溶液的配制
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7% PAGE变性胶的配制
1、UREA 210.6g x 2 403.2g
2、Formamide 192ml x 2 382g
3、40%丙烯酰胺105ml x 2 210ml
4、5 x TBE 120ml x 2 240ml 取500ml锥形瓶(放一磁转子),依次加入,磁转子搅拌,过滤,4℃。
10%过硫酸铵的配制
过硫酸铵1g加水1ml
银染液的配制
1、10% 乙酸50 ml HAC+400ml ddH2O
2、1.5%HNO3 500 ml 的浓HNO3加入500 ml水
3、0.2%AgNO3 500 ml (1 g AgNO3加入500 ml ddH2O)
4、3%Na2CO3
500 ml
0.075%甲醛(375 ml)
PAGE 加样缓冲液Binding (25 ml)
98%去离子甲酰胺 4.5 ddH2O
10 nM EDTA(PH8.0)20 ml 无水乙醇
0.025% 溴酚兰0.5 ml 冰乙酸
70 μl Binding
FISH 所用溶液的配制
70% FA 40 ml 50 ml
FA 28 ml 35 ml
20 x SSC 4 ml →终浓度为2 x SSC 5 ml
ddH2O 8 ml 10 ml
着丝粒探针变性所用的60%FA
60% FA 50 ml
FA 30ml
20 x SSC 5ml →终浓度为2 x SSC
ddH2O 15ml
20 x SSC 1000 ml
Nacl 175.3 g
柠檬酸钠88.2 g
ddH2O 800 ml
10 M NaOH调至PH=7.0 加水1000 ml
10 x PBS 500 ml
Nacl 40 g
Kcl 1 g
Na2HPO4-12H2O 14.35 g / Na2HPO4-7H2O 10.85 g
KH2PO4 1 g
加水到500 ml
1 x Pepsin x :0.01 N Hcl =0.5 ml :1 ml
75% 乙醇(分装)75μl (100% 乙醇)+ 25μl(ddH2O)
25 ml FA 20
50% FA 5 ml 20 x SSC 4
20 ml ddH2O 16
75% 乙醇50 ml ddH2O
150 ml 100% 乙醇
0.075 mol / l Kcl
母液:Kcl分子量:74.55 M =74.55 mol /l
100 ml H2O +11.2 g kcl→20 x
工作液:10 ml母液+ 190 ml ddH2O
一次配制0.075mol/l kcl
kcl 1.11825g (74.55g/mol)1.11825 / 74.55 = 0.015 mol
ddH2O 200 ml
1 % 多聚甲醛
多聚甲醛1g
1 x PBS 100 ml
(注:多聚甲醛难溶,要放在50-60℃的水浴锅里溶解)
4 x SSC /0.05% Tween20配制
20 x SSC 200 ml
ddH2O 800 ml PH=7.6
Tween20 0.5 ml
.
1 M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0)
组份浓度1 M Tris-HCl
配制量1L
配制方法1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
pH值浓HCl
7.4 约70 ml
7.6 约60 ml
8.0 约42ml
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高l℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
二
1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6,8.0)
组份浓度100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA
配制量1 L
配制方法1.量取下列溶液,置于l L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100 ml
500 mM EDTA(pH8.0) 20 ml
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。
3.将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
三
3 M醋酸钠(pH5.2)
组份浓度3 M醋酸钠
配制量100 ml
配制方法1.称量40.8 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml烧杯中,加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。
3.加去离子水将溶液定容至100 ml。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
1×TE缓冲液(10mmol/L, pH7.5. Tris-HCl, 1mmol/L EDTA)
称取0.12g Tris,加适量蒸馏水溶解,用1mol/L盐酸调至pH8.0并定容至100m L,加入0.037gEDTA·Na2·2H2O,高压灭菌20min.
2 M醋酸钠(pH5.2)
组份浓度3 M醋酸钠
配制量100 ml
配制方法1.称量27.2 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml烧杯中,加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。
3.加去离子水将溶液定容至100 ml。
4.高温高压灭菌后,室温保存。