Masson染色技术

胶原纤维染色（Masson三色染色法）
胶原纤维：是三种纤维中分布最广泛，含量最多的一种纤维。

广泛分布于各脏器内。

在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。

胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别。

应用意义：
定性定量胶原纤维在体内分布广泛。

HE染色不能以不同颜色将其显示出来，而胶原纤维定性特染可作到这一点，故在多种疾病的病理诊断和研究用中具有实用价值.
如：
1．显示组织，器官的损伤或炎症的修复与纤维板化程度
2．判断心肌坏死后被除纤维结缔组织所取代的区域：HE染色时胶原纤维与心肌均为红色，胶原纤维染色则使胶原纤维呈红色，心肌纤维呈黄色。

3．鉴别心肌纤维化与心内膜弹纤维增生症。

4．区别胶原纤维透明变性与淀粉样变性。

5. 对肿瘤方面提供诊断和诊断鉴别的依据。

胶原纤维染色结果：胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色。

组织样品应为：4%多聚甲醛固定组织，石蜡切片。

天狼猩红：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其它成分呈黄色。

V.G染色法 : 胶原纤维：鲜红色,肌纤维：黄色，红细胞：黄色。

细胞核：蓝黑或灰色。

Nagar-Olsen染色
观察心肌缺氧早期改变，是早期心肌病变组织染色：
显色结果：缺氧心肌红细胞呈现红色，正常心肌呈黄色或棕黄色，细胞核呈蓝色。

丽春红（Ponceau S）新法染色
首先采用维多利亚蓝将细胞核染成绿色，再用Ponceau S 丽春红复合物将胶原纤维染成红色，肌肉成黄色。

实验流程
一、实验试剂
1. Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。

将苏木精加入蒸馏水内加温溶解，冷却后加入酒精和甘油，放数日后即可应用；
2. Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml；
3. 0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml；
4. 1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml；
5. 苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml；
6. 1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml。

二、操作步骤
1. 石蜡切片脱蜡至水；
2. 铬化处理或去汞盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)；
3. 依次自来水和蒸馏水洗；
4. 用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min；
5. 充分水洗，如过染可盐酸酒精分化；
6. 蒸馏水洗；
7. 用Masson 丽春红酸性复红液5-10min；
8. 以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻；
9. 1%磷钼酸水溶液分化3-5min；
10. 不经水洗，直接用苯胺蓝或光绿液染5min；
11. 以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻；
12. 95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色)，胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。

三、体会与说明
1. 控制好染色步骤；
2. 组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间；
3. 0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色调清晰鲜艳；
4. 磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制，肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。