氰化高铁血红蛋白测试液说明书
2013体检培训——血红蛋白
个浓度标准液校正。
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3. 仪器的质控 （1）分光光度计的校正
氰化高铁血红蛋白标准液： 含50、100、150、200g/L四种浓度，每 支标准约10ml。
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54
表6 可见光分光光度计波长540nm，光径1.0cm 标准液允许误差
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日期
表5 血红蛋白平行样测定质量控制表
2005.3.22
学校
学
采血人 崔丹
大兴榆垡中
编号 血红蛋白值 复测值
范围
是否合格
20
149
40
140
60
143
80
130
100
123
145
141.6<149<156.5
146
133<140<147
132
135.9<143<150.2
117
123.5<130<136.5
1 0 81 0 5 100(T)
95 92
1
2
3
5
6
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最大允许线 警告线
靶值线
警告线 最大允许线
4
次数
废液处理
原则：不允许直接排放到下水道， 建议委托专业机构处理。
试剂含有氰化钾，使用处理不当可造成严重公 害。氰化物必须在碱性及中性条件下，加入次氯酸 钠进行二级分解。
医务人员使用时，应首先做好职业防护。 废液处理，首先以水稀释（1:1）；然后，稀释 后的废液按每升加入35ml次氯酸钠；充分混匀后敞 开容器口，放置15小时以上，使CN-氧化成CO2和N2 挥发，或是水解成CO32-和NH4+，再排入下水道。
实验七 血红蛋白和血型的测定
前言
血红蛋白是红细胞的主要成分，除作为血液缓冲物质而 发挥作用外，其功能是在肺部结合氧气，送到全身各组织并 将组织中的二氧化碳送到肺部而呼出体外。
血红蛋白分子是一种由 亚铁血红素和珠蛋白结合而 成的结合蛋白，由四个亚基 构成，分别为两个α亚基和两 个β亚基。血红蛋白的贮氧、 运氧功能都是依靠血红素中 的Fe2+与O2的配位结合， 血红蛋白与氧结合是以协同 效应方式进行的。
注意事项：
1、采血应采用正确的采血方法。 2、严格消毒，并保证玻片、玻棒的清洁。
课自己的 实验结果，用实验结果来评定自己的身 体机能状态，需要怎样去调整。若数值 偏大或偏小，原因是什么？说出理由。
Hb在运动实践中的应用：
Hb指标主要用于评定某个训练周期或阶段，如根据1-2周 时间内运动员对运动量和运动强度的反应来评定运动员的机能 状态等。 Hb在运动训练中的变化是多因素综合作用的结果，如仅从 运动负荷的影响看，大运动量训练期间系统测试血红蛋白，可 能会出现以下三种类型： （1）训练初Hb下降，经一段训练后，Hb又逐步回升。 （2）训练初Hb下降，经一段训练后，始终未出现回升。 （3）训练期间， Hb无显著变化。 （1）表示运动量安排适宜；（2）、（3）则分别由于运 动量过大，过小而未能出现血红蛋白的正常变化趋势。因此， 测试Hb的含量，对于评定运动员的机能状态和运动训练水平 等具有重要的意义。
722分光光度计结构示意图
1
2
3
4
5
6
7
8
1 光源 5比色杯
2 聚光透镜 6 光门
3 色散棱镜 7 光电管
4狭缝 8 检流计
722分光光度计的使用
氢氰酸(氰化氢)安全技术说明书
氰化氢安全技术说明书第一部分化学品及企业标识化学品中文名：氰化氢；氢氰酸化学品英文名：hydrogen cyanide第二部分危险性概述物理化学危险：极易燃，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热能引起燃烧爆炸。
长期放置则因水分而聚合，聚合物本身有自催化作用，可引起爆炸。
健康危害：抑制呼吸酶，造成细胞内窒息。
短时间内吸入高浓度氰化氢气体，可立即因呼吸停止而死亡。
非骤死者临床分为4期：前驱期有粘膜刺激、呼吸加快加深、乏力、头痛；口服有舌尖、口腔发麻等。
呼吸困难期有呼吸困难、血压升高、皮肤粘膜呈鲜红色等。
惊厥期出现抽搐、昏迷、呼吸衰竭。
麻痹期全身肌肉松弛，呼吸心跳停止而死亡。
可致眼、皮肤灼伤，吸收引起中毒。
慢性影响表现为神经衰弱综合征、皮炎。
环境危害：对水生生物毒性极大并具有长期持续影响。
紧急情况概述：易燃，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热能引起燃烧爆炸。
长期放置则因水分而聚合，聚合物本身有自催化作用，可引起爆炸。
吸入致命。
对水生生物毒性极大并具有长期持续影响。
GHS 危险性类别：易燃液体-1,对水环境的危害-急性1,对水环境的危害- 长期慢性1,急性毒性-吸入-2,标签要素：象形图：警示词：危险危险信息：极易燃液体和蒸气; 对水生生物毒性非常大; 对水生生物毒性非常大并且有长期持续影响; 吸入致死;防范说明：预防措施：远离热源/火花/明火/热表面。
禁止吸烟。
保持容器密闭。
容器和接收设备接地/等势联接。
使用防爆的电气/通风照明/设备。
只能使用不产生火花的工具。
采取防止静电放电的措施。
戴防护手套/穿防护服/戴防护眼罩/戴防护面具。
不要吸入粉尘/烟/气体/烟雾/蒸气/喷雾。
只能在室外或通风良好处使用。
戴呼吸防护装置。
避免释放到环境中。
事故响应：火灾时：使用干粉、抗溶性泡沫、二氧化碳灭火。
如皮肤（或头发）沾染：立即脱掉所有沾染的衣服。
用水清洗皮肤/淋浴。
如误吸入：将受害人转移到空气新鲜处，保持呼吸舒适的休息姿势。
氰化高铁血红蛋白测定法
氰化高铁血红蛋白测定法氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的生物化学实验方法，用于测定血液中的血红蛋白含量。
本文将介绍这种测定方法的原理、步骤和应用。
一、原理氰化高铁血红蛋白测定法是基于血红蛋白与氰化高铁反应的原理。
血红蛋白是一种含有铁离子的蛋白质，与氰化高铁反应后形成氰合血红蛋白，其吸收波长为540 nm。
通过测定氰合血红蛋白的吸光度，可以间接测定血液中的血红蛋白含量。
二、步骤1. 血样处理：取适量的血液样品，离心分离出血浆，将血浆与氰化高铁试剂混合均匀。
2. 反应：将混合液放入分光光度计或分光比色计中，设定波长为540 nm，记录初始吸光度。
3. 添加还原剂：在反应过程中，加入适量的还原剂，如还原葡萄糖等，使氰合血红蛋白还原成血红蛋白。
4. 再次测定：记录还原后的吸光度。
5. 计算血红蛋白浓度：根据吸光度的变化，利用标准曲线或计算公式，计算出血液中的血红蛋白浓度。
三、应用氰化高铁血红蛋白测定法广泛应用于临床医学和生物研究中。
以下是该方法的几个常见应用：1. 临床诊断：血红蛋白是血液中的重要成分，其测定对于诊断贫血、血液病等疾病具有重要意义。
氰化高铁血红蛋白测定法可以快速、准确地测定血红蛋白含量，帮助医生进行诊断。
2. 药物研发：在药物研发过程中，需要评估药物对血红蛋白的影响。
氰化高铁血红蛋白测定法可以用于评估药物对血红蛋白的结合能力或解离能力，进而判断药物与血红蛋白的相互作用。
3. 营养评估：血红蛋白含量与身体的营养状况密切相关。
通过氰化高铁血红蛋白测定法，可以评估人体的血红蛋白含量，从而判断是否存在营养不良或缺铁性贫血等问题。
4. 动物实验：在动物实验中，血红蛋白的测定对于评估动物的健康状况和实验结果的可靠性至关重要。
氰化高铁血红蛋白测定法可以用于动物血液样品的血红蛋白浓度测定。
氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的测定血红蛋白含量的方法。
其原理简单，步骤明确，应用范围广泛。
在临床医学、药物研发、营养评估和动物实验等领域都有重要的应用价值。
血红蛋白测定实验
血红蛋白测定实验一、实验目的与任务了解XF—1B型（或Hb—2000型）血红蛋白仪的使用方法，掌握血红蛋白的测定技术。
有训练运动员在较好训练效果的影响下血红蛋白正常值高于正常成年人，因此，血红蛋白的测定是评定训练效果的重要指标。
二、原理测定血红蛋白的方法很多，常见的有直接比色，光电比色法，沙利氏比色法（间接比色法）。
我们现在实验室用的是XF—1B型和Hb—2000型血红蛋白仪。
此仪器是采用氰化高铁法，应用光电比色的原理测定血红蛋白值的，其原理是：将全血样品20ul注入5ml氰化高铁血红蛋白稀释液内（亦称文—齐氏液），作251倍稀释，溶化红细胞释出血红蛋白。
稀释剂将血红蛋白先转变成高铁血红蛋白，再转化为氰化高铁血红蛋白。
然后，再用XF—1B 型（或Hb—2000型）Hb仪比色法直接测定显示浓度数，不需任何换算（每次测定只需5秒钟）。
三、实验器材XF—1B型和Hb—2000型血红蛋白仪、一次性血细胞吸管（刻度10～20ul）、采血针、75%酒精、消毒棉球、培养皿、烧杯、可调加液器、试管架、血红蛋白测定试剂（文—齐氏液）、氰化高铁血红蛋白标准液。
四、实验步骤1、插上电源，打开血红蛋白仪电源开关，按动进样开关，重复三次吸入蒸馏水，并通电预热20～30分钟。
观察显示是否为“零”。
（按出Hb仪器左下角“测试—定标”按键，使之处于“测试”状态。
）2、取试管一支，加入Hb测定试剂（文—齐氏液）5ml，放在试管架上备用。
3、采血、比色：先消毒，再用采血针在耳垂或无名指尖处采血，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用血细胞吸管取血液20ul（注意：吸管内不可有气泡，否则需重新采血）。
擦去吸管外血液后，轻轻吹入测定管底部，并回吸数次洗净吸管，然后充分混合均匀。
待5分钟后，置Hb仪上比色。
4、记录：直接读数，记录下来。
Hb值通常以每100 ml血液中含Hb若干克来表示。
（g/ml）。
本仪器采用国际单位制（g/L），可直接显示Hb值（g/L）。
血红蛋白测定方法
6.1 血红蛋白测定（氰化高铁法）消光系数法和标准曲线法任选其一测定血红蛋白。
１.6.1.1 光系数法１.6.1.1.1 原理血红蛋白(haemoglobin，Hb)被铁氰化钾氧化后生成高铁血红蛋白，再生氰离子结合形成氰化高铁血红蛋白（红色），氰化高铁血红蛋白（红色）极为稳定，在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。
１.6.1.1.2 仪器721型或其它型号的分光光度比色计。
10微升量吸管。
１.6.1.1.3 试剂称取碳酸氢纳（）140毫克\铁氰化钾200毫克、氰化钾50毫克，用水溶解并稀释到1000毫升。
贮存於棕色试剂瓶内，在暗处或冰箱（+4℃）保存，至少可稳定数月到一年。
１.6.1.1.4 实验步骤１.6.1.1.4.1 试剂2.5毫升於5毫升带盖试管中，加入10微升血液，混匀后，放置15分钟。
１.6.1.1.4.2 选用0.5厘米光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调零点，将所得样品管之光密度乘以73.6，即为血红蛋白之浓度（克%）。
计算公式如下：Ct=待测的血红蛋白（克%）浓度。
D 540 = 氰化高铁血红蛋白在540nm波长下测出的光密度。
HICN251=测定时血液的稀释倍数（血10微升加入试剂2.5毫升中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数0.5=比色杯的光径10000=将（毫克/升）换算成（克%）的数字１.6.1.1.5 注意事项１.6.1.1.5.1 试剂不要放在聚乙烯瓶内，以免因氰离子与其反应而使试剂作用降低。
１.6.1.1.5.2 仪器因mM消光系数法完全依靠仪器的吸光度来计算,故此法要求所用的仪器性能要符合要求(如仪器的波长准确与否,以及灵敏度及线性等),否则将直接影响测定的结果。
1.6.1.1.5.3仪器在使用前最好以WHO规定的氰化高铁血红蛋白参考液校正后再使用。
参考液最好选用ICSH9国际血液学标准化委员会）确定的由RIV（莅国立公共卫生研究院）制定的氰化高铁血红蛋白参考液或上海医学化验所制血的氰化高铁血红蛋白标准液。
氰化高铁血红蛋白测定法试剂
氰化高铁血红蛋白测定法试剂氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的生化实验方法，用于分析和测定血液中的血红蛋白含量。
本文将全面介绍该测定法的原理、操作步骤及实验结果的解读，以及实验中需要注意的事项。
氰化高铁血红蛋白测定法的原理是利用氰化高铁与血红蛋白形成氰合血红蛋白，通过测定其最大吸收波长处的吸光度来确定血红蛋白的浓度。
这个测定法在实验室应用广泛，特别适用于快速分析大量样本。
操作步骤如下：1. 准备试剂：将氰化高铁溶液定容至10ml，并使用洗瓶洗净可塑性吸光管。
2. 取1ml待测血清，加入两滴牛磺酸溶液，充分混合。
3. 加入2ml的氰化高铁溶液，尽量避免溶液溢出或产生气泡。
4. 轻轻倾斜吸光管，充分混合后，放置在室温下孵育5分钟。
5. 将孵育后的吸光管置于1cm光程比色皿中，切不可触摸吸光池。
6. 使用5% NaOH溶液分别置于两个比色皿中，作为空白对照。
7. 使用比色计在最大吸收波长（540nm）测定各组的吸光度值。
8. 计算血红蛋白浓度。
根据标定曲线和吸光度值的关系，描绘标定曲线并用所测吸光度值参照标定曲线，查得相应血红蛋白浓度。
实验结果的解读需要注意以下几个方面：1. 血红蛋白浓度的计算：在标定曲线上查找所测吸光度值对应的血红蛋白浓度，可得到最终结果。
2. 结果的参考范围：血红蛋白浓度的正常范围在男性为130～175g/L，女性为115～155g/L。
3. 实验误差的排除：实验过程中，应严格控制各实验条件的一致性，避免外界因素对实验结果的影响。
同时，在同一天内重复检测样本可以提高实验结果的可靠性。
需要注意的事项：1. 操作安全：氰化高铁溶液有毒，操作时应佩戴手套和护目镜，并避免接触皮肤和吸入气体。
2. 实验条件：实验室应具备较好的通风条件，同时实验过程中，避免光线、震动和干扰。
3. 校准和质控：每天开始实验前进行仪器校准，并使用已知浓度的标准品进行质控，以确保实验结果的准确性和可靠性。
综上所述，氰化高铁血红蛋白测定法是一种简便、快速、准确的血红蛋白测定方法。
实验一血红蛋白的测定（氰化法）
实验一血红蛋白的测定（氰化法）1．实验特点实验类型：验证实验类别：专业基础计划学时：3 每组人数：22．实验目的要求：了解氰化法测定血红蛋白的原理，掌握人体血液样本的采集方法，分光光度法测定原理和技术。
3．实验原理：血红蛋白在铁氰化钾和氰化钾的作用下，生成极为稳定的氰化高铁血红蛋白（红色），其颜色深浅与血红蛋白的含量成正比。
氰化高铁血红蛋白在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。
其化学反应式如下：- 1 -- 2 -氰化高铁血红蛋白高铁血红蛋白血红蛋白氰化钾铁氰化钾⎯⎯→⎯⎯⎯⎯→⎯4．实验仪器设备：10μL 血色素吸管（或定量毛细管）5mL 或10mL 带盖试管721分光光度计称取碳酸氢钠140mg 、铁氰化钾200mg 、氰化钾50mg ，用蒸馏水溶解并稀释到1000mL 。
贮存于棕色试剂瓶内，在4°C 冰箱保存，至少可稳定数月到一年。
5．材料消耗费：10元6．实验内容步骤：吸取2.5mL试剂于5mL带盖试管中，加入10μL血液，混匀后放置15min。
选用0.5cm光径比色杯，与540nm波长下，以试剂调节仪器零点，测定各样品管的光密度。
7．注意事项：本法为国际血液学标准化委员会（ICSH）所推荐，具有操作简便、不需要标准、结果准确可靠等优点。
应用本法进行血红蛋白的测定，所用分光光度计的波长必需事先经过校正。
实验条件改变，如更换了光电池或灯泡、电压不稳、试剂换了批号等等均会引起光密度的改变。
为了获得正确结果，可用标准液校正或采用色泽近似的无机盐人工永久标准液来核对，这也是一种行之有效的方法。
如以上两点难以实现，宜采用标准曲线法或直接比较法进行。
血样放入试剂后形成的氰化高铁血红蛋白极为稳定，经试验，在4°C冰箱存放70天之久前后结果仍能保持一致。
为此，可将各地采集的样品在加入试剂后，在2-10°C环境中，集中到中心实验室进行比色测定。
血红蛋白测定试剂盒(SLS-Hb法)产品技术要求ruierda
血红蛋白测定试剂盒（SLS-Hb法）适用范围：该试剂用于体外定量测定人全血中血红蛋白的含量。
1. 产品型号/规格及其划分说明1.1试剂（R）：100ml×2(200测试)；2. 性能指标【产品性能指标】1 试剂空白试剂空白吸光度值≤0.006。
2 线性区间测量范围[25,200]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。
3准确度回收率90%～110%4分析灵敏度血红蛋白150g/L测定吸光度≥0.3705 测量精密度a）重复性变异系数≤10%。
b）批间差连续三批血红蛋白试剂盒测定同份血红蛋白液，其测定值的批间差≤10%。
【包装规格】试剂（R）：100ml×2(200测试)【主要组成成分】试剂（R）缓冲液：0.04mol、十二烷基硫酸钠60g/L、稳定剂0.05 mol【产品性能指标】1. 试剂空白：试剂空白吸光度值≤0.0062. 线性区间：测量范围[25,200]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。
3. 准确度：回收率90%～110%4. 分析灵敏度：血红蛋白150g/L测定吸光度≥0.3705. 精密度：a) 重复性：CV≤10％。
1. 产品型号/规格及其划分说明1.1 试剂（R）：100ml×2(200 测试)；校准品：2ml×1（选配）；质控品：2ml×1（选配）1.2 组成成份：试剂（R）：缓冲液 0.04mol、十二烷基硫酸钠 60g/L、稳定剂 0.05 mol校准品：水基质，氰化高铁血红蛋白浓度为125g/L（目标浓度）。
质控品：水基质，氰化高铁血红蛋白浓度为116.3g-133.8g/L。
注：校准品、质控品浓度具有批差异性，详见标签。
2. 性能指标2.1 外观试剂为无色透明无沉淀及絮状浮物溶液。
校准品质控品为棕褐色液体。
2.2 装量试剂净含量不少于标示值。
2.3 试剂空白试剂空白吸光度值≤0.006。
2.4 线性区间测量范围[25,200]g/L,相关系数 r≥0.99；相对线性偏差≤12%。
氰化高铁血红蛋白测定法
氰化高铁血红蛋白测定法
原理：
血液中除硫化红蛋白(SHb)外的各种血 红蛋白(如氧化血红蛋白、碳氧血红蛋白、 高铁血红蛋白或其他衍生物)均可被高铁氰 化钾氧化称高铁血红蛋白，再与氰离子(CN-) 结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白，氰化 高铁血红蛋白在波长540nm处有一个较宽的 吸收峰，它在540nm处的吸光度同它在溶液 中的浓度成正比，常规测定可以从HiCN参 考液制作的标准曲线上读取结果。
警告值(危机值) Hb＜50 g/L 或 ＞ 250 g/L
贫血程度划分
轻度
Hb 正常下限 —91 g/L 症状轻微；
中度 Hb 90-60 g/L 体力劳动时心慌气短； 重度 Hb 60-31 g/L 休息时感觉心慌气短；
极重度 Hb ≤ 30 g/L 常合并贫血性心脏病。
注意事项
HiCN试剂应贮存在棕色的有塞的玻璃瓶中， 不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN-丢失，测 定结果偏低
HiCN试剂应在4℃保存，不能0℃保存，因结 冰可使试剂失效 白细胞过高或球蛋白异常增高时，可产生浓 度干扰实验 氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应除毒 处理后再弃去
质量控制
HiCN试剂应4℃保存，否则试剂失效，直 接影响检测质量 试剂应保持新鲜，至少一个月配制一次 样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时， 可干扰实验，解决方法是：白细胞过高， 离心后取上清液比色；球蛋白异常增高 (如肝硬化者)，比色液中加入少许固体氯 化钠或碳酸钾，混匀后溶液澄清后再比 色
测定值假性增高
稀释倍数不准确 红细胞未完全溶解
血浆中脂质或蛋白质量增加
废液处理
氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液
应首先以水稀释(1:1)，再加次氯酸钠
血红蛋白测定及注意事项
（2）以上述同样的方法取血，并使血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白。
然后以转化液作空白，测定标本吸光度A。
（3）通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2)3.使用沙里氏血红蛋白计测定沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。
（1）沙里血红蛋白计主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。
比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。
为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。
（2）具体测定方法如下：①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。
②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。
③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。
操作时勿产生气泡,以免影响比色。
用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。
④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。
⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。
用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。
⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。
比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。
换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。
[注意事项]1.取血前要做好充分的消毒。
2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。
医学检验—临检基础(四)
医学检验—临检基础（四）一、血红蛋白测定1.氰化高铁血红蛋白HiCN测定法原理:血液中除硫化血红蛋白（SHb）外的各种Hb均可被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，再和CN-结合生成稳定的棕红色复合物-氰化高铁血红蛋白，其在540nm处有一吸收峰。
但其致命弱点是氰化钾试剂有剧毒,使用管理不当可造成公害。
存放HiCN转化液的容器应为：棕色玻璃瓶，不能储存在塑料瓶中，会导致CN-下降，也不能在0℃下保存，会使试剂失效。
废液应该用水稀释后，加入次氯酸钠，放置15h以上，CN-变成CO2和N2，再排入下水道。
（1）血红蛋白WHO、ICSH推荐的参考方法：HiCN（氰化高铁血红蛋白测定法）（2）不能检测HbS（3）吸光度540nm。
HiCN在540nm处的吸光度与溶液浓度呈正比，根据测得吸光度可求得待测标本中Hb浓度。
SDS测定法（十二烷基硫酸钠血红蛋白）：除SHb外的各种Hb均可与低浓度SDS作用，生成棕红色化合物。
用分光二、血红蛋白测定的质量控制异常血红蛋白、高脂血症、白血病计数超过30´109/L、脂滴等可产生浊度，干扰Hb测定。
三、血红蛋白测定的临床意义血红蛋白意义与红细胞计数类似，但在贫血程度的判断优于红细胞计数。
比如发生大细胞性贫血或小细胞低色素贫血时,红细胞计数与血红蛋白浓度不成比例。
大细胞性贫血的血红蛋白浓度相对增高,小细胞低色素贫血的血红蛋白减低,但红细胞计数可正常。
四、红细胞形态检查1.红细胞形态参考值:瑞氏染色血涂片成熟红细胞形态为双凹圆盘形,细胞大小一致、平均直径7.2μm,淡粉红色,中央1/3为生理性淡染区,胞质内无异常结构。
2.红细胞大小改变:(1)小红细胞：直径＜6μm。
正常人偶见。
见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、遗传性球形细胞增多症。
(2)大红细胞：直径＞10μm。
见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血等。
(3)巨红细胞：直径＞15μm。
巨幼细胞性贫血。
(4)红细胞大小不均：红细胞间直径相差一倍以上。
血红蛋白检测试剂(比重法)产品技术要求wangshenweiye
血红蛋白检测试剂（比重法）组成：硫酸铜水溶液（硫酸铜质量浓度范围：7.27%～8.22%）。
适用范围：用于体外定性检测人全血中的血红蛋白含量。
1.1 型号男用1.0520（16℃）、男用1.0520（20℃）、男用1.0520（24℃）、男用1.0520（28℃）、男用1.0520（32℃）、女用1.0510（16℃）、女用1.0510（20℃）、女用1.0510（24℃）、女用1.0510（28℃）、女用1.0510（32℃）、女用1.0500（16℃）、女用1.0500（20℃）、女用1.0500（24℃）、女用1.0500（28℃）、女用1.0500（32℃）1.2 包装规格85ml/瓶、80ml/瓶、50ml/瓶、45ml/瓶、40ml/瓶、4ml/瓶、2ml/瓶1.3主要组成成分硫酸铜水溶液（硫酸铜质量浓度范围：7.27%～8.22%）。
2.1 外观试剂包装完整无破损；标签清晰可辨；硫酸铜溶液透明、无杂质；男用硫酸铜溶液为绿色，女用硫酸铜溶液为蓝色。
2.2 净含量试剂净含量不得少于标示值。
2.3 比重值a) 男用1.0520型，在标示的使用温度下比重为1.0520±0.0005；b) 女用1.0510型，在标示的使用温度下比重为1.0510±0.0005；c) 女用1.0500型，在标示的使用温度下比重为1.0500±0.0005。
2.4 临界值及重复性2.4.1 男用1.0520型a) 男用1.0520型，在标示的使用温度下检测血红蛋白浓度的临界值为120g/L；用此溶液检测血红蛋白浓度为125g/L的血液样本20次，其结果阴性率应≥95%。
b) 用此溶液检测血红蛋白浓度为115g/L的血液样本20次，其结果阳性率应≥95%。
2.4.2 女用1.0510型a) 女用1.0510型，在标示的使用温度下检测血红蛋白浓度的临界值为115g/L，用此溶液检测血红蛋白浓度为120g/L的血液样本20次，其结果阴性率应≥95%；b) 用此溶液检测血红蛋白浓度为110g/L的血液样本20次，其结果阳性率应≥95%。
高铁血红蛋白还原实验操作讲解
• 表1 高轶血红蛋白还原试验操作步骤
混合试剂 /ml
生理盐水 /ml
0.18mol/l 亚硝酸钠,0.28mol/l 葡萄糖溶液
A 0.01
_
_
B _
0.01
_
C _
_
0.01
经调整的 0.1
0.1
0.1
全血/ml
实验仪器
• 抗凝管、紫外分光光度仪、离心机、试管、 恒温水浴箱。
实验步骤
• 1 将抗凝血以1000 r／min离心沉淀1 5 min，取出．调整血细胞与血浆比侧为1：l 后再混匀。
• 2 将0．18 mol／L 亚硝酸钠一0．28 mol ／L葡萄糖溶液与0．4 mmol／L亚甲基蓝 溶液等量混合．形成混合试剂
思考题
1.根据上述患儿的临床表现和实验室检查， 初步判断患儿是何种疾病？（必答）
面色苍白——贫血 伴血尿——血红蛋白尿 恶心、呕吐——说明有溶血性贫血 尿呈酱油色——蚕豆病典型体征 姐姐有过类似情况——符合蚕豆病具有遗传性 这一特点
相关知识
蚕豆病是由于遗传性红细胞六磷酸 葡萄糖脱氢酶(G6PD酶)缺乏者进食 蚕豆后，随后发生的急性溶血性疾 病。通过性联不全显性遗传，G-6PD基因在X染色体上，病人大多为 男性，男女之比约为7∶1，在生吃 蚕豆后数小时至数日（1～3天）内 突然发热、头晕、烦躁、恶心，尿 呈酱油样或葡萄酒色，一般发作2～ 6天后能自行恢复，但重者若不及时 抢救，会因循环衰竭和实验室
检查结果。（必答）
蚕豆病
遗传性
葡萄糖-6磷-酸脱氢酶
急性溶血性贫血
1，G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以 维持还原型谷胱甘肽（GSH）的还原性（抗 氧化作用），在遇到蚕豆中某种因子后更诱 发了红细胞膜被氧化，红细胞膜上的磷脂分 子中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质， 损害细胞膜发生溶血。 故临床表现为黄疸，精神萎靡，低热。溶血 严重发生心力衰竭，造成食欲不振、恶心、 呕吐 这些临床症状，心衰最典型的症状是程 度不同的呼吸困难，所以病人呼吸急促。
实验三血红蛋白(Hb)及全血尿素氮
实验三血红蛋白（Hb）及全血尿素氮的测定一、血红蛋白的测定（氰化高铁血红蛋白法）血红蛋白（Hb）是一种结合色蛋白，色素部分是亚铁血红素，蛋白质部分是珠蛋白。
1分子的Hb是由4分子的亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。
Hb的主要生理功能是：1、运输氧气（O2）和二氧化碳（CO2），2、缓冲作用。
每分子的Hb可结合4分子的氧气，在标准的情况下（0℃，1个大气压），每克Hb能结合1.39毫升氧气。
HbO2比Hb具有较强的酸性，例如，在红细胞中，1毫摩尔的HbO2能产生1.88毫克当量的氢离子（H+），而1毫摩尔的Hb只能产生1.28毫克当量的H+。
因此，在组织中，每放出1毫摩尔O2（体积22.4毫升），就能多结合0.60毫克当量的。
因而Hb在调解体内酸碱平衡也有一定的作用。
所以，在运动训练和比赛中，Hb不仅能为组织提供氧气，促进物质的有氧代谢和带走CO2，而且也能起中和酸性的作用。
调查研究认为：正常人与运动员Hb含量没有明显差异。
故Hb的正常值男性为120-160克/升；女性110-150克/升。
贫血仍采用临床标准，即成年男性低于120克/升；成年女性低于105克/升；14岁以下的少年、儿童，不论男女，均以低于120克/升作为贫血标准。
Hb在运动训练的不同阶段，其含量不完全相同，这与运动员的机能状态、训练水平及遗传因素等关系密切。
因此，系统测试Hb的含量，对于评定运动员的机能状态和运动员选材等具有重要的意义。
（一）实验目的1、学习血红蛋白的生物学功能及在运动训练中的作用2、学习超微量血红蛋白的测定方法及原理，熟练掌握试管、相关仪器的操作技能（二）实验原理Hb被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰离子（CN-）结合成氰化高铁血红蛋白（HiCN），它在540nm有一吸收峰，测定其光密度，与标准血红蛋白进行比较，而得到Hb的含量。
（三）实验试剂和仪器1、试剂：（1）HiCN 稀释液：称取高铁氰化钾[K 3Fe(CN)6]200毫克，氰化钾（KCN ）50毫克，磷酸二氢钾（KH 2PO 4）140毫克，加蒸馏水稀释至1升。
血浆游离血红蛋白测定试剂盒（比色法）产品技术要求ruierda
血浆游离血红蛋白测定试剂盒（比色法）产品技术要求ruierda血浆游离血红蛋白测定试剂盒（比色法）适用范围：该试剂用于定量测定人血浆中游离血红蛋白的含量。
1. 产品型号/规格及其划分说明1.1试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml ×12. 性能指标1、试剂空白试剂空白吸光度值≤0.18。
2、线性区间测量范围[0.025，0.400] g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。
3、准确度回收率90%～110%4、分析灵敏度血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。
5、精密度a）重复性变异系数≤10%。
b）批间差连续三批血浆游离血红蛋白试剂盒测定同份血浆样本，其测定值的批间差≤10%。
【包装规格】试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml×1【主要组成成分】R1：TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/LR2：4-氨基安替比林 5mmol/LR3：过氧化氢3.0%【产品性能指标】1. 试剂空白吸光度值≤0.18。
2. 线性区间测量范围[0.025，0.400 ]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。
3. 重复性：变异系数≤10%。
4. 准确度：4.1 型式检验：回收率90%～110%4.2 出厂检验：检测控质控品，结果在靶值±2SD范围内。
5. 灵敏度：血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。
”变更为“产品技术要求1. 产品型号/ 规格及其划分说明1.1 试剂 1（R1）：100ml×1，试剂 2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml ×1校准品：2ml×1（选配）；质控品：2ml×1（选配）1.2 组成成份：试剂 1（R1） TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/L试剂 2（R2） 4-氨基安替比林 5mmol/L试剂 3（R3）过氧化氢 3.0%校准品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白 0.100g/L（目标浓度）质控品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白0.146 g -0.236g/L 。
血红蛋白测定实验2
实验名称血红蛋白测定_-实验目的掌握间接比色测定血红蛋白值的方法。
实验内容及原理沙里比色法是用稀盐酸加入血液中，使血红蛋白变成不易变色的棕褐色高铁血红蛋白，则可以与一标准色相比，从而测出其含量。
实验仪器血红蛋白计、采血针、蒸馏水、 95%酒精、乙醚、75%酒精、棉球、0.1mol·L -1 HCl、血红蛋白稀释放液、铁氰化钾等。
实验步骤（１）用采血针在无名指端采血。
用干棉花拭去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用血红蛋白吸管吸至20μL刻度处。
仔细将吸管尖端外面的血液拭去。
（２）将吸管中血液轻轻地加入到测定管中盐酸的底部，并把上层清澈的盐酸溶液回吸几次，使吸管内的血液完全洗净。
取出吸管后轻轻摇动比色管，使血液与盐酸充分混合。
静置10min，使作用完全，充分形成棕色的高铁血红蛋白。
（３）用滴管将蒸馏水一滴一滴地加入测定管内。
每加一滴蒸馏水，即用玻璃校友会搅动混匀，并观察管内的颜色，直到管内溶液色度和标准比色架上标准色玻璃的色度相等为止。
读出管内液面所在的刻度，即每100mL血液中所含血红蛋白的克数。
实验数据分析我国成人Hb正常值男：120~160g·L -1 ，女：110~150g·L-- -1 。
男低于120 g·L -1 和女低于110 g·L -1 时诊断为贫血，并出现倦乏、无力、头晕等各种症状。
一般人与运动员都以此为标准。
常居高原者血红蛋白含量偏高。
实验注意事项采血针应一人一根针，严防交叉感染。
思考题报告同组同学的血红蛋白测定值，并解释男女之间差异的原因。
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北京索莱宝科技有限公司
氰化高铁血红蛋白测试液说明书
货号：H7990
规格：40T/38S
产品内容：
Hb稀释液贮备液：1mL×1支，为浓缩100倍贮备试剂。
4℃保存6个月。
试剂配制方法：Hb稀释液贮备液临用时用双蒸水1:99稀释，配成Hb稀释液应用液（即1mL加双蒸水至100mL），充分混匀，4℃保存。
操作步骤：
空白管测定管双蒸水（mL）0.01
待测样本（全血或溶血液）（mL）0.01 Hb稀释液应用液（mL） 2.5 2.5
充分混匀，静置5分钟，波长540nm，光径1cm，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
注：或取稀释应用液2.5mL加全血10μL，回洗三次，混匀后静置5分钟，双蒸水或稀释应用液调零，540nm，1cm光径比色杯比色，测定各管吸光度值（A）。
计算公式：
血红蛋白含（g/L）=（测定OD-空白OD）×367.7
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