溶液的配制

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7% PAGE变性胶的配制

1、UREA 210.6g x 2 403.2g

2、Formamide 192ml x 2 382g

3、40%丙烯酰胺105ml x 2 210ml

4、5 x TBE 120ml x 2 240ml 取500ml锥形瓶(放一磁转子),依次加入,磁转子搅拌,过滤,4℃。

10%过硫酸铵的配制

过硫酸铵1g加水1ml

银染液的配制

1、10% 乙酸50 ml HAC+400ml ddH2O

2、1.5%HNO3 500 ml 的浓HNO3加入500 ml水

3、0.2%AgNO3 500 ml (1 g AgNO3加入500 ml ddH2O)

4、3%Na2CO3

500 ml

0.075%甲醛(375 ml)

PAGE 加样缓冲液Binding (25 ml)

98%去离子甲酰胺 4.5 ddH2O

10 nM EDTA(PH8.0)20 ml 无水乙醇

0.025% 溴酚兰0.5 ml 冰乙酸

70 μl Binding

FISH 所用溶液的配制

70% FA 40 ml 50 ml

FA 28 ml 35 ml

20 x SSC 4 ml →终浓度为2 x SSC 5 ml

ddH2O 8 ml 10 ml

着丝粒探针变性所用的60%FA

60% FA 50 ml

FA 30ml

20 x SSC 5ml →终浓度为2 x SSC

ddH2O 15ml

20 x SSC 1000 ml

Nacl 175.3 g

柠檬酸钠88.2 g

ddH2O 800 ml

10 M NaOH调至PH=7.0 加水1000 ml

10 x PBS 500 ml

Nacl 40 g

Kcl 1 g

Na2HPO4-12H2O 14.35 g / Na2HPO4-7H2O 10.85 g

KH2PO4 1 g

加水到500 ml

1 x Pepsin x :0.01 N Hcl =0.5 ml :1 ml

75% 乙醇(分装)75μl (100% 乙醇)+ 25μl(ddH2O)

25 ml FA 20

50% FA 5 ml 20 x SSC 4

20 ml ddH2O 16

75% 乙醇50 ml ddH2O

150 ml 100% 乙醇

0.075 mol / l Kcl

母液:Kcl分子量:74.55 M =74.55 mol /l

100 ml H2O +11.2 g kcl→20 x

工作液:10 ml母液+ 190 ml ddH2O

一次配制0.075mol/l kcl

kcl 1.11825g (74.55g/mol)1.11825 / 74.55 = 0.015 mol

ddH2O 200 ml

1 % 多聚甲醛

多聚甲醛1g

1 x PBS 100 ml

(注:多聚甲醛难溶,要放在50-60℃的水浴锅里溶解)

4 x SSC /0.05% Tween20配制

20 x SSC 200 ml

ddH2O 800 ml PH=7.6

Tween20 0.5 ml

.

1 M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0)

组份浓度1 M Tris-HCl

配制量1L

配制方法1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。

2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。

pH值浓HCl

7.4 约70 ml

7.6 约60 ml

8.0 约42ml

4.将溶液定容至1 L。

5.高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高l℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6,8.0)

组份浓度100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA

配制量1 L

配制方法1.量取下列溶液,置于l L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100 ml

500 mM EDTA(pH8.0) 20 ml

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。

3.将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。

4.室温保存。

3 M醋酸钠(pH5.2)

组份浓度3 M醋酸钠

配制量100 ml

配制方法1.称量40.8 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml烧杯中,加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。

3.加去离子水将溶液定容至100 ml。

4.高温高压灭菌后,室温保存。

1×TE缓冲液(10mmol/L, pH7.5. Tris-HCl, 1mmol/L EDTA)

称取0.12g Tris,加适量蒸馏水溶解,用1mol/L盐酸调至pH8.0并定容至100m L,加入0.037gEDTA·Na2·2H2O,高压灭菌20min.

2 M醋酸钠(pH5.2)

组份浓度3 M醋酸钠

配制量100 ml

配制方法1.称量27.2 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml烧杯中,加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。

3.加去离子水将溶液定容至100 ml。

4.高温高压灭菌后,室温保存。

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