内标法测定奶茶中香兰素的含量
《食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定》编制说明
《食品安全国家标准食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定》（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况本标准制定任务来源于国家卫生健康委员会（原国家卫生和计划生育委员会）委托制定的食品安全国家标准项目，由厦门海关技术中心（原厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心）和上海市质量监督检验技术研究院负责起草制定SPAQ-2017-073《食品安全国家标准食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定》。
2017年11月8日收到正式通知，2017年11月16日在北京召开2017年食品安全国家标准项目启动会，启动会后项目组正式协调成立，在广泛调查研究和讨论的基础上，起草了本标准。
标准分为液相、液质、气质三种检测方法，并邀请了四家专业技术机构进行标准方法验证工作。
2018年12月在方法验证的基础上，形成讨论稿，并通过信函的方式向有关机构和专家广泛征求意见，期间未收到重大分歧意见，经整理归纳后，形成送审稿。
二、标准的主要技术内容及修改情况本标准适用于婴幼儿配方奶粉、婴幼儿谷类辅助食品、糕点、糖果、牛奶、面粉、饮料中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定。
相较于SN/T 4318-2015，增加香兰素等三种目标物质，增加了婴幼儿食品、奶粉、牛奶、面粉等样品基质。
本标准从提取溶剂、提取体积、超声时间、氮吹、加酸体积、固相萃取小柱的选择、色谱条件等方面对于四种香兰素类化合物的提取进行分析。
最终选取乙腈为提取溶剂，提取体积为20mL，超声时间为30min，不同基质的加酸体积为0-40μL，选取HLB为净化小柱，选择氮吹至近干方式，选择C18柱为色谱分离柱。
第一法为液相色谱法，当称样量为1 g时，香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素检出限为0.09 mg/kg，定量限为0.2 mg/kg。
当香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素、香豆素的浓度在0.2 mg/L-2 mg/L范围内时，线性关系良好。
实验平均加标回收率为80.5%-98.9%，相对标准偏差为0.49%-12.1%。
食品中香兰素的高效液相色谱仪(HPLC)检测方案
食品中香兰素的高效液相色谱仪(HPLC)检测方案香兰素(Vanillin)，又名香草醛，为一种广泛使用的可食用香料，可在香荚兰的种子中找到，也可以人工合成，有浓烈奶香气息。
广泛运用在各种需要增加奶香气息的调香食品中，如蛋糕、冷饮、巧克力、糖果;还可用于香皂、牙膏、香水、橡胶、塑料、医药品。
目前还没有相关报道说香兰素对人体有害。
但是不行过量，据欧盟专家委员会2000年2月24日报导，大剂量可导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至损伤肝、肾等，故正商订降低允许剂量中。
赛智科技利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色谱仪，经实践检验可供应食品中香兰素的HPLC检测方案，得出的结果精确牢靠，检出限好，适用于食品类添加香兰素的测定，仅供广阔用户参考。
以下是食品中香兰素的液相色谱仪测定的具体检测方法。
1、仪器与试剂1.1仪器LC-10Tvp高效液相色谱仪;Vertex色谱柱250mm4.6mm5m;超声波水浴;万分之一天平;组织捣碎机;微孔滤膜：0.45m，水相。
1.2试剂甲醇：色谱纯。
无水乙醇。
磷酸溶液：0.01mol/L香兰素标准工作液：称取肯定量的香兰素用流淌相溶解配置成100mg/l的溶液，逐级稀释到肯定的浓度作为工作液。
2、测定原理样品加适量乙醇经超声波提取，经高效液相色谱仪测定，外标法定量。
3、色谱条件色谱柱：Vertex色谱柱250mm4.6mm5m;流淌相：甲醇磷酸水溶液0.01mol/L(2575);流速：1mL/min;进样量：20L;检测波长：350nm。
4、试样溶液的制备样品制备：固体样品经组织捣碎机捣碎混匀后备用;液体样品摇匀后备用。
试样处理：精确称取肯定量的(精确至0.01g)试样至500mL离心管中，加入20mL乙醇，混匀，经超声波浸提30min后，4000r/min离心5min，取上清液1ml，加入4ml的流淌相，混匀，经0.45m微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定。
5、结果分析在添加0.25g/kg-5.0g/kg范围内，回收率在89%-106之间，相对标准偏差小于5%。
食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定
附件1食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定BJS2017051范围本方法规定了食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的高效液相色谱-串联质谱的测定方法。
本方法适用于液体乳、稀奶油、婴幼儿配方乳粉（不包括特殊医学用途的婴幼儿配方乳粉）、婴幼儿谷类辅助食品、谷物碾磨加工品、植物油脂等食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定。
2原理样品经乙腈提取后，再以正己烷除脂净化，高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，外标法定量。
3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
3.1试剂3.1.1甲醇（CH4O）：色谱纯。
3.1.2乙腈（C2H3N）：色谱纯。
3.1.3甲酸（CH2O2）：色谱纯。
3.1.4正己烷（C6H14）：色谱纯。
3.1.5氯化钠（NaCl）：在550℃灼烧4h后备用。
3.1.60.1%甲酸水溶液：量取10mL甲酸并加入水定容至1000mL。
3.2标准品香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素标准品纯度≥98.0%，中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量和结构式等信息详见附录A表A.1。
3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液（1.00mg/mL）：分别称取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素0.1g（精确至0.0001g）标准物质于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度。
避光于-18℃下保存，保存期为6个月。
3.3.2混合标准储备溶液：分别吸取上述三种标准储备液1.00mL于同一100mL容量瓶中，用乙腈稀释到刻度配制成浓度为10μg/mL的混合标准储备溶液，避光于-18℃保存，保存期为1个月。
3.3.3空白基质溶液：按照6.1规定的前处理方法操作制备空白基质溶液。
3.3.4基质混合标准系列工作液：分别准确吸取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素混合标准储备液适量(3.3.2)，用空白基质提取液（3.3.3）将其稀释为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL标准系列工作溶液，临用时配制。
紫外分光光度法测定香兰素的含量的国际标准ISO5565-2:1999(部分)
紫外分光光度法测定香兰素的含量的国际标准ISO5565-2：
1999(部分)
赛敏
【期刊名称】《香料香精化妆品》
【年(卷),期】2003()2
【总页数】2页(P40-41)
【关键词】紫外分光光度法;测定;香兰素;含量;国际标准
【作者】赛敏
【作者单位】云南省香料研究开发中心
【正文语种】中文
【中图分类】TQ654.2;O657.32
【相关文献】
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高效液相色谱法测定调味茶饮料中甜味剂和防腐剂
高效液相色谱法测定调味茶饮料中甜味剂和防腐剂【摘要】本文采用高效液相色谱法对调味茶饮料中甜味剂和防腐剂进行检测。
在首先介绍了高效液相色谱法的基本原理和概述，然后详细讨论了甜味剂和防腐剂的检测方法，以及调味茶饮料样品处理的步骤。
实验结果分析部分展示了该方法在样品中的应用效果。
结论部分总结了高效液相色谱法在调味茶饮料中甜味剂和防腐剂检测中的应用前景，以及本研究的意义和贡献。
未来研究展望部分提出了进一步深入研究的方向。
该研究为提高调味茶饮料质量和安全性提供了重要的科学依据，对食品安全监管和质量控制具有一定的参考价值。
【关键词】。
1. 引言1.1 研究背景现如今，随着人们生活水平的提高，调味茶饮料成为人们生活中不可或缺的一部分。
而随着市场需求的增加，调味茶饮料中甜味剂和防腐剂的使用量也逐渐增加。
甜味剂和防腐剂作为食品添加剂，其安全性和合规性备受关注。
对调味茶饮料中甜味剂和防腐剂的快速、准确检测成为食品安全监管的重要课题之一。
本研究旨在通过高效液相色谱法，建立一种快速准确的调味茶饮料中甜味剂和防腐剂的检测方法，为食品安全监管提供技术支持，保障消费者的健康和权益。
通过本研究的开展，将为食品安全监管提供新的技术手段和方法，有助于完善我国食品安全监管体系，促进食品行业的健康发展。
1.2 研究目的研究目的是通过利用高效液相色谱法，对调味茶饮料中甜味剂和防腐剂进行准确、快速、高效的检测。
通过本研究，旨在探索调味茶饮料中甜味剂和防腐剂的含量及种类，为食品安全提供科学依据。
通过对不同品牌、不同类型的调味茶饮料进行检测分析，揭示市面上调味茶饮料的质量状况，为消费者选择健康、安全的产品提供参考。
研究还旨在验证高效液相色谱法在调味茶饮料中甜味剂和防腐剂检测中的可行性和准确性，为今后相关研究提供方法学支持。
最终目的是提升食品安全监管水平，保障公众健康，促进食品行业的健康发展。
2. 正文2.1 高效液相色谱法概述高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和定量分析技术，特别适用于复杂样品中成分的分离和检测。
高效液相色谱法测定软饮料中香兰素和乙基香兰素
高效液相色谱法测定软饮料中香兰素和乙基香兰素摘要：目的通过高效液相色谱法检测方法，来测定软饮料中香兰素和乙基香兰素。
方法在酸性条件下，通过乙腈来提取样品中的香兰素和乙基香兰素，利用盐析作用进行分层净化，配置出标准的混合溶液以备用，用以液相色谱检测。
检测波长308nm，外标法定量。
结果香兰素和乙基香兰素在0.5-50.0g/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.9999。
添加水平为5、30、63mg/kg时，香兰素和乙基香兰素的平均回收率分别为98.4%和100.4%，96.7%和100.2%，97.8%和100.3%，相对标准偏差在3.53%~4.70%，检出限均为0.5mg/kg。
结论高效液相色谱法检测方法经济实用，适用性比较强，结果准确可靠，能够用于样品批量快速检测。
关键词：高效液相色谱法；香兰素；乙基香兰素一、一般资料与方法1、仪器与试剂1.1仪器Agilent1260系列高效液相色谱仪（美国Agilent公司），配有脱气机、四元泵、高效自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器（diodearraydetector，DAD）；电子天平（德国Sartorius公司）；氮吹仪（美国Organomation公司）；涡旋混匀器（德国IKA公司）；离心机（美国Sigma公司）；超纯水仪（美国Millipore公司）。
1.2试剂乙腈（色谱纯，德国Merck公司）；甲酸（色谱纯，天津科密欧）；氯化钠、乙酸锌（分析纯，天津科密欧）；海砂（粒度0.65~0.85mm，国药试剂）；水为去离子水。
香兰素（纯度＞98.0%）购自上海梯希爱化成工发展有限公司，乙基香兰素（纯度＞99%）购自百灵威科技有限公司。
2、方法2.1标准溶液的配制标准储备液：分别称取香兰素和乙基香兰素标准物质约50mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加乙腈溶解，加甲酸2滴，摇匀，继续用乙腈稀释，定容至刻度，摇匀，得浓度为2mg/mL的标准储备溶液。
香兰素质量标准
XXXXXXXXX有限公司
一、目的：建立香兰素质量标准，确保所用香兰素的质量。
二、范围：本规定适用于香兰素质量控制。
三、责任：
四、内容：
1.标准来源
《中华人民共和国国家标准》GB 1886.16-2015 食品安全国家标准食品添加剂香兰素2.技术要求
3.贮存条件：阴凉、干燥、通风，避免杂气污染，远离火源。
香兰素质量标准版本号：
4.相关标准操作规程：香兰素检验操标准作规程（SOP-ZL-JG(FL)-051）、物料取样标准操作规程（SOP-ZL-QA-001）。
5.企业统一指定的物料名称：与GB 188
6.16-2015 食品安全国家标准食品添加剂香兰素一致。
6.内部使用的物料代码：1102123。
7.经批准的供应商：见合格供应商目录。
8.印刷包装材料的实样或样稿：无此项内容。
9.注意事项：密闭。
10.有效期：按厂家规定执行。
11.文件附件：共0份。
12.修订及变更历史：。
高效液相色谱法测定调味茶饮料中甜味剂和防腐剂
高效液相色谱法测定调味茶饮料中甜味剂和防腐剂调味茶饮料是一种受到消费者喜欢的饮品。
这款饮品需要加入甜味剂和防腐剂等添加剂才能保证其品质和口感。
但是，这些添加剂的使用需要符合国家食品安全标准和规定。
因此，对调味茶饮料中的甜味剂和防腐剂等成分的检测显得尤为重要。
因为高效液相色谱法可以测定多种化合物，所以可以成为一种评估调味茶饮料中甜味剂和防腐剂等成分含量的有效方法。
1.实验原理（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）高效液相色谱法（HPLC）采用高压泵将待测样品的流动相送入进样器。
在样品分离过程中产生的可溶液被分离和分配到各个色谱柱中。
在碳氢化合物和有机分子之间经过一段时间后可以发现，分离好了的溶液被分层在柱底，因为它们吸附在不同材料上。
若要测量样品中存在的某一成分，需要将某个波长的光源照射样品，记录在检测器上的读数。
读数的变化取决于该分子化合物的化学成分和浓度。
所以，高效液相色谱法可以测定不同化合物的含量。
2.实验方法在实验中，我们需要用到以下试剂：甜味剂（如糖精钠、安赛蜜、麦芽糖浆）、防腐剂（如苯甲酸钠、山梨酸钾、亚硝酸钠）、苯甲酸及氯化铁、甲醇、乙腈、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH溶液。
具体实验步骤如下：1.准备样品。
将不同的调味茶饮料样品进行准确称重后，加入适量的甲醇提取。
用震荡器搅拌10分钟，最后离心分离样品。
2.甜味剂的提取。
将甜味剂加入适量的0.1mol/L NaOH溶液中，再加入适量的甲醇和乙腈。
用超声处理器震荡10分钟后，最后离心分离样品。
4.液相色谱处理。
将上述样品注入高效液相色谱仪中进行分析。
使用60%乙腈和40%蒸馏水作为流动相，使用C18柱进行分析。
通过HPLC测定甜味剂、苯甲酸及防腐剂的质量浓度。
5.记录结果。
将不同样品中的甜味剂、防腐剂等成分的含量测定出来，并计算统计值。
3.实验结果分析我们根据实验方法进行了调味茶饮料中甜味剂和防腐剂的含量实验。
毛细管电泳内标法分离测定饮料中甜味剂含量
毛细管电泳内标法分离测定饮料中甜味剂含量吴光倩;邱伊绵;杜建中【摘要】建立了毛细管电泳内标法分离测定饮料中甜菊糖、阿斯巴甜、糖精钠含量的方法.研究了缓冲溶液种类、浓度、pH值、电压等对分离的影响,对分离条件进行了优化.在波长210 nm、分离电压12.5 kV、pH=8.3、5mtool·L-1 Na2 HPO4-5 mmol·L-1Na2 B4 O7缓冲溶液中,甜菊糖、阿斯巴甜、糖精钠在8 min 内得到较好的分离,加标回收率为90％～105％.【期刊名称】《湛江师范学院学报》【年(卷),期】2015(036)006【总页数】10页(P64-73)【关键词】毛细管电泳;饮料;甜菊糖;阿斯巴甜;糖精钠【作者】吴光倩;邱伊绵;杜建中【作者单位】岭南师范学院化学化工学院,广东湛江524048;岭南师范学院化学化工学院,广东湛江524048;岭南师范学院化学化工学院,广东湛江524048【正文语种】中文【中图分类】S262.2甜味是一种人们普遍喜爱的味道，甜味剂已经成为食品加工中重要的添加剂.按来源甜味剂分为天然甜味剂和人工合成甜味剂.天然甜味剂是指自然界存在于各种生物体中天然合成的一种成分，经加工提取而得的产品.人工合成甜味剂是指人工化学合成得到的产物.甜菊糖、阿斯巴甜和糖精钠是饮料中常见的甜味剂，结构式见图1.甜味剂都有一定的使用范围和添加限量，过量使用会影响人体健康，长期摄入可能造成机体损伤[1].阿斯巴甜在体内能很快消化分解成3个组分：天冬氨酸、苯丙氨酸和甲酯，然后被吸收，代谢产物中包含苯丙氨酸，可能会对苯丙酮患者造成不良影响，因此，要求在含有阿斯巴甜的食品标签上必须注有提醒这类患者的标志[2].甜菊糖虽然本身的急毒，亚毒性，慢性毒性和致癌性不强，但其主要代谢产物stevio显示了诱变活性，在高浓度时产生毒性，并怀疑具有致癌能力[3].国家标准对饮料中甜菊糖未有明确限量，最大使用量按生产需要适量使用.但在调味和果料发酵乳中有了明确限制，最大使用量为0.2g/kg[4].糖精钠无营养价值，在生物体内不被分解，由肾排出体外，虽其毒性不强，起争议主要在其致癌性.研究表明，摄入大量的糖精钠可以导致雄性大鼠患膀胱癌，最近的研究显示糖精致癌性可能不是糖精所引起的，而是与钠离子及大鼠的高蛋白尿有关.糖精的阴离子可作为钠离子的载体而导致尿液生理性质的改变,过多摄入甜食及加糖饮料会增加人患胰腺癌的危险[5].我国对糖精钠和阿斯巴甜的使用有明确的规定，糖精钠在饮料类最大使用量为0.15g /kg[4]，阿斯巴甜在饮料类最大使用量为0.68g/kg[4].由此可见，食品工业中使用的甜味剂可能对人体会造成一定的危害的.防止甜味剂超标和超范围使用，保护消费者健康，有必要加强饮料中甜味剂的检测.目前对饮料或食品中甜味剂的测定方法主要有分光光度法[6]，气相色谱法[7]，高效液相色谱法[8-9]，高效离子色谱法[10]，高效液相-质谱法[11]和毛细管电泳法[12]等.但利用毛细管电泳比值法同时测定甜菊糖、阿斯巴甜和糖精钠还未见报道.本文详细研究了毛细管电泳比值法分离测定甜菊糖、阿斯巴甜和糖精钠的条件，并用于部分市售饮料中甜菊糖、阿斯巴甜和糖精钠含量的定量测定，取得了较好的效果.1.1 仪器与试剂CL2001高效毛细管电泳仪(北京彩陆仪器有限公司)；涂层熔融石英毛细管(内径100 μm，有效长度43 cm河北永年光导纤维厂)；UV-2550型紫外可见分光光度计(日本岛津制作所)；PHS-3C精密酸度计(上海精密科学仪器有限公司)；电子分析天平(托利多有限公司).阿斯巴甜(含量98%，阿拉丁○R 上海晶纯生化科技股份有限公司)；糖精钠(含量≧99%，阿拉丁○R上海晶纯生化科技股份有限公司)；甜菊糖(含量97%，阿拉丁○R上海晶纯生化科技股份有限公司)；磷酸氢二钠(广东光华化学厂有限公司)；四硼酸钠(广州化学试剂厂)；盐酸(广东廉江市爱廉化试剂股份有限公司)；氢氧化钠(天津市大茂化学试剂厂)；桂皮酸(广东光华化学厂有限公司).实验所用其他试剂均为分析纯，水为蒸馏水.惠宜葡萄糖盐汽水(黄石珍珠果食品饮料有限公司，2014.08.29)；乐醋坊苹果汁醋饮品(中山市创康食品企业有限公司，2014.12.01)；宝庆堂四季凉茶(Q/SH00015，产地广东省深圳市2014.04.19)；可口可乐芬达橙味汽水(海南中粮可口可乐饮料有限公司，2014.10.15)；零度可口可乐汽水(湛江中粮可口可乐饮料有限公司，2014.10.06)：天地壹号苹果醋饮料(天地壹号饮料股份有限公司江门分厂，2014.07.24 A1).1.2 标准储备液的配制准确称取0.0085 g桂皮酸标准品于烧杯中，用蒸馏水溶解，并定容于250 mL容量瓶中，摇匀，配成34 mg·L-1桂皮酸储备溶液.准确称取0.4540 g 甜菊糖标准品于烧杯中，用蒸馏水溶解，并定容于50 mL容量瓶中，摇匀，配成9 080 mg·L-1 甜菊糖标准储备溶液.准确称取0.2000 g阿斯巴甜标准品于烧杯中，用蒸馏水溶解，并定容于50 mL容量瓶中，摇匀，配成4 000 mg·L-1 阿斯巴甜标准储备溶液.准确称取0.1998 g糖精钠标准品于烧杯中，用蒸馏水溶解，并定容于50 mL容量瓶中，摇匀，配成3996 mg·L-1 糖精钠标准储备溶液.1.3 电泳条件测定波长210 nm，分离电压12.5 kV，毛细管内径100 μm，有效长度43 cm，采用阳极端手动压差进样，进样高度10 cm，进样时间10 s ，桂皮酸作为内标物，运行缓冲溶液为pH =8.3，5 mmol·L-1 Na2HPO4-5 mmol·L-1Na2B4O7缓冲溶液.毛细管在每天运行前先用1.0 mol·L-1 HCl溶液冲洗5 min，蒸馏水冲洗5 min，再用1.0 mol·L-1 NaOH溶液冲洗5 min，蒸馏水冲洗5 min，最后用运行缓冲溶液冲洗5 min.每次进样前用蒸馏水、缓冲溶液分别冲洗毛细管2 min.1.4 样品测定1.4.1 标准曲线的绘制配制桂皮酸浓度不变的甜菊糖、阿斯巴甜、糖精钠3种甜味剂系列标准混合溶液，在电泳条件下，保持桂皮酸浓度不变，测定系列标准混合溶液中各甜味剂的峰面积和桂皮酸峰面积，以各甜味剂的峰面积与桂皮酸的峰面积的比值(或甜味剂的峰面积)分别对各甜味剂质量浓度作图，得到工作曲线，计算出线性方程.1.4.2 样品测定移取市售澄清无固形物饮料，使用针筒式滤膜过滤器(孔径为0.45 μm)过滤后，在电泳条件下，测定各甜味剂峰面积，将所测甜味剂峰面积或甜味剂峰面积与内标物峰面积比值代入线性方程，求出待测样品中待测甜味剂的含量.2.1 电泳条件的确定2.1.1 检测波长的选择利用UV-2550型紫外可见分光光度计在200 nm ～ 300 nm范围内，分别扫描甜菊糖、阿斯巴甜、糖精钠溶液的吸收曲线，见图2.由图可知，甜菊糖、阿斯巴甜、糖精钠在200 nm处吸收值较大，考虑该仪器波长下限为200 nm，实验选择电泳检测波长为210 nm.2.1.2 缓冲系的选择甜菊糖、阿斯巴甜、糖精钠在一定条件下可以发生电离，形成带有一个或者多个负电荷的粒子，产生电泳行为.在波长210 nm、电压为12.5 kV、pH=8.0的电泳条件下，分别考察3种甜味剂在20 mmol·L-1Na2HPO4 、20 mmol·L-1Na2B4O7、10 mmol·L-1Na2HPO4-10 mmol/L Na2B4O7混合缓冲溶液分离情况，见图3.结果表明，三种甜味剂在10 mmol/L Na2HPO4-10 mmol/L Na2B4O7缓冲溶液体系中分离相对较好、基线较稳定，分离时间短，故实验选择Na2HPO4-Na2B4O7混合缓冲体系.2.1.3 缓冲溶液pH值的确定缓冲溶液的pH值对分离有较大影响，溶液pH值的大小影响毛细管表面特征及柱壁与溶质的电荷差异，从而改变其相互作用，影响分离度[13].在波长210 nm，分离电压12.5 kV，10 mmol·L-1 Na2HPO4-10 mmol·L-1 Na2B4O7混合缓冲溶液的条件下，依次考察了缓冲溶液pH值为7.5、8.0、8.3、8.5和9.0时3种甜味剂的分离情况，见图4.结果表明，在pH=8.3的条件下，所得的3种甜味剂电泳峰形相对较好，实验选用缓冲溶液pH为8.3.2.1.4 缓冲溶液浓度的确定对于同一缓冲溶液，因浓度增大，双电层厚度变薄，zeta电势下降，电渗流变小[13].在波长为210 nm，pH=8.3、分离电压为12.5 kV的条件下，分别考察Na2HPO4-Na2B4O7缓冲体系浓度为5 mmol·L-1 -5 mmol·L-1、5 mmol·L-1 -10 mmol·L-1、10 mmol·L-1 -5 mmol·L-1、10 mmol·L-1 -10 mmol·L-1、15 mmol·L-1-10 mmol·L-1、10 mmol·L-1 -15 mmol·L-1、15 mmol·L-1 -15 mmol·L-1时3种甜味剂的电泳情况，见图5.由图5可知，缓冲溶液浓度比不同时，浓度对3种甜味剂混合样品分离效果影响不大，从节省试剂、保护环境角度考虑，本实验选5 mmol·L-1 Na2HPO4-5 mmol·L-1 Na2B4O7溶液为缓冲体系.2.1.5 分离电压的选择在波长为210 nm、缓冲体系为pH =8.3、5 mmol·L-1 Na2HPO4-5 mmol·L-1 Na2B4O7缓冲溶液的条件下，分别考察了分离电压为7.5 kV、10.0 kV、12.5 kV、15.0 kV和17.5 kV时，3种甜味剂混合样品电泳情况的影响，见图6.结果表明，随着分离电压的增大，出峰时间变短，但随着电压的不断升高，产生的大量焦耳热导致基线越不平稳.综合上述两因素的影响，本实验选择分离电压为12.5 kV.2.1.6 内标物的确定内标法是通过测量峰面积相对大小进行定量分析的方法，又称相对强度法.在分析测定样品中某组分含量时，可减少实验过程中由于进样高度和进样时间的差异对实验结果产生的误差.采用该法的关键是选择合适的内标物，内标物是原样品中不存在的纯物质，不与待测样品起化学反应，同时要能完全溶于被测样品溶液中，且出峰时间合适.实验考察了用不同物质做内标物，结果显示，桂皮酸的稳定性好，出峰时间合适，分离效果好，见图7.本实验选择桂皮酸为内标物.通过条件实验，确定了分离测定甜菊糖、阿斯巴甜和糖精钠的电泳条件为：波长210 nm，分离电压12.5 kV，电泳介质为pH=8.3、5 mmol·L-1 Na2HPO4-5 mmol·L-1 Na2B4O7的混合缓冲溶液，内标物为桂皮酸.2.2 工作曲线的绘制准确移取8.40 mL 9 080 mg·L-1 甜菊糖标准储备溶液，1.40 mL 4 000 mg·L-1 阿斯巴甜标准储备溶液，0.20mL 3 996 mg·L-1 糖精钠标准储备溶液于10 mL 容量瓶中，定容、混匀，得到标准混合溶液A，混合液A中甜菊糖浓度为7 627mg·L-1、阿斯巴甜浓度为560 mg·L-1、糖精钠浓度为79.9 mg·L-1.准确移取混合液A 2.50 mL两份，一份加入34 mg·L-1 桂皮酸标准储备液2.50 mL，混合均匀，得到桂皮酸浓度17 mg·L-1 、三种甜味剂浓度为A混合溶液浓度1/2的标准混合溶液；另外一份中加入2.50 mL蒸馏水混合均匀，得到标准混合稀释液B.按前稀释方法，对溶液进行逐级稀释，配制成三种甜味剂浓度为A混合溶液浓度1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/124的系列标准混合溶液，保持系列标准混合溶液中桂皮酸浓度为17 mg·L-1.在电泳条件下，依次进样，测定系列标准混合溶液中各种甜味剂的峰面积与内标物桂皮酸的峰面积，平行测定七次，取其平均值.以甜味剂峰面积(S)或甜味剂峰面积与桂皮酸峰面积比值(A)对甜味剂质量浓度(c)作图，绘制工作曲线并计算线性方程.定量分析参数见表1.结果表明，甜菊糖、阿斯巴甜、糖精钠在60～3814 mg·L-1，4.4～280 mg·L-1，0.6～40 mg·L-1范围内，其质量浓度与峰面积比都呈现良好的线性关系.2.3 样品测定2.3.1 样品中甜味剂的定性检测在电泳条件下，对惠宜葡萄糖盐汽水、乐醋坊苹果汁醋饮品、宝庆堂四季凉茶、可口可乐芬达橙味汽水、零度可口可乐汽水、天地壹号苹果醋饮料所含有甜味剂进行了加标定性检测，见图8.经过加标定性实验，惠宜葡萄糖盐汽水、乐醋坊苹果汁醋饮品、零度可口可乐汽水、天地壹号苹果醋饮料中均检测出阿斯巴甜.宝庆堂四季凉茶、可口可乐芬达橙味汽水中检测出甜菊糖.所测试样中均未检出糖精钠.由图8可知，乐醋坊苹果汁醋饮品和天地壹号苹果醋饮料样品因读取桂皮酸峰面积有干扰，无法准确读取峰面积，故采用面积法计算其阿斯巴甜含量.2.3.2 精密度实验按照实验方法，在电泳条件下测定待测样惠宜葡萄糖盐汽水中阿斯巴甜、可口可乐芬达橙味汽水中甜菊糖的峰面积与桂皮酸的峰面积，计算出峰面积比值，代入线性方程，计算惠宜葡萄糖盐汽水、可口可乐芬达橙味汽水中阿巴斯甜和甜菊糖的质量浓度.测定乐醋坊苹果汁醋饮品中阿斯巴甜的峰面积，代入线性方程，计算乐醋坊苹果汁醋饮品中阿巴斯甜质量浓度，平行测定5次，结果见下表2.2.3.4 样品的含量测定在确定试样中含有的甜味剂后，饮料样品预处理过滤后，准确移取2.50 mL样品原液，加入2.50 mL 34 mg·L-1桂皮酸标准储备液，配成桂皮酸浓度为17 mg·L-1、样品原液浓度1/2的混合溶液；在电泳条件下，测定混合液中甜味剂的峰面积与桂皮酸的峰面积，以峰面积或峰面积与桂皮酸峰面积比值代入线性方程求出样品中各甜味剂的含量，测定结果见表3.在实验的检出范围内，样品中均没有检出糖精钠；且饮料中含有的甜菊糖与阿斯巴甜含量均没超过国家限量标准.2.3.1 加标回收率实验以惠宜葡萄糖盐汽水、乐醋坊苹果汁醋饮品和可口可乐芬达橙味汽水为代表，进行加标回收实验.准确移取一定体积的惠宜葡萄糖盐汽水原液两份，一份加入2.00 mL蒸馏水，混匀过滤，准确移取滤液2.50 mL，加入2.50 mL 34.0 mg·L-1桂皮酸标准储备液，混合均匀，在电泳条件下测定阿巴斯甜和皮桂酸峰面积，代入线性方程，计算出阿巴斯甜浓度为底物浓度.在一份中加入2.00 mL 40.0 mg·L-1阿斯巴甜标准液，混匀过滤，准确移取滤液2.50 mL，加入2.50 mL 34.0 mg·L-1桂皮酸标准储备液，混合均匀后，在电泳条件下测定阿巴斯甜和皮桂酸峰面积，代入线性方程，计算其加标回收率，平行测定5次.同理，计算乐醋坊苹果汁醋饮品、可口可乐芬达橙味汽水中阿巴斯甜、甜菊糖的加标回收率，结果见表4.建立了同时分离测定饮料中阿巴斯甜、甜菊糖和糖精钠的高效毛细管电泳法，用于部分市售饮料中上述甜味剂的检测取得了较好的结果.该方法的样品预处理简便，操作快速，准确度较高，精密度较好，为饮料中阿巴斯甜、甜菊糖和糖精钠的检测提供了一种较好的方法.【相关文献】[1] 苏志台,陈前进,张鉴存.浅析食品添加剂使用存在的问题和防范对策[J].卫生管理,2006,12(6):71-72.[2] 宋雁，樊永祥，李宁，阿斯巴甜的安全性评价进展情况[J]. 中国食品卫生杂志，2010，22(1)：84-87.[3] 李晓瑜.甜菊糖苷的安全性研究进展[J].中国食品添加剂，2003,14(2)：5-11.[4] 中华人民共和国卫生部.GB2760-2011 食品安全国家标准/食品添加剂使用标准[S].北京：中国标准版,2011.[5] 晓唐.糖精钠对人体有那些危害[J].监督与选择.2004,18(7)：11.[6] 李巧玲，刘景艳.紫外-可见分光光度法在食品分析中的应用[J].中国食品添加剂.2005，15(5)：113-116.[7] 王凤霞.气相色谱在食品分析中的应用[D].烟台：烟台大学，2013.[8] 陈青川，于文莲，王静.高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂[J].色谱，2001，19(2)105-108.[9] 李丹红，毛红霞．食品中安赛蜜，甜味素，糖精钠，苯甲酸，山梨酸高效液相色谱测定[J].中国卫生检验杂志，1999，9( 4): 258 -260．[10] 王爱月，翟志雷，卢素格.离子色谱法同时测定碳酸饮料中5种添加剂的方法研究[J].现代预防医学，2013，40(11)：2106-2109.[11] 冯峰，杨烁，凌云，等.超高效液相色谱-串联质谱快速筛查葡萄酒中的14种禁用食品添加剂[J].分析化学，2011,39(11)：1732-1737.[12] 张静，杨鸿斌，谢娟，等.毛细管电泳法同时测定饮料中的阿斯巴甜、糖精钠和安赛蜜[J].现代预防医学，2014,41(20)：3768-3770.[13] 邓延倬,何金兰.高效毛细管电泳[M].北京：科学出版社,1996.。
香兰素检测标准
香兰素检测标准
香兰素是一种常见的人工合成香料，广泛应用于食品、化妆品、香水等领域。
然而，香兰素也被认为是一种过敏原，可能会引起皮肤过敏或其他不良反应。
因此，为了保障公众健康，检测香兰素的含量成为了必要的措施。
目前，香兰素的检测标准主要有两种方法：高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱-质谱联用（GC-MS）。
这两种方法均能够准确地检测香兰
素的含量，且具有灵敏度高、精确度高等优点。
根据相关法规，食品中香兰素的含量不得超过5毫克/千克，化
妆品中香兰素的含量不得超过0.1%。
因此，对于生产企业来说，必
须建立完善的检测体系，确保产品的质量符合标准。
总之，香兰素的检测标准对于保障公众健康至关重要。
生产企业应该严格遵守相关法规，建立科学合理的检测体系，确保产品的质量和安全性。
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香兰素 国标
香兰素国标
香兰素是一种香料成分，也称为香兰醇。
根据中国国家标准GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》，香兰素属于食品添加剂类别，其使用范围、使用量和限制条件都有详细规定。
根据该标准规定，香兰素的使用范围主要是在各类食品中作为香料使用，如糖果、饼干、巧克力等。
其使用量和限制条件因不同食品而异，具体的限制浓度和使用方法可通过查询该标准或咨询相关部门获得准确信息。
需要注意的是，食品添加剂的使用应符合国家标准和相关法规，以确保食品安全和质量，建议在使用香兰素或其他食品添加剂前仔细了解并遵守相关规定。
BJS201705食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定
附件1食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定BJS 2017051范围本方法规定了食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的高效液相色谱-串联质谱的测定方法。
本方法适用于液体乳、稀奶油、婴幼儿配方乳粉（不包括特殊医学用途的婴幼儿配方乳粉）、婴幼儿谷类辅助食品、谷物碾磨加工品、植物油脂等食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定。
2原理样品经乙腈提取后，再以正己烷除脂净化，高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，外标法定量。
3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
3.1试剂3.1.1甲醇（CH4O）：色谱纯。
3.1.2乙腈（C2H3N）：色谱纯。
3.1.3甲酸（CH2O2）：色谱纯。
3.1.4正己烷（C6H14）：色谱纯。
3.1.5氯化钠（NaCl）：在550℃灼烧4h后备用。
3.1.60.1%甲酸水溶液：量取10mL甲酸并加入水定容至1000mL。
3.2标准品香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素标准品纯度≥98.0%，中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量和结构式等信息详见附录A表A.1。
3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液（1.00mg/mL）：分别称取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素0.1g（精确至0.0001g）标准物质于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度。
避光于-18℃下保存，保存期为6个月。
3.3.2混合标准储备溶液：分别吸取上述三种标准储备液1.00mL于同一100mL容量瓶中，用乙腈稀释到刻度配制成浓度为10μg/mL的混合标准储备溶液，避光于-18℃保存，保存期为1个月。
3.3.3空白基质溶液：按照6.1规定的前处理方法操作制备空白基质溶液。
3.3.4基质混合标准系列工作液：分别准确吸取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素混合标准储备液适量(3.3.2)，用空白基质提取液（3.3.3）将其稀释为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL标准系列工作溶液，临用时配制。
香兰素量标准
香兰素质量标准
内容：
【参考标准】GB3861-2008
【性状】本品为白色或微黄色针状结晶或结晶性粉末，具有甜香、奶香和香草香气。
【熔点】本品熔点应为80.0℃～83.0℃(《中国药典》二部附录VI C)
【检查】乙醇中的溶解度取本品1g应全溶于3ml70%或2ml95%乙醇中，溶液应呈透明色。
干燥失重将变色硅胶在120℃恒温箱中干燥4h，稍冷后移入干燥器内冷却至室温。
将称量瓶（瓶及盖分开）置于干燥器内至少干燥4h时，取出后称重。
准确称取试样2～3g（精确至0.0002g）于称量瓶中，并将试样摊匀,厚度不得超过10mm。
然后将装有试样的称量瓶及盖分置于干燥器内至少4h，取出时须将盖盖好，称重。
如此操作至恒重，减失重量不得过0.5%。
【类别】药用辅料，防腐剂。
【贮藏】密封保存。
奶茶中8种合成着色剂的含量测定-逗点生物
奶茶中8种合成着色剂的含量测定（Copure®WAX）合成着色剂可以改善食品色泽，刺激感官，增加食欲，在日常生活中应用范围日益广泛，是现代食品工业中装点食品的重要添加剂，但过量使用会对人体健康造成损害。
奶茶含有大量的蛋白、脂肪和糖分，在测定合成着色剂时，该成分容易使固相萃取柱堵塞，导致上柱流速慢，前处理耗时。
本方案通过在提取液中加入硫酸锌溶液作为沉淀剂，可大幅度减少蛋白、脂肪和糖分等带来的不利影响。
以乙醇氨水溶液提取，混合弱阴离子交换柱净化，高效液相色谱法检测，成功测定了奶茶中柠檬黄、日落黄、新红、胭脂红、苋菜红、诱惑红、亮蓝和赤藓红这8种合成着色剂，本方案操作简单实用，灵敏度高，准确，可满足日常检测需求。
一、样品提取称取2.0g试样于50mL离心管中，加入5mL硫酸锌溶液（120g/L），混匀后，乙醇氨水溶液25mL，涡旋混合1min，超声提取15min，以8000r/min离心5min，取上清液于干净50mL离心管中，再加入15mL提取液重复提取1次，合并上清液，定容到50mL（若浑浊再次离心），取10mL上清液，在50℃下氮气浓缩至2mL，再加入10mL5%甲醇水溶液，混匀后作为待净化液。
注：乙酸氨水溶液：乙醇700mL，氨水4mL，用水定容至1L。
二、样品净化（Copure®WAX,150mg/6mL）活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化；上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液；淋洗：依次用5mL水和5mL甲醇淋洗，抽干小柱；洗脱：8mL2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45℃氮吹仪浓缩至0.3mL左右，加入0.02mmol/L乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机。
三、仪器条件仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液B：甲醇洗脱方式：梯度洗脱，见表1流速：1.0mL/min柱温：30℃进样量：10μL检测器：紫外检测器检测器波长范围：400~800nm，柠檬黄测定波长为415nm；新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红测定波长为520nm；亮蓝测定波长为630nm。
饮料中香兰素测定方法的改进
饮料中香兰素测定方法的改进
周则彬
【期刊名称】《浙江预防医学》
【年(卷),期】1999(000)006
【总页数】1页(P53)
【作者】周则彬
【作者单位】丽水地区卫生防疫站;遂昌县卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】TS202
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1H-NMR法测定饮料中安赛蜜和甜蜜素的含量
1H-NMR法测定饮料中安赛蜜和甜蜜素的含量毛桂洁;于喆英;历荣【摘要】Characteristic resonance peaks in ' H - NMR spectrum of Acesulfame potassium and Sodium cyclohexyl sulfamate were attributed. The effects of the number of scans ( NS) and relaxation delay (dl) on determination of Acesulfame potassium and Sodium cyclohexyl sulfamate were investigated by their characteristic resonance peaks and with Potassium biphthalate as an internal standard. The results showed that dl =3s and dl = 15s were the optimum conditions for Acesulfame potassium and Sodium cyclohexyl sulfamate respectively. The baseline can be straight when NS^64. Under these optimum conditions, linear ranges of Acesulfame potassium and Sodium cyclohexyl sulfamate were excellent. RSD (re = 3) of Acesulfame potassium and Sodium cyclohexyl sulfamate were 0. 86% and 1. 51% , respectively. Average recoveries were 96. 57% and 96. 87 % .respectively. Sample preparation was simple and rapid, results were accurate. This method was suitable for the determination of Acesulfame potassium and Sodium cyclohexyl sulfamate in carbonated drinks and tea drinks.%采用核磁共振波谱分析技术,对甜味剂安赛蜜和甜蜜素1H-NMR谱图中的各组峰进行了归属.以邻苯二甲酸氢钾做内标,利用安赛蜜和甜蜜素1H-NMR谱图中的主要特征峰,通过标准溶液考察了扫描次数(NS)及弛豫延迟时间(d1)对测定结果的影响.结果表明,安赛蜜和甜蜜素分别在d1=3s和d1=15s时测定结果最佳,NS≥64即可保证基线平直.在最佳条件下对安赛蜜和甜蜜素进行定量测定的线性范围良好,对饮料中的安赛蜜和甜蜜素进行了定量分析,其测定结果的RSD(n =3)分别为0.86％和1.51％,平均回收率分别为96.57％和96.87％.该方法样品处理简单,测定速度快、结果准确,适合于碳酸饮料和茶饮料中安赛蜜和甜蜜素的测定.【期刊名称】《黑龙江大学自然科学学报》【年(卷),期】2012(029)001【总页数】6页(P90-94,98)【关键词】安赛蜜;甜蜜素;饮料;测定;核磁共振【作者】毛桂洁;于喆英;历荣【作者单位】黑龙江大学化学化工与材料学院,哈尔滨150080;黑龙江大学化学化工与材料学院,哈尔滨150080;黑龙江大学化学化工与材料学院,哈尔滨150080【正文语种】中文【中图分类】TS207.3安赛蜜和甜蜜素是各类饮料中常用的甜味剂，在国家标准GB2760－2011《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定了明确的使用限量。
顶空气相色谱内标法快速测定奶茶中乙醇的含量
顶空气相色谱内标法快速测定奶茶中乙醇的含量
欧阳丽;黄辉;钟菲菲;杨韵
【期刊名称】《湖南农业科学》
【年(卷),期】2022()7
【摘要】采用顶空气相色谱内标法建立了一种快速测定奶茶中乙醇含量的方法。
样品中加入丙酮为内标,在顶空瓶中经加热平衡后,取其挥发气体进入气相色谱仪,以毛细管色谱柱分离,氢火焰离子化检测器(FID)检测,内标法定量。
在优化条件下,乙醇的检出限为0.04%,在0.1%~10%浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.998,加标回收率(n=6)为93.98%~105.31%,相对标准偏差为1.34%~6.15%。
该方法不需要对样品进行预处理,操作简单,检测结果准确可靠、重现性好,适用于奶茶中乙醇含量的测定。
采用优化后的方法对30批次的奶茶样品进行检测,其中有16.7%的样品乙醇含量已超过0.5%,按照GB/T 17204—2008标准已属于酒精饮料,应该引起相关职能部门的高度重视。
【总页数】4页(P80-83)
【作者】欧阳丽;黄辉;钟菲菲;杨韵
【作者单位】长沙市食品药品检验所;湖南省市场监督管理局缺陷产品召回服务中心
【正文语种】中文
【中图分类】TS252.7
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内标法测定奶茶中香兰素的含量一、 实验目的1. 了解气相色谱法的基本原理及仪器结构.2. 了解气相色谱基本仪器操作.3. 掌握内标法的配样与计算方法.二、实验原理 内标法：在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。
使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱柱所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。
内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。
当然，内标物必须能与样品中各组分充分分离并不发生反应。
m —样品的质量；ms —待测样品中加入内标物的量；As —待测样品中内标物的峰面积；f s,i —组分i 与内标物的校正因子之比，称为相对校正因子香兰素（Vanillin ），又名香草醛，分子式： C8H8O3，CAS 号： 121-33-5，分子量: 152.15，为一种广泛使用的可食用香料或医药中间体，本实验采取内标法测定奶茶中香兰素的含量。
三、 仪器与试剂Agilent 6890N 气相色谱仪，10ul 进样针，移液枪；香兰素储备样（称取香兰素0.5022g ，以氯仿定容到50ml 容量瓶）；2-甲氧基苯酚储备样（称取2-甲氧基苯酚0.4987g ，以氯仿定容到50ml 容量瓶）； 香兰素未知样，氯仿。
四、 实验步骤1、配置标准溶液：以移液枪量取100，200， 300，400ul 香兰素储备液和200，200， 200，200ul 2-甲氧基苯酚储备液 于5ml 容量瓶中，用氯仿定容。
%100A m f A m x s i s,i s ⨯=∙∙∙i2、配置未知溶液：以移液枪量取200ul香兰素未知液和200ul 2-甲氧基苯酚储备液于5ml容量瓶中，用氯仿定容。
3、设定气相色谱参数：进样口：气化温度：250℃，分流比：10:1；色谱柱：流速：2.0ml/min;柱温箱：120℃（保持1min），10℃/min升到200℃检测器：基座温度：250℃，H2：45ml/min,Air:450ml/min,N2:40ml/min.保存。
4、进样：以以上方法测定标样及未知样，记录实验数据（保留时间及峰面积）5、做出内标标准曲线，以内标法计算未知样中香兰素含量。
进样应注意的问题：GC中手动进样技术的熟练与否，直接影响到分析结果的好坏，正确的进样手法是：取样后，一手持注射器(防止气化室的高气压将针芯吹出)，另一只手保护针尖（防止插入隔垫时弯曲）。
先小心地将注射针头穿过隔垫，随即快速将注射器插到底，并将样品轻轻注入气化室（注意不要用力过猛使针芯弯曲），同时按start键，拔出注射器，注射样品所用时间及注射器在气化室中停留的时间越短越好。
另外，在进多个不同样品时，每次进样前都要将进样针润洗干净，确保洗针溶剂不干扰样品检测。
五、数据处理六、结果与讨论1.你做出来的标准曲线相关系数是多少？你觉得操作过程中有哪些地方会带来误差？有哪些操作或参数还可以优化？2.比较归一化法，外标法和内标法各自的优缺点。
3.你对本实验有什么意见或建议吗？液相色谱仪分离测定奶茶、可乐中咖啡因一、实验目的（1）了解高效液相色谱仪（以安捷伦1100、1260为例）的结构及基本操作。
（2）了解色谱分离的基本原理，尤其是反相色谱的基本规律。
（3）掌握色谱的基本定性、标准曲线定量方法。
二、实验原理咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称1，3，7-三甲基黄嘌呤，是由茶叶或咖啡中提取出的一种生物碱。
它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。
咖啡中含咖啡因约1.2%～1.8%，茶叶中约为2.0～4.7%。
可乐饮料、APC药片均含咖啡因。
本实验采用的是液相色谱中的反相分配色谱，反相色谱用的是非极性填料分析柱（如ODS-C18），流动相是极性较强溶剂（如甲醇和水），样品根据在固定相和流动相中的分配系数不同而进行分离。
通过标准样品的保留时间进行定性，以峰面积对浓度绘制的工作曲线定量。
三、仪器与试剂1. 仪器Agilent 1260型液相色谱仪：真空在线脱气装置；四元梯度泵；多波长检测器；ODS-C18柱；超声器（用于样品溶解，流动相脱气，玻璃器皿清洗）。
2. 试剂甲醇（色谱纯）；水（超纯水）；咖啡因标样；奶茶；可乐。
四、实验步骤1. 确定实验条件打开计算机，等计算机启动完毕后，依次打开输液泵、真空在线脱气装置、柱温箱、检测器的开关。
通讯完毕后，设定操作条件。
流动相：甲醇/水＝60/40；总流速0.5mL/min设定在254nm波长下进行检测，柱温30℃，流动相的比例可以根据实验内容的需要在控制单元中修改。
2. 样品制备将可乐、奶茶倒入烧杯后放在超声波仪中超声脱气，去除奶茶、可乐中溶解的空气以及大量二氧化碳气体。
将脱气后的可乐溶液稀释5倍后，通过0.45μm的滤膜过滤，转移至定量管中备用。
将脱气后的奶茶溶液用甲醇稀释5倍后、离心，取上层清液通过0.45μm的滤膜过滤后，转移至定量管中备用。
准确称量10mg的咖啡因用甲醇溶解于10ml的容量瓶中作为母液，再分别从母液中移取0.25mL、0.5mL、1mL、2mL、3mL溶液至容量管中，然后分别稀释至10mL。
3. 样品测定（1）流动相比例设为甲醇/水＝60/40，依次将咖啡因标准溶液进样5μL（利用六通阀进样器的定量管进行准确定量），以得到咖啡因在此色谱条件下的保留时间以及各个浓度下咖啡因的峰面积。
（2）将未知浓度可乐、奶茶溶液进样5μL，以获得此溶液中咖啡因的保留时间及峰面积。
4. 关机用纯甲醇冲色谱柱约半小时，观察基线平稳后，可在工作站上关闭输液泵，柱温箱、监测器，然后关闭工作站，再依次关闭仪器上监测器、柱温箱、输液泵的电源开关。
关闭计算机。
五、数据处理由步骤3获得的各标准溶液的实验结果，绘制峰面积-浓度标准曲线，再根据步骤4测得的值，从曲线上查出未知咖啡因溶液的实际浓度。
六、思考题（1）反相分配色谱的分离原理是什么？（2）液相色谱的优缺点？实验18 毛细管电泳仪分离测定雪碧、芬达中苯甲酸钠一、实验目的（1）了解毛细管电泳仪（以安捷伦7100为例）的结构及基本操作。
（2）了解毛细管电泳分离的基本原理。
（3）掌握色谱的基本定性、外标法的定量方法。
二、实验原理苯甲酸钠是苯甲酸的钠盐，无味或略带安息香气味，在空气中十分稳定，易溶于水，由于比苯甲酸更易溶于水，比苯甲酸更常用与工业生产。
但有研究显示，苯甲酸类具有叠加毒性作用，普遍已改用山梨酸盐作为防腐剂。
电泳指带电粒子在电场作用下作定向运动的现象。
电泳有自由电泳和区带电泳两类，区带电泳是将样品加于载体上，并加一个电场。
在电场作用下，各种性质不同的组分以不同的速率向极性相反的两极迁移。
利用样品与载体之间的作用力的不同，并与电泳过程结合起来，以期得到良好的分离。
因此，电泳又称电色谱。
本实验通过使用毛细管电泳法对饮料中苯甲酸钠含量进行定性定量测量，得出了饮料中苯甲酸钠的含量。
三、仪器与试剂1. 仪器Agilent 7100型液相色谱仪；2. 试剂1.0 mol/L氢氧化钠溶液；20 mmol/L PH=9.3硼酸钠溶液；雪碧滤液（脱气后经0.45μm 滤膜过滤）；芬达滤液（脱气后经0.45μm滤膜过滤）。
四、实验步骤1. 确定实验条件打开计算机，等计算机启动完毕后，打开毛细管电泳仪电源开关。
通讯完毕后，设定操作条件：分别在进样盘中放入相应的溶液：1、NaOH溶液；2、纯水；3、空；4、5、6、硼酸钠溶液；7、空；8、废液。
CE平衡步骤：第一步，设定inlet为1号位置，outlet为8号位置冲洗300秒。
第二步，设定inlet为2号位置，outlet为8号位置冲洗300秒。
第三步，设定inlet为6号位置，outlet为8号位置冲洗300秒。
Method Parameter CE(Default Settings)：VialsInlet home vial 4Outlet home vial 5Cassette Temperature20.0 ℃High Voltage SystemEnable high voltageV oltage 0.0VCurrent 300μAPower 6.0 WLow current limit OFFStoptime10.0 minutesPosttimeOFFReplenishmentReplenishment and preconditioning parallel processingNo replenishment usedCE ConditioningFlush inlet 6 Vial, outlet 8 Vial for 5 minutesCE InjectionInject by pressure,50 mbar,4 secondsTimetableChange voltage 0.2 minutes,30 kV2. 样品制备将雪碧、芬达倒入烧杯后放在超声波仪中超声脱气，去除饮料中溶解的空气以及大量二氧化碳气体。
脱气后的雪碧、芬达溶液通过.45μm的滤膜过滤后，转移至进样瓶中备用。
称量0.2g的苯甲酸钠，用20 g/L的NaHCO₃溶液加热溶解于10ml的容量瓶中，再从中移取2.5mL溶液至50ml容量管中定容作为母液。
再分别从母液中移取2mL、4mL、6mL、8mL、10mL溶液至25mL容量瓶中定容。
3. 毛细管电泳仪样品测试参数Method ParameterReplenishmentReplenishment and preconditioning parallel processingNo replenishment usedCE ConditioningFlush inlet Home Vial, outlet Out Vial for 5 minutesCE InjectionInject by pressure,50 mbar,4 secondsTimetableChange voltage 0.2 minutes,30 kV4.样品测定（1）把苯甲酸钠标准液放置于进样盘11、12、13、14、15位置处测试，并获得保留时间及峰面积。
（2）将未知浓度雪碧滤液、芬达滤液放置于进样盘17、18处测试，以获得此溶液中苯甲酸钠的保留时间及峰面积。
5. 关机用纯水冲毛细管约半小时，观察基线平稳后，可在工作站上关闭电泳仪及检测器，然后关闭工作站，再依次关闭仪器电源及计算机电源。