基因定位常用方法36页PPT
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基因定位与克隆PPT课件
D4S406 117.06 2.33 1.91 1.45 0.95 0.39 2.33
D4S193 117.06 6.07 5.08 3.97 2.74 1.35 6.07
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2004年 定位与克隆角膜环状皮样瘤基因
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• 角膜环状皮样瘤是一种先天性角膜良性肿瘤，呈 常染色体显性遗传，以双侧眼球角膜缘处环形淡 黄色肿块为特征，可延伸到结膜，患者可出现视 力的改变如弱视、斜视和散光。
• 皮样瘤由外胚层包括角化的上皮、毛发、皮脂腺 和中胚层包括纤维组织、脂肪组织、血管组成
基因分布在24种染色体上，它们在染色体上的位置可通过两
种制图方法来表示：
1、物理图谱(physical map)，即确定基因之间的绝对物
理学距离，通常用Mb(百万碱基对)或Kb(千碱基对)来表示
2、遗传图谱(genetic map)，即确定基因之间的遗传学
距离，用cM(centimorgen分摩)表示。
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• 体细胞杂交基因定位示意图
Miller等运用体细胞杂交证明胸苷激酶（TK）位于人的17
号染色体，这是首例应用体细胞杂交法进行的基因定位。
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原位杂交法（FISH）
• 如果一个基因或基因的某一部分已经被克隆，则 可将该基因用同位素或荧光标记和染色体原位的 分子杂交，在染色体上恒定出现信号的区域即该 基因在染色体上的位置。同一染色体上的多个不 同的基因可用不同的荧光标记来鉴别他们在染色 体上的相对位置，运用这一方法在中期染色体上， 可区分两个相隔约2Mb的基因；在间期染色体上， 据称可鉴别仅相隔50kb的两个基因。
基因定位
第七章基因定位一、真核生物的基因定位1、确定基因所在的染色体2、确定基因的距离和位置二、原核生物的基因定位三、病毒、噬菌体的基因定位河南师范大学生命科学学院卢龙斗一、真核生物的基因定位1、确定基因所在的染色体1）单体定位法原理：利用假显性现象。
由于不存在显性基因而使隐性基因得以表现的现象A A ×a a A a有色显性无色隐性有色显性aA × a a A a有色显性无色隐性有色显性无色假显例如：玉米有色A无色a 粳性W糯性w 饱满S 凹陷s 玉米单体Ⅰ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅱ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅲ 有色×突变体无色有色：无色玉米单体Ⅳ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅴ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅵ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅶ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅷ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅸ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅹ 有色×突变体无色全有色玉米单体Ⅰ粳性×突变体糯性全粳性玉米单体Ⅱ粳性×突变体糯性全粳性玉米单体Ⅲ粳性×突变体糯性粳性：糯性玉米单体Ⅳ粳性×突变体糯性全粳性玉米单体Ⅴ粳性×突变体糯性全粳性玉米单体Ⅵ粳性×突变体糯性全粳性玉米单体Ⅶ粳性×突变体糯性全粳性玉米单体Ⅷ粳性×突变体糯性全粳性玉米单体Ⅸ粳性×突变体糯性全粳性玉米单体Ⅹ粳性×突变体糯性全粳性因此：基因A、W、S 都在3号染色体上。
2) 三体定位法原理：三体杂交后代的非3：1比值A A ×a a A a有色无色有色⊕A A A a a a有色有色无色3有色：1无色A A A × a a有色无色A A a A a有色有色⊕⊕35有色：1无色3有色：1无色总比例不逞3 ：1玉米的有色基因A 、粳性基因W 、饱满基因S 的定位三体Ⅰ有色×突变体无色三体有色3有1无三体Ⅱ有色×突变体无色三体有色3有1无三体Ⅲ有色×突变体无色三体有色非3：1三体Ⅳ有色×突变体无色三体有色3有1无三体Ⅴ有色×突变体无色三体有色3有1无三体Ⅹ有色×突变体无色三体有色3有1无同样方法把基因A 、W 、S 定位在3号染色体上…..…...…...…...⊕3) 体细胞杂交法原理：某种酶与染色体的线性关系人的成纤维细胞小鼠的体细胞A B C D E+ －－+ －－+ －+ －+ －－+ －+ + + －－－+ －+ －+ －－+ －－－－+ +甲乙丙丁1 2 3测定性状染色体2号甲丙乙1号4) 克隆基因定位法人体白蛋白基因mRNAHind Ⅲ酶切的HindⅢ酶切的人体细胞DNA 仓鼠细胞DNA cDNA6.8Kb 3.5Kb 放射性在6.8Kb带上在3.5Kb带上显示放射性显示放射性HindⅢ酶切人与仓鼠cDNA 卵巢杂种细胞DNA含有人的4号染色体6.8Kb 3.5Kb3.5Kb基因在4号染色体上基因不再4号染色体上5) 缺失法原理：根据某一性状与染色体的结构变化确定。
基因定位PPT课件
A BC
A1 B1 C1 A2 B2 C2
基因组学 Genomics
§4.1 基因的鉴定
§4.1.2 遗传分析
判断某一性状是否由主基因控制和受多少对基因控 制，首先需要对该性状作遗传分析。遗传分析的基本方 法是：
（1）选择具有相对性状的两个亲本杂交； （2）在F1中观察该性状属于完全显性，还是不完全 显性；
基因组学 Genomics
第四章 基因定位
基因组学 Genomics
§4 基因定位
§4.1 基因的鉴定 §4.2 主基因定位 §4.3 QTL定位 §4.4 分子标记辅助选择
基因组学 Genomics
§4 Mapping of genes
§4.1 基因的鉴定
基因定位（ Mapping of genes ）是指通过遗传作图的 方法，确定基因与遗传标记之间的关系。
（2）如果不知道要定位的基因与已定位的基因之间的 关系，但它们的表现型相同，则存在它们是同一个基因的 可能性，需要确定它们之间的关系。
基因组学 Genomics
§4 Mapping of genes
§4.2 主基因定位
基因定位通常指的是主基因的定位。而微效基因的 定位通常用专有名词QTL定位。
基因组学 Genomics
基因组学 Genomics
§4.2 主基因定位
§4.2.3 分子标记的分析
已定位标记的利用：
通过遗传图谱的构建，很多分子标记在染 色体上的位置已经确定，因此只要找到与基因 连锁的分子标记，就可以确定基因在染色体上 的位置。这类标记有RFLP标记和SSR标记等。
已定位标记的利用，通常是从现有的遗传 图谱中，按一定距离均匀选取分子标记。
基因组学 Genomics
基因定位常用的方法
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HAT选择系统： HAT选择系统： 选择系统
人的突变细胞株：缺乏HGPRT 人的突变细胞株：缺乏HGPRT酶 HGPRT酶 小鼠细胞株：缺乏TK TK酶 小鼠细胞株：缺乏TK酶 两者融合培养于HAT HAT培养基中 两者融合培养于HAT培养基中 HAT培养基： HAT培养基： 培养基 为次黄嘌呤， HGPRT的底物 的底物， DNA合成提 H为次黄嘌呤，是HGPRT的底物，为DNA合成提 供原料（核苷酸旁路合成原料） 供原料（核苷酸旁路合成原料） 可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP DNA合成 TMP合成受抑 A可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP合成受抑 制） 在胸苷激酶（TK） T在胸苷激酶（TK）的作用下生成胸腺嘧啶核 苷酸， DNA合成提供原料 苷酸，为DNA合成提供原料
1）概念： 概念： 基因定位的连锁分析是根据基因在染 色体上呈直线排列， 色体上呈直线排列，不同基因相互连锁成 连锁群的原理， 连锁群的原理，即应用被定位的基因与同 一染色体上另一基因或遗传标记相连锁的 特点进行定位。 特点进行定位。
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2）重组值（recombination fraction） fraction） 重组值（ 是基因定位时两个基因间遗传图距的量 即基因间的遗传距离。 度，即基因间的遗传距离。如果两个基因 间有1%的重组值，其遗传图的距离为1厘摩。 1%的重组值 间有1%的重组值，其遗传图的距离为1厘摩。 centimorgan，cM） （centimorgan，cM） 遗传标记（ marker） 3）遗传标记（genetic marker） 用连锁分析发法进行基因定位需要已知 的记忆内作为遗传标记， 的记忆内作为遗传标记，这些标记按孟德 尔方式遗传，标记位点应是多态的。 尔方式遗传，标记位点应是多态的。
HAT选择系统： HAT选择系统： 选择系统
人的突变细胞株：缺乏HGPRT 人的突变细胞株：缺乏HGPRT酶 HGPRT酶 小鼠细胞株：缺乏TK TK酶 小鼠细胞株：缺乏TK酶 两者融合培养于HAT HAT培养基中 两者融合培养于HAT培养基中 HAT培养基： HAT培养基： 培养基 为次黄嘌呤， HGPRT的底物 的底物， DNA合成提 H为次黄嘌呤，是HGPRT的底物，为DNA合成提 供原料（核苷酸旁路合成原料） 供原料（核苷酸旁路合成原料） 可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP DNA合成 TMP合成受抑 A可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP合成受抑 制） 在胸苷激酶（TK） T在胸苷激酶（TK）的作用下生成胸腺嘧啶核 苷酸， DNA合成提供原料 苷酸，为DNA合成提供原料
1）概念： 概念： 基因定位的连锁分析是根据基因在染 色体上呈直线排列， 色体上呈直线排列，不同基因相互连锁成 连锁群的原理， 连锁群的原理，即应用被定位的基因与同 一染色体上另一基因或遗传标记相连锁的 特点进行定位。 特点进行定位。
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2）重组值（recombination fraction） fraction） 重组值（ 是基因定位时两个基因间遗传图距的量 即基因间的遗传距离。 度，即基因间的遗传距离。如果两个基因 间有1%的重组值，其遗传图的距离为1厘摩。 1%的重组值 间有1%的重组值，其遗传图的距离为1厘摩。 centimorgan，cM） （centimorgan，cM） 遗传标记（ marker） 3）遗传标记（genetic marker） 用连锁分析发法进行基因定位需要已知 的记忆内作为遗传标记， 的记忆内作为遗传标记，这些标记按孟德 尔方式遗传，标记位点应是多态的。 尔方式遗传，标记位点应是多态的。
《基因定位》课件
CHAPTER 04
基因定位的挑战与未来发展
基因定位的挑战
技术限制
当前基因定位技术仍存在一定的局限性，如分辨率和灵敏度不够高 ，无法准确检测所有基因变异。
数据解读难度
基因定位产生的数据复杂且庞大，对专业知识和技术要求较高，解 读难度较大。
伦理和隐私保护
基因信息属于个人隐私敏感信息，如何合理合法地使用和保护基因数 据，避免侵犯个人隐私和权益，是基因定位面临的伦理挑战。
基因定位的未来发展方向
技术创新
01
随着生物技术的不断发展，未来基因定位技术将不断改进和完
善，提高分辨率、灵敏度和特异性。
数据解读能力提升
02
通过加强人才培养和技术研究，提高基因定位数据的解读能力
，为精准医疗和个性化治疗提供更可靠的支持。
应用领域拓展
03
基因定位技术的应用范围将进一步扩大，不仅局限于遗传性疾
基因定位方法
利用分子遗传学技术，通过家 系分析和关联分析等方法，确 定与疾病相关的基因变异位点 。
临床应用
通过基因检测，预测个体患病 风险，制定个性化的预防和治
疗方案。
研究案例二：农作物抗逆性的基因定位
总结词
通过基因定位技术，鉴定农作物中与 抗逆性相关的基因，提高农作物的抗 逆性，促进农业生产的发展。
CHAPTER 03
基因定位与疾病关联研究
单基因遗传病定位
单基因遗传病定位
通过遗传学手段确定导致 单基因遗传病的基因位置 和变异类型。
意义
有助于理解疾病的发病机 制，为疾病的早期诊断和 治疗提供依据。
技术
包括连锁分析、单倍型分 析和全基因组关联分析等 。
多基因遗传病定位
多基因遗传病定位
基因定位
有色显性 A
无色隐性 a
有色显性 A a 有色显性 a 无色假显
× a
有色显性
无色隐性
例如：玉米有色A无色a 粳性W糯性w 饱满S 凹陷s 例如：玉米有色A无色a 粳性W糯性w 饱满S 凹陷s 玉米单体Ⅰ 玉米单体Ⅰ 玉米单体Ⅱ 玉米单体Ⅱ 玉米单体Ⅲ 玉米单体Ⅲ 玉米单体Ⅳ 玉米单体Ⅳ 玉米单体 Ⅴ 玉米单体 Ⅵ 玉米单体 Ⅶ 玉米单体 Ⅷ 玉米单体 Ⅸ 玉米单体 Ⅹ 有色 有色 有色 有色 有色 有色 有色 有色 有色 有色 × 突变体无色 × 突变体无色 × 突变体无色 × 突变体无色 × 突变体无色 × 突变体无色 × 突变体无色 × 突变体无色 × 突变体无色 × 突变体无色 全有色 全有色 有色 ：无色 全有色 全有色 全有色 全有色 全有色 全有色 全有色
配子与交换型配子想乘后再乘以2 规则Ⅱ 配子与交换型配子想乘后再乘以2（规则Ⅱ）， 例如：AABb=（AB×Ab） 2=（45%×5%） 例如：AABb=（AB×Ab）×2=（45%×5%） 2=4.5%,aaBb=（ab×aB） 2=（45%×5%） ×2=4.5%,aaBb=（ab×aB）×2=（45%×5%） ×2=4.5%。 2=4.5%。 第三类为两位点杂合的类型 AaBb 此类基因型的形成涉及到四种配子（ 此类基因型的形成涉及到四种配子（两种亲本型 配子和两种交换型配子）， ），此种基因型的概率等 配子和两种交换型配子），此种基因型的概率等 于亲本型配子的平方加上交换型配子的平方后再乘 以2（规则Ⅲ），既AaBb=【（AB× ab）＋（Ab× 规则Ⅲ），既AaBb=【 AB× ab）＋（Ab× ）＋（Ab aB） 2=【 5%） 2=41%。 aB）】×2=【（45%）２＋（5%）２】×2=41%。
基因定位常用的方法ppt课件
4）原位杂交的步骤
制备中期染色体 DNA原位变性 变性 放射性或非放射性标记探针 杂交（在载玻片上） 洗膜 放射性标记：放射自显影 检测 非放射性标记：荧光染料与抗体或蛋白结合 记录杂交信号 结合染色体形态进行基因定位
DMD女性患者的核型
X染色体与常染色体易位时X染色体失活的结果
两个研究小组分别采用两种不同的方法克隆了DMD基因： 一组是通过X常染色体易位，克隆了该基因的一部分。 另一研究组使用有Xp21.1微小缺失的男孩的DNA，利用消减技术，获得了在正常X染色体存在而在这个男孩DNA中缺乏的DNA克隆片段。
遗传做图：是以研究家族的减数分裂，以了解两个基因分离趋势为基础来绘制基因座位间的距离，它表明基因之间连锁关系和相对距离，并以重组率来计算和表示，以厘摩（cM）为单位。 染色体定位：只把基因定位到某条染色体上。 细胞水平上的基因图又称细胞遗传图 区域定位：从细胞遗传学水平，用染色体显带等技术在光学显微镜下观察，将基因定位到染色体的具体区带。
5）荧光原位杂交 （florescence in situ hybridization，FISH）
用特殊荧光素（dig或Biotin）标记探针DNA（Nick translation 标记法），变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA杂交。在荧光显微镜下观察并记录结果。 FISH 优点：可用来作基因或特定DNA片段的染色体区 域定位。 缺点：必须在已知探针的情况下方可进行。
HAT选择系统：
人的突变细胞株：缺乏HGPRT酶 小鼠细胞株：缺乏TK酶 两者融合培养于HAT培养基中 HAT培养基： H为次黄嘌呤，是HGPRT的底物，为DNA合成提供原料（核苷酸旁路合成原料） A可阻断正常的DNA合成（嘌呤及TMP合成受抑制） T在胸苷激酶（TK）的作用下生成胸腺嘧啶核苷酸，为DNA合成提供原料
基因定位常用的方法
基因定位常用的方法基因定位是指通过一系列方法和技术确认、标定和描述基因在染色体上的相对位置。
它对于研究基因的功能、结构和演化以及遗传病的诊断和治疗都至关重要。
下面将介绍几种常用的基因定位方法。
1.遗传连锁图谱法：遗传连锁图谱法是一种早期应用广泛的基因定位方法。
通过观察不同基因的遗传连锁关系，查看它们在染色体上的距离，从而确定基因的相对位置。
这种方法需要大量的家系结构和大规模的家系分析来确定基因的连锁关系。
2.连锁不平衡分析法：连锁不平衡指的是染色体上两个以上基因的组合在多个个体中的频率比预期的频率要高或者低。
通过分析连锁不平衡信息，可以确定基因的精确定位位置。
这种方法是通过分析大规模人群的基因型和表型数据来实现的。
3.瓶颈扩大法：瓶颈扩大法是基于起源研究的一种基因定位方法。
它假设一个繁衍历史上的能够产生其中一疾病相关基因变异的细胞个体群通过瓶颈效应限制了群体的大小，从而使得该变异在群体内被广泛扩大，进而形成基因浮游。
通过分析该基因浮游的遗传差异，可以获得基因的定位信息。
4.启动子活性测定法：启动子活性测定法是一种通过观察基因的启动子（调控基因转录的DNA区域）活性来确定基因定位的方法。
这种方法利用了启动子活性与基因的转录活性之间的关联。
通过测定基因的转录活性，可以间接确定其启动子的位置。
6.比较基因组分析法：比较基因组分析法是一种通过比较不同物种或相同物种不同个体的基因组序列来确定基因位置的方法。
通过分析基因组序列上的保守区域和变异区域，可以确定基因在染色体上的位置。
以上是一些常用的基因定位方法。
随着研究技术的不断进步和发展，基因定位方法也在不断更新和完善。
这些方法的应用不仅可以帮助我们更好地理解基因的功能和结构，还可以为人类遗传病的诊断和治疗提供重要的帮助。
遗传学课件第7章基因定位
For example:
Cystic fibrosis (CF,囊肿性纤维化,属遗传性胰腺病) is the most common lethal inherited disease in the U. S. As many as 1 in 2500 Americans of Northern European descent carry a gene with CF.
第七章 遗传图的制作 和基因定位
GENE MAPPING
内容
• 基本概念和基本方法 • 人类基因定位的基本方法 • 真菌类生物（脉孢霉）的遗传分析 • 体细胞交换与基因定位 • 细菌的基因定位 • 噬菌体的重组作图
The ultimate goal of gene mapping is to clone genes, especially disease genes. Once a gene is cloned, we can determine its DNA sequence and study its protein product.
理论双交换频率 4.36%23.07%=1.0%
并发系数与干涉
• 干涉通常用并发系数(C)（coefficidence of coincidence or coincidence）来表示。
并发系数（C）= 实际双交换值÷理论双交换值
按上列数值 C = 0.96% ÷1.0% = 0.96
干涉（I）= 1 - C, 即1 - 0.96 = 0.04 (可正可负)
Examples: cystic fibrosis (囊肿性纤维化，属遗传性 胰腺病), diabetes(糖尿病), multiple sclerosis(多发性
硬化), and blood pressure
人类基因定位的基本方法课件
即 EST是代表一种cDNAபைடு நூலகம்子（基因），但一种cDNA分子或一个
基因 可以有不止一个EST。由EST构成的图谱，有助于构建转录图或 基因图。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
(7)随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA, RAPD）。 用同一套PCR随机引物（通常每个引物为10个核苷酸左
比较时，平均每1300个核苷酸中就有1个差别，所以这种界标 数
目极多，覆盖密度大，可大大提高基因组作图的精度。SNP作
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
的置换）。它与点突变的区别是点突变率低于1%～2%。 SNP 可分为分布在基因组非编码序列中和基因组编码序列中(称为 cSNP)。 (5)序列标签位点（sequence tagged site， STS ）。
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4.人类基因组作图及图谱 （1）遗传图（genetic map）,即连锁图（linkage map）。 是以多态的遗传标记为界标，通过计算细胞减数分裂过程中， 同源染色体间交换导致遗传标记之间发生重组的频率，来确定 两个标记在染色体上的相对位置。遗传标记之间的相对距离以 厘摩（cM）为单位，重组值1%为1cM.如果是利用染色体缺 失、倒位、易位等畸变所得的结果，将基因位点或遗传标记排 列成直线序列，称为细胞遗传图(cytogenertic map)。 （2）物理图（phsical map）。以特定的DNA序列为界标直
右）去扩增群体中不同个体的基因组DNA，得到大小和数量 有
差异的产物。这些扩增产物（DNA片段）多态性可以反映基 因
基因 可以有不止一个EST。由EST构成的图谱，有助于构建转录图或 基因图。
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(7)随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA, RAPD）。 用同一套PCR随机引物（通常每个引物为10个核苷酸左
比较时，平均每1300个核苷酸中就有1个差别，所以这种界标 数
目极多，覆盖密度大，可大大提高基因组作图的精度。SNP作
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的置换）。它与点突变的区别是点突变率低于1%～2%。 SNP 可分为分布在基因组非编码序列中和基因组编码序列中(称为 cSNP)。 (5)序列标签位点（sequence tagged site， STS ）。
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4.人类基因组作图及图谱 （1）遗传图（genetic map）,即连锁图（linkage map）。 是以多态的遗传标记为界标，通过计算细胞减数分裂过程中， 同源染色体间交换导致遗传标记之间发生重组的频率，来确定 两个标记在染色体上的相对位置。遗传标记之间的相对距离以 厘摩（cM）为单位，重组值1%为1cM.如果是利用染色体缺 失、倒位、易位等畸变所得的结果，将基因位点或遗传标记排 列成直线序列，称为细胞遗传图(cytogenertic map)。 （2）物理图（phsical map）。以特定的DNA序列为界标直
右）去扩增群体中不同个体的基因组DNA，得到大小和数量 有
差异的产物。这些扩增产物（DNA片段）多态性可以反映基 因
判断基因位置的方法.ppt分析ppt课件
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
（1）仅根据同学甲的实验，能不能证明控制黄体的基因位于X染 色体上，并表现为隐性？
不能；Aa（灰）×aa（黄）或 Aa（黄）×aa（灰）； （2）请用同学甲得到的子代果蝇为材料设计两个不同的实验， 这两个实验都能独立证明同学乙的结论。（要求：每个实验只用 一个杂交组合，并指出支持同学乙结论的预期实验结果。）
三、根据子代性状的数量比进行基因定位
例3：步步高P123 3题
总结三： 若子代中某性状在雌雄中比例相同，则基因位于 常染色体上； 若子代中某性状在雌雄中比例不同，则基因位于 X染色体上。
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
反交： XaXa♀×XAY♂→XAXa: XaY＝1:1
正交：多对 紫眼雌果蝇×红眼雄果蝇； 反交：多对 红眼雌果蝇×紫眼雄果蝇，
①如果两个杂交组合的子一代中都是紫眼个体多于红眼个体，并且眼色 的遗传与性别无关，则紫眼为显性，基因位于常染色体上
②如果两个杂交组合的子一代中都是红眼个体多于紫眼个体，并且眼色 的遗传与性别无关，则红眼为显性，基因位于常染色体上
Q3：控制性状的基因位于常染色体、XY的 同源区段，正反交的结果相同，如何进一步 判断基因的位置？请说出杂交方案并用遗传 图解表示。
人类基因定位与克隆PPT课件
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3
物理图谱是利用限制性内切酶将染色体切成片段，再根据重叠 序列确定片段间连接顺序，以及遗传标志之间物理距离〔碱基 对(bp) 或千碱基(kb)或兆碱基(Mb)〕的图谱。
以人类基因组物理图谱为例，它包括两层含义，一是获得分布 于整个基因组30 000个序列标志位点(STS，其定义是染色体定 位明确且可用PCR扩增的单拷贝序列)。将获得的目的基因的 cDNA克隆，进行测序，确定两端的cDNA序列，约200bp，设 计合成引物，并分别利用cDNA和基因组DNA作模板扩增；比较 并纯化特异带；利用STS制备放射性探针与基因组进行原位杂 交，使每隔100kb就有一个标志；
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DNA指 纹
基因组中存在着多种重复序列，拷贝数从几个
到数十万个，可分为串联重复序列和分散重复序
列。根据个体重复序列拷贝的位置和数目的差异， 使 用 限 制 性 内 切 酶 ， 获 得 具 有 个 体 特 异 性 的 DNA 片段。可以作为亲缘关系或个人身份的鉴定。
绘制遗传连锁图的方法有很多，随着DNA多态性的开发， 使得可利用的遗传标志数目迅速扩增。早期使用的多态 性标志有RFLP(限制性酶切片段长度多态性)、RAPD(随 机引物扩增多态性DNA)、AFLP(扩增片段长度多态性)； 80年代后出现的有SSR(短串联重复序列，又称微卫 星)DNA遗传多态性分析和90年代发展的SNP(单个核苷 酸的多态性)分析。
2. 将以通过DNA序列分析确定导
致疾病的分子缺陷。
3.
绝大部分分子病、遗传性代谢缺陷（酶）病如白
化病（albinism）、苯丙酮尿症（phenylkeonuria， PKU）
和镰刀形细胞贫血病（sickle-cell disease）等，都是采取
高中生物《基因定位的遗传分析方法》最新PPT课件
各种限制性核酸内切酶具有各自特异的识别顺序。这些识别顺序可以作为DNA 部位的标记，可进一步辅助基因定位。
BamHI 酶切位点
BamHI 酶切位点
酶切
缺失
BamHI 酶切位点
酶切
果
蝇
染
色
体
片 段
缺失
缺
失
品
系
BamHI酶切
利用限制性酶切图谱进行基因定位【任务一】
请各组讨论并判断每组的染色体的缺失区域， 并用笔涂掉相应的缺失区域：
利用人鼠细胞融合进行基因定位
（选修3 动物细胞融合）由于细胞杂交过程中染色体容易 丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物 （蛋白质）减少的对应关系可以进行基因定位。
利用人鼠细胞融合进行基因定位
HPRT-;TK+ 人
鼠 HPRT+;TK-
HPRT+;TK+
细胞融合
核融合 在HAT培养 基中生长
生长和细 胞分裂
人的HPRT基因缺陷（HPRT－TK+）细胞和小鼠的TK基 因缺陷（ HPRT+ TK－）细胞在HAT培养基中都不能存
活。杂种细胞在分裂中随机丢失人的染色体，但保留所
有的鼠染色体。
利用人鼠细胞融合进行基因定位
HPRT-;TK+ 人
鼠 HPRT+;TK-
细胞融合
核融合
HPRT+;TK+
【任务二】判断基因的位置和顺序
A
B
3.0 I
6.3
D1
D2 3.0 I
6.3
3.0 I
6.3
D3
3.0 I
6.3
D4
D5 3.0 I
BamHI 酶切位点
BamHI 酶切位点
酶切
缺失
BamHI 酶切位点
酶切
果
蝇
染
色
体
片 段
缺失
缺
失
品
系
BamHI酶切
利用限制性酶切图谱进行基因定位【任务一】
请各组讨论并判断每组的染色体的缺失区域， 并用笔涂掉相应的缺失区域：
利用人鼠细胞融合进行基因定位
（选修3 动物细胞融合）由于细胞杂交过程中染色体容易 丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物 （蛋白质）减少的对应关系可以进行基因定位。
利用人鼠细胞融合进行基因定位
HPRT-;TK+ 人
鼠 HPRT+;TK-
HPRT+;TK+
细胞融合
核融合 在HAT培养 基中生长
生长和细 胞分裂
人的HPRT基因缺陷（HPRT－TK+）细胞和小鼠的TK基 因缺陷（ HPRT+ TK－）细胞在HAT培养基中都不能存
活。杂种细胞在分裂中随机丢失人的染色体，但保留所
有的鼠染色体。
利用人鼠细胞融合进行基因定位
HPRT-;TK+ 人
鼠 HPRT+;TK-
细胞融合
核融合
HPRT+;TK+
【任务二】判断基因的位置和顺序
A
B
3.0 I
6.3
D1
D2 3.0 I
6.3
3.0 I
6.3
D3
3.0 I
6.3
D4
D5 3.0 I
基因定位常用的方法共36页
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿基因定位 Nhomakorabea用的方法
26、机遇对于有准备的头脑有特别的 亲和力 。 27、自信是人格的核心。
28、目标的坚定是性格中最必要的力 量泉源 之一， 也是成 功的利 器之一 。没有 它，天 才也会 在矛盾 无定的 迷径中 ，徒劳 无功。- -查士 德斐尔 爵士。 29、困难就是机遇。--温斯顿．丘吉 尔。 30、我奋斗，所以我快乐。--格林斯 潘。
谢谢！
《基因定位方法》PPT课件
• 是1993年荷兰科学家Zabeau和Vos发展起来的 一种检测DNA多态性的分子标记技术。 AFLP 技术是基于PCR反应的一种选择性扩增限制性 片段的方法。由于不同物种的基因组DNA大小 不同,基因组DNA经限制性内切酶酶切后，产 生分子量大小不同的限制性片段。
• 使用特定的双链接头与酶切DNA片段连接作为 扩增反应的模板，用含有选择性碱基的引物对 模板DNA进行扩增，选择性碱基的种类、数目 和顺序决定了扩增片段的特殊性，只有那些限 制性位点侧翼的核苷酸与引物的选择性碱基相 匹配的限制性片段才可被扩增。扩增产物经放 射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离， 然后根据凝胶上DNA指纹的有无来检验多态性。
❖RAPD的特点：
➢ RAPD技术比RFLP简单，容易掌握。它既克服了同
工酶位点偏少的缺点，又避免了RFLP操作复杂的 弊端，更因其不需使用同位素进行分子杂交，从而 使得一般的实验室亦能操作。 ❖ RAPD分子标记多为显性标记，只有少数可发展成 为共显性标记，提供的信息量有限，且掩盖了显性 纯合体与杂合体的区别，标记本身也大多是完全显 性遗传；
• 当某个性状（基因）与某个（些）分子标记协同分离 时，表明这个性状（基因）与分子标记连锁。分子标 记与性状之间交换值的大小，即表示目标基因与分子 标记之间的距离，从而可将基因定位于分子图谱上。 分子标记克隆在质粒上，可以繁殖及保存。不同限制 性内切酶切割基因组DNA后，所切的片段类型不一样， 因此，限制性内切酶与分子标记组成不同组合进行研 究。常用的限制性内切酶一般是HindⅢ， BamHⅠ,EcoRⅠ,EcoRV,XbaⅠ,而分子标记则有几个甚 至上千个。分子标记越多，则所构建的图谱就越饱和。 构建饱和图谱是RFLP研究的主要目标之一。
而 且 所 需 DNA 样 品 量 大 ， 对 于 涉 及 许 多 个 体 （200以上）的鉴定研究并不可取。
• 使用特定的双链接头与酶切DNA片段连接作为 扩增反应的模板，用含有选择性碱基的引物对 模板DNA进行扩增，选择性碱基的种类、数目 和顺序决定了扩增片段的特殊性，只有那些限 制性位点侧翼的核苷酸与引物的选择性碱基相 匹配的限制性片段才可被扩增。扩增产物经放 射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离， 然后根据凝胶上DNA指纹的有无来检验多态性。
❖RAPD的特点：
➢ RAPD技术比RFLP简单，容易掌握。它既克服了同
工酶位点偏少的缺点，又避免了RFLP操作复杂的 弊端，更因其不需使用同位素进行分子杂交，从而 使得一般的实验室亦能操作。 ❖ RAPD分子标记多为显性标记，只有少数可发展成 为共显性标记，提供的信息量有限，且掩盖了显性 纯合体与杂合体的区别，标记本身也大多是完全显 性遗传；
• 当某个性状（基因）与某个（些）分子标记协同分离 时，表明这个性状（基因）与分子标记连锁。分子标 记与性状之间交换值的大小，即表示目标基因与分子 标记之间的距离，从而可将基因定位于分子图谱上。 分子标记克隆在质粒上，可以繁殖及保存。不同限制 性内切酶切割基因组DNA后，所切的片段类型不一样， 因此，限制性内切酶与分子标记组成不同组合进行研 究。常用的限制性内切酶一般是HindⅢ， BamHⅠ,EcoRⅠ,EcoRV,XbaⅠ,而分子标记则有几个甚 至上千个。分子标记越多，则所构建的图谱就越饱和。 构建饱和图谱是RFLP研究的主要目标之一。
而 且 所 需 DNA 样 品 量 大 ， 对 于 涉 及 许 多 个 体 （200以上）的鉴定研究并不可取。