第五章黄酮类化合物-2
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35
例： 黄酮类化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo
黄酮类化合物 芹菜素 木犀草素 槲皮素 杨梅素 山奈酚-3-半乳糖鼠李糖-7鼠李糖苷 槲皮素-3-芸香糖苷 槲皮素-3-鼠李糖苷 取代图式 5,7,4‘-三OH 5,7,3’,4’-四OH 3,5,7,3’,4’-五OH 3,5,7,3’,4’,5’-六OH 三糖苷 双糖苷 单糖苷 Ve/ Vo 5.3 6.3 8.3 9.2 3.3 4.0 4.9
（二）黄酮苷类：可溶于热水、甲醇、 乙醇、稀碱液，难溶于亲脂性有机溶 剂。 1、多糖苷>单糖苷； 2、3-OH苷>7-OH苷；
10
糖的连接位置对苷的水溶性的影响
HO O O glc OH
HO
O OH OH O
OH
OH
O
glc
O
O OH OH O
OH
11
三、酸性与碱性
（一）显著的酸性
羟基位置 7，4＇-二羟基 7或4＇-羟基 一般酚羟基 5-羟基 弱 酸性 溶解性 强 溶于5%NaHCO3 溶于5%Na2CO3 溶于0.2%NaOH 溶于4%NaOH
常见的诊断试剂
NaOMe NaOAc（熔融/未熔融）
NaOAc/H3BO3
AlCl3 AlCl3 /HCl
55
样品在甲醇钠(NaOMe)中的UV光谱
碱性强，解离所有Ar-OH
带II 带I 红移40~60nm 强度不降 红移50~60nm 强度下降 归属 有4`-OH 有3-OH，无4`-OH
吸收谱随时间延长而衰 示有3，4`-OH，或 退 3，3`，4`- 三OH 等对碱敏感结构 56
二 次
展开剂：醋酸-水
43
一、色谱法
（二）TLC 主要指吸附薄层，常用硅胶TLC，聚酰胺TLC。 硅胶TLC：鉴定弱极性化合物。 聚酰胺TLC：分离大多数黄酮及苷类，适用范 围广，分离效果好。
44
二、紫外及可见光谱法
可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否 含有羟基。
一般程序：
①测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型；
12
三、酸性与碱性
（二）微弱的碱性： 1位氧原子有未共用电子对，表现微 弱碱性，可与浓盐酸、浓硫酸成 盐， 极不稳定，遇水分解。
..
O HCl H2O O O + O
13
四、显色反应
还原试验 硼酸的显色 反应
金属盐类的 络合反应
碱性试剂的 显色反应
14
还原试验
1、盐酸—镁粉反应（最常用）
黄酮（醇）类 二氢黄酮（醇）类 查耳酮 儿茶素类 异黄酮
HO O OH OH O OH
19
金属盐类的络合反应
3、锆盐—枸橼酸显色反应： 用途：区别3-OH 和/或 5-OH的存在。
HO O O OH O Zr
H2O
O Cl
注意：3-羟基黄酮产 生的络合物稳定性大 于5-羟基黄酮。
20
锆盐—枸橼酸显色反应区别3-OH或5-OH的存在 样品/ MeOH
2%ZrOCl2/MeOH
22
（三）硼酸的显色反应
具有
OH O
结构的化合物
在酸性条件下与硼酸反应生成亮黄色。 例如：
OH O
OH
O
O
23
（四）碱性试剂显色反应
1、二氢黄酮类遇碱变橙色~黄
OH HO O OCH 3 OH
OH H
+
HO
OH
OCH 3
OH
O
OH
O
2、黄酮醇遇碱呈黄色，通入空气变棕色。 3、具有邻二酚羟基或3，4′-二羟基取代时， 在碱液中由黄-深红-绿棕色沉淀。
阳性 （红色）
阴性
注意：花色素、部分查耳酮等在浓HCl酸 性下变红，要做空白对照实验，排除干扰。
15
还原试验
2、四氢硼钠反应：（专属性） 二氢黄酮（醇） 其它黄酮
阳性 （红色） 阴性
附：二氢黄酮类化合物可与磷钼酸试剂 反应呈棕褐色。
16
金属盐类的络合反应
可以发生金属盐类络合反应的基团：
OH HO O OH OH O OH
II
I
50
查耳酮和橙酮在甲醇溶液中的UV光谱
HO OH OH OH
O
2，3，4—三羟基查耳酮
OH O CH OH
200
300
400
500
O
3`，4`--二羟基橙酮
51
（一）在甲醇溶液中的紫外光谱
3、异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇 ： 相同点：具有强的带II吸收 带I很弱，常为肩峰。 不同点：异黄酮带II（245~270nm） 二氢黄酮（醇）带II（270~295nm）
红移12~30nm
带I
归属 有7-OH 有4’-OH
对碱敏感结构 A环有邻二酚羟基 B环有邻二酚羟基 （不包括5,6位）
58
带Ⅱ，+5~20nm
——示有7-OH
MeOH NaOAc – 未熔融
+12nm
OH HO O O OH O glc 6 OH 1rha
200
300
400
500
添加了AlCl3、AlCl3/HCl的紫外光谱（UV）
30
（一）柱色谱法
1
2 3
• 硅胶柱色谱
• 聚酰胺柱色谱 • 葡聚糖凝胶柱色谱
31
2、聚酰胺柱色谱
（1）基本原理 双重色谱
氢键吸附 水溶性相差不大
相似相溶
水溶性相差较大
32
2、聚酰胺柱色谱
（2）洗脱规律 ①叁糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元。 ②母核酚羟基数目越多，洗脱越慢；酚 羟基数目相同，易成分子内氢键者吸 附弱。 ③异黄酮>二氢黄酮醇>黄酮>黄酮醇。 ④芳香核多，共轭程度高，难洗脱。
28
（二）沸水法
适用于苷类和水溶性苷元的提取。 注意： （1）酶的活性； （2）糊化和变质； （3）加等量浓醇使蛋白质、多糖等 水溶性杂质去除。
29
（三）碱提取酸沉淀法
常用碱的种类：
含 5%NaOH 稀乙醇
稀 NaOH
石灰水
注意： （1）碱水浓度不宜过 高否则易破坏母核； （2）酸化时酸性不能 太强，否则易生成 盐，使得率下降。
COOH O O OH OH HO OH O O
黄芩粗粉 OH 分别加10倍、8倍量沸水煎煮两次， 每次1小时，过滤 药渣
滤液 加盐酸调pH1~2, 80 ℃ 保温30min 静置，离心沉淀 沉淀 依次用水、50%EtOH洗涤 95%EtOH重结晶 黄芩苷
38
滤液
提取分离方法实例
2.芦丁的提取方法
举例
OH HO O OH
OH
O
木犀草素
MeOH 242sh,253,267,291sh,349 NaOMe 266sh,329sh,401
200
300
400
500
57
NaOAc和NaOAc/H3BO3UV光谱
带II NaOAc 红移5~20nm （未熔融） NaOAc （熔融） 红移 40~65nm 强度下降 吸收谱随时间延长而衰退 NaOAc /H3BO3 红移5~10nm
II I
nm
52
异黄酮和二氢黄酮在甲醇溶液中的UV光谱
HO
O
O
7-羟基异黄酮
HO O
OH
O
200
300
400
500
4`，7-二羟基二氢黄酮
53
总结
异黄酮 二氢黄酮 黄酮 黄酮醇 查耳酮
橙酮
小结：在MeOH中的UV特点 —— 确定黄酮类化合物的骨架类型
54
200
300
400
源自文库
(nm)
（二）加入诊断试剂后引起的位移及其 在结构测定中的意义
有3-OH和/或5-OH
溶液变黄
2%枸橼酸/MeOH
仍显黄色
有3-OH
显著褪色
无3-OH，有5-OH
21
金属盐类的络合反应
4、醋酸镁的显色反应 二氢黄酮(醇)：天蓝色荧光 异黄酮、黄酮(醇) ：黄~橙黄~褐色荧光 5、氯化锶（SrCl2）的显色反应 具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物:绿 ~棕色~黑色沉淀
OH OH HO O O
Al +
O
AlCl3
OH O
HO
O
O OH OH HO O
O
Al 2 + HCl / H2O
槐花米粗粉
HO O O OH O OH OH glc O rha
加6倍量水和适量的硼砂，煮沸 趁热抽滤 药渣
边搅拌边加入石灰乳至pH8~9，微沸30min
滤液 在60~70 ℃条件下，加浓盐酸调至pH5，静置 抽滤
滤液 沉淀（芦丁粗品）
39
第四节 黄酮类化合物的 检识与结构鉴定
40
检识与结构鉴定
常见的金属盐类： 铝盐、镁盐、锆盐等。
17
金属盐类的络合反应
1、三氯化铝的显色反应： 大多数黄酮显黄色并有荧光。 例外：4'-OH或7，4'-二OH黄酮醇显天蓝 色荧光。 用途：黄酮类化合物的定性定量分析。
18
金属盐类的络合反应
2、醋酸铅的显色反应 试剂：中性醋酸铅或碱式醋酸铅 阳性结果：生成黄～红色沉淀 作用部位： OH
◆ AlCl3、AlCl3/HCl
AlCl3可与下列结构系统螯合，并引起相应的 吸收带向红位移。
O O OH OH O O OH OH
其中，邻二酚-OH形成的络合物不稳定，加少
量酸水即可分解。反应过程如下：
60
添加了AlCl3、AlCl3/HCl的紫外光谱（UV）
◆ AlCl3、AlCl3/HCl
33
例题：下列黄酮化合物，（1）用聚酰胺柱色谱，含 水甲醇梯度洗脱
OH
OH HO O
HO
O
OH
OH
O
OH
OH
O
A
GlcO O
B
OH
O
Rha-GlcO
O
O
OH
O
C
OH
OH
Rha-GlcO O OH
O
D
OH
O
E
34
3、葡聚糖凝胶色谱法
（1）基本原理 双重属性
吸附属性 分子量相差不大
分子筛属性
分子量相差较大
3
一、性状
1、苷元多呈晶形
苷类为无定形粉末；
4
一、性状
2、颜色：多为黄色
结构中的交叉共轭体系
助色团的种类、数目和取代位置
5
交叉共轭体系的存在
O
O
OH O
O
色原酮：无色
O
黄酮（醇）：灰黄-黄色
O
OH
O
O
异黄酮：微黄色
二氢黄酮（醇）：无色
一、性状
注意：花色素的颜色随pH不同而不同 红（pH<7) ~紫（pH=8.5) ~蓝（pH>8.5)
色谱法 紫外及可见光谱
氢核磁共振谱
碳核磁共振谱 质谱
41
一、色谱法
（一）纸色谱 苷元：分配色谱。流动相：BAW系统。 苷：双向纸色谱。 第一向：醇性溶剂展开，例如BAW系统， 化合物极性大，吸附强。 第二向：水类溶剂展开，例如2-6%醋酸水 ，化合物极性大，吸附弱。
42
双向纸色谱图例
一 次
展开剂：BAW
7
二、溶解性
（一）黄酮苷元
多难溶于水，易溶于有机溶剂（甲醇、乙醇、乙酸 乙酯、乙醚）和稀碱液； 1、平面型分子的水溶性小于非平面型分子；
O
O
OH O
OH O
8
二、溶解性
2、花色素以离子的形式存在，具有盐的 通性，水溶性反而最大；
H O R O H 二氢黄酮 花青素 O X 或OH
-
9
二、溶解性
注：Ve为洗脱样品时需要的溶剂总量或洗脱体 积；Vo为柱子的空体积。Ve/Vo数值越小，说明 36 化合物越容易被洗脱下来。
（二）梯度pH萃取法
5%NaHCO3 5%Na2CO3 0.2%NaOH 4% NaOH 7，4`-二OH者 7或4`-OH者 一般OH者 5-OH者
37
提取分离方法实例
1.黄芩苷的提取分离方法
第五章 黄酮类化合物
Flavonoids
1
学习要求
1.掌握黄酮类化合物的主要结构类型， 了解结构之间的生物合成关系； 2.掌握黄酮类化合物的理化性质和显色 反应； 3.掌握黄酮类化合物的提取分离方法； 4.熟悉波谱法在黄酮类化合物结构鉴定 中的应用，熟悉其色谱鉴定方法。
2
第二节 黄酮类化合物的理化性 质与显色反应
24
五、Wessely-Moser 重排
25
第三节 黄酮类化合物的 提取与分离
26
黄酮类化合物的提取与分离
醇提法
柱色谱法
沸水法
提取
分离
碱溶酸沉法
pH梯度萃 取法
27
（一）醇提法
95%乙醇 60~70%乙醇 提取苷元 提取苷类
注意： 1.含杂质多，可用石油醚去油脂、蜡、叶 绿素 等脂溶性杂质。 2.用炭粉吸附、酚/水洗脱的方法进行苷 类成分的精制
47
（一）在甲醇溶液中的紫外光谱
1、黄酮、黄酮醇： 相同点：带I与带II的吸 收峰强度均较大； 不同点：带I位置不同 黄酮带I（304~350nm） 黄酮醇带I（352~385nm）
II
I
48
木犀草素和槲皮素在甲醇溶液中的UV光谱数据
OH HO O
OH HO
OH
O OH
OH
OH
O
OH
O
木犀草素
MeOH
槲皮素
256 （带II） 371（带I）
253 （带II） 349 （带I） MeOH
黄酮带I 黄酮醇带I （304~350nm） （352~385nm）
49
（一）在甲醇溶液中的紫外光谱
2、查耳酮及橙酮类： 相同点：带Ⅰ很强，为主峰； 带Ⅱ较弱，为次强峰。 不同点：带Ⅰ峰位不同
查耳酮：340～390nm 橙酮： 370～430nm
②在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UV谱和 可见光谱以了解3,5,7,3’,4’有无羟基及邻二酚羟基； ③苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法 测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。
45
46
二、紫外及可见光谱法
O
O
带Ⅱ（220-280 nm） 由苯甲酰基系统引起 反应A环取代情况
带Ⅰ（300-400nm）由 桂皮酰基系统引起反应 B环取代情况
例： 黄酮类化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo
黄酮类化合物 芹菜素 木犀草素 槲皮素 杨梅素 山奈酚-3-半乳糖鼠李糖-7鼠李糖苷 槲皮素-3-芸香糖苷 槲皮素-3-鼠李糖苷 取代图式 5,7,4‘-三OH 5,7,3’,4’-四OH 3,5,7,3’,4’-五OH 3,5,7,3’,4’,5’-六OH 三糖苷 双糖苷 单糖苷 Ve/ Vo 5.3 6.3 8.3 9.2 3.3 4.0 4.9
（二）黄酮苷类：可溶于热水、甲醇、 乙醇、稀碱液，难溶于亲脂性有机溶 剂。 1、多糖苷>单糖苷； 2、3-OH苷>7-OH苷；
10
糖的连接位置对苷的水溶性的影响
HO O O glc OH
HO
O OH OH O
OH
OH
O
glc
O
O OH OH O
OH
11
三、酸性与碱性
（一）显著的酸性
羟基位置 7，4＇-二羟基 7或4＇-羟基 一般酚羟基 5-羟基 弱 酸性 溶解性 强 溶于5%NaHCO3 溶于5%Na2CO3 溶于0.2%NaOH 溶于4%NaOH
常见的诊断试剂
NaOMe NaOAc（熔融/未熔融）
NaOAc/H3BO3
AlCl3 AlCl3 /HCl
55
样品在甲醇钠(NaOMe)中的UV光谱
碱性强，解离所有Ar-OH
带II 带I 红移40~60nm 强度不降 红移50~60nm 强度下降 归属 有4`-OH 有3-OH，无4`-OH
吸收谱随时间延长而衰 示有3，4`-OH，或 退 3，3`，4`- 三OH 等对碱敏感结构 56
二 次
展开剂：醋酸-水
43
一、色谱法
（二）TLC 主要指吸附薄层，常用硅胶TLC，聚酰胺TLC。 硅胶TLC：鉴定弱极性化合物。 聚酰胺TLC：分离大多数黄酮及苷类，适用范 围广，分离效果好。
44
二、紫外及可见光谱法
可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否 含有羟基。
一般程序：
①测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型；
12
三、酸性与碱性
（二）微弱的碱性： 1位氧原子有未共用电子对，表现微 弱碱性，可与浓盐酸、浓硫酸成 盐， 极不稳定，遇水分解。
..
O HCl H2O O O + O
13
四、显色反应
还原试验 硼酸的显色 反应
金属盐类的 络合反应
碱性试剂的 显色反应
14
还原试验
1、盐酸—镁粉反应（最常用）
黄酮（醇）类 二氢黄酮（醇）类 查耳酮 儿茶素类 异黄酮
HO O OH OH O OH
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金属盐类的络合反应
3、锆盐—枸橼酸显色反应： 用途：区别3-OH 和/或 5-OH的存在。
HO O O OH O Zr
H2O
O Cl
注意：3-羟基黄酮产 生的络合物稳定性大 于5-羟基黄酮。
20
锆盐—枸橼酸显色反应区别3-OH或5-OH的存在 样品/ MeOH
2%ZrOCl2/MeOH
22
（三）硼酸的显色反应
具有
OH O
结构的化合物
在酸性条件下与硼酸反应生成亮黄色。 例如：
OH O
OH
O
O
23
（四）碱性试剂显色反应
1、二氢黄酮类遇碱变橙色~黄
OH HO O OCH 3 OH
OH H
+
HO
OH
OCH 3
OH
O
OH
O
2、黄酮醇遇碱呈黄色，通入空气变棕色。 3、具有邻二酚羟基或3，4′-二羟基取代时， 在碱液中由黄-深红-绿棕色沉淀。
阳性 （红色）
阴性
注意：花色素、部分查耳酮等在浓HCl酸 性下变红，要做空白对照实验，排除干扰。
15
还原试验
2、四氢硼钠反应：（专属性） 二氢黄酮（醇） 其它黄酮
阳性 （红色） 阴性
附：二氢黄酮类化合物可与磷钼酸试剂 反应呈棕褐色。
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金属盐类的络合反应
可以发生金属盐类络合反应的基团：
OH HO O OH OH O OH
II
I
50
查耳酮和橙酮在甲醇溶液中的UV光谱
HO OH OH OH
O
2，3，4—三羟基查耳酮
OH O CH OH
200
300
400
500
O
3`，4`--二羟基橙酮
51
（一）在甲醇溶液中的紫外光谱
3、异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇 ： 相同点：具有强的带II吸收 带I很弱，常为肩峰。 不同点：异黄酮带II（245~270nm） 二氢黄酮（醇）带II（270~295nm）
红移12~30nm
带I
归属 有7-OH 有4’-OH
对碱敏感结构 A环有邻二酚羟基 B环有邻二酚羟基 （不包括5,6位）
58
带Ⅱ，+5~20nm
——示有7-OH
MeOH NaOAc – 未熔融
+12nm
OH HO O O OH O glc 6 OH 1rha
200
300
400
500
添加了AlCl3、AlCl3/HCl的紫外光谱（UV）
30
（一）柱色谱法
1
2 3
• 硅胶柱色谱
• 聚酰胺柱色谱 • 葡聚糖凝胶柱色谱
31
2、聚酰胺柱色谱
（1）基本原理 双重色谱
氢键吸附 水溶性相差不大
相似相溶
水溶性相差较大
32
2、聚酰胺柱色谱
（2）洗脱规律 ①叁糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元。 ②母核酚羟基数目越多，洗脱越慢；酚 羟基数目相同，易成分子内氢键者吸 附弱。 ③异黄酮>二氢黄酮醇>黄酮>黄酮醇。 ④芳香核多，共轭程度高，难洗脱。
28
（二）沸水法
适用于苷类和水溶性苷元的提取。 注意： （1）酶的活性； （2）糊化和变质； （3）加等量浓醇使蛋白质、多糖等 水溶性杂质去除。
29
（三）碱提取酸沉淀法
常用碱的种类：
含 5%NaOH 稀乙醇
稀 NaOH
石灰水
注意： （1）碱水浓度不宜过 高否则易破坏母核； （2）酸化时酸性不能 太强，否则易生成 盐，使得率下降。
COOH O O OH OH HO OH O O
黄芩粗粉 OH 分别加10倍、8倍量沸水煎煮两次， 每次1小时，过滤 药渣
滤液 加盐酸调pH1~2, 80 ℃ 保温30min 静置，离心沉淀 沉淀 依次用水、50%EtOH洗涤 95%EtOH重结晶 黄芩苷
38
滤液
提取分离方法实例
2.芦丁的提取方法
举例
OH HO O OH
OH
O
木犀草素
MeOH 242sh,253,267,291sh,349 NaOMe 266sh,329sh,401
200
300
400
500
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NaOAc和NaOAc/H3BO3UV光谱
带II NaOAc 红移5~20nm （未熔融） NaOAc （熔融） 红移 40~65nm 强度下降 吸收谱随时间延长而衰退 NaOAc /H3BO3 红移5~10nm
II I
nm
52
异黄酮和二氢黄酮在甲醇溶液中的UV光谱
HO
O
O
7-羟基异黄酮
HO O
OH
O
200
300
400
500
4`，7-二羟基二氢黄酮
53
总结
异黄酮 二氢黄酮 黄酮 黄酮醇 查耳酮
橙酮
小结：在MeOH中的UV特点 —— 确定黄酮类化合物的骨架类型
54
200
300
400
源自文库
(nm)
（二）加入诊断试剂后引起的位移及其 在结构测定中的意义
有3-OH和/或5-OH
溶液变黄
2%枸橼酸/MeOH
仍显黄色
有3-OH
显著褪色
无3-OH，有5-OH
21
金属盐类的络合反应
4、醋酸镁的显色反应 二氢黄酮(醇)：天蓝色荧光 异黄酮、黄酮(醇) ：黄~橙黄~褐色荧光 5、氯化锶（SrCl2）的显色反应 具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物:绿 ~棕色~黑色沉淀
OH OH HO O O
Al +
O
AlCl3
OH O
HO
O
O OH OH HO O
O
Al 2 + HCl / H2O
槐花米粗粉
HO O O OH O OH OH glc O rha
加6倍量水和适量的硼砂，煮沸 趁热抽滤 药渣
边搅拌边加入石灰乳至pH8~9，微沸30min
滤液 在60~70 ℃条件下，加浓盐酸调至pH5，静置 抽滤
滤液 沉淀（芦丁粗品）
39
第四节 黄酮类化合物的 检识与结构鉴定
40
检识与结构鉴定
常见的金属盐类： 铝盐、镁盐、锆盐等。
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金属盐类的络合反应
1、三氯化铝的显色反应： 大多数黄酮显黄色并有荧光。 例外：4'-OH或7，4'-二OH黄酮醇显天蓝 色荧光。 用途：黄酮类化合物的定性定量分析。
18
金属盐类的络合反应
2、醋酸铅的显色反应 试剂：中性醋酸铅或碱式醋酸铅 阳性结果：生成黄～红色沉淀 作用部位： OH
◆ AlCl3、AlCl3/HCl
AlCl3可与下列结构系统螯合，并引起相应的 吸收带向红位移。
O O OH OH O O OH OH
其中，邻二酚-OH形成的络合物不稳定，加少
量酸水即可分解。反应过程如下：
60
添加了AlCl3、AlCl3/HCl的紫外光谱（UV）
◆ AlCl3、AlCl3/HCl
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例题：下列黄酮化合物，（1）用聚酰胺柱色谱，含 水甲醇梯度洗脱
OH
OH HO O
HO
O
OH
OH
O
OH
OH
O
A
GlcO O
B
OH
O
Rha-GlcO
O
O
OH
O
C
OH
OH
Rha-GlcO O OH
O
D
OH
O
E
34
3、葡聚糖凝胶色谱法
（1）基本原理 双重属性
吸附属性 分子量相差不大
分子筛属性
分子量相差较大
3
一、性状
1、苷元多呈晶形
苷类为无定形粉末；
4
一、性状
2、颜色：多为黄色
结构中的交叉共轭体系
助色团的种类、数目和取代位置
5
交叉共轭体系的存在
O
O
OH O
O
色原酮：无色
O
黄酮（醇）：灰黄-黄色
O
OH
O
O
异黄酮：微黄色
二氢黄酮（醇）：无色
一、性状
注意：花色素的颜色随pH不同而不同 红（pH<7) ~紫（pH=8.5) ~蓝（pH>8.5)
色谱法 紫外及可见光谱
氢核磁共振谱
碳核磁共振谱 质谱
41
一、色谱法
（一）纸色谱 苷元：分配色谱。流动相：BAW系统。 苷：双向纸色谱。 第一向：醇性溶剂展开，例如BAW系统， 化合物极性大，吸附强。 第二向：水类溶剂展开，例如2-6%醋酸水 ，化合物极性大，吸附弱。
42
双向纸色谱图例
一 次
展开剂：BAW
7
二、溶解性
（一）黄酮苷元
多难溶于水，易溶于有机溶剂（甲醇、乙醇、乙酸 乙酯、乙醚）和稀碱液； 1、平面型分子的水溶性小于非平面型分子；
O
O
OH O
OH O
8
二、溶解性
2、花色素以离子的形式存在，具有盐的 通性，水溶性反而最大；
H O R O H 二氢黄酮 花青素 O X 或OH
-
9
二、溶解性
注：Ve为洗脱样品时需要的溶剂总量或洗脱体 积；Vo为柱子的空体积。Ve/Vo数值越小，说明 36 化合物越容易被洗脱下来。
（二）梯度pH萃取法
5%NaHCO3 5%Na2CO3 0.2%NaOH 4% NaOH 7，4`-二OH者 7或4`-OH者 一般OH者 5-OH者
37
提取分离方法实例
1.黄芩苷的提取分离方法
第五章 黄酮类化合物
Flavonoids
1
学习要求
1.掌握黄酮类化合物的主要结构类型， 了解结构之间的生物合成关系； 2.掌握黄酮类化合物的理化性质和显色 反应； 3.掌握黄酮类化合物的提取分离方法； 4.熟悉波谱法在黄酮类化合物结构鉴定 中的应用，熟悉其色谱鉴定方法。
2
第二节 黄酮类化合物的理化性 质与显色反应
24
五、Wessely-Moser 重排
25
第三节 黄酮类化合物的 提取与分离
26
黄酮类化合物的提取与分离
醇提法
柱色谱法
沸水法
提取
分离
碱溶酸沉法
pH梯度萃 取法
27
（一）醇提法
95%乙醇 60~70%乙醇 提取苷元 提取苷类
注意： 1.含杂质多，可用石油醚去油脂、蜡、叶 绿素 等脂溶性杂质。 2.用炭粉吸附、酚/水洗脱的方法进行苷 类成分的精制
47
（一）在甲醇溶液中的紫外光谱
1、黄酮、黄酮醇： 相同点：带I与带II的吸 收峰强度均较大； 不同点：带I位置不同 黄酮带I（304~350nm） 黄酮醇带I（352~385nm）
II
I
48
木犀草素和槲皮素在甲醇溶液中的UV光谱数据
OH HO O
OH HO
OH
O OH
OH
OH
O
OH
O
木犀草素
MeOH
槲皮素
256 （带II） 371（带I）
253 （带II） 349 （带I） MeOH
黄酮带I 黄酮醇带I （304~350nm） （352~385nm）
49
（一）在甲醇溶液中的紫外光谱
2、查耳酮及橙酮类： 相同点：带Ⅰ很强，为主峰； 带Ⅱ较弱，为次强峰。 不同点：带Ⅰ峰位不同
查耳酮：340～390nm 橙酮： 370～430nm
②在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UV谱和 可见光谱以了解3,5,7,3’,4’有无羟基及邻二酚羟基； ③苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法 测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。
45
46
二、紫外及可见光谱法
O
O
带Ⅱ（220-280 nm） 由苯甲酰基系统引起 反应A环取代情况
带Ⅰ（300-400nm）由 桂皮酰基系统引起反应 B环取代情况