实验八_酶性质——最适PH选择
酶的性质的实验报告
一、实验目的通过本实验，加深对酶性质的认识，了解酶的专一性、温度、pH值对酶活性的影响及其检测方法，掌握其原理及检测方法。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效性、专一性和可调节性等特点。
酶的活性受多种因素的影响，包括温度、pH值、底物浓度等。
本实验通过观察不同条件下酶的活性变化，探讨影响酶活性的因素。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 酶制剂- 底物- pH缓冲液- 温度计- 移液器- 试管- 恒温水浴箱2. 仪器：- 酶活性测定仪- 紫外可见分光光度计四、实验方法1. pH对酶活性的影响：- 将酶制剂和底物分别加入不同pH值的缓冲液中，混合均匀。
- 将混合液置于恒温水浴箱中，在不同温度下保温一定时间。
- 使用酶活性测定仪检测酶活性。
2. 温度对酶活性的影响：- 将酶制剂和底物分别加入同一pH值的缓冲液中，混合均匀。
- 将混合液置于不同温度下保温一定时间。
- 使用酶活性测定仪检测酶活性。
3. 底物浓度对酶活性的影响：- 将酶制剂和不同浓度的底物分别加入同一pH值的缓冲液中，混合均匀。
- 将混合液置于恒温水浴箱中，在不同温度下保温一定时间。
- 使用酶活性测定仪检测酶活性。
五、实验结果与分析1. pH对酶活性的影响：- 随着pH值的升高，酶活性逐渐增加，达到最适pH值后，酶活性逐渐降低。
- 最适pH值因酶的种类而异，如胃蛋白酶的最适pH值为1.8-2.2，胰蛋白酶的最适pH值为7.0-8.0。
2. 温度对酶活性的影响：- 随着温度的升高，酶活性逐渐增加，达到最适温度后，酶活性逐渐降低。
- 最适温度因酶的种类而异，如胃蛋白酶的最适温度为37℃，胰蛋白酶的最适温度为40℃。
3. 底物浓度对酶活性的影响：- 随着底物浓度的增加，酶活性逐渐增加，达到一定浓度后，酶活性不再增加。
- 酶活性与底物浓度的关系呈饱和曲线。
六、结论1. 酶的活性受pH值、温度、底物浓度等多种因素的影响。
2. 酶的最适pH值和最适温度因酶的种类而异。
某大学生物工程学院《生物化学》考试试卷(410)
某大学生物工程学院《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（95分，每题5分）1. 多数寡聚蛋白质分子其亚基的排列是对称的，对称性是蛋白质分子四级结构的最重要的性质之一。
（）答案：正确解析：2. 和其他生物一样，每一种病毒都含有RNA及DNA两种核酸。
（）答案：错误解析：病毒只含有DNA或RNA，分为DNA病毒和RNA病毒两种。
3. 符合米氏方程式的酶促化学反应，其最大反应速度不受添加竞争性抑制剂的影响。
（）。
答案：正确解析：4. 当谷氨酸在pH5.4的醋酸缓冲液中进行电泳时，它将向正极运动。
（）答案：正确解析：5. 羧肽酶A的分子外部主要是α螺旋构象，分子内部主要是β折叠的构象。
（）答案：正确解析：6. 组成多糖的大多数单糖是L型。
（）答案：错误解析：组成多糖的大多数单糖是D型。
7. 功能蛋白质分子中，只要有氨基酸残基发生改变都会引起生物功能的丧失。
（）[武汉科技大学2018研]答案：错误解析：一个典型蛋白质的功能决定于它的三维结构，而蛋白质所采取的三维结构又决定于它的氨基酸序列。
若由于氨基酸残基发生的改变影响了该蛋白质的三维结构，则会引起其生物功能的丧失，但若未影响其三维结构，则不一定会引起生物功能的丧失。
8. 血红蛋白的α链、β链和肌红蛋白的肽链在三级结构上很相似，所以它们都有结合氧的能力。
血红蛋白与氧的亲和力较肌红蛋白更强。
（）答案：错误解析：对一定的氧压而言，肌红蛋白与氧的亲和力较血红蛋白强。
9. 化学本质为蛋白质的酶是生物体内唯一的催化剂。
（）答案：错误解析：10. 糖的变旋现象是由于糖在溶液中起了化学作用。
（）答案：错误解析：糖的变旋现象不是由于糖在溶液中起了化学作用，而是由于其分子结构在溶液中起了变化，从α型变成β型或相反地从β型变成α型。
酶最适ph实验报告
酶最适ph实验报告1. 引言酶是一类生物催化剂，能够加速化学反应，并在催化过程中保持自身不发生变化。
酶的活性和稳定性受多种因素的影响，其中pH是酶活性和稳定性的重要因素之一。
pH指的是溶液的酸碱度，是用来描述溶液中氢离子（H+）的浓度的一个指标。
不同酶对pH的要求不同，每个酶都有一个最适pH值，即酶活性最高的pH值。
本实验旨在确定某一酶的最适pH值。
2. 实验材料和方法2.1 实验材料- 实验酶：X酶- 缓冲液：pH 3、5、7、9、11的缓冲液各一个- 反应底物：底物A和底物B- 试管：5个- 移液器：5个2.2 实验方法1. 准备5个试管，标记为试管1至试管5。
2. 在试管1中加入1ml pH 3缓冲液，试管2中加入1ml pH 5缓冲液，以此类推，试管3至试管5分别加入1ml pH 7、9、11缓冲液。
3. 将试管1至试管5分别放入不同的恒温水浴中，使其温度保持一致。
4. 在试管1中加入1ml X酶和1ml 底物A，立即开始计时。
5. 在反应开始后每30秒取出试管1，向其中加入1ml底物B，再迅速放回水浴中。
6. 重复步骤4和步骤5，记录下每次添加底物B的时间和测得的吸光值。
7. 在试管2至试管5中重复步骤4至步骤6，分别使用对应pH的缓冲液、X 酶、底物A和底物B。
8. 将所得结果整理并绘制曲线图。
3. 实验结果及分析将得到的实验数据整理如下表：时间（s）pH 3 pH 5 pH 7 pH 9 pH 110 0.1 0.1 0.1 0.1 0.130 0.2 0.15 0.25 0.08 0.0560 0.4 0.2 0.3 0.06 0.0290 0.6 0.18 0.35 0.05 0.01120 0.8 0.15 0.4 0.04 0.01150 0.9 0.12 0.45 0.03 0.01根据上表中测得的吸光值数据绘制曲线图，横轴表示时间（s），纵轴表示吸光值。
影响酶促反应的因素——温度,ph,激活剂及抑制剂,生化实验报告(共8篇) 影响酶促反应速度的因素生化实验实验二影响酶促反应速度的因素【目的】观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
【原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。
淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。
在不同温度，不同PH值下，唾液淀粉酶活性不同，催化淀粉水解程度不一，生成的产物也就不同。
此外，激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性，影响淀粉的水解。
因此可根据在不同反应条件下，溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度，从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
淀粉I2 【操作】1. 温度对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：2. PH对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：3．激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响取4支试管，编号，按下表操作：【结果及分析】观察各管颜色变化，说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。
【实验注意事项】篇二：生化实验思考题参考答案生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么？答：生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。
从科研工作的角度选材，还应当注意具体的情况，如植物的季节性、地理位置和生长环境等，动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等，微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。
2、材料的破碎方法有哪些？答：(1) 机械的方法：包括研磨法、组织捣碎法；(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等；(3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。
实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。
间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。
唾液淀粉酶最适pH的测定
唾液淀粉酶最适pH的测定【摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。
温度一定时,酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。
在不同pH值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适pH值。
在不同pH条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。
Enzymes are highly efficient catalytic ability of biological macromolecular material, phase at the same time, initial concentration of enzyme catalytic activity was mainly affected by factors such as temperature, pH value. At a certain temperature, the highest enzyme activity of enzyme in the pH value of the temperature of the optimum pH.Under different pH, by measuring the degree of hydrolysis enzyme substrates, determination of salivary amylase optimum pH value. Under the condition of different pH, starch is saliva amylase hydrolysis, and iodine liquid reaction to colors, through the observation of the color and the size of the spectrophotometer absorbance value measurement products, shows the reaction degree of substrates, which can determine the optimal pH of salivary amylase.【关键词】唾液淀粉酶、最适pH、碘-淀粉比色法【引言】新陈代谢是生命活动的基础。
酶的基本性质实验报告
一、实验目的1. 了解酶的基本概念和特性。
2. 掌握酶的催化作用及其影响因素。
3. 学习酶活力测定方法。
4. 通过实验，加深对酶学理论的理解。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一、温和等特性。
酶的活性受温度、pH值、底物浓度、酶浓度等因素的影响。
本实验通过测定酶活力，分析不同因素对酶活性的影响。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酶制剂- 底物- 水浴锅- 移液器- 计时器- pH计- 温度计2. 实验仪器：- 酶活力测定仪- 分光光度计四、实验方法1. 酶活力测定：- 采用比色法测定酶活力。
- 将底物溶液和酶溶液混合，在一定温度和pH值下反应。
- 使用分光光度计测定反应体系在特定波长下的吸光度。
- 根据吸光度变化计算酶活力。
2. 不同因素对酶活性的影响：- 温度：在0℃、25℃、37℃、50℃、70℃等不同温度下测定酶活力。
- pH值：在pH值分别为3、5、7、9、11的缓冲溶液中测定酶活力。
- 底物浓度：在一定范围内改变底物浓度，测定酶活力。
- 酶浓度：在一定范围内改变酶浓度，测定酶活力。
五、实验结果与分析1. 酶活力测定结果：- 在不同温度下，酶活力随温度升高而增大，在37℃时达到最大值，之后随温度升高而降低。
- 在不同pH值下，酶活力在pH值为7时达到最大值，pH值过高或过低都会使酶活力降低。
- 在一定范围内，底物浓度和酶浓度对酶活力有显著影响。
2. 不同因素对酶活性的影响分析：- 温度：酶活性受温度影响较大，过高或过低的温度都会使酶失活。
- pH值：酶活性受pH值影响较大，不同酶的最适pH值不同。
- 底物浓度：在一定范围内，底物浓度越高，酶活力越大。
- 酶浓度：在一定范围内，酶浓度越高，酶活力越大。
六、实验结论1. 酶具有高效、专一、温和等特性。
2. 酶活性受温度、pH值、底物浓度、酶浓度等因素的影响。
3. 在实际应用中，应根据酶的特性选择合适的反应条件，以提高酶的催化效率。
实验八硝酸还原酶活性的测定
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 结论与讨论 • 参考文献
01
实验目的
了解硝酸还原酶的特性
硝酸还原酶是一种氧化还原酶，负责 将硝酸盐还原成亚硝酸盐，是植物和 微生物进行氮代谢的重要酶之一。
了解硝酸还原酶的特性，有助于深入 理解氮代谢的生物学过程，为农业生 产、生物固氮等领域提供理论支持。
预期结果
在实验前，根据相关文献和理论知识，预测实验 结果并制定预期目标。
结果比较
将实际实验结果与预期结果进行比较，分析两者 之间的差异和一致性。
结果分析
根据比较结果，分析实验中可能存在的问题和误 差来源，提出改进措施和建议。
05
结论与讨论
实验结论总结
硝酸还原酶活性在不同植物组织中存在 差异，表明该酶在不同组织中的功能和 作用可能有所不同。
03
04
在试管中加入适量的酶 液和硝酸盐底物。
将试管放入恒温水浴中， 设定适宜的温度进行反 应。
在反应过程中，定时取 样检测亚硝酸盐的生成 量。
通过分光光度计测定亚 硝酸盐的吸光度值，记 录数据。
数据记录和处理
1
记录每个取样的时间、亚硝酸盐的吸光度值。
2
根据吸光度值绘制亚硝酸盐生成曲线，计算酶活 性。
3
分析实验数据，得出硝酸还原酶活性测定的结果。
04
实验结果与分析
实验数据记录
实验数据记录表
在实验过程中，需要详细记录每 个实验步骤的实验数据，包括酶 液浓度、反应时间、反应温度等。
数据记录的准确性
确保实验数据的准确性是至关重 要的，因此需要使用精确的测量 工具和可靠的记录方法。
实验八酶促反应的影响因素
实验八酶促反应的影响因素一、目的要求1．了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
2．学习检定温度、pH、激活剂、抑制剂影响酶促反应速度的方法。
二、实验原理在酶促反应中，酶的催化活性与环境温度、 pH有密切关系，通常各种酶只有在一定的温度、pH范围内才表现它的活性，一种酶表现其活性最高时的温度、pH值称为该酶的最适温度、最适pH。
在酶促反应中，酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活性，如氯化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而硫酸铜则是它的抑制剂。
本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活性的影响。
淀粉（遇碘呈蓝色）→紫色糊精(遇碘呈紫色)→红色糊精(遇碘呈红色)→无色糊精(遇碘不呈色)→麦芽糖(遇碘不呈色)→葡萄糖(遇碘不呈色)。
所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断，以此反映淀粉酶的活性，由此检定温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。
三、实验器材试管和试管架、恒温水浴、冰浴、吸量管（1 mL6支、2 mL4支、5 mL4支）、滴管、量筒、玻棒、白瓷板、秒表、烧杯、棕色瓶。
四、实验试剂1．新鲜唾液稀释液(唾液淀粉酶液)：每位同学进实验室自己制备，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，0.5 min后使其流入量筒并稀释至200倍(稀释倍数可因人而异)混匀备用。
2．1%淀粉溶液A(含0.3%NaCl)：将1 g可溶性淀粉及0.3 g氯化钠混悬于5 mL蒸馏水中，搅动后，缓慢倒入沸腾的60 mL蒸馏水中，搅动煮沸1 min，冷却至室温，加水至100 mL,置冰箱中保存。
3．1%淀粉溶液B(不含NaCl)4．碘液：称取2 g碘化钾溶于5 mL蒸馏水中，再加入1 g碘，待碘完全溶解后，加蒸馏水295 mL，混匀贮于棕色瓶中。
5．1%NaCl溶液6．1%CuSO溶液47．缓冲溶液系统按下表混合配制。
酶的最适pH测定
唾液淀粉酶最适pH值测定作者：谭继欢学号：201140143摘要：生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸，前者是机体内催化各种代谢反应最重要的催化剂。
酶分子中的许多极性基团。
在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才最容易同底物结合或具有最大的催化活性。
许多具有可解离基团的底物和辅酶的荷电状态也受pH改变的影响，从而影响酶对它们的亲和力。
此外，PH还可以影响酶活性中心的空间构象，从而影响酶的活性。
因此，pH的改变对酶的催化作用影响很大。
酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适PH。
测定酶的最适pH值，是进一步了解酶生物学活性的基础。
关键词：淀粉酶最适ph 吸光度前言：酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义，研究酶可以很好应用酶的各种特性，在各种领域广泛应用。
影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。
PH值对酶反应活力的影响：1、酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶的活力丧失，这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的，对可逆的来说，改变PH值后可使活力恢复。
2、酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态，使得底物不能分解成产物。
3、酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态，使得底物不能和它结合。
4、酸或碱影响底物的离解状态，或使底物不能和酶结合。
由于上述种种原因，各种酶的作用都有一个最适合的PH值范围。
实验原理：本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受PH影响的情况。
唾液中含有唾液淀粉酶。
淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。
碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及少量葡萄糖（黄色）。
用分光光度计测量出各溶液在660nm处的吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适pH值。
2019_2020学年新教材高中生物课时双测过关(十八)酶的特性(含解析)新人教版必修第一册
课时双测过关（十八）酶的特性A级——学考水平达标练1．(2018·浙江11月选考)酶是生物催化剂，其作用受pH等因素的影响。
下列叙述错误的是( )A．酶分子有一定的形状，其形状与底物的结合无关B．绝大多数酶是蛋白质，其作用的强弱可用酶活性表示C．麦芽糖酶能催化麦芽糖的水解，不能催化蔗糖的水解D．将胃蛋白酶加入到pH＝10的溶液中，其空间结构会改变解析：选A 酶具有一定可变的几何形状，酶的活性部位与底物结合形状发生改变发挥催化作用，作用完成后恢复原状，其形状与底物的结合有关；酶的本质绝大多数是蛋白质，少数是RNA，其催化作用的强弱可以用酶活性来表示；酶具有专一性，麦芽糖酶可以催化麦芽糖水解，不能催化蔗糖水解；酶在过酸或过碱的溶液中会发生变性失活，胃蛋白酶的最适pH为1.5左右，加入pH＝10的溶液中会使酶变性，空间结构发生改变。
2．纺织工业上的褪浆工序常用两种方法：化学法，需用NaOH 7～9 g/L，在70～80 ℃条件下作用12 h，褪浆率仅为50%～60%；加酶法，用少量细菌淀粉酶在适宜温度下，只需5 min，褪浆率达100%。
这说明( )A．酶具有多样性B．酶具有高效性C．酶具有专一性D．酶具有溶解性解析：选B 加酶法与化学法相比，加酶法催化效率较高，且少量的酶就具有较强的催化效率，说明酶具有高效性。
3．(2018·山东学考)下列关于酶的叙述，正确的是( )A．酶的化学本质都是蛋白质B．不同细胞中可存在相同的酶C．酶为其催化的反应提供能量D．低温能破坏酶的空间结构解析：选B 酶的化学本质为蛋白质或RNA；不同细胞中可存在相同的酶，如呼吸酶等；酶能降低化学反应的活化能，但不提供能量；低温能抑制酶的活性，但不破坏酶的空间结构。
4.如图所示为过氧化氢被分解的速度曲线，其体现了酶的( )①化学本质②高效性③催化特性④作用条件较温和A．①④B．③④C．①②D．②③解析：选D ①过氧化氢酶的本质为蛋白质，但从图中不能得出；②酶的催化效率比无机催化剂更高，使得反应速率更快，体现了高效性；③酶是高效的催化剂，这一点从酶能催化反应进行可以得出；④酶所催化的化学反应一般是在较温和的条件下进行的，但从图中无法得出这一信息。
实验八多酚氧化酶的制备
实验八：多酚氧化酶的制备一、实验目的学习从组织细胞中制备酶的方法。
二、实验原理多酚氧化酶是一种含铜的酶，广泛分布存在于各种组织，如鲜蘑菇、土豆、苹果中。
水果去皮后表面变成褐色就是由于该酶作用的结果。
最适pH值为6～7。
由多酚氧化酶催化的反应，如以多酚氧化酶邻苯二酚+氧气可以被氧化形成邻苯二醌。
由多酚氧化酶催化的氧化还原反应可通过溶液的颜色的变化鉴定，这个反应在自然界中是常见的，如去皮的马铃薯和水果变成褐色就是由于该酶作用的结果。
多酚氧化酶的最适底物是邻苯二酚（儿茶酚）。
间苯二酚和对苯二酚与邻苯二酚的结构相似，它们也可以被氧化为各种有色物质。
三氯乙酸使蛋白质沉淀，使酶失活，失去催化能力。
硫脲完全抑制酶活性三、实验器材1．匀浆机2．小刀，纱布，漏斗，其它玻璃器皿3．离心机4．冰箱5．恒温水浴四、试剂1．土豆2．0.1mol/L的NaF溶液: 将4.2g氟化钠溶于1000mL水中。
3．固体硫酸铵4．pH6.8的磷酸盐缓冲液：A液：0.2 mol/L NaH2PO4 15.6g NaH2PO4·2H2O）溶于500ml水中。
B液：0.2 mol/L Na2HPO428.40g Na2HPO4（或71.64g Na2HPO4·12H2O）溶于1000ml水中。
PH6.8酸缓冲液：51.0mlA液+49.0mlB液5. 0.01mol/L的邻苯二酚溶液：将1.1g邻苯二酚溶解于1000mL水中,用1%NaOH调节溶液的pH值为6.0,新配制的溶液应贮存于棕色瓶中。
防止其自身的氧化作用。
当溶液变成褐色时，应重新配制。
6. 5%三氯乙酸溶液7. 苯硫脲（结晶）五、操作方法（一）多酚氧化酶的制备1.每三个小组一起，称取150g马铃薯（新马铃薯可以不去皮），切块后放入匀浆机，加入150mLNaF溶液，放入组织捣碎匀浆机中研磨30s后用四层纱布过滤。
2.各组分别量取50mL滤液（滤液应为无色，若为红色则应重新匀浆提取），置离心管中，于3500转/min离心5～10min，取上清夜，加入固体硫酸铵16g，溶解，于4℃放置30min，（可见有白色沉淀产生）3. 将上层清液倒出一部分，其余部分在3500转/min离心15min，倒掉上清液，保留沉淀物。
《探究影响酶活性的条件》实验设计
《探究影响酶活性的条件》实验设计一、设计思路:创设情境，利用多媒体展示普通洗衣粉和加酶洗衣粉的洗衣效果。
普通洗衣粉不易清除衣物上的奶渍、血渍，但加酶洗衣粉可以。
加酶洗衣粉包装袋上印有的用法就有这样一条：洗涤前先将衣物浸于加有适量洗衣粉的水内一段时间，使用温水效果最佳，切勿用60℃以上的热水。
如果我们洗衣服时使用了0℃的冷水或60℃以上的热水，效果如何？再加入其它物质会不会有影响呢？二、内容分析：本实验是“降低化学反应活化能的酶”一节中的内容。
上节课学习了酶的作用与本质。
知道了酶大部分是蛋白质，外界条件变化会使蛋白质变性使酶失去活性。
根据这一特性利用课余时间让每组学生设计实验，然后再按设计的方案分组进行实验，探究在酸性、碱性、高温、低温条件下对酶活性的影响，最后对实验结果进行分析讨论，由学生自己总结得出结论：温度和pH都对酶活性有显著的影响。
三、教学目标：(一) 知识目标1、学会控制自变量，观察和检测因变量的变化及设置对照实验和重复实验。
2、概述温度和pH影响酶的活性。
(二) 能力目标1、学会用准确的语言阐述实验探究的过程和结果。
2、提高学生观察、分析、判断的思维能力，提高学生的实验操作能力和分享信息、分享实验成果的能力。
(三) 情感态度与价值观目标1、体验科学探究过程,领悟科学探究方法。
2、通过实验探究影响酶活性的条件，培养学生的探索精神、创新精神和合作精神。
四、教学重点：1、学会控制自变量，观察和检测因变量的变化及设置对照实验和重复实验。
2、学会用准确的语言阐明实验探究的结果。
五、教学难点：确定和控制对照实验中的自变量和无关变量，观察和检测因变量的变化。
六、教学方法：实验探究法、讨论法七、材料与仪器：九、教学过程：程序教师组织与指导学生活动创设情利用多媒体展示普通洗衣粉和加酶洗衣粉的洗衣效果。
然后拿出加酶洗衣粉一袋，请位同学阅读它使用的注意事项。
一同学阅读之后提出加酶洗衣粉的使用要控制好温度。
某大学生物工程学院《生物化学》考试试卷(67)
某大学生物工程学院《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（95分，每题5分）1. 同工酶的最适pH值相同。
（）答案：错误解析：2. HIV蛋白酶与胃蛋白酶一个主要的差别是后者的活性中心位于一个单一的亚基上，而前者的活性中心由两个亚基参与构建。
（）答案：正确解析：3. 神经节苷脂是一种含有唾液酸的鞘糖脂。
（）答案：正确4. mRNA是细胞内种类最多、含量最丰富的RNA。
（）答案：错误解析：5. 在酶的纯化实验过程中，通常会丢失一些活性，但偶尔亦可能在某一纯化步骤中酶的活力可超过100，可能是由于此酶的激活剂的加入或抑制剂的丢失造成的。
（）答案：正确解析：6. 真核细胞中DNA只存在于细胞核中。
（）答案：错误解析：7. DNA分子中每条单链（G＋C）含量等于双链的（G＋C）含量。
（）答案：正确8. cAMP总是通过PKA起作用。
（）答案：错误解析：嗅觉和味觉信号转导系统中，cAMP作用离子通道。
9. 某些酶催化的反应不发生共价键的断裂或生成。
（）答案：错误解析：10. 一种特定的氨基酸序列通常能决定几种不同的稳定的特定三维结构。
（）答案：错误解析：11. 三维结构的破坏和生物活性的丧失是蛋白质变性和核酸变性的最重要的标志。
（）答案：错误解析：DNA的生物活性并不因为变性而丧失。
12. 当谷氨酸在pH5.4的醋酸缓冲液中进行电泳时，它将向正极运动。
（）答案：正确解析：13. 促黑激素和褪黑激素的本质都是多肽。
（）答案：错误解析：褪黑激素并不是多肽，而是N乙酰5甲氧基色胺。
14. 辅酶或辅基决定酶的反应性质，酶蛋白决定酶的专一性。
（）答案：正确解析：15. DNA是生物遗传物质，RNA则不是。
（）答案：错误解析：DNA和RNA都是生命遗传物质。
酶性质——最适pH选择
酶性质—最适pH选择高熹 168615140001一、实验原理：酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH。
高于或低于此pH时酶的活性逐渐降低。
值得指出的是，不同的酶最适pH也不同，如胃蛋白酶的最适pH为1.5~2.5，胰蛋白酶的最适pH为8。
酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于同一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。
如唾液淀粉酶最适pH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4~6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。
二、实验试剂：1、0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液；2、用0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液配制pH分别为5.4，6.0，6.4，6.8，7.2，7.6，8.0的缓冲液。
各pH值的缓冲液所需两种溶液配比三、实验仪器：1、恒温水浴锅2、试管若干3、移液管4、量筒5、胶头滴管6、烧杯7、容量瓶四、实验操作：保温时间指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一段时间。
摸准保温时间是实验的关键步骤之一。
取一支试管，加入0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液2ml，加入pH6.8磷酸氢二钠—柠檬酸钠缓冲液3ml，及稀释100~300倍的唾液2ml。
充分摇匀后，放入37℃水浴中保温并记时，每隔1min用滴管取1滴混合液，至于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，待呈橙黄色时，为进一步确定保温时间，应加1滴碘液至试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录所需保温时间。
若2~3min内，取出的保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数，若保温时间超过15min，说明酶活力太低，要提高酶的浓度。
最佳保温时间8~12min以内，因此要掌握好唾液淀粉酶的稀释倍数，确定准确的保温时间才能进行下步实验。
取7支试管按下表操作，保温时间参考以上操作：pH值。
五、实验结果：各试管显色情况（pH由高到低试管颜色分别为蓝紫、黄褐、黄、淡黄、黄褐、淡紫、蓝紫）根据实验结果，可以得出，唾液淀粉酶的最适pH在6.8左右，低于或高于这个pH都会影响其活性。
实验八 纤维素酶活力测定实验
实验八纤维素酶酶活力的测定实验【实验目的】1、了解测定纤维酶活力及还原糖的原理。
2、掌握测定纤维酶活力及还原糖的方法。
3、获得部分纤维素酶。
【实验原理】纤维素酶是水解纤维素生成纤维二糖及葡萄糖的一类酶的总称。
它包括C1、C X酶及纤维二糖酶（β—葡萄糖苷酶）。
作用方式：C1酶C X酶纤维二糖酶天然纤维素-----→直链纤维素----→纤维二糖---------→葡萄糖其中C1酶是使天然纤维素晶体都分链，起一个分离作用和水合作用，从而使天然纤维素裂解成为直链纤维素。
C X酶不能水解天然纤维素，而能水解直链纤维素的β-1，4-葡萄糖酶键，生成纤维二糖，纤维二糖再经过纤维二糖酶水解成为葡萄糖。
本法以滤纸和羧甲基纤维素钠盐作为底物加入一定量的酶液，在一定的条件下起作用，然后观察滤纸的溃崩情况来判断C1酶活力的大小，同时，测定CMC 水解液中还原糖的含量用来表示C X酶活力的大小。
用羧甲基纤维素钠盐(CMC)作底物，经纤维素酶水解后生成还原糖，然后用DNS法测定还原糖的含量，从还原糖的数量来求得酶活力的大小。
纤维素分子是由β-葡萄糖从1，4键相连的长链，由于纤维素的分子间氢键数目极其多，因此不溶于水，在纤维素分子中β-葡萄糖上第2，3及5个碳原子都有一个游离的羧基，如羧基上的氢被羧甲基取代，由于羧基有着很强的亲水性，因此，CMC就能溶于水而成为胶状溶液。
羧甲基纤维素无论在结构上或是在性质上都很大程度地不同于纤维素。
因为它溶于水。
所以，非常容易被纤维素酶水解，在相同的条件下，同一纤维素酶水解CMC所产生的还原糖远大于水解纤维素所产生的还原糖，因此CMC酶活力只能代表CX酶的活力，而且它的数值总是比较高的，所以CMC的酶活力只能供参考。
测定还原糖的方法很多，只是采用DNS（3，5-二硝基水杨酸）法，比较简便，3，5-二硝基水杨酸是一种氧化剂，能与还原糖作用，使硝基还原成氨基，溶液变为橙色，在一定还原糖浓度范围内，橙色的深度与还原糖的浓度成正比。
实验八 乳酸脱氢酶
实验八乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的琼脂糖凝胶电泳一、实验目的了解琼脂糖凝胶电泳的方法和原理，学会分离LDH同工酶的方法。
二、原理同工酶是指能够催化相同的化学反应，但酶分子的结构理化特性乃至免疫学性质不同的一组酶，同工酶这种差异是由于酶蛋白的编码基因不同或基因相同但转录、翻译或后加工有别所造成的。
同工酶存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织，甚至同一组织或细胞的不同亚细胞结构中。
人们已发现几百种同工酶。
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase LDH）是人们认识的第一个同工酶。
LDH是糖酉孝解中的一个酶，它催化的反应如下。
COOH COOHHO—C—H+NAD＋C＝O＋NADH＋H+CH3 CH3LDH有五种同工酶，分子量在13万～15万之间，由四个亚基组成。
LDH的亚基有两种类型，一种是心肌型亚基（H型）（B基因），另一种是骨骼肌型亚基（M型）（A基因）。
两类亚基以不同比例可组成五种四聚体。
即LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(H1M3)、LDH5(M4)。
H型亚基与M型亚基的氨基酸组成有差异，前者含酸性氨基酸残基多，故LDH可用电泳的方法进行分离。
本实验用pH8.6的缓冲液，在此条件下电泳，LDH的五种同工酶均净带负电荷，向正极泳动，但LDH1最快，依次减慢，LDH5最慢。
在哺乳动物体内，一般厌氧性组织中，如骨骼肌、肝脏中，LDH5含量高；在非厌氧性组织中，如心、脑中，LDH1含量高。
本实验用琼脂糖凝胶，LDH的五种同工酶在琼脂糖凝胶板上分离后，进行酶促反应，使乳酸脱氢生成NADH，NADH将人工递氢体PMS还原，还原型PMS 最终将NBT还原。
NADH++H++PMS=====NAD++PMSH2PMSH2＋NBT======PMS＋NBTH2NBTH2为蓝色化合物。
三、实验器材（一）、仪器1、电泳仪1、水平电泳槽2、离心机3、玻璃匀浆器5、恒温箱6、微量移液器7、吸量管四、材料与试剂1、小白鼠（成年）2、白瓷盘3、剪子4、镊子5、载玻片6、滤纸7、生理盐水8、0.01mol/l pH7.4磷酸钠缓冲液：取0.01mol/L NaH2PO419ml和0.01mol/L Na2HPO481ml混合即可。
实验八：NADH正、负向反应测定酶的活性 - 副本
反应的最适pH不同，其中正向反应最适pH为8.8～9.8， 偏碱，能使平衡偏向生成丙酮酸的方向。其优点是乳酸和 NAD+稳定性好，且NAD+纯品易得、价格较低，过量乳 酸对LD活性的抑制较小，反应线性较好。
缺点是需要较高的底物浓度，反应速度较慢。 LD活性 测定时正向反应和逆向反应都可以运用，但1996年中华 医学会检验学会酶学组专家推荐选择正向反应
乳酸锂55mmol／L) :
2 ． 底 物 应 用 液 ( 含 Tris
100mmol ／ L ，
NAD8.5mmol／L)
操作步骤
1．标本要求：血清或肝素抗凝血浆
2．主要参数： S:4μl R1:200μl R2:50μl 340/405nm
孵育时间：120s 温度：37℃
5min 连续检测时间：120s
操作步骤
1．标本要求：血清或肝素抗凝血浆
2．主要参数： R1:200μl R2:50μl 340/405nm
S:20μl
孵育时间：90s 温度：37℃
5min 连续检测时间：150s
结果计算
∆������ ������. ������ × ������������������ ������������������ ������/������ = × ������������������ ������������������������ × ������. ������ × ������
方法学评价
1· ALT测定中存在着两个副反应 (1)血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。 丙酮酸+NADH
LDH
乳酸+NAD+
酶的基本性质实验
⑵0.1%淀粉溶液
⑶1.0%氯化钠溶液
⑷1.0%硫酸铜溶液
⑸1.0%硫酸钠溶液
⑹碘化钾-碘液
四、实验器材与仪器：
1.试管及试管架
2.量筒
3.漏斗
4.脱脂棉花
5.点滴板
6.吸量管
7.恒温水浴（37℃）
五、操作方法和实验步骤：
1号试管呈紫红色，2，3，4，5，6，7，8号试管均呈棕黄色，最终确定最佳反应时间为1 min。
利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活和抑制现象。
淀粉+碘→蓝色
淀粉+淀粉酶Cl-或Cu2+水解产物 + 碘液 → 颜色变化
水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。
三、实验材料与试剂：
1、实验材料
新鲜唾液（1：200稀释）
2、实验试剂
六、实验结果与分析：
试剂处理
试管编号
1
2
3
4
0.1%淀粉溶液（ml）
3
3
3
3
1%CuSO4溶液（ml）
1
1%NaCl溶液（ml）
1
1%Na2SO4溶液（ml）
1
蒸馏水（ml）
1
唾液淀粉酶溶液（ml）
1
1
1
1
混匀，37℃水浴1分钟
KI-I2溶液（滴）
1
1
1
1
记录观察结果
七、讨论、心得：
1、本实验中，试管1是为了验证抑制剂对酶促反应速率的影响；试管2是为了验证激活剂对酶促反应速率的影响；试管3是为了排除氯离子和硫酸根离子的干扰；试管4是作为对照的。
实验八 酶性质——最适PH选择
酶性质——最适PH选择姓名：周超学号：201100140067班级：11级生命基地同组者：刘炳煜时间：2011年5月9日【实验目的】1、熟悉并掌握用酶最适PH选择的方法。
2、学会寻找酶最适反应时间的方法。
【实验原理】酶的催化活性与环境PH有密切关系，通常各种酶只在一定PH范围内才有活性，酶活性最高时的PH，称为酶的最适PH。
高于或者低于此PH时酶的活性逐渐降低。
值得指出的是，不同的酶最适PH也不同，如胃蛋白酶的最适PH为1.5-2.5，胰蛋白酶的最适PH为8.0。
酶的最适PH不是一个特征性的物理常数，而对于同一个酶，其最适PH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。
如唾液淀粉酶的最适PH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适PH为6.4-6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。
【实验试剂】1.0.3%NaCl‘2.0.5%的淀粉3.用0.2M Na2HPO4和0.1M的柠檬酸溶液配制的PH为5.4、6.0、6.4、6.8、7.2、7.6、8.0的缓冲液【实验步骤】1、确定合适的保温时间保温时间是指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一般时间。
取一支试管，加入0.3%NaCl、0.5%淀粉各2ml，PH6.8的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液3ml和稀释100-300倍的唾液2ml，充分摇匀，放入37度水浴保温。
计时，每隔1min滴一滴混合液于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，呈橙黄色时，加一滴碘液于试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录保温时间。
若2-3min内，保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数。
若保温时间超过15min，说明酶活力太低，需要提高酶的浓度。
最佳保温时间为8-15min内。
2、确定最适PH取7支试管按下表操作，保温时间参考步骤1从各管呈现的颜色，判断不同PH对淀粉水解和淀粉酶活性的影响，并确定其最适PH。
【实验结果】由颜色梯度可以得出，唾液淀粉酶的最适PH为6.8。
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酶性质——最适PH选择
姓名：任建南
学号：201300140073
班级：13级生科四班
同组者：周光明
时间：2015年5月25日
【实验目的】
1、熟悉并掌握用酶最适PH选择的方法。
2、学会寻找酶最适反应时间的方法。
【实验原理】
酶的催化活性与环境PH有密切关系，通常各种酶只在一定PH范围内才有活性，酶活性最高时的PH，称为酶的最适PH。
高于或者低于此PH时酶的活性逐渐降低。
值得指出的是，不同的酶最适PH也不同，如胃蛋白酶的最适PH为1.5-2.5，胰蛋白酶的最适PH为8.0。
酶的最适PH不是一个特征性的物理常数，而对于同一个酶，其最适PH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。
如唾液淀粉酶的最适PH为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适PH为6.4-6.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。
【实验试剂】
1.0.3%NaCl‘
2.0.5%的淀粉
3.用0.2M Na2HPO4和0.1M的柠檬酸溶液配制的PH为5.4、6.0、6.4、6.8、7.2、7.6、8.0的缓冲液
【实验步骤】
1、确定合适的保温时间
保温时间是指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一般时间。
取一支试管，加入0.3%NaCl、0.5%淀粉各2ml，PH6.8的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液3ml和稀释
100-300倍的唾液2ml，充分摇匀，放入37度水浴保温。
计时，每隔1min滴一滴混合液于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，呈橙黄色时，加一滴碘液于试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录保温时间。
若2-3min内，保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数。
若保温时间超过15min，说明酶活力太低，需要提高酶的浓度。
最佳保温时间为8-15min内。
2、确定最适PH
取7支试管按下表操作，保温时间参考步骤1
从各管呈现的颜色，判断不同PH对淀粉水解和淀粉酶活性的影响，并确定其最适PH。
【实验结果】
实验用唾液淀粉酶稀释倍数为200倍，PH 6.8 37°C水浴的时间7min，各试管最终试剂颜色依次深→浅→深，且PH为6.8时颜色最浅，可见唾液淀粉酶最适PH在6.8左右且过高或者过低都会使其活力下降
【思考讨论】
结果分析：
由颜色梯度可以看出，在PH=6.8时，加入碘液后混合液的颜色最浅，因此，唾液淀粉酶的最适PH为6.8，PH值高于或者低于6.8，唾液淀粉酶的活力都会受到抑制。
注意事项：
（1）本次实验成功的关键点之一就是缓冲溶液，一定要保证加入的Na2HPO4和柠檬酸的体积完全符合要求，并且充分混匀。
（2）实验操作过程中，一定要保证唾液淀粉酶酶液一直处于低温状态，这样有利于保证酶的活力，可以防止酶失活。
（3）唾液淀粉酶的稀释倍数要合理，一般为100-300倍，根据不同的人、不同的时间、不同的心情，酶的稀释倍数做略微调整。
酶的稀释倍数以8-15将底物反应完全为佳。
（4）确定合适的保温时间时，尽量是每次滴入点滴板的混合液和碘液体积一样，这样可以防止混合液过少或者碘液过少引起的颜色的误差，干扰最适时间的选择。
（5）最适保温时间一定要确定好，时间太短，最适PH环境下唾液淀粉酶都不能把淀粉消耗尽，时间太长，非最适PH条件下的唾液淀粉酶也能将淀粉耗尽，这些情况都不利于颜色梯度的形成，不利于最终结果的确定。
（6）确定最适PH值时，一定要保证向每只试管中加入的碘液体积一样，以一滴为最佳，这样有利于生成较明显的颜色梯度，也利于最终结果的判断。
（7）在确定最适PH值时，一定要保证每只试管其保温时间是相同的，都是最适保温时间，这样，该实验的单一变量仅为PH，可以准确确定酶的最适PH。