细胞HE染色的标准操作规程
实验技术—HE染色
实验技术—HE染⾊⼩⿏胚胎切⽚原位杂交（⼀）主要试剂及配制⽅法：a)原位杂交⽤10×PBS储存液（0.5 L体积配⽅）：向1L烧杯中依次加⼊29.22 g NaCl ，13.86 g Na2HPO4·12H2O 和1.763 g NaH2PO4·2H2O，然后加⼊400mL ddH2O充分搅拌溶解，⽤固体NaOH将pH调节⾄7.4，然后加⼊ddH2O定容⾄0.5 L，最后各组分终浓度为NaCl=1.3mol/L，Na2HPO4=70mmol/L，NaH2PO4=30mmol/L，⾼压灭菌后室温保存备⽤；b)1×PBS⼯作液：将10×PBS储存液⽤灭菌⽔稀释10倍即可；c)10×⽢氨酸溶液：称取⽢氨酸10g溶于ddH2O或DEPC⽔中，最后补⾜ddH2O定容⾄1000ml，⾼压灭菌备⽤。
该液为储备液，-20℃储存。
使⽤时⽤PBS将10×⽢氨酸储备液稀释为⼯作液（1.0mg/mL)；d)5M NaCl：在800ml⽔中溶解292.2g NaCl，加⽔定容⾄1L，⾼压灭菌后室温保存备⽤；e)1M Tris-HCl ( pH7.5 ，pH9.5)：在800ml⽔中溶解121.91g Tris碱,加⼊浓HCl调节pH值⾄所需值（应使溶液冷⾄室温后⽅可最后调定pH值），然后加⽔定容⾄1L，最后⾼压灭菌，室温保存备⽤；f)1M MgCl2：在800ml⽔中溶解203.4g MgCl2·6H2O，⽤⽔定容⾄1L，⾼压灭菌，室温保存备⽤；g)20%（W/V)SDS：20 g SDS溶解于80 mL ddH2O中，加热到68 ?C溶解，加热的同时⽤玻璃棒搅拌助溶，⽤浓盐酸调节pH 值到7.2，加⽔⾄100 mL，⾼温⾼压灭菌，室温保存备⽤；h)3%过氧化氢溶液：⽤于组织脱除⾎⾊，也可起到⼀定RNase抑制剂效果，使⽤时将H2O2原液（30%）⽤ddH2O稀释10倍即可使⽤；i) 2 µg/mL Proteinase K/PBS：使⽤时配制，将Proteinase K (20mg/mL，-20 ?C冷冻保存）⽤PBS稀释10000倍使⽤；j)⼄酰化试剂：如配制40 mL溶液，需加⼊530 µL三⼄醇胺，100 µL冰⼄酸，70 µL 浓HCl，ddH2O定容⾄40 mL；k)NT Buffer：各种成分终浓度为0.1 M Tris-HCl ( pH7.5 )，0.15 M NaCl。
培养细胞的H·E染色
实验步骤（二）
以流动的自来水洗 加入0.5%氨水溶液进行返蓝处理（数十秒） 以流动的自来水洗后观察，效果好则以蒸馏水稍洗 加入伊红染液染色（数秒） 以蒸馏水洗 观察并记录（细胞核呈紫色、细胞质呈粉红色，层次感
分明）
注意：每步操作中都应随时镜检
保持湿润 不清洗干净后，按要求放置
实验中的废液请倒入废液桶中
实验结束后，请将各种试剂统一收回到最后一条实 验台上，托盘中的物品清洗干净后，请放置在原处
4. 淡氨水：0.5mL氨水、100mL自来水
5. 伊红染液：0.5g伊红B、100mL80%乙醇
实验步骤（一）
镜检：观察并记录细胞状态 吸弃培养基，以PBS溶液（1mL）漂洗1-2次 以固定剂固定15分钟 吸弃固定剂，以蒸馏水洗 加入苏木精染液（1mL，可重复使用）染色十数分钟
（随时镜检，以确定染色时间） 以流动的自来水洗 加入0.5%盐酸酒精溶液进行分色（数秒） 以蒸馏水洗
培养细胞的 H·E染色
H·E染色
苏木精 伊红
试剂
1. 4%多聚甲醛溶液
2. 苏木精染液
苏木精0.5g，无水乙醇10mL 硫酸铝钾25g，蒸馏水150mL 完全溶解后，混合均匀，加热煮沸3－5min，加入蒸馏水至500mL，
最后加入0.1g碘酸钠
3. 盐酸酒精溶液：0.5mL盐酸、100mL 70%乙醇
HE染色方法与步骤吐血
HE染色试剂配置A：~1%的伊红酒精溶液：称取伊红~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状;以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可100毫升溶解;B：苏木素染液配方：配制3000ml,可按比列减少苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠;C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可;染色流程1二甲苯Ⅰ15min2二甲苯Ⅱ15min3二甲苯：无水乙醇=1:12min4100%乙醇Ⅰ5min5100%乙醇Ⅱ5min680%乙醇5min7蒸馏水5min8苏木精液染色5min9流水稍洗去苏木精液1-3s101%盐酸乙醇1-3s11稍水洗10-30s12蒸馏水过洗1-2s13%伊红液染色1-3min14蒸馏水稍洗1-2s1580%乙醇稍洗1-2s1695%乙醇Ⅰ2-3s1795%乙醇Ⅱ3-5s18无水乙醇5-10min19石炭酸二甲苯5-10min20二甲苯Ⅰ2min21二甲苯Ⅱ2min22二甲苯Ⅲ2min23中性树胶封固注：①第11、12步可省去,13步冲水时间需延长至20-30min;②第21步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;冷冻切片HE染色步骤：1冰冻切片固定10～30s2稍水洗1～2s3苏木精液染色60℃30～60s4流水洗去苏木精液5～10s51%盐酸乙醇1～3s6稍水洗1～2s7促蓝液返蓝5～10s8流水冲洗15～30s9%曙红液染色30～60s10蒸馏水稍洗1～2s1180%乙醇1～2s1295%乙醇1～2s13无水乙醇1～2s14石炭酸二甲苯2～3s15二甲苯Ⅰ2～3s16二甲苯Ⅱ2～3s17中性树胶封固;注：第14步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;染色结果：细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色;4．12切片脱水透明切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖;如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色;切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水;石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去;染色评定标准：1切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕；2染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观;4 染色结果编辑细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色;细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色;胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色;着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变;例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染;胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深;Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一;试剂：Regaud 氏苏木精：苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml;将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用;Masson丽春红酸性复红液：丽春红,酸性复红,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml; %冰醋酸水溶液：冰醋酸 ml,蒸馏水100 ml;1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g,蒸馏水100 ml;苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g,蒸馏水98 ml,冰醋酸2 ml;1%光绿水溶液：光绿 1g,蒸馏水100 ml;Masson三色法步骤1．石蜡切片脱蜡至水;2．铬化处理或去汞盐沉淀甲醛固定的组织此步可略;3．依次自来水和蒸馏水洗;4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min;5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化;6．蒸馏水洗;7．用Masson 丽春红酸性复红液5-10min;8．以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻;9． 1%磷钼酸水溶液分化3-5min;10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min;11．以%冰醋酸水溶液浸洗片刻;12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固;结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色如光绿液染色为绿色,胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色;体会与说明：1．控制好染色步骤;2．组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间; 3．%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳;4．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可;天狼猩红染色试剂配制1天狼星红饱和苦昧酸液 O．5％天狼星红10ml,苦味酸饱和液90ml;2天青石蓝液天青石蓝B1．25g．铁明矾1．25g,蒸馏水250ml;溶解煮沸、待冷却过滤加入甘油30ml,然后再加入浓盐酸0．5ml;染色步骤1中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水;2人大青石蓝液染5一lOmin;3蒸馏水洗3次;4天狼星红饱和苦昧酸浓染15-30min5无水乙醇直接分化与脱水;Devil二甲苯透明,中性树胶封固;注意事项1细胞核里染色可以用Harris苏木素染色液谈染;2染色封固后的切片,须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩注：在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维;l型胶原纤维：紧密排列,显示很强的双折光性,呈黄色或红色的纤维oll型胶原纤维：显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布;皿型胶原纤维：显示弱的双折光,呈绿色的细纤维;lv型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜,呈淡黄色;免疫组化步骤ABC法1;4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液4℃中过夜;蜡块制作;切片,贴片;清洗5min×3后；2;加入配好的%的过氧化氢甲醇溶液甲醇80ml＋ 100ml＋30%过氧化氢30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,清洗5min×3；3;加入配好的% Triton X10030% Triton X100＋ 100ml30min,以增加细胞的通透性,清洗5min×3；4;加入用血清稀释液牛血清白蛋白＋ 100ml＋叠氮纳稀释的一抗,4℃存放24-48h；吸去抗体,洗5min×3；5;加入稀释的的二抗,室温孵育2h;洗5min×3；6;加入ABC复合物之类的抗体,室温孵育2h,洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次；7;加入显色液,进行免疫组织化学显色,时间一般不超过30min,可不时在显微镜下进行观察,待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液,用蒸馏水迅速冲三次后加入终止反应；8;梯度酒精脱水之后,封片,拍照;免疫组化SP法步骤：SPstreptavidin-perosidase法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法.按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等;按染色步骤可分为直接法又称一步法和间接法二步、三步或多步法；按结合方式可分为抗原—抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶PAP法和亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物ABC法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法等,其中SP法是最常使用的方法;一般的sp法步骤啊,具体如下：1.烤片,68℃,20分钟,2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min；4. 抗原修复:置枸橼酸缓冲液PH 中用煮沸95℃,15－20min,自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min;5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗.6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照；滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS 冲洗3X5min;8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片;免疫组化Elivision二步法：1石蜡切片置于67℃烘箱中,烘片2小时,脱蜡至水,用的PBS冲洗三次,每次3分钟3×3’;2取一定量pH=柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理10分钟,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3’;注：不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定3每张切片加1滴3% H2O2,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性;PBS冲洗3×3’;4除去PBS液,每张切片加1滴相应的第一抗体相应稀释倍数,室温下孵育2小时;5PBS冲洗3×5’;除去PBS液,每张切片加1滴聚合物增强剂试剂A,室温下孵育20分钟;PBS冲洗3×3’;6除去PBS液,每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物试剂B,室温下孵育30分钟;PBS冲洗3×5’7除去PBS液,每张切片加1滴新鲜配制的DAB液,显微镜下观察5分钟;8苏木素复染,%HCl分化,自来水冲洗,蓝化,切片经梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固,晾干后观察;注：即用型第二代免疫组化Elivision plus广谱试剂盒,购自福州脉新生物技术开发有限公司;包括：生物素化抗兔二抗、亲和素Reagent A、生物素－辣根过氧化物酶Reagent B、二氨基联苯胺DAB脱钙剂的配置10%EDTA的配置：1加热水浴锅到65℃2称取NaOH11g加到900mlddH2O中3再加入EDTA-Na2100g至水中；4水浴加热,搅拌至透明溶解5加入Na2HPO46g,NaH2PO4,NaCl9g;蒸馏水定容至1000ml 6调节pH值至~,室温或4度保存。
HE染色步骤[推荐]
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HE染色步骤[推荐]
染色是加入染料将细胞或组织着色的过程。
HE染色是指使用
血红蛋白染成红色，细胞核染成蓝色的染色方法。
HE染色步骤如下：
1. 取制好的玻片（细胞或组织已固定在玻片上），用甲醇或乙醇进行脱水，使细胞或组织变得透明。
2. 将玻片放入染料盒中，加入苏丹三液（血红蛋白染料）浸泡。
时间通常为5-10分钟。
洗净玻片以去除多余的染料。
3. 将玻片放入氧化性酸液中（酸性洗涤液或稍微含有酒精的酸性水溶液），将苏丹三液中的铁离子还原成溶于水的亚铁离子。
时间通常为1-2分钟。
4. 接下来，将玻片放入碱性染色液中（含有甲苯重组溶液和酸性洗涤液的甲苯重组溶液），染色液中的亚铁离子被氧化成沉淀（血红蛋白）。
5. 最后，将玻片漂洗并脱水，然后用透明介质将玻片封闭，使其防止氧化。
通过HE染色，可以使细胞核染成蓝色，血红蛋白染成红色，
从而在显微镜下清晰地观察细胞或组织的结构和特征。
这是一种常用的组织学染色方法。
HE染色方法与步骤吐血整理
HE染色方法与步骤吐血整理染色是一种常见的实验技术，用于观察和分析生物样品中的细胞或组织结构。
HE染色是一种常用的组织和细胞染色方法，它能够同时染色细胞核和细胞质，因此得名HE（hematoxylin and eosin）染色。
下面是HE染色的步骤：1.染色前的准备工作：-选择合适的组织样品，通常是已固定和包埋的组织切片。
-准备好需要使用的试剂和设备，包括显微镜玻片、切片刀、染色盘、醇和蜡解剂、染色液和显微镜。
-将切片从包埋蜡中去蜡，并通过浸泡在蜡解剂中来溶解蜡质。
2.组织切片的处理：-将组织切片通过水洗涤，去除蜡解剂和剩余的蜡质。
-将切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片逐渐转移到无水状态。
-将脱水处理后的切片通过透明质量更好的试剂（如亚硫酸氢钠或甘油）进行透明处理，以利于细胞的观察。
3.组织切片的染色：-首先进行碱性染色，即将切片浸泡在染色盘中的伊洛酮溶液中，伊洛酮是一种天然的染色物质，能够与细胞核结构中的DNA结合，使细胞核染色为暗蓝色。
-然后进行酸性染色，即将切片浸泡在染色盘中的苏木精溶液中，苏木精是一种带正电荷的染色物质，能够与细胞质结构中的负电荷部分结合，使细胞质染色为粉红色。
4.组织切片的脱水和封片：-将染色后的切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片从水状态逐渐转移到无水状态。
-将切片在醇溶液中固定一段时间，然后转移到透明的试剂（如苏木精和二甲苯混合溶液）中进行浸泡。
- 最后将切片取出，放在显微镜玻片上，滴入固定剂（如Canada Balsam）并加盖玻片，使切片固定在玻片上。
5.显微镜观察和分析：-使用显微镜观察染色后的组织切片，并通过不同增大倍数的镜头进行详细观察。
-根据观察到的细胞和组织结构，进行分析和研究，并将观察结果记录下来。
需要注意的是，HE染色是一种简单、快速且广泛应用的染色方法，但在不同类型的组织和细胞中可能会有不同的染色效果。
因此，在进行HE染色时，需要根据具体实验要求和样品的特点，进行相应的优化和调整。
HE染色操作流程
HE染色操作流程HE染色（Hematoxylin and Eosin Staining）是一种常用的组织学染色方法，用于观察和诊断组织学切片。
HE染色通过染色剂HE染料的组合，使细胞核染成紫色，胞质染成粉红色，从而揭示组织的结构与形态。
HE染色的操作流程一般包括标本处理、脱水、透明化、分解蜡和染色五个步骤。
下面将详细介绍每个步骤的具体操作。
1.标本处理：首先，将切割好的组织标本放入10%中性缓冲福尔马林进行固定，一般固定时间为24-48小时。
固定后，将组织标本转移到70%乙醇中进行离子交换，使组织中的水分逐渐去除。
2.脱水：将固定的组织标本依次转移到浓度逐渐提高的乙醇溶液中，如80%乙醇、95%乙醇和绝对乙醇，每个乙醇浓度保持15-30分钟。
这个过程称为脱水，目的是逐渐去除组织中的水分，使组织内的乙醇浓度逐渐升高。
3.透明化：将脱水后的组织标本依次转移到透明剂中，如苯并三氮唑、次氯酸、二氯甲烷等。
每种透明剂浓度和时间要根据实验需求进行调整，这个步骤的目标是使组织中的乙醇慢慢溶解，透明度增强。
4.分解蜡：将透明后的组织标本转移到蜡纸中，加热到60-65°C的融点，使固定的组织标本逐渐融化。
蜡纸是由石蜡和植物油混合而成，有助于固定和保护组织的形态。
5.染色：将脱蜡的组织标本依次转移到碱性染料（如血红素）溶液中，染10-15分钟，然后洗净；接着将组织标本转移到酸性染料（如紫杉醇）溶液中，染5-10分钟，然后洗净。
紫杉醇染料使细胞核染色成紫色，血红素染料使细胞胞质染色成粉红色。
最后用安全过滤垫将组织标本封装在玻片上，去除水分，然后用覆盖玻片进行固定。
细胞HE染色的标准操作规程(SOP)
细胞HE染色的标准操作规程（SOP）SOP编号：SOP-YK-QT-019-1 页数：4制定人：审核人：批准人：（签名、日期）（签名、日期）（签名、日期）生效日期：颁发日期：修订登记：审查登记：一、目的是细胞水平的实验研究的基础。
二、准备1.器材：手术刀、剪、镊、止血钳、空针、解剖针和不锈钢或泥龙筛网、培养皿、小烧杯、吸管、离心管、三角瓶、棉球、血细胞计数板。
2.消毒：2.1工作台的消毒：操作前用紫外线照射30分或消毒液、酒精棉球擦拭消毒。
2.2器材的消毒：对解剖器械和器具高温高压消毒，对取材过程中要用到的培养液、平衡盐溶液以及蛋白酶消化液等用微孔滤膜过滤除菌。
2.3操作者的消毒：按外科手术要求洗手和着装。
肥皂水洗手后，消毒液洛本清擦拭，穿衣，戴帽子口罩和手套。
实验过程中怀疑被污染可用酒精擦拭。
3.取材及制备培养材料的基本步骤∶3.1切取或摘取欲培养的动物器官或大块组织，在培养液或平衡盐溶液中洗涤去除血污，剔除附带的脂肪组织、被膜结蒂组织及坏死组织。
必要时可借助显微镜，操作过程中不断给组织块滴加培养液或平衡盐溶液以保持湿润。
3.2将所取的组织块放在盛有培养液的培养皿中，解剖显微镜下将组织切成1mm3左右的小块用于植块培养。
3.3分离细胞培养，先在培养液或平衡盐溶液中剪碎组织，将组织连同培养液用吸管吸至离心管中静置，组织下沉后吸去上清。
加蛋白酶消化液密封，置37度或其他温度条件下消化15～45分，中途用手摇匀数次。
消化结束后吸去含酶溶液，加蛋白酶抑制剂或含血清的培养液终止蛋白酶活性。
用吸管或空针吸取液体吹打组织，以组织块刚好消散为宜。
3.4将制备好的细胞悬液用不锈钢网筛过滤，收集滤液。
如果未滤过的组织过多，可重复上述步骤3)然后再次过滤。
3.5离心滤过液，转速为800～1000r/min，时间为5～10min。
3.6弃上清，将细胞沉淀用少量细胞培养液重新制备为细胞悬液。
3.7细胞计数板计数细胞密度。
实验指南·细胞实验HE染色
实验指南·细胞实验HE染色点HE染色做为病理实验中常见的方法之一，想必大家都不陌生，今天跟大家再一起看看具体它的基本原理和操作流程1HE染色基本原理HE染色法之所以成为细胞染色最常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外，还有物理作用中吸附、吸收效果，使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。
属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色，为酸性的伊红使细胞着红色，其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。
两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率，在光镜下呈现出细胞图像。
★★ ★ ★★2HE染色实验材料固定液：冰丙酮、常用95%乙醇苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，再取NaIO 31g，水5ml，然后加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%盐酸系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶培养皿、培养瓶、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜3HE染色操作步骤01石蜡切片脱蜡至水依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗02苏木素染细胞核切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6%氨水返蓝，流水冲洗03伊红染细胞质切片入伊红染液中染色1-3min04脱水封片将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片05显微镜镜检，图像分析若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5minQ浙江华臻生物A浙江华臻生物技术公司是一家集生物医学基础研究、科研产品研发销售于一体的科研服务公司。
HE染色操作流程
H E染色操作流程 The document was finally revised on 2021HE染色操作流程HE染色，即是苏木精-伊红染色法，是最常用的染色方法，在质量较佳的HE染色切片上，各种组织或细胞的一般形态结特点都可以观察到。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
[试剂材料]1.试剂：%醇溶性伊红染液，改良的哈瑞（Harris）苏木素，%盐酸酒精溶液伊红：配制方法：中性红 0.5g，80%酒精100ml,将伊红溶于酒精内搅拌，全部溶解后即可使用。
苏木精：配制方法：A液：苏木素1g，无水酒精10mlB液：硫酸铝钾20g，蒸馏水200ml两液分别溶解后混合，加热煮沸后，慢慢加入红色氧化汞，此时有大量气泡产生，故容器要大，以防液体溢出，然后将染液迅速冷却，冷却后过滤，并每100ml加入冰醋酸6ml，甘油10ml。
%盐酸酒精溶液配制方法：盐酸，70%酒精100ml2.材料：石蜡切片[操作流程]1.将石蜡切片置于烘箱中60℃烤1～2h；2.石蜡切片常规二甲苯，乙醇脱蜡至水，3.苏木素染10分钟，4.流水冲洗，去余色，5.0.7%盐酸乙醇分化数秒钟，6.流水冲洗，切片变蓝约15分钟，%乙醇30秒钟，8.酒精性伊红染30秒，95%乙醇30秒钟，95%乙醇30秒钟，100%乙醇30秒钟，%乙醇30秒钟，13.石碳酸二甲苯30秒钟，（1： 4石碳酸1-二甲苯4）二甲苯30秒钟，二甲苯30秒钟，16.中性树胶封片。
[实验结果]：镜下观察细胞核呈蓝色；细胞浆一般呈红色；胶原纤维呈不同程度的红色，红细胞呈亮红色；粘蛋白呈浅蓝色；钙化组织呈深蓝色等。
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HE染色实验原理及步骤
HE染色实验原理及步骤染色原理1、细胞核染色原理苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色原理细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH 值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。
当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。
因此必须把pH 调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
3、分化作用染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。
在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。
经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
因此，在HE染色中分化是极为关键的一步。
4、返蓝作用分化之后，苏木精在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色，在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。
组织切片经0.5%盐酸乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水除去组织切片上的酸而终止分化，再用弱碱性水（0.2%氨水）使苏木精染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。
HE染色操作常规流程
HE染色操作常规流程1.实验前准备：1.1收集待染色的样本（如组织切片、细胞涂片等），确保样本保存完整和无污染。
1.2准备好所需的染色试剂：包括有水洗试剂（如去离子水）、染色试剂（如伊红、伊红酒精和亚甲蓝）、染色剂工作液（如伊红酒精和亚甲蓝溶液）等。
2.试片处理：2.1将组织切片或细胞涂片分别放入热腺管或玻璃片上。
2.2连续经过苯酚甲酸苯酯脱脂、乙醇梯度洗脱等步骤，去除样本中的脂肪和碱性物质，以减少后续染色的干扰。
2.3用去离子水洗涤样本，使其充分湿润，除去残存的试剂。
3.染色操作：3.1把处理好的样本放入腺管或玻璃片，倒入伊红酒精溶液中，用大约15-30分钟染色，使细胞和组织成为红色。
3.2轻轻用清水漂洗试品，去掉多余染色液。
3.3加入亚甲蓝液，使样本转为蓝色，使细胞核染色成深蓝色，时间为1-2分钟。
3.4再次用清水将试品漂洗干净。
4.固定和封片：4.1用醋酸纤维素或氯仿等溶剂固定染色后的试片，使试样中的颜色得以固定。
4.2在试片上加一滴封片剂（如封片胶）。
4.3将盖玻片缓慢地放在试片上，使封片剂均匀地覆盖整个样本。
4.4将封片剂封住，使细胞和组织样本能够在显微镜下观察。
5.显微镜观察：5.1将染色好的试片放在显微镜下，调整镜头，适当调节光线强度和聚焦位置，以便观察样本的细节。
5.2观察细胞和组织的形态、染色强度和细胞核的染色情况，并进行必要的记录和照片拍摄。
以上就是HE染色操作的常规流程。
通过此流程，我们可以对细胞和组织样本进行染色，从而得到对染色体分辨和鉴定的结果。
这一技术使我们能够更好地了解细胞和组织样本中的结构和功能，对于生物学和遗传学的研究具有重要意义。
HE染色试验技术及注意事项
HE染色试验技术及注意事项HE染色是一种常用的细胞和组织染色技术，被广泛应用于组织学、病理学以及生物学研究中。
本文将介绍HE染色试验的技术步骤和注意事项。
1.取得组织标本：首先需要取得待染色的组织标本。
一般情况下，可选择人体组织或动物组织。
组织标本应尽可能新鲜，并采用适当的方法进行保存。
2.固定组织标本：将组织标本固定在染色盘或载玻片上，以便后续的染色过程。
一般可选择使用福尔马林等化学物质进行固定，固定时间根据组织类型和标本大小而有所差异。
3.脱水：将固定的组织标本逐渐脱水，以去除组织中的水分。
这一步骤可以通过使用乙醇或异丙醇等溶剂进行。
4.渗透：在脱水之后，组织标本需要通过将其浸入合适的介质中进行渗透。
一般可使用有机溶剂，如丙酮或二甲苯。
5.制片：将渗透的组织放置在试管或盛有液体的容器中，然后将其切割成较薄的切片。
切片的厚度一般为3-5微米。
切片可以使用组织切割机或手工切片进行。
6.上染剂：将切片放入HE染色试剂中，浸泡一定时间以完成染色。
HE染色试剂主要由酸性染料和碱性染料组成，其中酸性染料为苏木精，碱性染料为伊红。
7.清洗：用去离子水或蒸馏水轻轻冲洗染色后的切片，以清除未结合的染色剂。
8.脱水：将染色后的切片通过逐渐浸入不同浓度的醇溶液中进行脱水，去除多余的水分。
9.透明化：使用透明介质，如柳酮或醋酸酯，使切片透明并保护其结构。
10.固定封片：将透明的切片放置在载玻片上，涂上适当的封片胶固定。
然后将载玻片放至烘箱中，进行封片胶的固化。
1.样本的存放：取得的组织标本必须及时固定和保存，以避免样本的腐败和变形。
2.染色时间控制：染色时间的长短会影响到最终染色结果的清晰度。
过长或过短的染色时间都会导致结果模糊不清。
3.清洗彻底：在清洗环节，要确保切片上的染色剂完全被清洗干净，以避免染色剂残留影响结果。
4.切片的薄度：切片的厚度直接影响到染色结果的清晰度和质量，因此需要掌握好切片的技巧和标本的处理。
病理HE染色流程
病理HE染色流程HE染色流程主要分为固定、脱水、清理、浸透、染色、脱色、洗涤和封片几个步骤。
下面将详细介绍每个步骤的操作。
1.固定：将取得的组织标本放入含有10%中性缓冲福尔马林中固定。
固定过程中，福尔马林可与细胞内的蛋白质发生共价结合，固定细胞组织。
2.脱水：将已固定的组织标本放入连续浓度逐渐增高的乙醇溶液（通常为70%、85%和95%乙醇）中脱水，以去除组织中的水分。
每种乙醇中的时间一般为1-2小时。
3.清理：将乙醇脱水后的组织标本放入清理剂（如苯、半乳索甘和二甲苯等）中浸泡，以溶解并除去脂类物质。
清理的时间一般为2个小时。
4.浸透：将清理后的组织标本放入浸透剂（如苯乳、半乳索甘和二甲苯等）中浸泡。
浸透剂可与标本中的清理剂互溶，并在选择性的清理脂质的同时，逐渐溶解脱水的细胞质内部结构。
浸透的时间一般为2个小时。
5.染色：将浸透后的组织标本放入酸性染料和碱性染料的混合物中浸泡。
酸性染料主要染色细胞核，如黑苦味酸铁染料；碱性染料主要染色胞质，如伊红染料。
染色的时间一般为5-15分钟。
6.脱色：将染色后的组织标本放入脱色剂（如乙醇和苯）中浸泡，以去除多余的染色剂。
脱色的时间一般为1-2分钟。
7.洗涤：将脱色后的组织标本用水流洗涤，以除去余留在标本上的脱色剂和染色剂。
8.封片：将洗涤后的组织标本放入玻璃干拭片中，用透明石蜡和玻璃片封住，以保护标本并便于观察。
以上是病理HE染色的主要步骤和操作方法。
HE染色可以清晰地显示出细胞核和胞浆的形态结构，帮助病理学家对组织样本进行诊断和评估。
虽然HE染色流程简单，但操作时需要细心和耐心，以确保染色结果的准确性和可靠性。
HE染色实验步骤
HE染色实验步骤HE染色是一种常用的细胞染色方法，用于染色细胞核和胞质。
以下是HE染色实验的详细步骤：1.组织样本的固定：将组织样本（如组织切片）固定在玻片上，以使其保持形态和结构。
常见的固定剂有甲醛、乙醇等。
将切片置于固定剂中浸泡一段时间，通常为24小时。
2.脱水：将固定的组织样本进行脱水处理，以去除其中的水分。
脱水过程常采用不同浓度的乙醇溶液，从低浓度到高浓度逐渐浸泡，通常为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和绝对乙醇。
每个乙醇浓度的浸泡时间可以根据需要调整，但通常为2-3分钟。
3.渗透：为了使切片更容易与染料接触并吸收，需要对其进行渗透处理。
常见的渗透剂是亚麻酸，通常在乙醇浓度为90%时进行处理。
将切片放入亚麻酸中浸泡2-3分钟。
4.包埋：将渗透处理后的组织切片逐步置于熔蜡中，使其被包裹在蜡中。
可用化学品如戊二醛蜡、乙蜡等作为包埋材料。
首先，将切片置于低熔点蜡中，如55-60℃的乙蜡，浸泡30分钟至1小时。
然后，将切片置于高熔点蜡中，如60-65℃的戊二醛蜡，浸泡1小时至数小时。
5.包块切割：将包埋的组织块放在切片机中，用刀片切成薄片。
通常切片厚度为4-5μm。
切好的切片将浮在热水中，并从切片机上取出。
6.切片贴片：使用刷子将切片轻轻移至玻片上。
刷子应先浸泡在水中，然后轻轻刷过切片以避免切片损坏。
7.焙烧：将装有切片的玻片放在干燥器中，或将其放在烘箱中进行干燥。
干燥温度和时间可根据需要进行调整，通常为60-70℃，2-3小时。
8. 染色：使用Harris液体染料进行染色。
HE染色中的染料包括酸性染料苏丹Ⅰ（hematoxylin）和碱性染料伊红（eosin），也称为碱性苏丹染料。
将组织样本浸入苏丹Ⅰ染料中，时间为2-5分钟。
然后将其转移到酸性水中漂洗30秒至1分钟，以去除多余的苏丹Ⅰ染料。
接下来，将样本浸入伊红染料中，时间为1-2分钟。
最后，将样本漂洗并在流水下冲洗。
9.脱色：如果染色后的切片颜色过浓，需要进行脱色处理。
病理HE染色流程
HE染色流程以及染色过程中的一些注意事项：一取材和固定取材后经固定24小时（4%PA灌注取材的后固定6~8小时）以后，流水冲洗24小时，置于70%~80%乙醇中，可长期保存。
二脱水和包埋1、95%A LC（二道）Ⅰ2~4hⅡ 2h2、无水AL C（二道）Ⅰ 1.5hⅡ1h3、二甲苯+无水乙醇（1：1）20min4、二甲苯（二道）Ⅰ 10m in（注：脱水透明esp.透明时间可适当延长）Ⅱ 10m in5、浸软蜡（50~52℃）（二道）Ⅰ 30minⅡ 1h6、浸硬蜡（58~60℃）（二道）Ⅰ30minⅡ 30m in7、包埋：注意温度、切面。
三切片修、切、展、贴、烤（烤片55~60℃） 3~10h四HE染色1、二甲苯脱蜡五道，每道5~10分钟2、无水乙醇Ⅰ5minⅡ 5min3、95%乙醇Ⅰ 5minⅡ 5m n4、80%乙醇5min5、70%乙醇 5m in6、D．W．3~5mi n7、H arris苏木素液5min（冬天可适当延长，eg.20mi n）8、水洗9、0.5%盐酸酒精分色 3~10secon ds，镜下观察10、水洗蓝化 15~30min（注意换水）11、70%乙醇5min12、80%乙醇5min13、伊红液（95%乙醇溶液）3~30s econd s14、95%乙醇Ⅰ 1m inⅡ5min15、无水乙醇Ⅰ5minⅡ 5mi n16、二甲苯+乙醇（1：1） 5mi n17、二甲苯Ⅰ 5minⅡ 5m inⅢ5min18、中性树胶封片。
HE染色注意事项：1. 染色时调节pH值很重要。
如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。
HE染色操作常规流程
HE染色操作常规流程
切好的片子应在60~70℃左右的烤箱中烘烤30分钟以上才能进行染色。
HE染色手工程序：
脱蜡
1、二甲苯Ⅰ（AR）5分钟
2、二甲苯Ⅱ（AR）5分钟
3、100%酒精Ⅰ（AR、无水乙醇）1分钟
4、100%酒精Ⅱ（AR、无水乙醇）1分钟
5、95%酒精（工业酒精或医用酒精）1分钟
6、80%酒精（工业酒精或医用酒精）1分钟
7、自来水浸洗1分钟
以上3~7称为进水过程。
染色
1、苏木素染液6分钟
2、水冼1分钟
3、0.5-1%盐酸酒精分化片刻（上下三次颜色由蓝变红）
4、自来水冲冼15分钟以上
（然后95%酒精片刻，主要是避免所带的水份稀释以下的伊红酒精，此步可免）
5、1%伊红酒精浸染1~2分钟
6、水冼1分钟
脱水、透明、封固
95%酒精Ⅰ1分钟
95%酒精Ⅱ1分钟
100%酒精Ⅰ1分钟
100%酒精Ⅱ1分钟
石炭酸二甲苯(1:3) 10秒钟
以上称为脱水。
二甲苯Ⅰ透明1分钟
取出后用中性树胶（上海产，预先用二甲苯溶解，粘稠度适中即可）封固。
染色结果：
核：蓝黑色
胞浆：不同程度的粉红色
肌纤维：较深的粉红色
胶元纤维：淡红色
红细胞：桔红色。
细胞he染色的操作流程
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HE染色的步骤及方法
HE染色的步骤及方法HE染色（hematoxylin and eosin staining）是一种广泛应用于组织学研究与临床病理学中的常规染色方法，用于显示组织和细胞的形态结构、特征和组织的组织学构造。
HE染色的主要步骤包括固定、脱水、透明、浸染、洗涤、脱色、洗涤、著色、酸洗、洗涤和封片等。
下面将详细介绍每个步骤的具体方法。
1.固定：将待染的组织标本放入含有4%至10%的缓冲醛（如10%的中性缓冲醛）中固定。
固定的时间一般为24至48小时，具体时间根据组织的大小和种类而定。
2.脱水：在固定后，将组织标本转移到带有不同浓度的乙醇溶液中进行脱水。
脱水的目的是逐渐将水分从组织中溶解掉，以便更好地进行后续处理。
常用的乙醇浓度为70%、80%、95%、绝对乙醇和绝对乙醇。
3.透明：将脱水的组织标本转移到透明剂中，如苯酚、甘油等。
透明的目的是去除残留的乙醇，并将标本与石蜡相容，以便进行后续处理。
4.浸染：将透明的组织标本转移到硬化的石蜡中，通过加热使其温度达到融点，使组织与石蜡充分浸透。
通常情况下，标本需要浸染多次以确保充分浸透。
5.洗涤：将浸染好的组织放入清洁的容器中，用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除未浸透的石蜡。
6. 脱色：将洗净的组织标本放入xylene或但醇溶液中进行脱色，以去除标本中的石蜡。
脱色时间视标本的大小和种类而定，通常为30分钟至1小时。
7.再洗：将脱色的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的脱色剂。
8. 著色：将洗净的组织标本置于染色剂中进行著色。
HE染色中，常用的染色剂为血红和嗜酸性染料安伊汀（Eosin）。
组织标本一般需在血红染色剂中浸泡2至5分钟，然后脱水，再在安伊汀染色剂中浸泡2至5分钟。
也可根据需要调整具体的染色时间。
9.酸洗：将著色好的组织标本用弱酸性缓冲液进行酸洗，以去除过量的染色剂。
酸洗时间一般为几秒钟至几分钟。
10.再次洗涤：将经酸洗的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的酸洗液。
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细胞HE染色的标准操作规程（SOP）
SOP编号：SOP-YK-QT-018-1 页数：3
制定人：审核人：批准人：
（签名、日期）（签名、日期）（签名、日期）生效日期：颁发日期：
修订登记：
审查登记：
一、目的
观察细胞的一种手段。
二、准备
1.器材：显微镜、载玻片、染缸、无齿的显微镊、滤纸。
2.药品：10%甲醛（福尔马林）、丙酮、蒸馏水、苏木精染液、0.5%盐酸、70％乙醇、10%碳酸氢钠、伊红染液、90％乙醇、95％乙醇、100％乙醇、二甲苯、树胶。
三、操作步骤
1.用10%甲醛（福尔马林）固定培养物30分钟，或以丙酮固定15分钟。
2.蒸馏水洗1次后，入苏木精染液5－10分钟染细胞核。
3.入0.5%盐酸－70％乙醇溶液30分钟，脱出胞质的着色，
此时核呈紫红色。
4.入碱性溶液碱化，使细胞核变成蓝色。
如果时间允许，最好用自来水（呈弱碱性）长时间浸泡，也可入10%碳酸氢钠溶液。
此过程不断用显微镜观察，以掌握碱化时间。
5.蒸馏水洗1分钟，去除残留的碱性溶液，否则影响伊红着色。
6.入伊红染液30秒－1分钟。
7.用梯度乙醇溶液脱水：70％、90％、95％乙醇各30秒－1分钟；100%（2次）各2次。
如伊红为乙醇溶液，略去70％乙醇。
8.用二甲苯透明2次，各5分钟。
9.树胶固封。
四、注意事项
严格掌握各步骤时间。