6发酵工业的种子制备(精)

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2、培养温度
温度过低，菌种生长发育缓慢
温度过高会使菌丝过早自溶
在制备土霉素生产种子过程中，高于37℃培养时， 孢子接入发酵罐后表现出糖代谢变慢，氨 基氮回升提前，菌丝过早自溶，效价降低等现象。
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3、湿度
湿度低，孢子生长快； 湿度大，孢子生长慢
种子转种至发酵罐
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种子制备过程
实验室种子制备阶段：琼脂斜面至固 体培养基扩大培养（如茄子瓶斜面培 养等或液体摇瓶培养
生产车间种子制备阶段：种子罐扩大 培养
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实验室种子制备
无菌方式接保藏的菌种至斜面培养基上，成 熟后挑选正常菌落至试管斜面和摇瓶。 菌种产孢子能力强及孢子发芽、生长繁殖迅 速，可用固体培养基培养孢子。 菌种产孢子能力不强或孢子发芽慢，可用摇 瓶液体培养法。 不产孢子的菌种，保藏基础上，在一定温度 下活化即可。

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种子罐级数越少，越有利于简化工艺 和控制，并减少由于多次转种而带来 的染菌机会以及减少因种子罐生长异 常而造成的发酵波动。 但考虑能否在一定时间内获得优质、 足量的种子以满足发酵的需求。
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15L种子发酵罐
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制备土霉素生产菌种龟裂链霉菌孢子时发现， 在含有少量水分的试管斜面培养基下部孢子长得 较好，而斜面上部由于水分迅速蒸发呈干瘪状， 孢子稀少。 在气温高湿度大的地区，斜面孢子长得慢，主 要由于试管下部冷凝水多而不利于孢子形成。
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种子扩大培养阶段

液体培养法：液体试管、三角瓶摇床 振荡或回旋式培养。 表面培养法：茄子瓶、克氏瓶或瓷盘 培养。
固体培养法：三角瓶、蘑菇瓶、克氏 瓶、培养皿等麸皮培养。
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生产车间种子制备

实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接到 种子罐进行扩大培养。 种子罐培养一获得足够的菌种数量，二 种子罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成 分和培养条件，使菌体适应发酵环境。
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例1：四环素、土霉素生产中，配制产孢子斜面培养基用的 麸皮，因小麦产地、品种、加工方法及用量的不同对孢子 质量的影响也不同。
例2：制备霉菌用的大(小 )米，其产地、颗粒大小、均匀程 度不同，孢子质量也不同。
例3：蛋白胨加工原料不同，对孢子影响也不同。 例4：琼脂的牌号不同，其中含无机离子的差别而引起孢子 质量的变化。 例5：水质的硬度、污染程度对生产均有影响。
实验室准备阶段
放罐，后处理
生 产 车 间 阶 段
产品
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5、种龄与接种量
接种龄
种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种 子罐或发酵罐时的培养时间 种子培养期应取菌种的对数生长期为宜， 菌种过嫩或过老，不但延长发酵周期，而 且会降低产量。
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• 四、种子制备的放大原理与
技术
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二、影响种子质量的因素


原材料质量
培养温度
斜面冷藏时间 培养基 pH


湿度
通气与搅拌
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1.原材料质量
原材料质量波动引起种子质量不稳定。
原材料质量波动的主要原因：无机离子 含量不同（微量元素Mg2+、Cu2+、 Ba2+能刺激孢子的形成，磷含量太多或 太少也会影响孢子的质量）。
第六章 发酵工业的种子制备
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本章内容：
• 一、种子制备原理与技术 • 二、影响种子质量的因素 • 三、种子质量的控制措施
• 四、种子制备的放大原理与
技术
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一、种子制备原理与技术
1、优良种子应具备的条件
生长活力强，延迟期短；
生理状态稳定；
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确定方法
菌种的性质(如菌种传代后的稳定性)
瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速 度 发酵罐中种子培养液的最低接种量 种子罐与发酵罐的容积比 生产规模 随工艺条件的改变作适当的调整
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3、种子质量的判断方法
通常检测的培养液中参数
pH是否在种子要求的范围之内
糖、氨基氮、磷酸盐的含量 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 有无杂菌污染 其他参数，如接种前酶活、种子罐的溶氧和尾 气等
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4、种子制备
步骤：
斜面培养基中活化；
扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培 养，完成实验室种子制备 一级种子罐，制备生产用种子；视情况 确定扩大级数，完成生产车间种子制备；
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放射形土壤杆菌多糖（ARPS） 发酵过程中不同的接种龄对多糖产量的影响
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大量地接入培养成熟的菌种的优点：
缩短生长过程的延缓期，因而缩短了
发酵周期，提高了设备利用率
节约发酵培养的动力消耗
有利于减少染菌机会
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接种量
接种量：移入的种子液体积和接种后培养液体 的体积的比例 接种量过多，菌丝生长过快、溶氧不足，衰老 细胞增加等，发酵后劲不足
接种量过少延长发酵周期，形成异常形态，而 且易造成染菌。
以生产菌种在发酵罐中的繁殖速度为依据。 接种量的大小直接影响发酵周期。
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在放射形土壤杆菌多糖（ARPS） 发酵过程中不同的接种量对多糖产量的影响
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本章内容：
• 一、种子制备原理与技术 • 二、影响种子质量的因素 • 三、种子质量的控制措施
浓度及总量能满足发酵罐接种量的要求；
无杂菌污染，保证纯种发酵；
适应性强，生产能力稳定。
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2、种子罐级数的确定
种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大 培养的次数 级数愈少，愈利于简化工艺及控制，并 可减少种子罐污染杂菌的机会，减少消 毒及值班工作量，减少因种子罐生长异 常而造成的发酵波动。