医学微生物实验

在医学中的应用
感染性疾病的病原学诊断 细菌学的研究 生物制品的制备

在工农业生产中的应用
在基因工程中的应用
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实验三
细菌的培养
目的：学习掌握细菌分离和培养的各种基本技术
2人/组
培养基
普通琼脂平板 斜面培养基 肉汤培养基 半固体培养基
菌种
大肠、金葡混和菌液 大肠杆菌 大肠、枯草杆菌 变形、痢疾杆菌
初染：石炭酸复红数滴，时间8~10分钟，用水冲洗。
脱色：3%盐酸酒精数滴，时间0.5~1分钟（30秒），用水冲洗。 复染：碱性美兰， 1~2滴，1分钟，用水冲洗。
③滤纸吸干，油镜观察。
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细菌的培养法
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细菌生长繁殖必要条件
营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子
环境条件：酸碱度、渗透压、温度和必要的气体
培养基的定义
微生物生长繁殖所需要的营养物质混合而成的营养基
质，一般pH为7.2~7.6，高压灭菌后使用。
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培养基分类
按其营养组成和用途不同

基础培养基： 营养培养基： 选择培养基： 鉴别培养基： 厌氧培养基：
步骤
①涂片 ②自然干燥 ③固定 ④染色 初染：结晶紫，1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。 媒染：碘液， 1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。
脱色：95％乙醇数滴，时间半分钟（30秒），用水冲洗。
复染：沙黄， 1~2滴，1分钟，用水冲洗。 ⑤滤纸吸干，油镜观察。
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你们好
抗酸染色法
标本：结核病人痰涂片，枯草涂片 试剂：石炭酸复红、3%盐酸酒精、碱性美兰 步骤 ①固定 ②染色
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按物理状态不同

液体培养基: 用于大量繁殖细菌
固体培养基: 液体培养基中加入1.5%~2.5%琼脂粉，用 于细菌分离和纯化

半固体培养基: 琼脂粉含量在0.3%~0.5%， 用于观察 细菌的动力和短期保存菌种
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细菌在培养基中的生长情况
液体培养基：表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
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固体培养基：菌落，菌苔
分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基表面，因划
线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面分散开， 称分离培养。
菌落：单个细菌生长后形成的肉眼可见的细菌集团叫菌落。
纯培养：挑取一个菌落接种到另一培养基中，生长出来的细菌 为纯种，称为纯培养。
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半固体培养基：
无动力
有动力
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细菌培养的应用
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细菌的形态和结构
细菌基本形态：
球菌
螺
形 菌 杆菌
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细菌基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
♦细菌特殊结构：
Capsule
Spore
Flagella
Pilus？？？
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细菌的形态和结构 ：观察示教片：9张
观察内容 球菌 示教片 葡萄球菌 链球菌 肺炎链球菌 大肠杆菌 炭疽杆菌 霍乱弧菌 肺炎球菌 破伤风梭菌 变形杆菌 重点观察
3.霉菌：丝状菌落；多细胞真菌的菌落形式。
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真菌镜下形态观察
1.霉菌小培养：菌丝，孢子
2.新生隐球菌墨汁涂片：厚荚膜、芽生孢子 3.白假丝酵母菌：厚膜孢子、假菌丝
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革兰染色法
菌种：两个单菌落E、S 试剂：生理盐水、结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄 材料：酒精灯、接种环、玻片、
细菌 基本 形态
杆菌 弧菌 荚膜
形状、大小、排列 方式
细菌 特殊 结构
荚膜大小与菌体的 关系
芽胞在菌体上的位 置、大小 鞭毛的形态、数量、 位置
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芽胞 鞭毛Βιβλιοθήκη Baidu
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真菌形态的观察
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真菌的菌落形态
1.新生隐球菌：酵母型菌落；类似细菌菌落；
2.白假丝酵母菌：类酵母菌落(酵母样菌落)；
方法
平板划线 斜面划线 液体接种 穿刺接种
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four-area streak plate technique
I
1/10
Flame loop Rotate 90
I
II
1/5
Flame loop Rotate 90 Rotate 90
III
1/4
IV
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液体接种
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斜面接种
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细菌的形态和结构
医学微生物实验
Experiment of Medical Microbiology
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微生物实验目的
• 巩固基础理论、基本概念
• 学习基本操作
• 树立无菌概念
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实验室规则：
1.必须穿白大衣；
2.尽量保持安静； 3.自己的实验器材(试管、平皿等)注明菌种、日期、组、姓名； 4.除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必须放入消毒缸； 5.注意安全；不要随意调动实验室仪器。 6.实验结束后，泡手、洗手。