柱层析分离芦丁与槲皮素
槐花米中芦丁的鉴定
实验五 槐花米中芦丁的鉴定
一、实验目的
• 掌握硅胶薄层层析鉴定鼠李糖和葡 萄糖的方法。
• 掌握芦丁和槲皮素的化学检识方法。
二．实验原理
• 1.根据鼠李糖和葡萄糖在硅胶板上 的分配系数不同达到分离的目的。
• 2.根据芦丁和槲皮素的理化性质来 检识芦丁液的硅胶薄层层析 1. 硅胶板的活化；
• 2. 配制展开剂，正丁醇：醋酸：水＝ • 4：1： 5 • 3. 将展开剂倒入层析缸中，展开缸中展开
剂的高度4mm左右。 • 4. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm；
（一）糖液的硅胶薄层层析
• 5. 点样（点样顺序为：糖液、鼠李糖、葡 萄糖），点样一般为圆点，点样直径一般 不大于2mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
• 6. 将硅胶板放入展开缸的展开剂中，浸入 展开剂的深度为距圆点5mm为宜，一般展距 为8cm，取出薄层板，晾干。
（一）糖液的硅胶薄层层析
7. 喷苯胺－邻苯二甲酸试剂，在105℃下 烘10min。 • 8. 实验结果见图1。
（二）芦丁、槲皮素及糖的化学检识
• 1. 浓硫酸和浓盐酸反应 • 取芦丁或槲皮素数毫克于比色瓷板上，
入少许镁粉，滴加数滴浓HCl，溶液由黄色渐变红 色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。
• 5.三氯化铝反应： • 取样品1mg溶于1ml乙醇中，加1%三氯化铁乙醇
液2-3滴，黄酮类呈鲜黄色。
6.醋酸镁反应
• 取样品乙醇液与醋酸镁试剂作纸上反映， 观察荧光。二氢黄酮，二氢黄酮醇类可显 天蓝色荧光，若有5-OH，色泽更明显。而 黄酮，黄酮醇和异黄酮类等显黄色—橙 色—褐色荧光。
分别加浓硫酸或浓盐酸1滴，注意呈色变化， 研磨后溶解成橙色溶液，加较多量的水稀 释后转为浅黄色，析出黄色沉淀。
槲皮素的提取分离及结构鉴定
冷凝水
槐米粗粉
甲醇
纯度检测
测熔点：取槲皮素精品少量，用熔点测定仪测其 熔点，观察熔距的大小，在0.5～2℃为纯品 （m.p.313—314℃ ） 薄层色谱法：硅胶G 板，用甲苯-醋酸乙酯-甲酸 （5:4:1）展开；3%三氯化铝乙醇液检识，紫外灯 （365nm）观察，经展开，显色仅显示槲皮素的斑点
槲皮素的结构鉴定
•熔点：取少量槲皮素纯品置于干净的载玻片上，盖 上盖玻片，用熔点仪测定槲皮素的熔点，槲皮素的熔 点：310～314℃ •理化：紫外灯下显兰色荧光，加AlCl3乙醇溶液萤光 变黄绿色，盐酸镁粉反应显红色，a-萘酚-浓硫酸反应 不显紫色。锆-枸橼酸反应：当加2%氯化锆甲醇液时 显黄色，再加2%,枸橼酸甲醇液用水稀释黄色不褪。 •紫外图谱：槲皮素在375nm和255nm有两个吸收峰， 375nm吸收带由肉桂酰生色团产生；250nm吸收带由 苯甲酰生色团产生。
具有较好的祛痰、止咳作用，并有 一定的平喘作用。此外还有降低血压、 增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管 脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加 冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支 气管炎。对冠心病及高血压患者也有 辅助治疗作用。抗肿瘤作用与抗血小 板聚集。
槐花为豆科槐属植 物槐的花或花蕾，开放 的花朵习称“槐花”， 花蕾习称“槐米”。全 国大部分地区均产。槐 米呈卵形或椭圆形，长 2～6mm,直径约2mm,花 萼下部有数条纵纹，萼 的上方为黄白色未开放 的花瓣。花梗细小。体 轻，手捻即碎。
黄酮类（芦丁等）
三萜皂苷类（赤豆皂苷Ⅰ等）
其他（月桂酸等）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 药理作用
凝血 止血
抗 炎
解痉 抗溃 疡
强 心
槐米中含量最多的有效成分是芦丁（10%～28%）,芦丁 的含量也是衡量槐米质量的重要指标。
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式综合化学实验:芦丁的提取分离和鉴定芦丁简介:芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。
目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。
尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinoe，一种由葡萄糖glucoe与鼠李糖rhamnoe组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174，178℃，无结晶水时188，190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycoide，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。
目前国际上通用“苷”如“皂苷”，而过去习惯使用的中文名称“甙”目前已不再使用如“皂甙”现统称“皂苷”。
一、目的要求：1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检测等手段在苷类结构鉴定上的作用。
3、通过UV、IR、HNMR和MS图谱解析，了解光谱方法黄酮类化合物结构鉴定中的作用。
二、已知重要成分性质：1、芦丁（rutin）：分子式C27H30O16·3H2O，为浅黄色针状结晶物，mp174～178℃（含三分子水）；100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，115～117℃软化，214～215 ℃发泡分解。
槐米中芦丁及槲皮素提取分离及鉴定
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。
味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。
临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
[目的要求]1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2．掌握槲皮素的制备原理及操作。
3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理]芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
[实验内容]一、芦丁的提取分离及精制方法⑴500ml 饱和石灰水，加热，并维持pH8～9滤液 药渣10分钟，维持pH8～9pH 至4 ～51：200的比例加水，方法⑵ 利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。
HPLC测定槐花药材不同部位芦丁和槲皮素含量
HPLC测定槐花药材不同部位芦丁和槲皮素含量目的比较槐花不同部位（槐花、槐米及枝梗）中芦丁和槲皮素的含量。
方法采用高效液相色谱法进行测定，Ultimate XB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，0.45 ?m），水-甲醇为流动相梯度洗脱，流速1 mL/min，柱温35 ℃，检测波长256 nm，进样量20 ?L。
结果芦丁含量为槐米>槐花>枝梗；槲皮素含量整体较低，且槐花>槐米>枝梗。
结论槐花各部位芦丁含量较高，且含量差别不大。
槐花中的槲皮素含量明显高于槐米及其枝梗。
Abstract：Objective To compare rutin and quercetin content of different parts （flower，bud and pedicel）of Sophora Japonica L.. Methods HPLC method was used with Ultimate XB-C18 column （4.6 mm×250 mm，0.45 ?m），water and methanol as solvent system with gradient elution. The flow rate was 1 mL/min，column temperature was 35 ℃，detection wavelength was set at 256 nm，and injection volume was 20 ?L. Results The content of rutin was bud>flower>pedicel. The content of quercetin was low on the whole，and in sequence of flower>bud>pedicel. Conclusion In the different parts of Sophora Japonica L.，rutin content is high with little difference. Quercetin content of flower is significantly higher than in bud and pedicel.Key words：Sophora japonica；different parts；rutin；quercetin；comparison of content槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，前者称“槐花”，后者称“槐米”，具有凉血止血、清肝泻火的功效[1]。
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式纸层析法是一种简单、快速、经济、易于操作的色谱分离技术，广泛应用于化学分析和药物化学等领域。
在实际应用中，纸层析法常用于对化合物的分离和纯化，并通过染色、显色等方法进行定性和定量分析。
在鉴定芦丁和槲皮素中，可以使用纸层析法进行分离和鉴定。
实验步骤如下：1.实验物料准备：准备好检测芦丁和槲皮素的纸层析板、标准品芦丁和槲皮素、溶剂毛细管、显色剂等。
2.准备样品溶液：取一定量的待测样品，将其溶解在适量的溶剂中，使浓度适当，以便在纸层析板上均匀涂抹。
3.准备标准溶液：准备芦丁和槲皮素的标准溶液，浓度分别为C1和C24.样品处理：将纸层析板上端标出起点线，再标出标准品C1和C2的位置，然后用毛细管在起点上均匀涂抹样品溶液和标准溶液。
5.平行纸层析：将涂抹好样品和标准品的纸层析板，放入干燥的脱水培养器中，在温度适宜的条件下进行平行纸层析分离，待样品跑至标准品C1和C2处时，取出纸层析板进行干燥。
6.显色：将纸层析板放入含有显色剂的容器中，在室温下进行显色反应，待出现斑点时取出。
7.结果分析：观察纸层析板上的斑点形成情况和色谱图，对比标准品的色谱图，根据斑点位置和色谱图形态，可以初步判断出纸层析板上的斑点是否与标准品C1和C2相同或相似。
8.定量分析：根据纸层析板上斑点的形成情况和色谱图，可以根据标准品的浓度、质量和相对迁移率等参数，计算出样品中芦丁和槲皮素的含量。
需要注意的是，纸层析法是一种相对简单的色谱分离方法，但是对于复杂样品的分离和鉴定较为有限。
在实际应用中，需要对样品进行预处理、选用合适的纸层析板和显色剂，并进行合理的操作控制和数据分析。
同时，纸层析法也可以与其他色谱分离方法如薄层色谱、柱层析等相结合，提高分析的准确性和可靠性。
芦丁和槲皮素的几种快速鉴定方法
芦丁和槲皮素的几种快速鉴定方法
芦丁和槲皮素是一种由植物合成的特殊的有机物质，常被用于药材和保健食品中。
由于它们拥有许多药用价值，所以鉴别它们的真伪及其成份非常重要。
因此，本文主要介绍了芦丁和槲皮素的几种快速鉴定方法。
首先，对芦丁和槲皮素进行外观检查是一种简单有效的鉴定方法。
通常情况下，芦丁是一种灰白色的细粉末，有较强的香味，溶于多种溶剂，而槲皮素是一种粉红色的细粉末，有较强的清香。
通过比较，可以很容易发现芦丁和槲皮素的不同外观特征。
其次，熔点检测是一种常用的快速鉴定方法。
根据芦丁和槲皮素的不同性质，它们在不同的温度下熔解。
通常情况下，芦丁的熔点为184℃，槲皮素的熔点为162℃，因此可以通过测量其熔点，来区分
它们。
再次，元素分析是一种常见的快速鉴定方法。
芦丁和槲皮素的主要成分分别是碳、氢、氧、氮和硫，通过元素分析仪来测量他们的含量，就可以完成对两者的快速鉴定。
最后，可以使用电脑辅助X射线衍射仪（XRD）来进行氧化鉴定。
XRD可以扫描样品，检测出它们的晶体结构及晶体尺寸，使分析更加准确，从而可以更准确地鉴定芦丁和槲皮素。
总结而言，外观检查、熔点检测、元素分析和X射线衍射仪（XRD）等几种快速鉴定方法可以被使用来鉴别芦丁和槲皮素，从而达到区分它们的目的。
但是，为了准确确定芦丁和槲皮素的成分，还需要采用
更多的检验手段，比如超高效液相色谱分析、红外光谱光谱分析等。
辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷的含量分析
辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷的含量分析谷俐媛;陶俊宇;曾芸;韦英益;胡庭俊【摘要】The flavonoids of Polygonum hydropiper were separated and purified by means of macroporous adsorption resin, and its antioxidant activity was tested in previous research, which gained satisfied results. In order to obtain flavonoids of Polygonum hydropipe with stable quality, and provide evidence for quality control in industrial production, high performance liquid chromatography for determination of total flavonoids in Polygonum hydropiper was used with rutin, quercetin and quercitrin as reference substance. The results showed that the contents of rutin, quercetin and quercitrin from flavonoids ethyl acetate ( FEA) in Polygonum hydropipe were 281. 97, 160.98, 83. 31 mg/g respectively; The contents of rutin, quercetin and quercitrin of flavonoids n-butanol ( FNB) in polygonum hydropiper were 150. 33, 147. 51, 73. 82 mg/g respectively. The method demonstrated advantage of simply, accuraty and sensitivity, and successfully applied to the analysis of rutin, quercetin and quercitrin content in flavonoids from Polygonum hydropipe.%为保障辣蓼黄酮工业化生产中的质量控制,建立辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷含量测定高效液相色谱法.结果表明,运用高效液相色谱法测定辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)中芦丁、槲皮苷与槲皮素的含量分别为281.97、160.98、83.31 mg/g,辣蓼黄酮正丁醇部分(FNB)中芦丁、槲皮苷与槲皮素的含量分别为150.33、147.51、73.82 mg/g.该方法简单、准确、灵敏、重复性好,可作为辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷含量分析的参考方法.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2017(051)010【总页数】7页(P39-45)【关键词】辣蓼;黄酮;高效液相色谱;含量分析【作者】谷俐媛;陶俊宇;曾芸;韦英益;胡庭俊【作者单位】广西大学动物科学技术学院,南宁530005;广西医科大学基础医学院,南宁530021;广西大学动物科学技术学院,南宁530005;广西大学动物科学技术学院,南宁530005;广西大学动物科学技术学院,南宁530005【正文语种】中文【中图分类】S853.7辣蓼，味辛、温，具有祛风利湿，散瘀止痛，解毒消肿，杀虫止痒之功效[1]。
芦丁的提取分离和鉴别
芦丁的提取分离和鉴别槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾。
味苦性凉，入肝、大肠经。
具有清热凉血、止血的功效，常用于治疗便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血和赤血下痢等，常炒炭应用。
槐花米主要化学成分为芦丁（芸香甙），具有维生素P样作用，可降低毛细血管脆性、调解其渗透性。
临床用于防治高血压脑病、视网膜出血和慢性气管炎等。
芦丁羟基化衍生物曲克芦丁能抑制血小板聚集，防止血栓形成的作用，同时能对抗内源性血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低其脆性，防止水肿，对急性缺血性脑损伤有显著保护作用，临床用作抗血小板药物。
一、实验目的：1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法；2．掌握黄酮类成分的主要性质及鉴别方法。
二、仪器与试药（一）仪器SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（250mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药槐花米粗粉硼砂氧化钙乙醇盐酸浓硫酸硅胶 CMC-Na 镁粉α-萘酚甲醇乙酸乙酯脱脂棉三氯化铝试液芦丁和槲皮素对照品甲酸丙酮三、主要成分的结构与性质：*皂苷（Saponin ），粗品为白色粉末，mp 210～220℃，易溶于吡啶，能溶于200倍的甲醇中，酸水解得上述两种苷元及糖。
糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
R=H 槲皮素R=–glu –rha 芦丁白桦脂醇 槐花二醇四、实验原理：1．芦丁分子结构中含有酚羟基，具有弱酸性，能与碱反应生成盐而溶于水，此盐加酸酸化，又析出芦丁，利用此性质进行提取。
并可利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差悬殊，用水重结晶。
2．芦丁在酸性溶液中可被水解，生成槲皮素和糖。
五、实验内容OOROOH OHOH O H OH CH 2OHOH OH（一）芦丁的提取分离和纯化60-70℃用浓盐酸调pH3-4[注3]，滤液（弃去）1:200的溶解度加蒸滤液冷却、静置、析晶，过滤 芦丁精品（60-70℃干燥，称重）注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基的作用，使其不与Ca 2+络合，生成钙盐沉淀，使提取收率下降。
天然药物化学实验报告(槲皮素的提取与鉴别)
17 玻璃漏斗
18
研钵
19 胶头滴管
20 薄层板
21 展开缸
22
紫外光谱 仪
23
熔点测定 仪
24 真空泵1个 1个 1个 1个 1个 1个
1个
1个 2条 1个 1个 1个 1个 1个 1张 1个 1套 1个 10个
1个
1台
1台
1台
1台
型号
IM-B2002
GG-17 1000ml GG-17 1000ml
（3）紫外光谱：槲皮素在 375nm 和 255nm 有两个吸收峰，分别属
(A
环)电子跃迁和
(B 环)电子跃迁，分别对应两个生色团组成：375nm
吸收带由肉桂酰生色团产生，为 I 带；250nm 吸收带由苯甲酰生色团产生， 为 II 带，将紫外光下的图谱与标准图谱对照； 实验记录:
八、结果与分析
（一）实验结果： 1、产率：实验所用槐米粗品300g,所得槲皮素晶体4.12g。 产率%=4.12g/300g*100%=1.373% 2、熔点：利用显微熔点测定仪测得最后结果如下： 理论熔点：313.7℃ 所测熔点：312.9℃~314.0℃ 3、薄层色谱：利用薄层色谱法鉴定实验所得产品的纯度如下图：
2、由产量和产率知，我们所得的槲皮素产率偏低，由于浸泡液中基本没有 再析出结晶，而且槲皮素粗品不少，所以产率低的原因是在槲皮素重结晶的过程 中，我们使用大烧杯，使许多产物粘烧杯壁上，造成大量损失。
3、和另外两组相比，我们的的产品纯度更好一些，他们采用的是加入氢氧 化钠提取，而我们直接采用的蒸煮法，所以碱提取会影响产品的纯度； 实验记录：第一天，领取药材以及实验仪器；
第二天，药材粉碎及其蒸煮三次，过滤，滤液静置； 第三天，抽滤，滤液装入饮料瓶，滤渣放入烧杯，烧杯放入烘箱烘干，
芦丁和槲皮素的化学检识 (2)
间延长，逐渐衰减
5-20
320-330nm 有吸收，成 苷后消失
在长波一侧 有明显的肩 峰
两峰强度基本相同，具体位置 与母核上电负性取代基(-OH, O多C，H越3)长有移关 ， -OH, -OCH3 越
有4’-OH，无3-OH 有3-OH，无4’- OH 有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰减 更快） 7-OH
（4） 根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外 光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟
基的取代情况。
带II(240285nm)（苯 甲酰系统）
250-285
245-270 270-295
220-270
带I(300400nm) 桂皮酰系统 304-350
328-357
352-385
300-400
影响不大
查耳酮2’-OH 使带I红移的
影响最大
加入诊断试剂后引起的位移及结构测定
加入试剂
带II
带I
说明
样品+甲醇 （黄酮类及 黄酮醇类）
+NaOMe
+NaOAc (未熔融)
250-285 304-385
A环有OH ， 红 移小， 无意义
40-60nm （不变或 增强） 50-60nm （下降）
带 I ， II 随 加 NaOMe 时
THANKS FOR YOUR ATTENTION! !
（3）
HO
O
OH O
OH HO
OH
AlCl3
O
OO Al3+
O Al3+
O HO
O
HCl/H2O
OO Al3+
OH OH
形成络合物的能力： 黄酮醇3-OH >黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）> 邻二酚羟基 > 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合 ； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。
芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定-2022年学习资料
思考题及记录-思考题：-1芦丁和槲皮素用不同展开剂系统展层将出现什么结果？为什么？-2芦丁和槲皮素聚酰胺薄 色谱将出现什么结果？为什么？-记录：-1芦丁和槲皮素的纸色谱、聚酰胺薄层色谱结果。-2糖的检出纸色谱结果。 1位移测定的结果-2测定克分子吸收系数、在吸收峰前后20m波长范围内，依次测定波-长和吸收值，用方格纸作图 精确的测出吸收峰的波长和吸收值，记-录测定结果。
四、槲皮素的降解-取槲皮素50mg,置于圆底烧瓶中，加水5m1,乙醇6ml,-KOH2g,置水浴上加热回流 0小时，蒸去乙醇，加水50m1溶-解，用浓盐酸酸化至pH2~3,用乙醚萃取三次，合并乙-醚液，回收乙谜，供 层层析点伴用。-五、槲皮素降解产物的薄层色谱-硅胶CMC-Na薄层-对照品：原儿茶酸Protocatech ic acid-间苯三酚Phloroglucinol-展开剂：氯仿-丙酮-醋酸8：20.5-显色剂：三氧化 试剂
二.纸色谱及薄层色谱鉴别-1.纸色谱：-新化一号层析滤纸-样品：自制芦丁、槲皮素-对照品：芦丁、槲皮素-展 剂：1正丁醇-醋酸-水4：1：5上层或4：1：1-2-25%醋酸水溶液-3》-85%醋酸水溶液-显色：1见光下观察，再在紫外光下观察-经氨气后再观察-喷三氧化铝试剂后再观察
2.芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定：-新化一号层析滤纸-样品：自制芦丁、槲皮素-对照品：芦丁、槲皮素-展 剂：乙醇-水7：3-显色：1可见光下观察，再在紫外光下观察-2经氨气后再观察-3喷三氧化铝试剂后再观察
3.糖的检出一纸色谱析法：-取上述滤除槲皮素时保留的水解滤液20ml加BaOH2-的细粉（约2.6克）中和 PH7。滤除生成的BaSO4沉淀-可用滑石粉助滤。滤液浓缩至约1m1。供纸层析点样-用。-展开剂-正丁醇酸-水4：1：5上层或4：1：1-对照品-葡萄糖、水解液鼠李糖水溶液-显色剂-苯胺邻苯二甲酸盐试剂喷后，1 5℃烘十分-钟。显棕色或红色斑点：
槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定
二、实验目的
1. 学习黄酮类化合物的提取分离方法。 2. 学习干柱色谱的原理、特点及实验操作。 3. 学习硅胶薄层色谱、聚酰胺薄层色谱、纸层色谱的原理、特点及实验操作，
并应用薄层色谱法对已知化合物进行鉴定。 4. 学习苷类成分的一般鉴定程序。
三、实验操作
（一）总黄酮的提取 称取槐花米15 g，在乳钵中研碎，放入烧杯（500 ml）中，加入250 ml
K3[Fe(CN)6]苯胺-联苯
二甲酸 芦丁标准品
槲皮素标准品 葡萄糖标准品 鼠李糖标准品
参考文献：
（一）主要成分的结构及性质
槐花系豆科植物 Sophora japonica L.的干燥花蕾。其主要有效成分为芦丁，
芦丁在槐花花蕾中含量高，《药典》规定槐花中芦丁含量不得少于20.0％。其结
构为槲皮素-3-O-芸香糖苷。
（二）基本原理
芦丁分子中有较多的酚羟基，有弱酸性，可与碱成盐而溶于水中，加酸酸化后可
沉淀析出，因而用碱溶酸沉法提取芦丁。
芦丁的精制是利操作步骤
１．芦丁的提取
称取槐花粗粉，置500ml 烧杯中，加入0.4％硼砂沸水溶液200ml，在搅拌下加
入石灰乳，调至 pH8～9,加热微沸20分钟（注意保持 pH8～9），并随时补充蒸发
淡 易溶于热吡啶、热甲醇，溶于热乙醇。热水中溶解度0.55%，
芦丁的提取与鉴定以及芦丁和槲皮素的柱色谱分离道
实验五芦丁的提取与鉴定以及芦丁和槲皮素的柱色谱分离芦丁Rutin又称芸香苷Rutoside是广泛存在于植物界的黄酮类化合物。
其中以槐花米、荞麦叶、桉树叶中含量较高均可作为提取芦丁的原料。
本实验以槐米为提取原料。
槐米为豆科植物槐树Sophora japonica L.的末开放花蕾其中芦丁含量高达23.5槐花开放后降至13.0。
槐米的主要化学成分为芦丁此外还含有槲皮素、白桦脂醇、槐二醇、三萜皂苷以及槐花米甲、乙、丙素等。
芦丁具有多方面的生理活性如抗炎、维生素P样作用、抗病毒、抑制醛糖还原酶作用等。
临床上用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、急性出血性肾炎等。
其衍生物三羟乙芸香苷troxerutin即维脑路通用以治疗脑血管病、视网膜水肿及出血。
一、目的和要求1、通过碱溶酸沉、水重结晶等方法要求得到纯品芦丁。
2、通过芦丁的水解制备其苷元槲皮素。
3、学习和掌握聚酰胺柱色谱法的原理和操作技术。
4、通过槲皮素的乙酰化反应要求得到纯品五乙酰化物。
二、主要成分结构和性质OOOROHOHOHOHRGlu-O-RhaRutinRHQuercetin 1、芦丁Rutin: 分子式C27H30O16.3H2O分子量664.51。
是黄酮苷类化合物为浅黄色粉末或极细的针状结晶水熔点176-178℃.无水芦丁熔点不恒定185-192℃成棕色215℃发泡分解. 溶解度:难溶于冷水1:8000略溶于沸水1:200冷乙醇1:300热乙醇1:30沸甲醇1:7易溶于吡啶和稀碱溶液中.微溶于丙酮、乙酸乙酯不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
芦丁分子中具有多个酚羟基显弱酸性易溶于碱液中酸化后又析出因此可用碱溶酸沉法来提取芦丁。
芦丁分子中含有邻二酚羟基在空气中易被光分解而变为暗褐色在碱性条件下更易被氧化分解硼酸盐能与邻二酚羟基结合从而达到保护的目的因此在用碱液加热提取芦丁时往往加入少量硼砂保护芦丁以减少其氧化分解。
2、槲皮素Quercetin: 分子式C15H10O7.2H2O分子量338.28。
中药化学题库大题
中药化学题库大题章节实验二试题：实验中芦丁和槲皮素的层析检识选用了何种担体？分离原理是什么？此种担体较常用的移动相是什么？为何选用AlCl3 作显色剂？写出槲皮素结构式。
【答案】1．聚酰胺2．原理是氢键吸附。
3．常用水—乙醇不同比例为移动相。
4 ．芦丁与槲皮素为黄酮类，且都有5-OH 、邻二酚羟基，槲皮素还有3-OH ，与AlCl3 反应可显黄绿色荧光。
编号：716 章节2.1 试题：简述中药化学成分划分概况。
（写出五种类型）题号868【答案】一．按物质基本类型：有无机成分、有机成分。
二．按化学结构母核或骨架：甙、黄酮、甾类、萜类、醌类等。
三．按酸碱性：酸性、中性、碱性成分。
四．按极性程度：亲脂性（非极性）、中等极性、亲水性（极性）。
五．有无活性：有效（有活性）成分、无效成分。
六．按物质代谢有一级代谢产物、二级代谢产物。
编号：718章节2.2 试题：某氯仿或乙醚中含有机酸、酚性成分、中性成分、碱性成分，如何用萃取法将它们分离。
可用流程表示。
编号：722章节4.3 试题：在羟基蒽醌中，羟基位置与酸性强弱有何关系？为什么？对碱的溶解性有何不同？题号874【答案】性OH酸性较强，a -OH酸性较弱。
1. 受羰基及p- n共轭效应的影响使B -OH酸性增强可溶于Na2CO3 ;2. 与羰基形成分子内氢键使a -OH酸性降低，不溶于Na2CO3，可溶于NaOH。
编号：723章节 4.6 试题：羟基蒽醌乙酰化时，乙酰化试剂有哪些种？欲保护a -OH，须用什么方法？为什么？题号875【答案】1 .有冰乙酸、醋酐、醋酐+硼酸、醋酐+硫酸、醋酐+吡啶。
2. 可用醋酐/ 硼酸作为乙酰化试剂。
3. 硼酸可与a -OH络合形成络合物，并且该络合物不稳定，加水可分解，恢复原结构。
编号：725章节 4.3 试题：羟基蒽醌的酸性与结构有什么关系？题号877【答案】1. 与位置及数目有关。
2 .a-OH的酸性小于B -OH ;3 .数目相同时：1 ）个a-OH时，1 , 8-二羟基酸性大于1 , 4或1 , 5-二羟基；2）1个a-OH、1个B-OH时，1 , 3-二羟基或1 , 6-二羟基酸性强；3）2个B-OH时，3 , 6-二羟基酸性最强、2 , 3-二羟基酸性则弱。
槐米中芦丁及槲皮素的提取实验策划
槐米中芦丁及槲皮素的提取、分离、鉴定及含量测定实验策划[实验背景]槐米为豆科植物槐树(Sophora japonicaL)的花蕾，具有清热、凉血、止血的功效。
现代药学研究表明，槐米中主要含有芦丁，槲皮素和粘液质等，其中芦丁是有效成分。
芦丁(Rutin)，又名芸香甙 (Rutio side)，属黄酮类化合物[1]，其化学名称为∶5，7，3，4'-四羟基一3一芸香糖黄酮，性状为黄色结晶粉末或无晶形粉末，有苦味，略溶于水，能溶于热水及乙醇。
芦丁具有维生素P样作用，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，临床上用于治疗毛细管脆性引起的出血症，有助于恢复毛细血管弹性，如治疗脑血管出血、高血压、视网膜出血、急性出血性肾炎等;芦丁还具有抗心肌缺氧、缺血、抗心律失常、降低血清胆固醇、抑制血小板集聚、抗溃疡、抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗衰老、抗辐射、抗病毒和增强免疫力等功能，是预防和治疗糖尿病、心绞痛、慢性心功能不全、高血脂和预防动脉硬化[2]、心机梗死、脑血栓等疾病的天然绿色药物。
因此，目前芦丁已被广泛用于医药、保健食品和化妆品中，具有很高的开发价值。
我国芦丁生产主要以槐米(槐花的花蕾)为原料进行提取。
[目的要求]1．通过芦丁的提取与精制掌握黄酮类化合物的不同提取方法及操作。
2．掌握槲皮素的制备原理及操作。
3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4．通过芦丁的结构检识，熟悉它的主要性质、检识方法和含量测定。
[实验内容]1、芦丁的提取方法：碱提取酸沉淀法1.1、原料与试剂槐米（100g），石灰水（硼砂缓冲液饱和），亚硫酸钠，盐酸，op-10，水。
1.2、仪器电子天平，量筒（1000mL），pH试纸，抽滤装置，真空干燥器，大烧杯等。
1.3、实验步骤a.称取槐米100g，加水800mL煮沸，用硼砂缓冲液饱和的石灰水调pH至8～9，加入1%亚硫酸钠作为抗氧剂，在90°C提取30min，过滤。
(整理)芦丁的提取分离和鉴定
综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定芦丁简介:芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。
目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。
尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophora japonica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。
槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。
有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。
而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycosides，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。
实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素
(1)硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用。实验证明，提取时加入硼砂，产品的质量会好些。
(2)石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但PH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物，影响产品的质量和产率。
其他成分理化性质：皂苷（saponin）粗品为白色粉末，m.p.210～220℃。易溶于吡啶。能溶于200倍的甲醇，酸水解后获得两种苷元（白桦酯醇、槐花二醇）及糖（糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸内酯）。白桦酯醇（betulin）无色针晶，m.p215～217℃,能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、三氯甲烷、苯等；难溶于石油醚。槐花二醇（Sophoradiol）无色针晶，m.p219～220℃或224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇，难溶于水。芦丁和槲皮素结构式如下所示。
（2）方法二（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加沸水200ml，用加热磁力搅拌器加热煮沸30min，趁热抽滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。
（3）方法三（醇提取法）取槐米20g，置于250ml圆底烧瓶中，加乙醇150ml加热回流1小时，趁热抽滤。滤渣再加乙醇150ml回流1小时，合并乙醇提取液，放冷，析出絮状沉淀，过滤，滤液浓缩至约50ml，放置过夜，滤液析出结晶。母液继续浓缩一半，放置又析出结晶，合并结晶。用乙醚30~50ml分次洗去脂溶性成分（油脂、叶绿素等），再用丙酮10ml洗涤一次，称重，计算得率。
4.薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁和槲皮素
(四)实验药材仪器与试剂
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三．实验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 聚酰胺5g 加水50ml 5g， 50ml， 1. 装柱 聚酰胺5g，加水50ml，搅 倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 注意保持液面1cm高度。） 1cm高度 注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g， 溶解 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 50%的乙醇冲洗 3. 洗脱 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 待两层析带之间的距离约1cm 1cm后 再用90% 90%的 待两层析带之间的距离约1cm后，再用90%的 乙醇冲洗。 乙醇冲洗。
二、实验原理
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 展开剂的极性较小（ 比例>50% >50%） 丁酮： 60： 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20： 洗脱先后顺序: 20：20; 洗脱先后顺序: • 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。 用正相色谱理论来解释。
三．实验操作步骤
• 4. 收集 用试管收集，每试管接收30 ml。 用试管收集，每试管接收30 ml。 • 5. 检测 分离结果用TLC检测。 分离结果用TLC检测。 TLC检测
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作 • 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1 配制展开剂，甲醇：丙酮： • 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂 将展开剂倒入展开缸中， 的高度4mm左右。 4mm左右 的高度4mm左右。 • 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； 画基线，基线距底边1.0 1.5cm； 1.0～ • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、 点样（点样顺序：试样1 试样2 芦丁、 槲皮素) 点样一般为圆点， 槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
四．体会与讨论
• 1. 画出聚酰胺薄膜层析鉴定芦丁和槲皮素 分析图
实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以 及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素 及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素 TLC
一 、实验目的
• 掌握用聚酰胺柱层析分离芦丁和槲皮素 的方法。 的方法。
二、实验原理
1. 槲皮素与芦丁的结构
OH HO O OH
OGlc OH O
Rha
芦丁
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作 • 5. 将点好样品的聚酰胺薄膜放入展开缸中 无展开剂的一侧预饱和15min 15min。 无展开剂的一侧预饱和15min。 • 6. 倾斜展开缸，使展开剂到入展开缸的另 倾斜展开缸， 一个槽中， 一个槽中，聚酰胺薄膜浸入展开剂的深度 为距圆点5 mm为宜 一般展距为8 cm,取出 为宜， 为距圆点5 mm为宜，一般展距为8 cm,取出 薄层板，晾干。 薄层板，晾干。 • 7. 喷1％的AlCl3显色。 显色。 • 8. 实验结果见图1。 实验结果见图1
二、实验原理
• 二）．黄酮苷元之间的比较： ）．黄酮苷元之间的比较 黄酮苷元之间的比较： • 用氢键吸附的原理来解释。 用氢键吸附的原理来解释。
二、实验原理
• 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统中， 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统中，洗 脱原理与RP 18的洗脱原理类似 因此， RP- 的洗脱原理类似， 脱原理与RP-18的洗脱原理类似，因此，芦 丁先从聚酰胺柱上洗脱出来， 丁先从聚酰胺柱上洗脱出来，槲皮素后从 聚酰胺柱上洗脱出来。 聚酰胺柱上洗脱出来。
二、实验原理
• 根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。 根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。 • 一）．比较黄酮苷 ）．比较黄酮苷 • 1. 展开剂的极性较大（水溶性溶剂所占比 展开剂的极性较大（ >50%） 含水醇或水：甲醇： 例>50%）时，如：含水醇或水：甲醇：丁 乙酰丙酮=65 15：15： =65： 酮：乙酰丙酮=65：15：15：5; 洗脱先后 顺序: 顺序: • 三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元 三糖苷>双糖苷>单糖苷> • 理论: 用反相色谱理论来解释。 理论: 用反相色谱理论来解释。