天然药物化学：实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
芦丁槲皮素的聚酰胺薄层层析
芦丁槲皮素的聚酰胺薄层层析1. 引言哎呀，今天我们聊聊一个听起来有点高大上的话题——芦丁槲皮素的聚酰胺薄层层析！听起来像是科学家们在实验室里搞什么高深莫测的事情，但其实，这个过程简单得让人意想不到。
芦丁槲皮素，这个名字是不是很复杂？简单来说，它是一种存在于很多植物里的天然化合物，常被用作保健品，效果还挺不错的。
今天就让我们一起揭开这个神秘面纱，看看它是如何被提取和分离的。
2. 芦丁槲皮素是什么？2.1 认识芦丁槲皮素首先，芦丁槲皮素其实是黄酮类化合物，存在于一些水果和蔬菜里，比如柑橘类、苹果和洋葱等。
它不仅能帮助我们抗氧化，还能增强血管的健康。
要说这东西跟健康的关系，那真是如鱼得水，简直是“绝配”啊！2.2 为什么要分离？那么，为什么我们要对它进行分离呢？大家都知道，化合物的“干货”可多着呢，但想要从复杂的植物中提取出芦丁槲皮素，就得用到一些手段。
通过聚酰胺薄层层析，我们可以把它从一大堆杂七杂八的物质中分离出来，确保我们得到的是真材实料，正宗的芦丁槲皮素。
就像在一堆沙子里找金子，得花点功夫。
3. 聚酰胺薄层层析3.1 这个过程怎么进行？接下来，咱们就要谈谈聚酰胺薄层层析的具体步骤了。
首先，得准备好样品。
把含有芦丁槲皮素的植物材料处理成粉末，然后溶解在适合的溶剂中。
嘿，这里就像是给植物洗澡，帮它们去掉一些不必要的“赘肉”。
然后，拿出聚酰胺薄层板，涂上一层薄薄的胶，准备接受“洗礼”。
把刚才准备好的样品点在板子上，接着把板子放进盛有移动相的容器里。
这里的“移动相”可以理解为溶剂的混合物，简直就像是一条小河，把芦丁槲皮素从板子的底部慢慢洗到顶部。
你能想象到那种画面吗？就像在看一场精彩的运动会，选手们一争高下，争着往前冲。
3.2 观察与分析当一切都完成后，等到溶剂上升到一定高度，就可以拿出板子进行观察了。
这时候，你会看到不同的成分根据极性和质量分开，形成了一道道漂亮的色带。
简直像是大自然为我们准备的艺术展览！通过观察这些色带的位置和颜色，我们就能分析出芦丁槲皮素的存在与否，甚至还可以评估它的纯度。
新试验一-芦丁的提取、分离与鉴定
实验一 芦丁的提取、精制与鉴定一、实验目的与要求l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，苷元和糖部分的鉴定方法。
R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素芦丁溶解度：冷水1：8000 热水1：200冷乙醇1：300 热乙醇1：30难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。
槲皮素溶解度：冷乙醇1：650 热乙醇1：60可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。
二、实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和精制；芸香苷属于苷类化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李糖。
芦丁和槲皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。
三、实验内容（一）提取分离和纯化l 、芦丁的提取：2、精制（重结晶）：3、芦丁的水解：OO OHOH OROH HO流程图如下：槐米（20g ）研碎，于500ml 烧杯中，加350，250ml 水煮沸15min,10min棉花过滤150ml ，1%H 2SO 4直火加热水解30min放置 1-1.5h ，抽滤精品芦丁（水浴浓缩至2ml ）(二)鉴定l 、化学检识取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml 使溶解(1)盐酸—镁粉反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加浓盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。
(2)Molish 反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml 摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml ，静置，观察二层溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。
(3)FeCL 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。
(4) AlCl 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式综合化学实验:芦丁的提取分离和鉴定芦丁简介:芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。
目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。
尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinoe，一种由葡萄糖glucoe与鼠李糖rhamnoe组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174，178℃，无结晶水时188，190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycoide，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。
目前国际上通用“苷”如“皂苷”，而过去习惯使用的中文名称“甙”目前已不再使用如“皂甙”现统称“皂苷”。
一、目的要求：1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检测等手段在苷类结构鉴定上的作用。
3、通过UV、IR、HNMR和MS图谱解析，了解光谱方法黄酮类化合物结构鉴定中的作用。
二、已知重要成分性质：1、芦丁（rutin）：分子式C27H30O16·3H2O，为浅黄色针状结晶物，mp174～178℃（含三分子水）；100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，115～117℃软化，214～215 ℃发泡分解。
天化试题1(含答案)
天化试题1 (含答案)试题、试卷纸总 12 页第 1 页 ( A )卷20 08 –20 09 学年第一学期考试方式: 开卷[ ] 闭卷[?] 课程名称: 天然药物化学使用班级:班级: 学号: 姓名:一、单选题(每题1分，一共30分)。
1. 挥发油的氯仿溶液中加入溴的氯仿溶液，如果产生紫色、蓝色或绿色反应，表明油中含有( )。
A. 薁类成分B. 羰基成分C. 酚类成分D. 不饱和化合物2. 要使有机酸根离子交换到树脂上，可选用( )A. 葡聚糖凝胶B. 大孔吸附树脂C. 阳离子交换树脂D. 阴离子交换树脂 3. 黄酮、黄酮醇类化合物的UV光谱中，若样品+AlCl与样品+AlCl/HCl的光谱无明显区33别，说明样品中含有( )化合物。
A. 无3-OHB. 无5-OHC. 无邻二酚OHD. 无3、5二OH4. 下面哪个可能为乙型强心苷内酯结构红外光谱的正常吸收( )-1 -1 A. 1820cm B. 1783cm-1 -1 C. 1720cm D. 1670cm5. 巴豆苷属于( )A(C-苷 B(O-苷C(N-苷 D(S-苷6. 具有升华性的化合物是( )A. 香豆素苷类B. 游离苯醌类C. 蒽苷类D. 三萜类7. 某中药提取液中含有蒽醌，宜用下列何种溶剂检识( )A. 碱液B. 盐酸/镁粉C. 醋酸铅D. 醋酐-浓硫酸试题、试卷纸总 12 页第 2 页 ( A )卷 8. 用分馏法分离下列化合物，馏出的先后顺序为( )OH4321A.、4-1-3-2B.2-1-3-4C.4-3-1-2D.1-3-2-4 9. Liebermann-Burchard反应所使用的试剂是( )A. 氯仿-浓硫酸B. 冰醋酸-乙酰氯C. 五氯化锑D. 醋酐-浓硫酸10. 黄酮母核结构中C环开环的是( )A.黄酮B.二氢黄酮C.异黄酮D.查耳酮1311. 螺甾烷醇的结构如下所示，其中C、C、C、C的C-NMR谱化学位移大小排列正3181922确的是( ) O18 A. C22,C3,C18,C19 22B. C22,C3,C19,C18 O19C. C3,C22,C18,C19D. C22,C19,C3,C18 312. 支配物理吸附过程的主要因素是( ) HOH A. 酸性强弱 B. 碱性强弱C. 极性强弱D. 浓度大小13. 在2-氨基糖苷、2-羟基糖苷和2-去氧糖苷中，最难发生酸水解的是( )。
芦丁槲皮素鉴定实验报告
一、实验目的1. 了解芦丁和槲皮素的理化性质。
2. 掌握芦丁和槲皮素的提取、分离与鉴定方法。
3. 熟悉光谱分析在有机化合物结构鉴定中的应用。
二、实验原理芦丁和槲皮素均为黄酮类化合物，具有多种生物活性。
芦丁是槐米中的一种主要活性成分，槲皮素则广泛存在于多种植物中。
本实验通过碱酸法提取芦丁和槲皮素，并利用光谱分析（紫外-可见光谱、红外光谱、核磁共振波谱）对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、芦丁标准品、槲皮素标准品、无水乙醇、浓盐酸、镁粉、10%萘酚溶液、浓硫酸、聚酰胺薄层板、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
2. 实验仪器：电子天平、恒温加热器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
四、实验步骤1. 芦丁和槲皮素的提取（1）将槐米粉末用无水乙醇回流提取，过滤，收集滤液。
（2）将滤液浓缩至一定体积，用热水溶解，冷却后用盐酸调节pH值至2～3。
（3）静置沉淀，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至近干。
（4）用少量无水乙醇溶解残渣，定容至一定体积，得到芦丁和槲皮素的提取液。
2. 芦丁和槲皮素的鉴定（1）紫外-可见光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用紫外-可见分光光度计测定其在200～400nm范围内的吸收光谱，与标准品进行比较。
（2）红外光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用红外光谱仪测定其红外光谱，与标准品进行比较。
（3）核磁共振波谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用核磁共振波谱仪测定其核磁共振波谱，与标准品进行比较。
3. 芦丁和槲皮素的分离（1）薄层色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，点样于聚酰胺薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（5:4:1）为展开剂进行薄层色谱分析，与标准品进行比较。
（2）高效液相色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，经适当处理后，用高效液相色谱仪测定其含量，与标准品进行比较。
五、实验结果与分析1. 紫外-可见光谱分析芦丁和槲皮素的紫外-可见光谱与标准品的吸收光谱基本一致，表明提取液中含有芦丁和槲皮素。
芦丁和槲皮素的化学检识
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实验步骤
• 芦丁和槲皮素的化学检识
(1)对不同强度碱液的溶解度试验：
芦丁
槲皮素
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实验步骤
(2)浓硫酸和浓盐酸反应： (3)Molish反应：
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实验步骤
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（3）
H O
O
O H O
O H
H O
O
O H
A lC l3
OO A l3+
O A l3+
O H O
O
H C l/H 2O
OO A l3+
O H O H
形成络合物的能力：
黄酮醇3-OH >黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）> 邻二酚羟基 > 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合 ； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。
芦丁的鉴别及含量测定
小组成员：陈丽、陈惠渝、 黄雄、李钰川
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实验目的
• 熟悉黄酮类化合物的化学检识的常用方法 • 掌握芦丁紫外吸收光谱测定的方法与原理 • 学习用紫外分光光度法测定芦丁提取物的含量
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实验原理
芦丁和槲皮素的化学检识
1.对不同强度碱液的溶解度试验 2.浓硫酸和浓盐酸反应 3.Molish反应 4.盐酸-镁粉试验 5.FeCl3反应 6.AlCl3反应
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式纸层析法是一种简单、快速、经济、易于操作的色谱分离技术，广泛应用于化学分析和药物化学等领域。
在实际应用中，纸层析法常用于对化合物的分离和纯化，并通过染色、显色等方法进行定性和定量分析。
在鉴定芦丁和槲皮素中，可以使用纸层析法进行分离和鉴定。
实验步骤如下：1.实验物料准备：准备好检测芦丁和槲皮素的纸层析板、标准品芦丁和槲皮素、溶剂毛细管、显色剂等。
2.准备样品溶液：取一定量的待测样品，将其溶解在适量的溶剂中，使浓度适当，以便在纸层析板上均匀涂抹。
3.准备标准溶液：准备芦丁和槲皮素的标准溶液，浓度分别为C1和C24.样品处理：将纸层析板上端标出起点线，再标出标准品C1和C2的位置，然后用毛细管在起点上均匀涂抹样品溶液和标准溶液。
5.平行纸层析：将涂抹好样品和标准品的纸层析板，放入干燥的脱水培养器中，在温度适宜的条件下进行平行纸层析分离，待样品跑至标准品C1和C2处时，取出纸层析板进行干燥。
6.显色：将纸层析板放入含有显色剂的容器中，在室温下进行显色反应，待出现斑点时取出。
7.结果分析：观察纸层析板上的斑点形成情况和色谱图，对比标准品的色谱图，根据斑点位置和色谱图形态，可以初步判断出纸层析板上的斑点是否与标准品C1和C2相同或相似。
8.定量分析：根据纸层析板上斑点的形成情况和色谱图，可以根据标准品的浓度、质量和相对迁移率等参数，计算出样品中芦丁和槲皮素的含量。
需要注意的是，纸层析法是一种相对简单的色谱分离方法，但是对于复杂样品的分离和鉴定较为有限。
在实际应用中，需要对样品进行预处理、选用合适的纸层析板和显色剂，并进行合理的操作控制和数据分析。
同时，纸层析法也可以与其他色谱分离方法如薄层色谱、柱层析等相结合，提高分析的准确性和可靠性。
柱层析分离芦丁与槲皮素
三．实验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 聚酰胺5g 加水50ml 5g， 50ml， 1. 装柱 聚酰胺5g，加水50ml，搅 倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 注意保持液面1cm高度。） 1cm高度 注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g， 溶解 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 50%的乙醇冲洗 3. 洗脱 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 待两层析带之间的距离约1cm 1cm后 再用90% 90%的 待两层析带之间的距离约1cm后，再用90%的 乙醇冲洗。 乙醇冲洗。
二、实验原理
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 展开剂的极性较小（ 比例>50% >50%） 丁酮： 60： 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20： 洗脱先后顺序: 20：20; 洗脱先后顺序: • 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。 用正相色谱理论来解释。
三．实验操作步骤
• 4. 收集 用试管收集，每试管接收30 ml。 用试管收集，每试管接收30 ml。 • 5. 检测 分离结果用TLC检测。 分离结果用TLC检测。 TLC检测
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作 • 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1 配制展开剂，甲醇：丙酮： • 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂 将展开剂倒入展开缸中， 的高度4mm左右。 4mm左右 的高度4mm左右。 • 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； 画基线，基线距底边1.0 1.5cm； 1.0～ • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、 点样（点样顺序：试样1 试样2 芦丁、 槲皮素) 点样一般为圆点， 槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
天然药物化学实验
目录中文摘要 (2)英文摘要 (2)文献综述 (2)材料方法 (3)结果 (4)讨论 (6)结论 (6)参考文献 (6)摘要目的：从槐花米中提取并精制芦丁，用特征反应及紫外鉴定；方法：碱提取-酸沉淀法提取芦丁，盐酸-镁粉反应、枸橼酸反应、Molish 反应及紫外进行鉴定；结果：成功从槐花米中提取出 1.3243g 芦丁粗品，精制后得0.6908g芦丁精品。
结论：碱提取-酸沉淀法能从槐花米中提取一定量芦丁。
AbstractObjective: To extract rutin from Pagodatree Flower and refined it. Identify it with characteristic responses and UV identification;Methods: Use alkaline extraction - acid precipitation to extract rutin, and hydrochloric acid - Mg reaction, ZrOCl2/citrate reaction, Molish reaction and UV are used to identiy it;Results: The extracted rutin crude from Pagodatree Flower is 1.3243g, refined rutin is 0.6908g.Conclusion:The alkaline extraction - acid precipitation did extract some rutin from Pagodatree Flower.文献综述槐花米是豆科植物槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾及花。
芦丁(Rutin)，又称芸香甙(Rutioside)，是由槲皮素C。
位上的羟基和芸香糖结合而形成的双糖甙，，其化学结构为5，7，3 ，4 ，一四羟基，3一芸香糖黄酮，对心血管系统的疾病有很好的预防和治疗作用[1]。
槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定
槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定实验名称：槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定实验目的：1）掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作，学会芦丁的精制与水解方法。
2）能运用化学法、色谱法鉴定芦丁。
实验器材：槐花粗粉石灰乳硼砂烧杯纱布蒸馏水抽滤装置盐酸硫酸三角烧杯镁粉α-萘酚硅胶ＧBa(OH)2 FeCl3K3[Fe(CN)6]苯胺-联苯二甲酸芦丁标准品槲皮素标准品葡萄糖标准品鼠李糖标准品参考文献：（一）主要成分的结构及性质槐花系豆科植物Sophora japonica L.的干燥花蕾。
其主要有效成分为芦丁，芦丁在槐花花蕾中含量高，《药典》规定槐花中芦丁含量不得少于20.0％。
其结构为槲皮素-3-O-芸香糖苷。
（二）基本原理芦丁分子中有较多的酚羟基，有弱酸性，可与碱成盐而溶于水中，加酸酸化后可沉淀析出，因而用碱溶酸沉法提取芦丁。
芦丁的精制是利用它在冷热水中的溶解差异进行的。
（三）操作步骤１．芦丁的提取称取槐花粗粉，置500ml烧杯中，加入0.4％硼砂沸水溶液200ml，在搅拌下加入石灰乳，调至pH8～9,加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发的水分，趁热用四层纱布滤过。
同样操作再提取一次，合并两次滤液。
滤液在60~70oC用浓HCl调至pH ３~４，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗２~３次，抽干，置空气中晾干，得芦丁粗品。
2．芦丁的精制称量粗品芦丁，按1:200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使芦丁全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，结晶置空气中晾干或60～70oC干燥，得精制芦丁，称重，计算收率。
3．芦丁的水解取芦丁，研细后置于250ml三角烧杯中，加入2%H2SO4溶液100ml，直火加热微沸约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15ml）重结晶得精制槲皮素。
实验三 芦丁、槲皮素及糖的检识
实验三 芦丁、槲皮素及糖的检识
一、实验目的：
1.掌握纸色谱、聚酰胺薄层色谱的操作技术；
2.了解黄酮类化合物和糖类的一般性质。
二、实验原理和步骤
1. 糖的纸色谱检识
糖溶液的制备：
水解母液（20ml
） 调至pH=7 玻璃漏斗过滤 滤液浓缩至2ml ，待用
2. 芦丁、槲皮素的薄层色谱检识
芦丁和槲皮素样品：各取精制芦丁和槲皮素3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，待用。
聚酰胺薄层色谱
吸附剂：聚酰胺预制板
展开剂：甲醇-水（8：2）
点样：标准芦丁、标准槲皮素、芦丁样品、槲皮素样品
显色剂：1%AlCl3的乙醇溶液或在UV365nm下观察荧光斑点位置
纸色谱
吸附剂：滤纸条
展开剂：BAW(4:1:5)
点样：标准芦丁、标准槲皮素、芦丁样品、槲皮素样品
显色剂：1%AlCl3的乙醇溶液或在UV365nm下观察荧光斑点位置
3. 糖类成分的检识反应（molish反应）
分别取制备的芦丁和槲皮素样品1ml，加入2-3滴10%α-萘酚溶液，摇匀，倾斜试管，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。
4.黄酮类化合物的检识反应
盐酸——镁粉反应（黄酮母核）
各取制备的芦丁和槲皮素样品1ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许（50mg）镁粉，注意观察颜色变化情况。
醋酸镁反应
各取制备的芦丁和槲皮素样品0.5ml，加等体积1%醋酸镁醇溶液，注意观察颜色变化情况。
（黄色荧光）。
芦丁的提取与鉴定以及芦丁和槲皮素的柱色谱分离道
实验五芦丁的提取与鉴定以及芦丁和槲皮素的柱色谱分离芦丁Rutin又称芸香苷Rutoside是广泛存在于植物界的黄酮类化合物。
其中以槐花米、荞麦叶、桉树叶中含量较高均可作为提取芦丁的原料。
本实验以槐米为提取原料。
槐米为豆科植物槐树Sophora japonica L.的末开放花蕾其中芦丁含量高达23.5槐花开放后降至13.0。
槐米的主要化学成分为芦丁此外还含有槲皮素、白桦脂醇、槐二醇、三萜皂苷以及槐花米甲、乙、丙素等。
芦丁具有多方面的生理活性如抗炎、维生素P样作用、抗病毒、抑制醛糖还原酶作用等。
临床上用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、急性出血性肾炎等。
其衍生物三羟乙芸香苷troxerutin即维脑路通用以治疗脑血管病、视网膜水肿及出血。
一、目的和要求1、通过碱溶酸沉、水重结晶等方法要求得到纯品芦丁。
2、通过芦丁的水解制备其苷元槲皮素。
3、学习和掌握聚酰胺柱色谱法的原理和操作技术。
4、通过槲皮素的乙酰化反应要求得到纯品五乙酰化物。
二、主要成分结构和性质OOOROHOHOHOHRGlu-O-RhaRutinRHQuercetin 1、芦丁Rutin: 分子式C27H30O16.3H2O分子量664.51。
是黄酮苷类化合物为浅黄色粉末或极细的针状结晶水熔点176-178℃.无水芦丁熔点不恒定185-192℃成棕色215℃发泡分解. 溶解度:难溶于冷水1:8000略溶于沸水1:200冷乙醇1:300热乙醇1:30沸甲醇1:7易溶于吡啶和稀碱溶液中.微溶于丙酮、乙酸乙酯不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
芦丁分子中具有多个酚羟基显弱酸性易溶于碱液中酸化后又析出因此可用碱溶酸沉法来提取芦丁。
芦丁分子中含有邻二酚羟基在空气中易被光分解而变为暗褐色在碱性条件下更易被氧化分解硼酸盐能与邻二酚羟基结合从而达到保护的目的因此在用碱液加热提取芦丁时往往加入少量硼砂保护芦丁以减少其氧化分解。
2、槲皮素Quercetin: 分子式C15H10O7.2H2O分子量338.28。
天然药物化学实验讲义
天然药物化学实验讲义天然药物化学实验讲义重庆医科⼤学药学院⽬录⼀、黄柏中⽣物碱的提取、分离和鉴别⼆、槐⽶中芦丁、槲⽪素的提取、分离与鉴别三、穿⼼莲中穿⼼莲内酯的提取、分离与鉴别四、⼋⾓茴⾹挥发油的提取及鉴别五、⼤黄中蒽醌苷元的提取、分离与鉴别六、苦参⽣物碱的提取、分离与鉴别前⾔《天然药物化学实验》是⼀门实践性很强的课程，理论教学与实验教学是⼀个不可分割的完整体系。
通过实验课的学习使学⽣能印证并加深理解课堂讲授的理论知识，掌握由天然药物中提取、分离、精制有效成分，并对其进⾏鉴别的基本⽅法和技能，提⾼学⽣独⽴动⼿、观察分析、解决问题的能⼒，培养学⽣严谨的科学态度和良好的科研作风。
N +O O OMe OMe 实验⼀黄柏中⼩檗碱的提取、分离和鉴别【实验⽬的】1.掌握从黄柏中提取⼩檗碱的原理和⽅法。
2.掌握⼩檗碱的理化性质和鉴别⽅法3.熟TLC 的基本操作以及在中药有效成分提取分离中的应⽤。
【实验原理】 1.⼩檗碱(berberine)，含量为1.4%-4%(川黄柏含量较⾼)性状：黄⾊结晶，有5.5个结晶⽔，mp145℃。
溶解性：能缓缓溶于冷⽔中（1:20），微溶于冷⼄醇（1:100），易溶于热⽔和熱⼄醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，硝酸盐极难溶于⽔，盐酸盐微溶于冷⽔（1:500）但较易溶于沸⽔，硫酸盐和枸橼酸盐在⽔中溶解度较⼤（1:30），盐酸⼩檗碱为黄⾊结晶，含2分⼦结晶⽔，220℃时分解并转变为棕红⾊⼩檗红碱，285℃时完全熔融。
2.⼩檗碱为季铵碱，其游离型在⽔中溶解度较⼤，其盐酸盐在⽔中溶解度较⼩。
利⽤⼩檗碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，⾸先⽤⽯灰乳沉淀黏液质，⽤碱⽔提出⼩檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸⼩檗碱沉淀析出。
【实验仪器与试剂】1.1000、500、100、10ml 烧杯，10ml 试管，试管架，托盘天平，量筒，三⾓漏⽃，洗瓶，布⽒漏⽃，电炉，10×20cm 薄层板，10×20cm 薄层⾊谱缸，点样⽑细管，紫外灯（仪），玻棒，⽜⾻匙，纱布，脱脂棉。
天然药物化学实验
实验一：芦丁的提取及鉴定芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
芦丁具有维生素P样作用。
有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
O H OO H OO HO H glu rha芦丁OOH OO H OO HO H槲皮素OH一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
3、了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
二、实验内容1、芦丁的提取分离2、芦丁的鉴定三、实验仪器设备和材料清单1、实验材料；槐米1500 g2、实验试剂；甲醇、乙醇、HAc、KBr、HCl、Mg、H2SO4、Ca(OH)2、PbAC2、FeCl3、硼砂等。
3、实验仪器。
搅拌机，真空抽滤装置，分析天平，电子天平，紫外光谱，红外光谱仪，核磁共振仪，常用的玻璃仪器等。
四、实验要求1、要拿到以下2个化合物：芦丁、槲皮素。
2、能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。
并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。
3、要求学生能独立操作每一个实验步骤，了解和掌握其相关的原理，培养学生熟练的试验操作。
天然药物化学：实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
二、实验原理
• 二）．黄酮苷元之间的比较： • 用氢键吸附的原理来解释。
二、实验原理
• 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统中，洗 脱原理与RP-18的洗脱原理类似，因此，芦 丁先从聚酰胺柱上洗脱出来，槲皮素后从 聚酰胺柱上洗脱出来。
三．实验操作步骤
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 1. 装柱 聚酰胺5g，加水30 ml，搅
匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。
例>50%）时，如：含水醇或水：甲醇：丁 酮：乙酰丙酮=65：15：15：5; 洗脱先后 顺序: • 三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元 • 理论: 用反相色谱理论来解释。
二、实验原理
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20：20; 洗脱先后顺序:
的高度4mm左右。
• 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、
槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
• 5. 倾斜展开缸，使展开剂到入展开缸的另 一个槽中，聚酰胺薄膜浸入展开剂的深度 为距圆点5 mm为宜，一般展距为8 cm,取出 薄层板，晾干。
实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以 及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
天然药物化学实验报告(槲皮素的提取与鉴别)
称重；按 1:200 的比例加水，加热溶解，趁热滤过，静置，得芦丁精品，称重； 第四天，称取芦丁置于圆底烧瓶中，加 2%硫酸加热回流 1 小时，放
冷，静置，抽滤； 第五天，水洗沉淀两次，干燥，乙醇重结晶，称重； 第六天，铺薄层板，置于水平台面上风干 12 小时； 第七天，将薄层板放入烘箱中活化半个小时，活化完成后进行薄层
滤取结晶，合并所有结晶产区，获得芦丁粗品（15.4 克）；
（4）将芦丁粗品置于 500mL 烧杯中，加入 43mL 无水乙醇溶解，待溶解完全
后放置析晶，得到芦丁精品（12.3 克）；
（5）将芦丁精品放于 500 ml 圆底烧瓶中，加入 1000ml4%硫酸，微沸回流 120 分钟，酸水解获得米黄色针状结晶，即槲皮素粗品（10.7 克）； （6）将槲皮素粗品放置于安瓿瓶中，用无水乙醇重结晶获得槲皮素精品 （4.12 克）； 2、结构鉴定方法 （1）测熔点：取槲皮素少量，用熔点测定仪测其熔点，观察熔距的大小， 在 0.5~2℃为纯品（m.p.313~314℃）。 （2）薄层色谱法：硅胶 GF254 板，用甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1）展开， 紫外灯（365nm)观察，经展开，显色尽显示槲皮素的斑点。
六、自制或创造的实验条件：利用饮料瓶装取废液，以备不时之需；
七、实验流程及操作方法：
（一）实验流程流程：
槐米粗粉（150 克） 加水 800ml 加热，加氢氧化钠调 PH8-8.5，升温至 80℃， 加硼砂 3.2 克，搅拌加热，95℃保温 50 分钟，趁热过滤， 滤渣再如上提取一次，合并滤液。
滤液 加 10%盐酸调 PH4-5，放置过夜，抽滤。
槲皮素的提取及结构鉴定
天然药物化学设计实验开题报告题目：槲皮素提取及结构鉴定学生姓名：舒泉湧学号： 200804040125院（系）：生命科学与工程学院专业：制药工程指导教师：孔阳一．【文献综述】1．1研究意义我国北部、华南和西南地区等地区都产槐花，尤河北和江苏省产量最为丰富。
槐花中含有丰富的黄酮类化合物，其芦丁(nltin)为黄酮中的主要成分，含量为8—20％；槲皮素(quercetin)为芦丁的苷元。
芦丁和槲皮素具有抗炎作用、抗氧化作用、抗肿瘤作用、抗血小板聚集作用；对糖尿病的肾脏、胃肠粘膜、器官缺血损伤具有保护作用；同时还有抗忧郁、抗心胸肥大、降压等作用。
因此，对槐花中芦丁和槲皮素的提取分离研究具有非常重要的研究意义。
1．2研究现状1．2．1槐花性状与产地简介槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾；前者习称为“槐花”，后者习称为槐米。
落叶乔木，单数羽状复叶互生，长达25 cm，叶柄基部膨大，小叶7—15，卵状长圆形或卵状披针形，长2.55 cm，先端尖，基部圆形或阔楔形，全缘,上面绿色，下面伏生白色短毛。
小叶柄长2.5cm；托叶镰刀状，早落。
花瓣多数散落，完整花呈飞鸟状，花瓣5枚，黄色或淡棕色，皱缩，卷曲。
雄蕊淡黄色，须状，有时弯曲，子房膨大；质轻，气微，味微苦；花期为7—8月。
主产于我国北部、华南及西南地区；河北省产量较丰富，江苏主产于镇江、苏州、南京、徐州等地。
1．2．2槐花的化学成份及理化性质1．2．2．1槐花中的化学成份槐花中含赤豆皂甙（azukisaponin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ，大豆皂甙（soyasaponin）I、Ⅲ，槐花皂甙（kaikasaponin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。
还含黄酮类：槲皮素（quercetin），芸香甙（rutin），异鼠李素（isorhamnetin），异鼠李素-3-芸香糖甙（isorhamnetin-3-rutinoside），山奈酚-3-芸香糖（kaempferol-3-rutinoside）。
天然药化槐米中芦丁的提取分离鉴定及槲皮素的制备
芦丁又叫芸香苷，广泛存在于植物中。其中以槐花米和荞麦叶中含量最高，使用最多的 是槐花米。 槐花米为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的未开放花蕾。味苦性凉、具有清热凉血、 止血的功效。炒炭常用来治疗各种出血症，如肠风便血、痔血、尿血、崩漏下血等。 槐花米的主要成分为芦丁。 芦丁可降低毛细血管脆性和调节渗透性。 临床上用作毛细血 管脆性引起的出血症，并常作为高血压症的辅助治疗药， 一、实验目的与要求 1．掌握酸碱法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握化学鉴别实验、苷的水解及薄层检查等方法在苷类化合物鉴定中的作用。 3.了解 UV 在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 二、实验原理 芦丁（rutin）C27H30O16：浅黄色针状结晶 mp174~178℃（含三分子结晶水） ；188℃（无 结晶水） 。难溶于冷水，可溶于热水、热甲醇、冷甲醇、热乙醇、冷乙醇，不溶于乙醚、氯 仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液，酸化后析出。全水解得槲皮素和葡萄糖及鼠 李糖。 槲皮素（quercetin）C15H10O7﹒2H2O:黄色结晶,mp313~314℃（2 分子结晶水） 。316℃ （无水物） 。能溶于冷乙醇、易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙脂、冰醋酸、吡啶、丙酮 等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等。
残渣
滤液 在 60~70℃下浓盐酸调至 PH4~5，静置 1 小时， 抽滤，洗涤沉淀至中性。
滤液
沉淀（粗制芦丁） 将沉淀悬浮于 300ml 蒸馏水中，加热煮 沸 15 分钟趁热抽滤。
残渣
滤液 充分静置过滤，60~70℃下干燥。 芦丁（精制品）
2．芦丁的酸水解 称取精制品芦丁约 2g 研细，加 1%H2SO4150ml，投入 500ml 锥形瓶中，放沸石，直火沸 腾后，保持 2 小时，放冷后抽滤。
(整理)天然药物化学实验详解
《天然药物化学实验讲义》实验须知天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。
养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。
为此，提出下列实验须知：1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。
若发生事故应立即报告指导教师。
2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。
实验过程应养成及时记录的习惯。
凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师。
3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。
节约用水、用电、药用试剂。
严格药品用量。
5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。
实验一薄层板的制备、活度测定及应用一、目的要求1．掌握硅胶薄层板的制备及薄层层析的操作方法2．掌握硅胶薄层活度的测定方法3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分二、实验材料薄层层析用硅胶G，硅胶F，羧甲基纤维素钠，0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene），苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline），苯，微量点样管，10×20cm玻璃板20块，碾钵7套。
芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定
芦丁的鉴定
实验目的 实验内容 思考题
实验目的
掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷 元和糖部分的鉴定方法
实验内容
一、化学检识
取芦丁3~ 4mg，用无水乙醇5~ 6ml溶解，分成3份做以下试验。
（1）取上述溶液1~ 2ml，加2滴浓盐酸，摇匀，再酌加少许镁粉， 注意观察颜色变化情况 （2）取上述溶液1~ 2ml，加 2%ZrOCl2 的甲醇溶液，注意观察颜色变 化情况，再继续向试管中加入2%柠檬的甲醇溶液，并详细记录 颜色变化情况 （3）α -茶酚反应（Molishs Reacfion）
~ 3，用乙醚萃取三次，合并乙
醚液，回收乙醚，供薄层层析点伴用。
五、槲皮素降解产物的薄层色谱
硅胶-CMC-Na薄层 对照品：原儿茶酸（Protocatechuic acid） 间苯三酚（Phloroglucinol）。 展开剂：氯仿-丙酮-醋酸（8:2:0.5） 显色剂：三氧化铁试剂
六、紫外吸收光谱测定槲皮素
2 .芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定：
新化一号层析滤纸
样 品: 自制芦丁、槲皮素 对照品: 芦丁、槲皮素
展开剂: 乙醇-水（7:3）
显 色: （1）可见光下观察，再在紫外光下观察 （2）经氨气后再观察 （3）喷三氧化铝试剂后再观察
3 .糖的检出一纸色谱析法：
取上述滤除槲皮素时保留的水解滤液20ml加Ba(OH)2
取上述溶液1~ 2ml，然后加10%α -茶酚乙醇溶液，摇匀，沿
管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化பைடு நூலகம்
二．纸色谱及薄层色谱鉴别
1. 纸色谱：
新化一号层析滤纸 样 品: 自制芦丁、槲皮素 对照品: 芦丁、槲皮素 展开剂: (1) 正丁醇-醋酸-水（4:1:5上层或4:1:1） (2) 25%醋酸水溶液 (3) 85%醋酸水溶液 显 色: (1) 可见光下观察，再在紫外光下观察 (2) 经氨气后再观察 (3) 喷三氧化铝试剂后再观察
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二、实验原理
• 2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占 比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60： 20：20; 洗脱先后顺序:
• 极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。 • 用正相色谱理论来解释。
二、实验原理
• 二）．黄酮苷元之间的比较： • 用氢键吸附的原理来解释。
二、实验原理
• 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统中，洗 脱原理与RP-18的洗脱原理类似，因此，芦 丁先从聚酰胺柱上洗脱出来，槲皮素后从 聚酰胺柱上洗脱出来。
三．实验操作步骤
3. 洗脱 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗， 待两层析带之间的距离约1cm后，再用90%的 乙醇冲洗。
三．实验操作步骤
• 4. 收集 用试管收集，每试管接收10 ml。 • 5. 检测 分离结果用TLC检测。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
• 1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1 • 2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂
实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以 及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素
一 、实验目的
• 掌握用聚酰胺柱层析分离芦丁和槲皮素 的方法。
二、实验原理ຫໍສະໝຸດ 1. 槲皮素与芦丁的结构HO
O
OH OH
OH
OH
O
槲皮素
HO
O
OH OH
O Glc Rha
OH
O
芦丁
二、实验原理
• 根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。 • 一）．比较黄酮苷 • 1. 展开剂的极性较大（水溶性溶剂所占比
• 6. 喷1％的AlCl3显色。 • 7. 实验结果见图1。
四．体会与讨论
• 1. 画出聚酰胺薄膜层析鉴定芦丁和槲皮素 分析图
• （一） 柱层析分离芦丁和槲皮素 1. 装柱 聚酰胺5g，加水30 ml，搅
匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞， 让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。 注意保持液面1cm高度。）
三．实验操作步骤
• 2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇 2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽 甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。
的高度4mm左右。
• 3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm； • 4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、
槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不 大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。
（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的 试样进行聚酰胺薄膜层析操作
• 5. 倾斜展开缸，使展开剂到入展开缸的另 一个槽中，聚酰胺薄膜浸入展开剂的深度 为距圆点5 mm为宜，一般展距为8 cm,取出 薄层板，晾干。