阿奇霉素片方法验证

一．概述1 有关物质1.1照高效液相色谱法（通则0512）测定1.2色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%的磷酸溶液调节pH值至8.2）-乙腈（45∶55），流动相B为甲醇，柱温为30℃（必要时适当调整）；按下表进行线性梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml，检测波长为210nm。

取杂质S和杂质A对照品各适量，加上述稀释液溶解并稀释制成每1ml中各约含0.05mg的溶液，作为杂质S和杂质A对照品溶液；另取阿奇霉素系统适用性对照品（含杂质R、杂质Q、杂质J、杂质I、杂质H、阿奇霉素和杂质B）适量，加上述对照品溶液溶解并稀释制成每1ml中约含10mg的溶液，作为系统适用性溶液；精密量取对照溶液10ml，置50ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液，取系统适用性溶液和灵敏度溶液各50μl，分别注入液相色谱仪，灵敏度溶液主成分峰峰高的信噪比应大于10，系统适用性溶液色谱图中各峰之间的分离度均应大于1.2，阿奇霉素峰的保留时间35 95 564 95 565 75 251.3测定法取本品细粉适量，加稀释液[磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.73g,加水溶解并稀释至1000ml，用氨试液调节P H值至10.0±0.05）-甲醇-乙腈（7：7：6）]使阿奇霉素溶解并稀释制成每1ml中含阿奇霉素10mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1 ml，置200 ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

精密量取供试品溶液和对照溶液各50μl，分别注入液相色谱图仪，记录色谱图。

供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质B峰面积不得大于对照溶液主峰面积的4倍（2.0%），杂质H与杂质Q按校正后的峰面积计算（分别乘以校正因子0.1、0.4）不得大于对照溶液主峰面积的2倍（1.0%），其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍（1.0%），各杂质峰面积的和按校正后的峰面积计算不得大于对照溶液主峰面积的8倍（4.0%）。

2溶出度2.1照溶出度与释放度测定法（通则0931第二法）测定。

2.2取本品，以磷酸盐缓冲液（pH6.0）(0.1mol/L磷酸氢二钠溶液6000ml，加盐酸约40ml，调节PH值至6.0±0.05)900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经45分钟时，取溶液适量，滤过，精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉素0.2mg的溶液，作为供试品溶液；另取阿奇霉素对照品适量，精密称定，加适量乙醇（每2mg约加乙醇1ml）使溶解，用溶出介质定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。

照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算每片的溶出量。

限度为标示量的75％，应符合规定。

3含量3.1照高效液相色谱法（通则0512）测定。

3.2色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%的磷酸溶液调节pH值至8.2）-乙腈（45∶55）为流动相；检测波长为210nm。

取阿奇霉素系统适用性试验对照品适量，加乙腈溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液，取50μl注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱一致。

3.3测定法取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿奇霉素0.1g），加乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉素1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿奇霉素对照品适量，同法测定。

按外标法以峰面积计算，即得。

4.工艺处方组成5、仪器基本情况：6.相关术语：6.1准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。

一般用回收率（%）表示。

回收率限度应在98%～102%之间。

6.2精密度系指在规定的条件下同一份均匀的供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。

精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

6.3线性系指在设计的测定范围内，测定结果与试样中被测物的浓度直接呈比例关系的程度。

6.4范围系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间。

6.5检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。

6.6耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。

二.验证目的通过验证以确认所采用的方法适合于阿奇霉素片的测定。

根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

若符合，按验证的方法和条件进行阿奇霉素片检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

三.验证依据中国药典2015年版二部中国药典2015年版四部9101《药品质量标准分析方法验证指导原则》四.参考文件1、验证管理规程2、验证总计划3、SIL-20A高效液相色谱仪操作维护保养规程5、变更控制规程6、偏差控制规程五.验证职责六.验证步骤1. 阿奇霉素片含量分析方法验证1.1系统适应性试验1.1.1色谱条件①固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（C18）；②检测器：紫外检测器，检测波长210nm；③流动相：磷酸盐缓冲液（0.05mol/L 磷酸氢二钾溶液，用20%磷酸溶液调节PH值至8.2）-乙腈=（45：55）④流速：1.0mL/min。

⑤柱温：30℃⑥进样量：50μL。

照高效液相色谱法（通则0512）测定。

1.1.2系统适用性试验溶液：取阿奇霉素系统适用性对照品约20mg加乙腈2ml溶解，制成每1ml中含10mg的溶液，作为系统适用性试验溶液。

1.1.3取系统适用性试验溶液50μL注入液相色谱仪。

1.1.4判定标准：记录的色谱图应与标准图谱一致。

1.2阿奇霉素片含量分析方法线性验证1.2.1溶液配制1.2.1流动相配制以磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%的磷酸溶液调节pH值至8.2）-乙腈（45∶55）为流动相1.2.2处方量辅料配制精密称定糊精约200mg、低取代羟丙纤维素约250mg、微晶纤维素约695mg、羧甲淀粉钠200mg、硬脂酸镁80mg、聚维酮K30 80mg 混合。

此混合辅料约为10片阿奇霉素片（2.5g）所需的辅料共约1505 mg。

1.2.3样品溶液配制精密称取阿奇霉素对照品约8mg 、9mg 、10mg 、11mg,12 mg，置10ml量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

按80%、90%、100%、110%、120%的倍数稀释，加乙腈配置成浓度为0.8mg /ml、0.9mg /ml、1mg/ml、1.1mg /ml、1.2mg /ml 的溶液。

1.2.4测定精密量取经微孔滤膜过滤后各不同浓度稀释液50μl，注入液相色谱仪，每个样品进样2次，记录色谱图。

1.2.5判定标准：阿奇霉素在0.8 mg /ml至1.2mg /ml的浓度范围内，阿奇霉素峰面积成线性且相关系数R≥99.8%。

1.3阿奇霉素片含量分析方法精密度验证1.3.1流动相配制见阿奇霉素片含量分析方法线性验证项下。

1.3.2样品溶液配制取阿奇霉素片（XXXX生产）10片，研细，精密称取样品适量（约相当于阿奇霉素0.1g ）置100ml量瓶中，加乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉素1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；1.3.3 测定精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图，连续6次，得到拉呋替丁峰面积。

1.3.4判定标准：峰面积的S rel≤2.0%。

1.4阿奇霉素片含量分析方法准确度验证1.4.1流动相配制、处方量辅料配制见阿奇霉素片含量分析方法线性验证项下。

1.4.2样品溶液配制精密称取阿奇霉素对照品约8mg 、10mg 、12 mg，置10ml量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

按80%、100%、120%的倍数稀释，加乙腈配置成浓度为0.8mg /ml、1mg/ml、1.2mg /ml的溶液。

1.4.3测定精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图，得到阿奇霉素峰面积。

通过线性方程计算阿奇霉素浓度。

用测得浓度和实际浓度之比计算回收率。

1.4.4判定标准：回收率限度应在98%-102%之间，回收率的S rel≤2.0%。

1.5阿奇霉素片含量分析方法范围验证1.5.1数据记录及结果计算依据1.2线性，1.3精密度，1.4准确度，确定高效液相色谱法符合《中国药典》2015版阿奇霉素峰含量的范围一般为测定浓度的范围。

1.5.2判定标准：含量的范围一般为测定浓度的 80%〜120%。

1.6阿奇霉素片含量分析方法专属性验证1.6.1流动相配制、处方量辅料配制见阿奇霉素片含量分析方法线性验证项下。

1.6.2溶液配制1.6.2.1供试品溶液：取阿奇霉素片（XXXX生产）10片，研细，精密称取样品适量（约相当于阿奇霉素0.1g ）置100ml量瓶中，加乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉素1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；1.6.2.2精密称取阿奇霉素对照品（约25mg），置25ml量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

1.6.2.3空白溶液：取乙腈作为空白溶液。

1.6.2.4阴性溶液：按照阿奇霉素片配方，加入处方量混合辅料60.2mg，置100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过（0.45um微孔滤膜），滤过,续滤液，作为阴性溶液。

1.6.3测定精密量取经微孔滤膜过滤后的供试品溶液、对照品溶液、空白溶液、阴性溶液各50μl，注入液相色谱仪，每个样品进样2次，记录色谱图。

1.6.4判定标准：阿奇霉素对照品溶液与样品溶液主峰保留时间一致，空白溶液与阴性溶液在主峰保留时间处应为平直基线，无吸收峰。

1.7阿奇霉素片含量分析方法耐用性验证1.7.1改变流动相比例1.7.1.1色谱条件①固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（C18）；②检测器：紫外检测器，检测波长210nm；③流动相：磷酸盐缓冲液（0.05mol/L 磷酸氢二钾溶液，用20%磷酸溶液调节PH值至8.2）-乙腈=（40：60）④流速：1.0mL/min。

⑤柱温：30℃⑥进样量：50μL。

照高效液相色谱法（通则0512）测定。

1.7.1.2系统适用性试验溶液：取阿奇霉素系统适用性对照品约20mg 加乙腈2ml溶解，制成每1ml中含10mg的溶液，作为系统适用性试验溶液。

1.7.1.3取系统适用性试验溶液50μL注入液相色谱仪。

1.7.1.4判定标准：在改变流动相比例后，记录的色谱图应与标准图谱一致。

2. 阿奇霉素片溶出度分析方法验证2.1阿奇霉素片溶出度分析方法线性验证照溶出度与释放度测定法 (通则0931第二法及高效液相色谱法测定法测定)2.1.1溶液配制2.1.1.1取磷酸盐缓冲液（pH6.0）(0.1mol/L磷酸氢二钠溶液6000ml，加盐酸约40ml，调节PH值至（6.0±0.05)900ml为溶出介质。