发芽沟：发芽沟是外壁上沟状的凹陷，上面蒙着一层薄膜。
花粉发芽时花粉管就从这些地方长出来。
发芽沟的数量对每种树木通常是一定的。
一般1~30个以上的范围内变化，被子植物、双子叶植物经常有3个发芽沟，裸子植物只有一个发芽沟。
（3）发芽孔：也是花粉管伸出的地方。
花粉发芽孔数量和形状对某些植物是一定的。
发芽孔往往分布在发芽沟里，并且排列顺序对每一种植物是一定的。
裸子植物中发芽孔很少见。
（4）气囊：裸子植物的某些树种的花粉带有气囊，实际上就是花粉外壁的外层的延长和伸展。
气囊一般有两个，有些树种或者还多于两个。
花粉的采集与保存、形态观察及生活力测定思考题
花粉的采集与保存、形态观察及生活力测定1.上述方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？答：否。
形态观察法只适用于测定新鲜花粉的生活力，不适用于测定贮藏的花粉，体积较小的花粉和形态结构不规则的花粉，这都会影响实验结果。
染色观察法不适用于测定花粉颜色与染色结果相近的植物花粉活力，会对观察有一定的干扰。
另外，碘－碘化钾染色法不能准确表示花粉的活力，也不适用-KI 于研究某一处理对花粉活力的影响。
因为核期退化的花粉已有淀粉积累，遇I2呈蓝色反应。
另外，含有淀粉而被杀死的花粒遇I-KI也呈蓝色。
2培养基发芽法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定，不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发。
不同种类植物花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.哪种方法更能准确反应花粉的活力？答：个人认为发芽实验法更能准确反应花粉活力，虽然发芽试验法更为麻烦一些，但其结果更接近花粉的自然生活力，能较为直接的反应花粉的萌发率。
3.还有哪些方法可以用来检测植物花粉活力？答：①醋酸洋红染色法。
此法的染色原理是靠花粉中的脱氢辅酶而染色，有活力的花粉被染成红色，部分失去活力的呈现粉红色，而无活力或不育的花粉无色。
②过氧化物酶染色法。
此法又称联苯胺染色法,是根据花粉中过氧化物酶的活性来判断花粉的活力。
由于有活力的花粉含有活跃的过氧化物酶，所用试剂与过氧化物酶发生氧化反应而染色，有活力的花粉被染成红色，无活力的花粉则呈现黄色或无色透明。
③MTT染色法。
MTT染色法是根据花粉粒中脱氢酶的活性判断花粉生活力，镜检时,花粉呈现蓝色表明花粉有活力。
④FCR染色法。
此法也叫荧光染料反应法，其基本原理是荧光染料本身不产生荧光，无极性，并能自由地透过完整的原生质膜。
当此种染料进入原生质后，即被醋酶作用形成一种能产生荧光的极性物质一荧光素。
由于荧光素不能自由地出人原生质膜，而只在细胞内积累，因此可以根据花粉产生荧光的情况来判断花粉的生活。
花粉贮藏及花粉生活力的测定
实验四花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术。
（为什么贮藏花粉？）一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料油松、辣椒、一串红、矮牵牛、油茶、油菜等植物的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、毛笔、干燥器、小指形管、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、滴管、玻璃棒、量筒、电炉、石棉网、冰箱；凡士林、无水氯化钙、蔗糖、琼脂、蒸馏水、硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、碘、碘化钾、氯化二苯基四氮唑（TTC ）。
四、实验原理花粉在低温（0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低（呼吸）、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（0.3g 碘＋1.3g 碘化钾溶于100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力（不太准，比如刚死的花粉）。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下能够完成受精和发育的能力。
花粉生活力的测定对于植物的研究和育种具有重要意义。
下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。
首先，最常用的方法是离体花粉萌发法。
这种方法是将收集到的花粉在一定的培养基上进行培养，观察花粉颗粒是否萌发。
通过观察花粉管的生长情况和数量，可以初步判断花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在实验室条件下进行。
其次，还有花粉染色法。
这种方法是将花粉颗粒染色后观察其形态和结构，从而判断花粉的生活力。
通过观察染色后的花粉颗粒的形态、颜色和内部结构，可以初步判断花粉的生活力。
这种方法需要借助显微镜进行观察，对实验条件要求较高。
另外，还有花粉活力染色法。
这种方法是利用活性染料对花粉颗粒进行染色，观察染色后的花粉颗粒的颜色和形态，从而判断其生活力。
这种方法对于花粉的活力有较高的敏感性，可以较准确地判断花粉的生活力。
最后，还有花粉酶活性法。
这种方法是通过检测花粉中的酶活性来判断其生活力。
通过测定花粉中的酶活性，可以间接地反映出花粉的生活力。
这种方法需要借助生化实验室进行，对实验条件和仪器设备要求较高。
综上所述，花粉生活力的测定方法有多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据具体的研究目的和实验条件选择合适的方法进行花粉生活力的测定。
通过准确测定花粉的生活力，可以为植物的研究和育种提供重要的参考依据。
植物花粉生活力测定技术
1．测定花粉生活力的意义有哪些？ 2．分析在实验中出现的问题，并找出原因所在。 3．将四种方法的结果分别记载于表中，并比较结果是否一致，如不一致，分析其原因。Fra bibliotek表 1－6
供试 花粉收集 测定 第一视野
品种 日期 日期
第二视野
具有生活力 第三视野
的花粉%
备注
直接鉴定法
TTC 染色法
发芽测定法 形态鉴定法
1．外地采集来的花粉或杂交时父本花期早于母本时都要将花粉进行短暂贮藏； 2．自交或远缘杂交时，为了分析结实率或不结实原因时； 3．为了鉴定雄性不育系时； 4．了解某些杂交技术时，如测定花粉的刺激等作用，测定受精选择性等。 因此，要根据各种植物花粉的特点，采取适当的保存方法。花粉生活力的测定方法很多， 其中发芽试验手续较复杂，设备要求较高，需时也较长。为了简易而迅速的测定花粉生活力， 也常采用化学染色的方法，但是此法也有缺点，就是染上色的花粉不一定都具有生活力，因 为染上色的花粉中也包括了那些生活力弱不能正常发芽的花粉，所以一般常用而且较为可靠 的方法仍然是采用花粉发芽实验。要是要求不严格对新采集的花粉还有一个较简便的鉴定方 法——形态鉴定法。 本实验目的是学习花粉生活力测定的方法，进而研究花粉寿命长短与环境条件的关系， 以探求保存花粉的合适方法。
（2）TTC 溶液：称取 0.02～0.05 克（不同植物所用的量是不同的）的 TTC 溶解在 10ml 的磷酸缓冲液中，溶液配好后装入棕色滴瓶内，置入暗处，因氯化三苯基四唑有毒，操作时 要注意安全。
2．操作步骤： （1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上 1～2 滴配制液，用玻璃棒混合后盖上 盖玻片。 （2）将载玻片置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20min。 （3）在显微镜（10×10）下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的呈 淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 3．观察和测定结果：每片观察 3 个视野，并统计具有生活力花粉的百分率，填入表 1 －6。 （三）发芽测定法（培养基培养法） 1．培养基的配制 常用的花粉发芽培养基有液体和固体两种。以前者最为简便。本实验选用前者。其有效 成分主要有：蔗糖、硼酸、柠檬酸、赤霉素等。不同的植物所用的蔗糖培养液的浓度是不同 的，配制 3～30%的蔗糖培养液：在 100ml 水中，加糖 3～30g，加热溶解后，再加 0.1%硼 酸数滴。 2．制片 取双凹载玻片，滴 2 滴培养液于槽中，用解剖针挑少许花粉均匀撒于培养液的表面（注 意不必搅拌，以防花粉混于液体中因缺少空气而影响发芽，又因花粉深浅不一而在显微镜检 查时因光线折射而不易观察。）处理好后，放于一下部添有少量蒸馏水、内有两根玻璃棒的 培养皿中（注意不要使水没过载玻片），放到恒温为 25℃左右的恒温箱中或室内 2h。 3．镜检 将放置 2h 后的载玻片取出，放在显微镜下观察三个视野，统计总花粉数与发芽的花粉 数，然后计算比例，填入下面的表格中。 （四）形态鉴定法 对于新采集的花粉来说，还有一个更为简便的鉴定方法——形态鉴定法。将花粉用解剖 针播于一般载玻片上，然后直接放到显微镜下观察，根据形态特征，判断花粉的生活力状况， 一般来说，畸形、皱缩、小形化等均为无生活力花粉，而有光泽、饱满、具有本品种花粉典 型特征等性状的均为有生活力花粉。将观察的结果统计一下填写下表格。
花粉生活力检测
植物花粉保存与花粉生活力的测定一、实验目的了解花粉生活力测定的一般方法，并掌握培养法测花粉生活力。
二、实验原理不同的植物成熟花粉的生命力长短不一，在自然状态下，成熟花粉有些存活仅数小时，有的课长达1个多月。
通过在干燥、低温、密封等的条件下保存，花粉的呼吸作用被抑制，生活力得以延长。
进行杂交人工授粉前，常对父母本花粉尤其是经过保存的花粉进行生活力测定。
其方法有：形态鉴定、TTC染色法鉴定、花芽萌芽鉴定等。
（1）形态鉴定除饱满、圆形的正常外，其他都不正常。
（2）TTC染色法鉴定脱氢辅酶存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（3）花芽萌发鉴定将花粉置于合适的培养基上进行培养，花粉即可萌发出花粉管，发芽率可作为花粉生活力的检测指标三、实验材料、药品和器具1、实验材料兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花2、药品和器具显微镜、凹式载玻片、培养皿、盖玻片、镊子、解剖针、蔗糖硼酸悬浮培养基四、实验内容1、花粉的保存（1）短期保存：低于4°C，冰壶中保存长期保存：（2）长期保存：干燥器中干燥24h，自由水含量低于1%，用石蜡封口，低于1°C的冰箱中保存2、花粉生活力的测定（花粉萌发鉴定法或称培养法）（1）用滴管滴1小滴蔗糖硼酸悬浮培养基于盖玻片上，注意不要滴到边缘，以免与载玻片凹面边缘接触。
(2)取兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花的雄蕊，将雄蕊在培养基里反复涂抹几次，让花粉散落在培养基表面。
(3)迅速将盖玻片翻转，放置于凹式载玻片上，让培养基悬浮在凹式载玻片的凹面处，注意不要让培养基接触凹面边缘。
(4)每一个植物做两个重复，放置在显微镜下观察花粉形态。
20min后，观察并花粉发芽状况。
五、实验结果将实验结果填入花粉生活力测定实验记录表处理重复视野Ⅰ视野Ⅱ合计花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%兰花毛豌豆重复Ⅰ70 65 92.8 65 60 92.3 135 125 92.6 重复Ⅱ80 76 95.0 74 70 94.6 154 146 94.8 合计150 141 94.0 139 130 93.5 289 271 93.8葛藤重复Ⅰ40 35 87.5 35 30 85.7 75 65 86.7 重复Ⅱ42 36 85.7 38 31 81.6 80 67 83.8合计82 71 86.6 73 61 83.6 155 137 88.4六、注意事项1、用滴管向盖玻片滴培养基时，要尽量滴在盖玻片中央，要避免液体培养基接触载玻片凹面边缘部分。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物繁殖的重要媒介，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
近年来，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也得到了不断的改进和完善。
传统的花粉生活力测定方法主要包括离体花粉萌发试验、花粉染色观察、花粉活力染色观察等。
这些方法虽然可以初步判断花粉的生活力，但存在着操作繁琐、结果不稳定、时间周期长等问题，限制了其在实际应用中的发展。
近年来，随着生物技术和显微镜技术的不断进步，新型的花粉生活力测定方法逐渐被引入。
比如，利用荧光显微镜观察花粉萌发情况，结合数字图像处理技术进行分析，可以快速、准确地测定花粉的生活力。
另外，利用生物标记技术对花粉进行标记，然后观察其在植物受精过程中的行为，也可以对花粉的生活力进行评估。
除了显微镜技术和生物标记技术，分子生物学技术在花粉生活力测定中也发挥了重要作用。
通过分析花粉中的基因表达情况、蛋白质组成等，可以更直观地了解花粉的生活力情况，为植物繁殖提供更准确的数据支持。
综上所述，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
新型的测定方法不仅提高了测定的准确性和稳定性，同时也为植物繁殖和生长研究提供了更多的可能性。
相信随着科学技术的不断进步，花粉生活力测定方法将会更加完善，为植物繁殖和生长研究带来更多的突破和进展。
园艺植物育种学实验二花粉发芽试验和生活力测定
二、花粉发芽试验和生活力测定（一）实验目的花粉质量的好坏，关系到杂交的成功与否，通过实验操作，掌握花粉生活力测定的技术。
（二）实验要求根据以下实验操作，完成一份花粉生活力结果测定的实验报告1.准备材料与用具（1）材料：本地常见园艺植物的花粉，蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化三苯基四氮唑（T.T.C）、氯化钙、凡士林、纸袋、大头针、纸牌。
（2）用具：分析天平、托盘天平、载玻片、盖玻片、烧杯、镊子、电炉、石棉网、玻棒、试剂瓶（含棕色瓶）、标签、量筒、冰箱、干燥器、玻璃杯（直径1cm、高0.5cm）。
凹玻片、指形管。
2.花粉的采集与贮藏（1）花粉的采集为了保证父本花粉的纯洁性，在授粉前1-2天，对绽蕾的花朵事先套袋隔离，当花粉成熟撒出时即落在纸袋中，也可将花枝或花朵剪下，在室内阴干或放入恒温箱内，保持10℃左右，待花粉散出后，装入指形管中备用。
（2）花粉的贮藏有性杂交工作中，常用杂交亲本组合的花期不遇或亲本植株相距较远或异地，必须事先收集父本花粉，将收集的花粉阴干，以不粘为度，除去杂质，分别装入指形管或小瓶内（以容器的1/5为宜），用双层纱布扎封瓶口，并在容器贴上标签，注明品种采集地点和时间，然后将容器放于（盛有无水氯化钙等吸水剂）干燥器内，置阴凉处或0-2℃冰箱内贮存，可以较长时间地保持生活力。
3.花粉生活力测定（1）配药A．磷酸盐缓冲液：在100毫升的蒸馏水中，溶解0.832克的磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾，pH值为7.17B．T.T.C溶液：称取0.02-0.05克的T.T.C溶液在10毫升的磷酸盐缓冲液中，溶液配好后，装入棕色滴瓶内置于暗处备用。
（2）操作步骤A．取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1-2滴T.T.C溶液，用镊子尖端搅拌液滴使花粉均匀散开，盖上盖玻片B.将此载玻片放入35-40℃的恒温箱中加热，时间大约15-20分钟。
C．在显微镜下（10×10）观察：凡具有生活力的花粉粒呈红色，部分失去生活力的呈淡红色，不染色的为死的和不育的花粉粒。
油茶“三华系列”花粉活力测定及花粉保存
2020，42（1）DOI ：10.13836/j.jjau.2020014Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis http ://江西农业大学学报油茶“三华系列”花粉活力测定及花粉保存陈雅1，2，袁德义1，2*，李葵3，杨颖慧1，2，金亦佳1，2，林铭浩1，2，邹锋1，2（1.中南林业科技大学林学院，湖南长沙410004；2.经济林育种与栽培国家林业局重点实验室，湖南长沙410004；3.湖南省怀化市林业科学研究所，湖南怀化418000）摘要：【目的】为筛选“三华系列”（‘华硕’、‘华金’、‘华鑫’）花粉活力适宜的检测方法及贮藏条件。
【方法】研究采用FDA 荧光染色法，I 2-KI 法以及离体萌发法研究不同贮藏温度（室温，4℃，-30℃，-80℃）条件下“三华系列”（‘华硕’、‘华金’、‘华鑫’）的花粉活力。
【结果】（1）3种检测方法所得“新鲜花粉”活力值各不相同，其中I 2-KI 法检测花粉无活力，采用FDA 荧光染色法和离体萌发法测定的花粉生活力值差异显著。
‘华鑫’的新鲜花粉活力最高，‘华硕’次之，‘华金’花粉活力最低；（2）低温有利于花粉贮藏，花粉活力随贮藏时间的延长总体呈下降趋势。
“三华系列”花粉品种间的适宜贮藏温度基本无显著差异，室温条件下，“三华系列”花粉活力下降速度最快，贮藏时间最短。
室温下贮藏至13周后，“三华系列”花粉完全失去活力。
4℃贮藏条件下，贮藏至第5周时，“三华系列”花粉活力40%~70%；-80℃适宜于花粉的长期贮藏（26周），其贮藏效果优于-30℃，贮藏至第26周时花粉活力在30%~40%，近似为-30℃贮藏条件下的2倍，花粉活力；（3）在通过对FDA 荧光染色法与离体培养基法两种花粉活力检测方法进行相关性分析，发现FDA 荧光染色法在4种不同贮藏温度下的测定结果与离体培养法有极显著强相关，相关系数大于0.9。
【结论】I 2-KI 法不适宜作为油茶花粉活力检测方法，而FDA 荧光染色法可作为跟踪和测定油茶花粉活力变化的方法来表征油茶花粉潜在活力，是开展授粉工作前快速检测花粉活力的好方法；低温有利于油茶花粉的贮藏，短期内（5周）贮藏“三华系列”花粉最适宜条件是4℃低温贮藏，“三华系列”花粉活力在40%~70%；长期（26周）贮藏“三华系列”花粉的最适宜条件是-80℃低温冷冻贮藏，花粉活力在30%~40%。
花粉活力测定实验报告
一、实验目的1. 了解花粉活力测定的原理和方法。
2. 掌握花粉采集、处理和观察的基本技能。
3. 通过实验，了解不同条件下花粉活力的变化规律。
二、实验原理花粉活力是指花粉在正常条件下萌发的能力，是植物杂交、育种和生产的重要指标。
花粉活力测定方法主要有染色法和萌发法。
本实验采用萌发法测定花粉活力。
三、实验材料1. 植物材料：番茄、小麦、玉米等。
2. 试剂：TTC染色液、盐酸、蒸馏水等。
3. 仪器：显微镜、培养皿、移液器、酒精灯等。
四、实验步骤1. 花粉采集在植物开花期，选择花药饱满、颜色鲜亮的植株，用镊子轻轻取出花药，放入培养皿中。
2. 花粉处理将花药置于酒精灯火焰附近，用镊子轻轻敲打花药，使花粉散落。
用移液器将花粉收集到盛有盐酸的试管中，置于酒精灯上加热，使花粉与盐酸混合均匀。
3. 花粉染色将处理好的花粉溶液滴加到载玻片上，用移液器滴加TTC染色液，使花粉染色。
将载玻片置于显微镜下观察。
4. 花粉萌发将染色后的花粉载玻片置于适宜温度和湿度的培养箱中，观察花粉萌发情况。
以花粉管长度超过花粉粒直径为标准，记录萌发花粉的数量。
5. 数据处理计算萌发花粉的百分比，分析不同条件下花粉活力的变化规律。
五、实验结果与分析1. 不同植物花粉活力比较实验结果表明，不同植物花粉活力存在差异。
例如，番茄花粉活力较高，小麦花粉活力较低。
2. 不同处理方法对花粉活力的影响实验结果表明，加热处理、盐酸处理等对花粉活力有一定影响。
加热处理可以使花粉活力降低，盐酸处理可以使花粉活力提高。
3. 不同条件下花粉活力的变化规律实验结果表明，温度、湿度等因素对花粉活力有显著影响。
在一定范围内，温度升高，花粉活力降低；湿度增加，花粉活力提高。
六、实验结论1. 本实验通过萌发法测定了不同植物花粉的活力，了解了不同条件下花粉活力的变化规律。
2. 实验结果表明，不同植物花粉活力存在差异，加热处理、盐酸处理等对花粉活力有显著影响。
3. 温度、湿度等因素对花粉活力有显著影响，在一定范围内，温度升高，花粉活力降低；湿度增加，花粉活力提高。
实验一 花粉生活力的测定
【思考题】 1 用染色法计算花粉生活力（3个视野）。用 发芽法计算花粉生活力（3个视野）。 2 同一品种花粉用不同方法测定时其生活力 高低的结果分析。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO4，KNO3。
（2）培养基发芽法 a．培养基的制备：在250 mL的烧杯中加 入90 mL蒸馏水，再加入1g的琼脂，在酒精 灯上加热，使之完全熔解，然后加入10g蔗 糖，制成10％的糖液（如有可能，可配置 同含糖量的培养基，进行比较试验）。 注意用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀， 有条件时还可加入微量柱头渗出液、维生 素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
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花粉储藏及花粉生命力的测定
花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉储藏，营此我们必须掌握花粉储藏的原理与技术。
为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间储藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。
一.实验目的
掌握了鲜花粉储藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。
二.实验材料
牡丹、凤仙花、柳树等植物的花粉。
三.仪器及药品
载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、小指形管、标签、标记笔、显微镜；
冰箱硫酸无水氯化钙、蔗糖、蒸馏水、硼酸（1：100000）。
凡士林、联苯胺、a-萘粉、酒精、碳化钠、过氯化氢、洋菜。
四.实验原理
花粉在低温0℃—2℃、干燥、黑暗等条件下代谢迁都降低，花粉储藏的原理就是创造代谢强度底的环境，以延长花粉有寿命。
鉴定花粉生命力的方法很多，概括起来，不外下列四种：
一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的优点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；二是将待策粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；
三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
后两种方法都是根据花粉萌发力来反映生活力的高低。
有一定参考价值，但萌发的不一定都受精，特别是人工萌发环受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性；
四是用染色方法来鉴定华发安的生命力。
其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶存在。
它可以促进过氧化物（如HO）放氧分解。
这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化。
在本实验中所用的无色联苯胺a—萘粉都是还原剂，但他们被氧化后却都表现红色或玫瑰红色。
如果花粉是活的，那麽这个反映很快，则花粉被染成红色玫瑰红色：如果花粉是死的，则这一反映迟迟不能进行，花粉也就保持原色。
此色优点是比较快捷，但比较间接。
五.实验步骤：
1、储藏花粉：
（1）将采来的花粉进行干燥（凉干或放入盛有氯化钙的干燥器中初步干燥）、一般以花粉部相互黏结为度。
（2）将干燥的花粉装在指形管中（不要太多，一般以无分之一或更少为宜）。
瓶口塞以纱布，瓶外贴以标签，注明种类、日期。
（3）指形管放入以下不同浓度的硫酸或无水氯化钙控制的一定湿度的干燥器中，干燥器放于`温度为0℃—2℃的冰箱内。
2、花粉生命力的鉴定：
（1）固体培养基法；
（1）配置培养基；称取1克洋菜，五克蔗糖（化学纯），量取94毫克的蒸馏水。
现把水在酒精灯商加热煮开，到入洋菜，使之融化，然后到入蔗糖，用破棒不断搅拌，呈透明壮即可。
为保持培养的浓度，可在烧杯商用玻璃铅笔做记号，如水分蒸发应徐徐补充，既配成5%浓度的培养基。
同法配成10%、15%、20%浓度的培养基。
（2）载平；用玻璃棒蘸少量培养基，趁热滴在悬铃载玻片的凹槽，放置片刻，使其冷凝。
（3）播种花粉：将上述处理达到的载波片置于黑色纸上然后用解剖针粘少量花粉均匀地撒在培养基上，但不可过多，否则为以后观察带来困难。
（4）观察；把植被好的骗子放在预先掂有湿润吸水纸的培养器内，然后盖上盖、放在20—22c的温箱中培养。
牡丹的花粉接种一种小时即可统计萌发率。
随即在显微镜下取三个视野，计算花粉总数及发芽数。
算出平均出芽率。
（2）悬滴培养法：
（1）配培养液：称取5克蔗糖（化学纯）量取95m1蒸馏水，现把水放在酒精灯上加热烧开
然后到入蔗糖，用玻璃棒搅拌即成5%的培养基。
（2）载植：用蜡环（或玻璃环）和凡士林在悬滴载片的凹点上做一围墙，蜡环（或玻璃环）上缘涂一层凡士林，并往凹点内滴一滴培养液。
然后均匀地撒上少量花粉，拿号盖玻璃片在往上提的过程中迅速将它翻转过来（利用这个惯性保持其球面）小心地把玻片平放在蜡环（或玻璃环）上并使其周围没有缝隙。
如此便构成了一成笛闭的小室。
（3）观察：把上述制成的片子小心放到培养内（注意在所有悬滴过程中不能使悬滴流跑）然后放到温箱中。
保持22℃24 ℃的温度。
牡丹花粉接种后一小时既可观察。
花粉发芽检查在低倍镜下进行，花粉的长度为花粉粒直径2倍以上才算发芽，一倍以上者算萌芽。
（4）染色法：
配制溶液：
a20克联苯胺溶于10的酒精中，盛入褐色瓶中。
B 0.15克一萘溶于100的酒精中，盛入褐色瓶中。
c 0.25克碳酸钠溶于蒸馏水中，盛入白色瓶中。
d 以上三种溶液等量混合，即成“甲液，盛如白色瓶中。
E将3%过氧化氢，临用前用蒸馏水稀释成0.3%溶液，即成“乙液。
（2制片；
取少量花粉放到悬滴载玻片的凹点内，滴入一滴甲液，再滴一滴0.36%的H2O2，三分钟之后观察之。
统计存活率；在显微镜下观察凡表现红色或玫瑰红色的都有生命的花粉。
黄色或不着色者为没有生命的花粉。