猪肉中瘦肉精的检测——GC-MS法

2.4 实验流程
称取(2 ± 0.01) g 4 mL 0.1 mol/L 盐酸 己绞碎的猪肉 C18小柱 上清液 旋涡振荡5 min
离心5 min
超声10 min 毛细管 整体柱
0.8 mL 甲醇：20 mmol/L 磷酸 =1：1(v/v）解析，调ph=7， 定容2mL 涡旋30s 衍生5 min 300μ L 甲苯混匀 100 μ L 甲苯 100 μ LBSTFA
2011年3•15特别行动中，央视曝光了双汇“瘦肉精”养猪 一事 。河南省孟州市等地养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精 ”饲养生猪，有毒猪肉流入双汇食品中。
二、概述 1、瘦肉精
瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如 莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。 将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使 用、使肉品提早上市、降低成本。但因为考虑对人体会产生副 作用，各国开放使用的标准不一。
猪肉中瘦肉精—克伦特罗的检测
制作人： 班级：食品1001班 学号：201035090114
目录
一、背景事件 二、概述 1、瘦肉精 2、ห้องสมุดไป่ตู้伦特罗 三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗 1、检测方法选择 2、实验具体方案 3、实验结果及分析 四、杜绝措施 五、参考文献
一、“双汇”瘦肉精事件
四、杜绝措施
• 相关部门要对瘦肉精的流通进行严加监管，实行购买登记 制度。 • 养牲畜者自律，监管人严格监督。 • 对责任人加大处罚力度，完善法律法规实。
五、参考文献
[1]气相色谱质谱联用仪(GC-MS)测定猪肉中的瘦肉精的含量.食品 与发酵工业．2011年03期． [2]Deng Ruiguang，Zhang Haitang，Wang Ziliang， Zhong Hua ， Zhang Gaiping．Development of GC-MS Method for Detecting Clenbuterol Residues and Confirmation of Self-made Strip Performance ．CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN.2008,24(11) [3]应永飞,皮雄娥,吴平谷等.气相色谱-质谱法同时测定动物尿样 中莱克多巴胺和克伦特罗.质谱学报.2006,27(2):74-78.
2.3 分析条件
• 色谱柱：Rtx-5MS (30 m×0.25 mm×0.25 μ m) • 进样口温度：220℃ • 柱温程序：70℃(0.6 min)-25℃/min-220℃(6 min)25℃/min-280℃(5 min) • 恒线速度方式, 柱流量0.9 mL/min • 不分流进样 • 检测波长：244nm • 检测离子： CLB：检测 m/z 86, 187, 243, 262， CLB-D9：检测 m/z 95, 187, 262 以克伦特罗 (m/z86) 与内标峰 (m/z 95) 的峰面积比校 准定量。
2、实验具体方案 2.1 分析方法
用C18小柱和聚（甲基丙烯 酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯） 整体柱进一步富集净化，经N ,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺 (BSTFA) 衍生，选择离子监测 方式进行气相色谱质谱测定。 该方法以克伦特罗同位素 (Clenbuterol-D9) 为内标，内 标法定量。 C18小柱
谢谢！
以克伦特罗与内标的峰面积的比值对浓度比值进行线性回 归，发现克伦特罗在0.5-50μ g/kg 的浓度范围内，线性 关系良好，相关系数大于0.999。
3.3
检测限及精密度
以信噪比的3倍和10倍分别计算检测限和定量限，方法检测限 为0.13 μ g/kg, 定量限为0.43μ g/kg。该方法有较好的日 内及日间精密度，在定量限附近，相对标准偏差小于20%（ 见表1），可满足分析要求。 表1. 克伦特罗的方法学数据
2.2 仪器与试剂
仪器：岛津GCMS-QP2010 Plus 高速离心机（转速可达到12000r/min以上） 漩涡混合器 超声波清洗器 氮吹仪 固相萃取装置 C18固相萃取小柱（100 mg, 3 mL） 混合型阳离子交换固相萃取柱
试剂：
• • • • • • 盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB）标准溶液1μ g/mL 内标溶液（Clenbuterol-D9， CLB-D9）1μ g/mL N , O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA） 甲醇(分析纯） 20 mmol/L 磷酸溶液 甲苯（分析纯）
2.2
人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现心 率失常、酮症酸中毒或乳酸中毒、急性中毒症状如面色潮 红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢 麻木等。 国家标准规定，每克肉中瘦肉精含量不能超过1纳克 。
三、气相色谱-质谱联用法（GC-ＭＳ）检测克伦特罗
1、检测方法选择
GC-MS法优点：把色谱高效快速的分离效果和质谱高 灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在 的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且 具更高的检测极限。 GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更 低，常用作筛选后阳性样品的确证。
0.2 mL 的甲醇解析+ 50 μ L 的内标使用液
质谱图
按操作规程使 GC-MS仪到工作状态， 基线平直时进样
3、实验结果及分析 3.1 盐酸克伦特罗的GC-MS 测定
图1 为衍生化克伦特罗和内标的质谱图，以克伦特罗碎片离 子 (m/z 86) 与内标碎片离子 (m/z 95) 的浓度比值为横坐 标，峰面积比值为纵坐标进行定量。
3.2
标准曲线
图2 为空白猪肉和添加2.5μ g/kg 克伦特罗的猪肉样品 提取液的离子流图，内标 (Peak 1) 和克伦特罗 (Peak 2) 的保留时间分别为9.83 min 和9.92 min, 空白猪肉样 品在被测物及内标处均无干扰
相关性分析
分别添加不同体积的克伦特罗标准溶液(1 μ g/mL) 和 50μ L 内标溶液于2 g 猪肉样品中 (其中克伦特罗的质量 分别为1、5、10、20、40 和100 ng)，样品的处理方法如 上所述。
肉质对比
2、克伦特罗
2.1 在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗。其学名是盐酸 克伦特罗，是一种平喘药。 • 结构简式：
• CAS号：37148-27-9 • 分子式：C12-H18-Cl2-N2-O • 理化特性：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点 161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。