微生物、洁净区作业知识
洁净区微生物及卫生知识培训根据GMP优秀课件
第 一 章
双球菌
四联球菌 八叠球菌
球杆菌
链杆菌
杆菌
弧菌
螺菌
螺旋菌
放线菌
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7
3.1菌落
微生物基础知识
3.相关术语
第 一 章
是由单个细菌（或其他微生物）、细胞或一堆同种细胞在适宜 固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的
子细胞群落。
细菌 菌落
霉菌 菌落
酵母 菌菌 落
A.营养因素
水
碳源
B.微生物生长的影响因素
氮源
无机 盐
生长 因子
营养 物
pH
温度
氧气
渗透 压
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9
微生物与药品
微生物基础知识
4.微生物与药品
第 一 章
微生物的分布极为广泛， 它们在自然界的物质转换作 用中，绝大多数对人类是有 益的，在制药工业中，有些 药品和制剂，本身就是微生 物，如菌苗、疫苗、微生物 制剂；有些药品是以微生物 的代谢物作为原料或经其有 效作用参与制药过程，如抗 生素制剂、葡萄糖、氨基酸、 酶类制剂等。
洁净区微生物及卫 生知识培训根据 GMP
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1
1 微生物基础知识 2 微生物的污染与控制 3 洁净室（区）环境的控制 4 洁净室（区）环境的监测 5 微生物室简述
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CONTENTS
目
录
2
1 Chapter 第一章
微生物基础知识
1.微生物的分类 2.微生物的特点 3.相关术语 4.微生物与药品
核
霉菌、 酵母菌
藻类等
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4
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体积小，比表面积大 吸收多，转化快
洁净车间管理培训--人员、微生物知识
缓冲间
二更
手消
缓冲间
洁净生产区
出口
脱下洁净服
公司产品的生产条件要求
——《医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂》
2.2.4 酶联免疫吸附试验试剂、免疫荧光试剂、免疫发光试剂、聚合酶链反应（PCR）试剂、金标试剂、干化学法试剂、细胞培养基、校准品与质控品、酶类、抗原、抗体和其他活性类组分的配制及分装等产品的配液、包被、分装、点膜、干燥、切割、贴膜以及内包装等，生产区域应当不低于100,000级洁净度级别。2.2.5 阴性或阳性血清、质粒或血液制品等的处理操作，生产区域应当不低于10，000级洁净度级别，并应当与相邻区域保持相对负压。2.2.6 无菌物料等分装处理操作，操作区域应当符合局部100级洁净度级别。2.2.7 普通类化学试剂的生产应当在清洁环境中进行。2015年第103号公告：《医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂》本附录是体外诊断试剂生产质量管理规范的特殊要求。体外诊断试剂生产质量管理体系应当符合《医疗器械生产质量管理规范》及本附录的要求。
一、概述--- GMP附录体外诊断试剂
PART 02
洁净区的污染
二、洁净区的污染---污染及其来源
污染的定义： 污染是指所有的不必要的物质。 不论是材料还是能量只要不是产品的组成部分， 都不是必要存在的、 会影响产品性能。污染有以下四种基本来源：1、 设施（天花板、 地板、 墙面） 2、 工具、 设备3、 人员4、 产品
2.压差要求
一、概述--- GMP附录体外诊断试剂
3.普通类化学试剂的清洁环境要求——引用附录
1.要有防尘、通风、防止昆虫或其他动物以及异物混入等措施；2.人流、物流分开，人员进入生产车间前应当有换鞋、更衣、佩戴口罩和帽子、洗手、手消毒等清洁措施；3.生产场地的地面应当便于清洁，墙、顶部应平整、光滑，无颗粒物脱落；4.操作台应当光滑、平整、无缝隙、耐腐蚀，便于清洗、消毒；5.应当对生产区域进行定期清洁、清洗和消毒；应当根据生产要求对生产车间的温湿度进行控制。
医疗器械微生物知识及洁净间作业知识培训试题
医疗器械微生物知识及洁净间作业知识培训部门：姓名：分数一．填空题（每空5分，共50分）1、微生物是指一类体积微小，结构简单，必须用光学显微镜观察形态的微小生物的通称。
2、微生物在自然界主要分布在土壤，空气，水。
3、洁净室中最大的微生物污染源是人员。
4、洁净区的门应随手关紧，所有闭锁装置应完好，缓冲间的两侧门不能同时打开，工作时门必须关紧，尽量减少出入次数。
5、十万级沉降菌最大允许数10 皿，万级沉降菌最大允许数 3皿6、酶联免疫吸附试验试剂、免疫荧光试剂、免疫发光试剂、聚合酶链反应（PCR）试剂、金标试剂、干化学法试剂、细胞培养基、校准品与质控品、酶类、抗原、抗体和其他活性类组分的配制及分装等产品的配液、包被、分装、点膜、干燥、切割、贴膜以及内包装等，生产区域应当不低于十万级洁净度级别。
二．选择题（每题3分，共24分）。
1、对尘埃、微生物污染的控制，从洁净技术要求的角度而言，原则有（ ABCD ）：A、是对进入洁净室（区）的空气必须进行充分地除菌或灭菌；B、是使室内微生物颗粒迅速而有效地吸收并被排出室外；C、是不让室内的微生物粒子积聚和繁殖；D、是防止进入室内的人员或物品散发细菌，如不能防止，则应尽量限制其扩散。
2、空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于 Pa，洁净室(区)与室外大气的静压差应大于 Pa。
（ A ）A、5,10B、5,20C、10,20D、10，203、依据《无菌医疗器具生产管理规范》（YY0033-2000）标准，洁净室（区）的监测项目包括( ABCD )A、温湿度、压力B、风速、换气次数C、尘埃粒子数D、沉降菌或浮游菌4、车间洁净室的主要污染源：（ACCDE ）A、空气B、人员C、工艺用水D、表面（设备、容器等）E、物料。
5、灭菌方法有：（ ABCD ）A、热力灭菌法。
B、辐射杀菌法C、滤过除菌法D、超声波杀菌法6、人员进入洁净室的要求有（ABCDE ）A、进入洁净室，不得带入手机和佩戴饰物等进入B、穿工作鞋，脚不得接触到地面C、洗手和消毒，戴手套，不得裸手直接接触药品D、带口罩可以控制口腔污染E、洁净室工作服不得接触到地面，戴帽保证完整地包裹头发7、用高压蒸汽灭菌的条件是（ A ）A、121℃，15-30minB、100.3℃，30-40℃C、160℃，2hD、65℃，30min8、下列哪些属于微生物的特点（ABCDE）A、个体小，面积大B、代谢强、转化块C、生长旺，繁殖快D、适应强，异变异E、分布广，种类多三．判断题（每题2分，共16分）1、医疗器械法规规定，高风险生物活性物料（如强毒微生物、芽胞菌制品、激素类试剂组分、放射性物质）的操作应使用单独的空气净化系统，与相邻区域应保持负压，排出的空气不应循环使用（√）2、体外诊断试剂生产企业应当具备环境监测能力，具有相适应的检测设备，检测设备一般包括尘埃粒子计数器、风速仪、温湿度计、压差表等。
洁净区微生物知识培训
消毒注意事项
消毒剂浓度合适，针对特定范围内的细菌选择相应的消毒剂消毒剂在一定周期内轮换使用，以防细菌耐药。我公司常用消毒剂为：0.2%新洁尔灭、75%酒精溶液紫外灯消毒时记录使用时间，紫外灯的输出功率随使用时间增加而降低。国产紫外灯的平均寿命（点到70%额定功率的时间）一般为2000h，超过平均寿命时，就达不到预期效果，必须更换。我公司规定紫外灯使用时间为1000h。
微生物是什么？
一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物。形体微小、单细胞或个体结构简单的多细胞、甚或无细胞结构的低等生物。是生物的一大类，形体微小、构造简单、繁殖迅速，广泛分布在自然界中，是一群在化学显微镜或电子显微镜下放大几千倍，甚至上万倍才能看得到的微小生物。
微生物分类－八大类
真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹）细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌放线菌：支原体：肺炎支原体衣原体：沙眼立克次体：斑疹伤寒螺旋体：梅毒病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流感病毒。
消毒和大扫除
区别？消毒－消灭微生物大扫除－除去垃圾等不用的东西。厂房消毒的必要性：消灭沉降在地面、附着在墙面、玻璃、门上的微生物。
谢谢大家！
消毒（disinfection）：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。
灭菌（sterilization）：杀死物体上所有微生物的方法。包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。
抑菌（bacteriostasis）：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。
防腐（antisepsis）： 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。
洁净车间内微生物在哪里？
空气 水人员器具
1. 空气中的微生物
灰尘——“微生物的飞行器”。 微生物不是凭空存在的，99%的微生物都附在颗粒上。控制空气中的微粒数，就是控制了微生物数量。灰尘、微粒具有沉降和粘附的趋势，所以同一区域内，地面是微粒相对集中的地方，也是微生物相对较多的地方，墙壁也容易粘附灰尘。
洁净区微生物基础知识
消毒注意事项
• 消毒剂浓度合适，针对特定范围内的细菌选择相应的消毒剂 • 消毒剂在一定周期内轮换使用，以防细菌耐药。我公司常用消 毒剂为：0.2%新洁尔灭、75%酒精溶液 • 紫外灯消毒时记录使用时间，紫外灯的输出功率随使用时间增 加而降低。国产紫外灯的平均寿命（点到70%额定功率的时间）一 般为2000h，超过平均寿命时，就达不到预期效果，必须更换。我 公司规定紫外灯使用时间为1000h。
可引起局部感染 道和尿道感染 化脓性感染、中耳炎、肺炎 结膜炎 使糖分解，药液产生有机酸
使制剂霉坏，酸败变质
精品课件
洁净室内微生物在哪里
• 空气 •水 • 人员 • 器具
精品课件
空气中的微生物
• 灰尘——微生物的飞行器 • 微生物不是凭空存在，99%的微生物都附在颗粒上。控制空 气中的微粒数，就是控制了微生物数量。 • 灰尘、微粒具有沉降和粘附在趋势，所以同一区域内，地 面是微粒相对集中在地方，也是微生物相对较多的地方，墙 壁也容易粘附灰尘。
精品课件
如何阻断人体污染源
◆ 《药品生产质量管理规范》中明确规定：进入洁净室（ 区）的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触药品。 ◆《药品生产质量管理规范》中明确规定：无菌工作服必须 包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。
精品课件
• ①洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量一般为10～300 个／(min·人)， 躯体一般活动时的发菌量为150～1000 个／(min·人)，快步行走时的发菌量为900— 2500 个／(min·人)。 • ②咳嗽一次的发菌量一般为70～700 个／(min·人)，喷嚏一次的发菌量一般为4000～ 60000 个／(min·人)。 • ③穿平常衣服时发菌量为3300～62000 个／(min·人)。 • ④无口罩发菌量：有口罩发菌量为(1：7)～(1：14)。 • ⑤发菌量：发尘量为(1 ： 500)～(1：1000)。 • 可知洁净室内穿无菌衣人员的静态发菌量一般不超过300 个／(min·人)，动态发菌量 一般不超过1000 个／(min·人)
洁净区环境控制及微生物知识培训
• 30-35℃的培养箱中培养3天。
沉降菌的监测方法
• 沉降菌监测的注意点： • 摆放位置和高度（抑制物质的引入）
洁净区环境控制及微生物 知识培训
zwx 2013.10
制药生产洁净控制
主要:
（一）人员控制系统 （二）公用工程控制系统 （三）设备控制系统 （四）物料控制系统 （五）生产过程控制系统 （六）质量检测控制系统
相关术语
• 洁净室(区)：需要对尘粒及微生物含量进行控制 的房间(区域)。
• 悬浮粒子：洁净室内悬浮在空气约在0.1µm至 5µm之间的固体和液体粒子，用于空气洁净度分 级。
• 非本岗位人员进入洁净区（包括维修、辅助人员） 应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业 等方面的培训及考核。非本岗位人员进入洁净区 要严格按规定程序进出、作业，并有登记记录。
洁净区卫生管理规程
工作服应制定清洗周期，工作服包括服装和一切用于 包裹头、脸、手臂等的遮护用品。不同空气洁净度级别使 用的工作服应分别清洗、整理，必要时消毒或灭菌。
1
＜1 1
＜1 1
＜1
1
1
3
1
3
1
5
3
3
1
3
1
10
8
-
-
-
-
洁净室环境控制
• 压差的控制：洁净区与非洁净区之间、不同级别 洁净区之间的压差应当不低于10帕斯卡。必要时， 相同洁净度级别的不同功能区域（操作间）之间 也应保持适当的压差梯度。
微生物和洁净作业知识考试试题答案
卫生、微生物和洁净作业知识试题卫生、微生物和洁净作业知识试题部门：部门： 姓名：姓名：姓名： 工号：工号：工号： 得分：得分：得分：一、填空题（每空1分，共分，共 40 40分）分）1、进入洁净区的工作人员（包括维修、辅助人员）应定期进行卫生 、微生物学基础知识和洁净作业等方面的培训及考核。
2、GMP 中规定，药品生产企业应有防止中规定，药品生产企业应有防止 污染污染 的卫生措施，制定各项卫生管理制度，并由专人负责。
制度，并由专人负责。
3、GMP 中规定， 生产区不得存放非生产物品和个人杂物。
生产中的废弃物应及时处理。
时处理。
4、药品生产人员应有健康档案。
直接接触药品的生产人员每年至少体检一次。
5、污染的形式：、污染的形式：11、尘粒污染；、尘粒污染；22、微生物污染。
、微生物污染。
6、微生物的主要种类：微生物的主要种类：非细胞型：非细胞型：非细胞型：包括包括包括（病毒、（病毒、（病毒、类病毒、类病毒、类病毒、脘病毒）脘病毒）；原核细胞型：包括、衣原体、立克次体、支原体、螺旋体和放线菌；真核细胞型：包括（酵母菌、霉菌）、原生动物、显微藻、原生动物、显微藻7、30万级洁净区≥万级洁净区≥0.50.5μm 尘粒数要求不多于1010，，500500，，000 /000 /立方米，沉降立方米，沉降菌数不多于15/15/皿皿8、洁净室的发尘源：空气、人体、内环境发尘、设备发尘、尘埃积存9、空气过滤器：按过滤微粒的大小分为初效、中效、亚高效、高效。
1010、空气净化系统（、空气净化系统（、空气净化系统（HVAC HVAC HVAC）评价七大指标：）评价七大指标：（1）、温湿度；（2）、静压差；（3）、风量、送风量（换气次数）新风量；（4）、尘埃粒子数；（5）、微生物；（6）、噪声；（7）、照度。
、照度。
1111、物理灭菌法包括干热空气灭菌法、湿热灭菌、过滤灭菌、紫外线灭菌法、微、物理灭菌法包括干热空气灭菌法、湿热灭菌、过滤灭菌、紫外线灭菌法、微波灭菌法、电离辐射灭菌法波灭菌法、电离辐射灭菌法1212、、30万级洁净室的温度要求为18-2618-26℃℃ ，相对湿度要求为4545——65%65%。
微生物与洁净区操作常识培训
头发断面
15μm
肉眼可见 5μm
2、发菌量 分析国外试验资料可以认为： （１） 洁净室内当工作人员穿无菌服时： 静止时的发菌量 一般为10-300 个/min.人躯体一般活动时的发菌量为 150-1000 个/min.人快步行走时的发菌量为 900-2500 个/min.人 （２） 咳嗽一次一般为 70~700 个/ min.人喷嚏一次一般为 4000~62000 个/ min.人 （３） 穿平常衣服时发菌量 3300~62000 个/ min.人 （４） 无口罩发菌量:有口罩发菌量 1:7~1:14 （５） 发菌量：发尘量 1:500~1:1000 据国内事例： （６） 手术中人员发菌量 878 个/ min.人 所以，可知洁净室内无菌衣人员的静态发菌量一般不超过 300 个/ min.人，动态发菌量一般不超过1000 个/ min/人，以 此作为计算依据是可行的。 洁净室之建筑主体构造，一般是用钢筋或骨水泥，但无论是 何种构造，必须满足如下之条件：A.不会因温度变化与振动 而发生裂痕；B.不易产生微尘粒子，且很难附着粒子；C.吸 湿性小；D.为了维持室内之湿度条件，热绝缘性要高
感性认知
一般微粒粒径对比
0.3μm 微尘粒 \ 0.5μm 微尘粒
PM2.5可吸入颗粒 2.5μm 微尘粒
肉眼可视 (5μm)
人类头发 (15μm)
感性认知
一般自然界气体等级
外大气层
1,000
大气层 田园地带
100,000
10,000
街市区
1,000,000
工业地带
10,000,000
空气洁净级别
大量临床资料表明，注射剂（尤其是静脉注射剂）如污 染了7~12μm的尘粒，可导致热原反应、肺动脉炎、微 血栓或异物肉芽肿等，严重的还会致人死命。而如果污 染了细菌，轻则局部红肿化脓，重则引起全身细菌性感 染。因此，对微生物和尘粒进行更加严格的控制对于针 剂生产洁净室非常重要。 人是洁净室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人 每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750 个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为10~300个/min， 一般活动时发菌量为150~1000个/min，行走时发菌量为 900~2500个/min。咳嗽一次发菌量为70~700个/min，喷 嚏一次为4000~60000个/min。所以在洁净室中，人的数 量和活动应有特别严格的限制。
微生物知识及洁净区操作常识培训
微生物的营养
根据其生命活动所需能量的来源不同， 可分为光能营养菌和化能营养菌。前者 是从光线中获得能量，后者则从化学物 质氧化中取得能量。 因此，根据微生物所需的碳源和能源不 同，可将微生物分为光能自养菌、光能 异养菌、化能自养菌、化能异养菌等四 类。
消毒与灭菌
消毒（disinfection) 杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或 非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)。 灭菌（sterilization） 杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细 菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗 生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。 同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。
空气洁净技术采用的过滤方法 空气净化装置可用于整个房间如无菌操 作室，也可只限于操作区域局部如超净 工作台。 化学消毒方法：采用消毒剂作用于室内 空气和物体表面 紫外线照射方法 ：采用紫外线对室内空 气进行照射。
制药用水中的微生物
化学消毒剂方法 对水的消毒以化学消毒 剂方法较常用，效果也最好。常使用次 氯酸钠或通氯气。 膜过滤法 适用于水系统的连续循环处理 紫外线照射法 在水系统中应用紫外线 照射消毒，适用于需要特殊处理的水（ 如光学透明度要求高），一般在末端之 前。
人员污染的途径和方式
人的头发和皮肤 水滴 衣着 化妆品和珠宝手饰 生产过程中人们所引起的混杂和误差
人体不同部位所带细菌数量
部位 细菌数量
手 部 前 额 头 皮 腋 窝 鼻腔分泌物 唾 液 粪 便
微生物基础知识和洁净区知识培训
-------FDA
2015-2-3 35
洁净区微生物的要求？
2015-2-3
36
人带来的污染来源
人的头发和皮肤
液滴
衣着
化妆品和珠宝手饰
人的操作
（生产过程中人员不当的操作所引起的 混杂和误差）
2015-2-3 37
人是第一的(主要)污染源。 怎么办？
2015-2-3
38
根据污染源查找解决方法
2015-2-3
10
<== 细菌细胞分裂的电镜超薄切片图
杆菌二分裂过程模式图
2015-2-3
11
细菌的繁殖速度
细菌一般每20-30分钟即可分裂一次
2015-2-3
12
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 大肠埃希菌 Escherichia coli
2015-2-3
13
2015-2-3
1
什么是微生物？
微生物 （Microorganism）通 常是描述一切不借助 显微镜用肉眼看不见 的微小生物，包括病 毒、细菌、真菌、原 生动物、和某些藻类。
2015-2-3 2
细菌 原核生物：
（由原核细胞构成的）
放线菌
具有细胞结 构的微生物
微 生 物 的 种 类
真菌 水绵
真核微生物
空气洁净度：是指环境中空气含尘（微粒）量
多少的程序，含尘浓度高则洁净度低，含尘浓 度低则洁净度高。
2015-2-3
33
洁净区的划分
药品生产洁净室（区）的空气洁净度划分为四个级别， 即A级、B级、C级、D级。
A级：冻干车间灌装功能区、轧盖功能区 B级：灌装室辅助区、中心化验室无菌区 C级：配制、洗瓶、轧盖等支持区、动物实验室、
（整理）卫生和微生物学基础知识、洁净作业知识.
（整理）卫⽣和微⽣物学基础知识、洁净作业知识.卫⽣和微⽣物学基础知识、洁净作业知识第⼀章微⽣物学基础知识⼀、微⽣物概况在⾃然界中，⽤⾁眼⽆法直接看到的，必须⽤光学显微镜或电⼦显微镜放⼤⼏百倍、⼏千倍甚⾄⼏万倍才能观察到的微⼩⽣物的总称。
微⽣物的种类繁多，⾄少在⼗万种以上。
包括病毒、细菌、霉菌及酵母菌等。
微⽣物在⾃然界分布极⼴。
⼟壤、⽔、空⽓、⼈类及动植物的体表、呼吸道、消化道等腔道中均存在数量不等的微⽣物。
⼆、微⽣物与药品质量的关系有些药品的⽣产是依靠微⽣物来完成的。
如神曲、淡⾖豉是通过微⽣物发酵后制成的；⽽青霉素是微⽣物的代谢产物等。
对⼤部份药品⽣产来说，微⽣物会污染药品，使药品变质，对⼈体产⽣危害。
为此，我们要尽量控制⽣产环境的微⽣物数量，避免药品受到污染。
三、细菌简介细菌是原核细胞⽣物中的⼀类单细胞微⽣物。
因此所有细菌均具有普通细胞的结构，包括细胞壁、细胞膜、细胞浆等，但⽆真正的细胞核结构（仅有原始核，⽆核膜、核仁，缺乏细胞器）。
细菌的特殊结构：主要有荚膜、芽孢、鞭⽑和菌⽑。
芽孢：某些细菌，在其⽣活的某⼀阶段可于细胞浆内形成圆形或卵圆形的特殊结构称为芽孢。
芽孢对⼲燥、热和化学药品的抵抗⼒较强。
四、霉菌简介霉菌亦称真菌，是真核细胞⽣物中的⼀类单细胞和多细胞微⽣物，具有真正的细胞核结构：核膜、核仁和染⾊体，胞浆内有完整的细胞器。
病原性的真菌最重要的有“廯菌”与“⽩⾊念珠菌”。
霉菌⽣长能⼒很强，特别是在温暖潮湿的环境中最易⽣长繁殖，⽽且对药物有较强的抵抗⼒。
第⼆章卫⽣学基础知识⼀、消毒1、概念（1）消毒：是指对病原微⽣物繁殖体的杀灭作⽤，但不能杀死芽孢等全部微⽣物。
（2）消毒剂：是指⽤于消毒的化学药品。
2、常⽤消毒剂3、影响化学消毒剂作⽤的因素（１）消毒剂的化学结构、浓度、消毒能⼒，协同作⽤和拮抗作⽤，接触时间；微⽣物的类型、数量和环境；（２）微⽣物的类型、数量和环境；（３）溶液的氢离⼦浓度、表⾯张⼒、有机物或其他钝化剂的存在；（４）被消毒物表⾯的性质是光滑还是多孔粗糙等。
微生物基础知识及洁净区微生物控制培训
微生物可通过空气、水、食品等途径传播，此处 将重点介绍空气中微生物的控制方法。
微生物危害及对人体的影响
1 感染传播
细菌、病毒等微生物会引起感染传播，引起疾病。
2 食品卫生
细菌在食品中繁殖，容易导致食品污染。
3 药物耐受性
细菌、病毒等微生物的药物耐受性会影响治疗效果。
洁净区域的定义与分类
1
洁净区定义
注意事项 易燃，对皮肤的刺激性较大。
地面、墙壁等表面消毒 消毒率较高，使用范围较广
含氯量不宜过高，会对地面 产生腐蚀性。
具有毒性，对人体造成伤害， 使用时要注意控制醛气浓度。
环境监测程序
设备选择
选择能满足环境监测数据采集 和管理的设备。
软件选择
根据设备类型、使用要求等选 择合适的监测软件。
操作流程
温度和湿度控制
要根据不同环境对温度和湿 度进行控制，保证洁净区域 内的环境舒适。
检测和维护
要对通风系统进行定期监测， 发现问题及时维护和处理。
环境相关的质量控制
对于洁净区域的环境质量进行相关的质量控制，包括环境监测、污染控制、物料灭菌、器具消毒等。不 断优化过程、提高管理水平和经验，提高洁净区域的质量保障和研究水平。
着装要求
穿戴干净的制服或衣服，佩 戴适当的防护用品。
操作流程
对不同操作流程进行操作规 程的制定和员工的培训，确 保操作的标准化和规范化。
相关法规
员工培训需要对相关法规进 行解析，使员工清楚了解洁 净操作的相关法律法规。
消毒剂的种类与使用方法
种类 酒精类 含氯类 醛类
使用范围 手术器械等器材表面消毒
涉及非常规流程的问题处理技巧
1 问题的分析和定位 2 方案的制定和实施 3 维护和管理
洁净区微生物基础知识
洁净室中最大的微生物污染源
1、人在代谢过程中会释放和分泌污染物。 2、人体表面、衣服能沾染、携带污染物。 3、人在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。
人体内外微生物的分布
1、皮肤：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八叠球菌属细菌、类白喉棒杆 菌、金黄色葡萄球菌等 2、口腔：唾液链球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、类白喉棒杆 菌等 3、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌 、流感杆菌、乙型链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌 等。 4、下呼吸道：包括气管、支气管和肺 。健康人的下呼吸道是无菌的。
热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生 不可逆转的死亡。 1、干热灭菌法—采用灼烧或干热空气灭菌 ，使用方便，适用于玻璃器皿和 瓷器等耐高温的固体物的灭菌 。 2、湿热灭菌法—利用热蒸汽杀死微生物。 高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方法 ，蒸汽的穿透力较热空 气强可以杀死一切微生物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐高温 的个体 。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。
• 4、枯草杆菌 结膜炎
• 5、酵母菌 使糖分解，药液产生有机酸
• 6、霉菌
使制剂霉坏，酸败变质
洁净室内微生物在哪里
• 空气 •水 • 人员 • 器具
空气中的微生物
• 灰尘——微生物的飞行器 • 微生物不是凭空存在，99%的微生物都附在颗粒上。控制 空气中的微粒数，就是控制了微生物数量。 • 灰尘、微粒具有沉降和粘附在趋势，所以同一区域内，地 面是微粒相对集中在地方，也是微生物相对较多的地方，墙 壁也容易粘附灰尘。
消毒注意事项
• 消毒剂浓度合适，针对特定范围内的细菌选择相应的消毒剂 • 消毒剂在一定周期内轮换使用，以防细菌耐药。我公司常用消 毒剂为：0.2%新洁尔灭、75%酒精溶液 • 紫外灯消毒时记录使用时间，紫外灯的输出功率随使用时间增 加而降低。国产紫外灯的平均寿命（点到70%额定功率的时间）一 般为2000h，超过平均寿命时，就达不到预期效果，必须更换。我 公司规定紫外灯使用时间为1000h。
洁净区工作人员基础知识培训教材
二、概述
9、浮游菌——由内部真空抽气,使含微生物粒子的高速气流从采样 器筛孔板吸入,定量空气中的活微生物粒子撞击到专用的培养基平 板上,经培养后形成菌落,记数后求得每立方米空气中的浮游菌数。
、污染物质：能使药品生产的原料、半成品、成品改变性质、造成 不良影响的物质。
三、卫生管理
④工作服的选材、式样及穿戴方式应与生产操作和空气洁净度级 别的要求相适应，并不得混用，且有明显区别。洁净工作服的质 地应光滑，不产生静电，不脱落纤维和颗粒性物质，无菌工作服 必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物；
⑤工作服应按不同洁净度级别的要求分别清洗整理，必要时消毒 或灭菌，应制定清洗周期；
二、概述
3．管理的核心、实质 (1)把人为差错控制在最低程度，直到最终消灭 差错。 (2)千方百计防止污染：微生物污染和交叉污染。 (3)建立严密的质量保证体系，对药品生产的全 过程进行严格的科学的管理。
二、概述
4．的主要内容 (1)硬件：是基础条件，包括总体布局、厂房、生产环 境、设备、设施等。 (2)软件：是管理手段，健全一套切合企业实际的文件 管理体系，包括各项制度。 (3)人员：是保证要素，是软、硬件的设计及执行者。
四、洁净区管理
1、洁净室(区)的要求 (1)洁净室(区)的内表面应平整光滑、无裂缝、接口严密、 无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒，墙壁与地面的交界 处宜成弧形或采取其他措施，以减少灰尘积聚和便于清洁 (避免藏污纳垢)。 洁净室(区)主要工作室的照度宜为300勒克斯(1x)，一般 区照度不低于150勒克斯(1x)。
二、概述
15、验证：证明任何程序、生产过程、设备、物料、活 动或系统确实能达到预期结果的有文件证明的一系列活 动。 16、标准操作规程：经批准用以指示操作的通用性文件 或管理办法。
洁净车间员工微生物知识培训
洁净车间员工微生物知识培训主要内容•为何进行微生物知识培训•为什么GMP中要控制微生物•微生物基础知识•常见微生物种类•洁净车间内微生物污染途径•GMP相关预防微生物污染措施一、为何进行微生物知识培训依据：医疗器械生产质量管理规范附录——无菌医疗器械2.1.1 凡在洁净室（区）工作的人员应当定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面培训。
二、为什么GMP中要控制微生物？为保证产品的安全有效，需要对微生物进行控制。
空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气中，1μm以下者处于悬浮状态，10μm以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。
所以也要对尘粒进行控制。
举例：“欣弗事件” 反映了我国一些企业在微生物控制方面存在的严重问题；而更为严重的是一些企业普遍存在的无菌检查认识误区！安徽华源生物药业有限公司生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液(欣弗)违反GMP工艺流程，降低灭菌温度，缩短灭菌时间；样品检测发现，无菌检查和热原检查不合格。
灭菌不合格样品长出细菌“按照批准的工艺，该药品应当经过105摄氏度、30分钟的灭菌过程。
但安徽华源却擅自将灭菌温度降低到100摄氏度至104摄氏度不等，将灭菌时间缩短到1到4分钟不等，明显违反规定。
样品经培养后，长出了细菌。
三、微生物基础知识•一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物。
•形体微小、单细胞或个体结构简单的多细胞、甚或无细胞结构的低等生物。
•是生物的一大类，形体微小、构造简单、繁殖迅速，广泛分布在自然界中，是一群在化学显微镜或电子显微镜下放大几千倍，甚至上万倍才能看得到的微小生物。
微生物分类－八大类•真菌：霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹）•细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌•放线菌：•支原体：肺炎支原体•衣原体：沙眼•立克次体：斑疹伤寒•螺旋体：梅毒•病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流感病毒。
五、洁净车间内微生物污染途径✓空气✓水✓人员✓器具✓物料1. 空气中的微生物空气：空气并不是产生污染的介质，但它是污染的危险携带者。
微生物基础知识及洁净区微生物控制
微生物基础知识及洁净区微生物控制培训内容简介一、 微生物简介二、微生物的分布三、微生物的作用及危害四、微生物的形态结构五、微生物污染及消毒灭菌六、 洁净区微生物的控制一、微生物简介1、微生物的定义(microorganism, microbe):微生物是存在于自然界中的个体微小，结构简单、肉眼看不见，必须借助于显微镜才能看清它们外形的一群低等的、原始的微小生物，如细菌，病毒等。
2、微生物的分类(按其结构、化学组成可分为)Ø原核生物:细胞核无核膜包裹，只存在称作核区的裸露DNA的原始单细胞生物。
它包括细菌、放线菌、立克次氏体、衣原体、支原体、蓝细菌和古细菌等。
Ø真核生物:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体, 细胞器完整。
如真菌(酵母菌和霉菌)、原生动物、藻类。
Ø非细胞类:结构最简单和最小的微生物，能通过除菌滤器，没有典型的细胞结构，无产生能量的酶系统，只能在宿主活细胞内生长增殖的微生物。
如病毒和朊病毒。
非细胞细胞生物生物3 .微生物的五大特点：3 .微生物的五大特点：①体积小、比表面积大：微生物的大小以μm计，但比表面积（表面积/体积）大，必然有一个巨大的营养吸收，代谢废物排泄和环境信息接受面。
这一特点也是微生物与一切大型生物相区别的关键所在。
②吸收多、转化快：这一特性为高速生长繁殖和产生大量代谢物提供了充分的物质基础。
③生长旺、繁殖快：生长繁殖率极高，如大肠杆菌在20-30分钟内分裂一次，如果连续分裂，48小时内2.2*10^43个细菌数量增加，营养消耗、代谢积累和限制生长速度。
这种特性可以在短时间内将大量的基板转化为有用的产品，缩短研究周期。
还有一些缺点，如疾病、粮食霉变。
④分布广,种类多（10万多种）：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等，土壤中的数量最多。
⑤适应性强，易变异：在紫外线辐射、生物诱变剂和环境中的一些营养因子的变化中，微生物自觉地、强制性地改变其遗传结构，导致变异。
微生物知识及洁净操作
…… No
…… Yes
5、 物料的微生物
物料系指原料、辅料和包装材料等。 • 原辅料可能将大量的微生物带入到药物制 剂中。因此，选用符合标准的原辅料，将 有助于控制药品和环境的污染水平。 • 来源于动物的原料药或辅料（如明胶）， 有可能被动物病原体所污染；来源于植物 的原料药或辅料（如淀粉）则可能被多种 细菌、霉菌、酵母菌所污染。中药材则常 带有土壤微生物。
微生物生长条件—温度
适合在中等温度范围内生长的称为嗜温菌。 绝大多数细菌属于此类，虽然多数病原菌 是嗜温菌，它们的最适生长温度为37℃， 接近自然宿主的体温。放线菌属真细菌， 适宜生长温度为28-32℃。真菌适宜生长的 温度为22-30℃，低于一般细菌的生长温度。
微生物生长条件--PH
• 微生物在一定的酸碱度范围内能得到最迅 速的生长，每种培养基均需小心调节到最 适微生物生长的氢离子浓度。大多数细菌 最适生长的pH范围很窄，约为6.0-8.0。多 数病原性细菌在中性或微碱性培养基（相 似人体环境）中生长良好。不论环境条件 的影响如何，细胞内部的生化反应适宜pH 总是在中性pH7.0 左右）。
• 不同动作状态的污染发尘率 • 发尘率（个/min） 动作状态 • 10万 站立或静止—没有动作 • 50万 站立或静止—手臂和头部轻 微动作 • 100万 站立或静止—全臂、手、头部和臂 部动作 • 250万 坐下或立起 • 500万 行走—3.6Km/h • 750万 行走—5.6Km/h • 1000万 坐椅子 • 1500-3000万 跳跃
2、吸收多，转化快
• 微生物的食谱非常广泛，凡是动植物能利用的营 养，微生物都能利用，大量的动植物不能利用的 物质，甚至剧毒的物质，微生物照样可以视为美 味佳肴。 • 如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗相当 于自身重量2000倍的糖，而人体则需要40年之久。
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微生物、洁净区作业知识
主要内容：微生物概述，微生物与人类的关系，制药与微生物。
１、微生物
什么是微生物：简单的说，微生物就是微小的生物。
是一群个体
微小、结构简单、肉眼不能直接看到，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千甚至几万倍才能看到的微小生物。
微生物的五大共性：
第一：体积小，面积大；
第二：吸收多，转化快；
第三：生长旺，繁殖快。
微生物简单分类：细菌、真菌、病毒。
注意：
细菌、霉菌及酵母菌为药品中的限制菌；
大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等
为药品中的控制菌，一旦药品中有以上控制菌被检出，该批药品不能做
灭菌处理而是将被销毁。
２、GMP与微生物
推行GMP目的：消灭污染、混药、差错；
污染的定义：当一个产品存在有不需要的物质时，它即受到污染；
污染的形式：尘粒污染、微生物污染。
３、尘粒污染
尘粒污染：是指产品因混入不属于它的那些尘粒而变得不纯净。
尘埃、
污物、棉绒、纤维以及我们的头发、皮屑都是尘粒污染的潜在原因。
临床资料表明：如药品被7－2μm的尘粒污染了，尤其是静脉注射用药，
可以导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的会致人死命。
４、微生物污染
微生物污染是指因微生物产生、附着而给特定的环境带来的不良影响。
５、传播污染的四大媒介
空气、水、表面、人。
ａ、传播污染的四大媒介－空气
空气：空气并不是产生污染的介质，但它是污染的危险携带者。
充满微
生物的尘埃和水滴就是通过空气作为侵袭我们产品的媒介而成为重要的污染源的。
当我们谈话、咳嗽和打喷嚏时，被污了的水滴正是不断地从我们的呼吸
道中放入我们的工作场所。
尘埃微粒正是通过空气流不间断地在我们整个药厂范围循环运行着。
请记住：空气中存在的尘埃微粒是含有微生物(细菌等)的。
因此，空气
是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。
这就是为什么要尽量保持空气洁净是极为重要的。
ｂ、传播污染的四大媒介－水
水：从理论上来讲，微生物在纯水中是不能生长的。
但是，所有的各类
水，不管怎样仔细地蒸溜或过滤，总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。
正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。
在生产过程中，水是应用最广泛的原料之一。
这就是为什么我们药厂的
卫生规程不仅必须仔细地控制用于生产过程的水，而且要控制好如何正确地用水来清洗我们的设备。
ｂ、传播污染的四大媒介－表面
表面包括：天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或桌子；
由于空气中的湿度，所有表面都包上一层含水的薄膜。
这层薄膜由于静
电吸引而饱含尘埃微粒，有很多时候，表面还覆盖一层油状物质，此层油膜易受到尘粒污染；
表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染；
请记住：一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污
染，除非已经做了正确的消毒灭菌。
ｄ、传播污染的四大媒介－人
人是最常见的传染源。
事实上，人们常说，人是药厂中最不清洁的成份，
最大的污染源。
为什么呢?一个原因，人体是一个永不休止的污染媒介。
当您每天来药厂上班时，您也许随身将几百万细菌带入工厂。
６、人员污染的途径和方式
人的头发和皮肤；
水滴；
衣着；
化妆品和珠宝手饰；
生产过程中人们所引起的混杂和误差。
ａ、人的头发和皮肤
您是否知道，每分钟从人类皮肤中要散发出约10,000个微生物?如果
说，一小粒糖的空间中能装载4亿个微生物，那么，您想想看，在一股头发中可以容纳多少微生物呢?
我们的手，也拥有大量的微生物。
此外，在人们正常的日常活动中都接
触大量微生物。
ｂ、水滴
呼吸和咳嗽将产生出大量水滴，这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物
污染。
口腔是对污染最为敏感的地区。
一次咳嗽或喷嚏将把干百万个微生物引入工作环境内。
ｃ、衣着
从可洗涤的纺织物中，可能散发出棉绒和淀粉粒。
而从羊毛、开士米和
其它松软的针纺织物中也可能散落出纤维和磨损下的微粒。
污染也可能通过我们的鞋子进入工作场所。
ｄ、化妆品和珠宝手饰
发胶、气雾除臭剂、眼膏、香粉、口红等，为微生物污染提供了极好的
源泉。
耳环、戒指、项链、手链、手表能传播微生物污染。
如果，一小片珠宝碎片落入一批产品中，则可能引起严重的尘粒污染。
ｅ、生产过程中人们所引起的混杂和误差
由人引起的污染也可能来自于生产过程中出现的混杂和误差。
例如，当
员工没有按照SOP进行工作时，车间的污染程度增加。
让产品容器不加盖地存
放，将导致产品污染。
７、生产过程中人们所引起的混杂和误差
由人引起的污染也可能来自于生产过程中出现的混杂和误差。
例如，当
员工没有按照SOP进行工作时，车间的污染程度增加。
让产品容器不加盖地存放，将导致产品污染。
８、药品生产人员卫生注意事项
新进人员的健康检查：药品生产企业在招收新职工时，一定要对新职工
进行全面的健康检查，要确保新进厂的职工不患有急性或慢性传染病。
另外还要根据新进职工安排的具体岗位性质再确定其它具体检查的项目；
建立生产人员健康档案：药品生产企业应对职工建立个人健康档案，以
便于检查、了解、追踪个人健康好坏的状况；
培养药品生产人员良好的个人卫生习惯；
洁净区生产人员要求。
９、洁净区生产人员要求
进入洁净区不得化妆，佩戴饰物；
不得将工作服穿离工作区；
应养成良好的卫生习惯，勤洗澡、修指甲、刮脸，进入洁净区不得佩带
戒指等首饰和手表、不得化妆。
患有皮肤病、传染病和呼吸道疾病的人员不宜上岗；
洁净区工作人员要尽可能少而精，只有工作需要时才能进入；
操作人员在洁净区动作尽量要缓慢，避免剧烈运动，以减少人的发尘量；
洁净区的门应关紧，避免不必要的移动，以保持洁净区的风速、风量、
风型和风压；
洁净区各室之间、洁净区与非洁净区之间严禁串岗。
１０、人员进出入洁净区的程序
进入洁净区一更室后，脱下一般区工作鞋，放入更鞋柜外侧；
从更鞋柜内侧取出洁净工作鞋换上；
脱下一般生产区工作服，装入袋中；
走到洗手池前，蘸取洗手液洗手；
进入洁净区二更；
取出洁净区工作服；
按口罩→工作服顺序穿好；
整理工作服；
手消毒。