老年黄斑变性的基因研究进展 PPT
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AMD 具有一定的家族倾向性，大约四分之一是由 遗传因素决定的。
1.定位于1q25~q31的基因（基因代号ARMD1）异常主 要表现为干性 AMD，玻璃膜疣和黄斑变性定位于染色 体6q14新的位点。
2.ABCR是感光细胞外节盘沿蛋白的重要组成部分，影 响视网膜色素上皮细胞与感光细胞之间的物质交换， 它与 AMD 发生有关。ERIC 报道167例萎缩型病例中 26例等位基因的变异，提示 ABCR 基因与干性 AMD有 关，但52例渗出型家族病例中只有2例与其有关，提 示 基因与渗出型关系不大。
四、AMD的基因研究模型
研究证明 AMD 的病理过程涉及氧化应激、免疫炎 症反应以及脂质和碳水化合物的代谢等。在分子遗传 学以及分子流行病学的基础上，目前已选出多个 AMD 相关候选基因，多种 AMD 相关候选基因修饰的 AMD 小鼠模型相继建立。
1.单核细胞趋化蛋白-1（Ccl-2）或其受体（Ccr-2）敲除小 鼠模型
尽管目前建立的 AMD 模型方法繁多，但由于AMD 涉及遗传及环境因素，还尚无一种模型可以完全再现 人 AMD 的发展过程，因而有必要进一步研究, 以寻 找更佳的AMD 模型。
五、与基因治疗相关的研究
基因治疗是一个很有前景的治疗方法，把目的基 因导入人的细胞去修正原有基因缺陷或者合成新的物 质达到治疗作用 。
过量的drusen将会损坏视网膜色素上皮细胞，被损坏 的视网膜色素上皮细胞及其引起的慢性炎症异常反应 会导致视网膜萎缩以及血管原性细胞因子(如VEGF等) 的表达，发展成湿性 AMD。
三、和AMD发病相关的基因
AMD 的发病机制较为复杂，目前尚不清楚其确切 的发病机制。目前提出的有遗传因素、光积聚损伤、 自由基损伤及脉络膜血液动力学改变等学说。
6 周龄的小鼠模型可观察到类玻璃膜疣的视网膜 改变，并随着年龄的增长变大融合，一些会形成疤痕 样萎缩灶；同时该模型还会出现 RPE 细胞异常和光 感受器细胞的萎缩。该模型小鼠优点是出现 AMD 病 理改变要早于其他 AMD 模型小鼠，然而此模型造模 技术要求高。
4.载脂蛋白 Bl00（ApoBl00）转基因小鼠模型
3.补体系统C1抑制因子(SERINGl)基因的单体型 CGTGCA是一种中国汉族人群湿性 AMD 的风险单体型， 另一种单体型CGTGCA是中国汉族人干性 AMD 的一个 风险单体型。
4.2005年三个独立的科研小组分别在science上发现 常染色1（1q31）上的补体系统H基因(CFH)上的一段 氨基酸序列中，Tyl402His的重复性与白色人种 AMD 的高发率有关。
2.趋化因子受体 1 抗体基因敲除（Cx3crl -/-）小鼠模型
12 月龄 Cx3crl -/-小鼠眼底可观察到光感受器 层明显变薄，黄色结节样类玻璃膜疣沉积物。 在视 网膜内，小胶质细胞（MCs）是 Cx3crl 的唯一寄存 细胞，该模型可用于 MCs 与 AMD 病理机制的相关性 研究。
3.单核细胞趋化蛋白-1（Ccl-2） ／ 趋化因子受体 Cx3crl 双基因敲除小鼠模型
5.CFH是主要补体系统的抑制剂，在黄斑部位合成并出现在 drusen中。补体系统F基因（CFH）的4个SNP位点rs3753394、 rs800292、rsl061170、rsl329428与中国汉族湿性AMD显著 相关，它们的单体型CATA是中国汉族人湿性AMD的保护因子
而补体因子B(CFB)及c2基因对增加 AMD 的发病风险也 有关，有数据显示因CFH、CFB及C2基因引起的 AMD 占全部 AMD 病例的75％。
ApoBl00 是肝脏合成和分泌甘油三酯的VLDL 所 必须的载脂蛋白，此基因的突变可引起多种脂蛋白的 代谢紊乱。12月龄的人ApoBl00 转基因小鼠体内观察 到了Bruch 膜明显增厚及基底膜沉积物，RPE 细胞的 空泡形成。
5.ApoE 基因缺失（ApoE-/-）小鼠模型
对 ApoE-/-小鼠进行高脂喂养 出现光感受器细 胞和 RPE 层细胞萎缩、排列紊乱，Bruch 膜厚薄不 均，胶原纤维分叉，分叉处可见玻璃膜疣。 其作为 AMD 动物模型的优点在于较符合 AMD 自然病程。缺 点是此动物模型的成模率不高。
二、分类
1.萎缩型——又称干性或非渗出性。主要为脉络膜毛 细血管萎缩，玻璃膜增厚和视网膜色素上皮萎缩引起 的黄斑区萎缩变性。病之早期即见中心视力下降或伴 视物变形。眼底可见较多玻璃膜疣，黄斑部结构不清， 色素紊乱或脱失。荧光素眼底血管造影为透见荧光， 系视网膜色素上皮萎缩所致。
黄斑区大量玻璃膜疣
巨噬细胞是清除补体及免疫复合物的主要细胞， 其功能的缺失有利于补体和免疫复合物的堆积，这可 能间接促进了 AMD 的形成。Ccl-2 对单核细胞具有 趋化活性，可激活单核细胞和巨噬细胞，并调控单核 细胞和巨噬细胞的黏附分子和细胞因子的表达。
在 Ccl-2 及 Ccr-2 敲除小鼠的体内均发现了类似人 类 AMD 的病理改变，包括 RPE 内脂褐素的沉积、玻 璃膜疣的产生和光感受器细胞的萎缩。此类小鼠的存 活率以及成模率不甚理想。
黄斑区玻璃膜疣
2.渗出型——又称湿性。视网膜下出现黄斑部反复渗 液、出血，最后机化而成为瘢痕，造成中心视力丧失。 荧光素眼底血管造影可见新生血管渗漏及出血而遮蔽 荧光。据临床观察萎缩型也可转变为渗出型。
黄斑区片状出血， 周围黄白色渗出
新生血管荧光渗漏
病理改变：AMD 以视网膜上出现玻璃膜疣(drusen)为 典型性特点，drusen是细胞代谢产物堆积在视网膜上 而形成的。早期干性 AMD 并无明显症状，随着病情 逐渐发展，drusen，数目增多、体积变大并引起视力 模糊、图像变形、盲区扩大，致使中心视觉丧失。
7.黄斑变性易感基因2(ARMS2／LOC387715)位于常染 色体10(10q26)，ARMS2负责编码位于视网膜线粒体中 的蛋白的表达，该基因上的氨基酸序列 Ala69Ser也 与 AMD 的发生发展有关。
8.研究发现一个参与人体免疫反应的关键分子 TLR3 的分子可被周围出现的病毒 RNA 激活，与 AMD 发生 有关。可以成为基因治疗的靶点。
年龄相关性黄斑变性的 基因研究治疗新进展
董洪涛 李秋明 郑州大学第一附属医院眼科
河南省眼科医院
一、定义
年 龄 相 关 性 黄 斑 变 性 ( a g e — r e l a t e d maculardegeneration，简称AMD或ARMD)，又称老年 性黄斑变性，是视网膜色素上皮细胞和神经视网膜退 行性病变造成的一种视力下降的疾病。该病与年龄增 大及视网膜色素上皮代谢功能衰退密切相关，目前普 遍认为是由环境因素作用于遗传易感个体而引起的疾 病。
CFH -/-小鼠也发生了类 AMD 的视网膜病理改变。 包括 ERG 显示 a、b 振幅均降低，视网膜自发荧光 的增强，视网膜下沉积物的增多，光感受 器 外 段 的紊乱。
9.脑啡肽酶（NEP）基因敲除小鼠模型
Aβ 沉积于 AMD 患者眼内， 并与玻璃膜疣的形 成相关，而 NEP 具有降解 Aβ 的作用。 NEP 基因 敲除小鼠体内可发现 Aβ 沉积和VEGF 高表达，同时 伴随色素上皮源性因子（PEDF）的低表达，符合氧化 应激反应的表现。此外有视网膜下沉积以及 RPE 细 胞的萎缩等类似早期 AMD 的病理改变。
6.超氧化物歧化酶（SOD）基因修饰小鼠模型
SOD 是一类超氧自由基的消除剂，SOD-1 则 是其一种亚型，SOD-1 基因的缺失会增强氧化应 激反应对视网膜的损伤。实验研究显示Sod-1 -/小鼠体内可发现类玻璃膜疣的视网膜沉积物，部 分小鼠可发生CNV。SOD基因修饰小鼠可用于氧化 应激反应与 AMD 致病机制的研究。
7.血浆铜蓝蛋白（CP）/亚铁氧化酶（HP）双基因敲除小鼠模型
铁与氧化应激反应相关联，CP 是一种铁氧化酶， 调节细胞中铁的输出。CP 和 HP 双基因敲除小鼠眼 底观察到了与 AMD 类似的病理表现，包括 RPE 的 肥大和色素减退，光感受器萎缩，视网膜下新生血 管。但该模型小鼠存活率低。
8.补体因子 H（CFH）基因敲除小鼠模型
源自文库
3.另有报道在实验性模型中用转导抗血管生成因 子的方法治疗，这为基因治疗提供了新的可能性 。
谢谢您的聆听！
1.以VEGFR1为靶点经化学修饰得到的siRNA可使 上调的VEGF mRNA沉默，阻断VEGF的过度表达，从而 抑制脉络膜新血管的形成，其作为治疗AMD药物正处 于研究中。
2.研究表明 VEGF 对视网膜下新生血管（SRN） 形成起着关键作用，VEGF可溶性受体基因转染可抑制 SRN。 已有报道构建的腺病毒可以表达表达人 VEGF 受体/FLT-1融合到人 IgG 的 Fc 部分（AdFLT-EXR） 的整个胞外域，腺病毒转染到小鼠模型中。荧光素血 管造影评估 SRN 的形成比对照大鼠中更显著地抑制7 天。
1.定位于1q25~q31的基因（基因代号ARMD1）异常主 要表现为干性 AMD，玻璃膜疣和黄斑变性定位于染色 体6q14新的位点。
2.ABCR是感光细胞外节盘沿蛋白的重要组成部分，影 响视网膜色素上皮细胞与感光细胞之间的物质交换， 它与 AMD 发生有关。ERIC 报道167例萎缩型病例中 26例等位基因的变异，提示 ABCR 基因与干性 AMD有 关，但52例渗出型家族病例中只有2例与其有关，提 示 基因与渗出型关系不大。
四、AMD的基因研究模型
研究证明 AMD 的病理过程涉及氧化应激、免疫炎 症反应以及脂质和碳水化合物的代谢等。在分子遗传 学以及分子流行病学的基础上，目前已选出多个 AMD 相关候选基因，多种 AMD 相关候选基因修饰的 AMD 小鼠模型相继建立。
1.单核细胞趋化蛋白-1（Ccl-2）或其受体（Ccr-2）敲除小 鼠模型
尽管目前建立的 AMD 模型方法繁多，但由于AMD 涉及遗传及环境因素，还尚无一种模型可以完全再现 人 AMD 的发展过程，因而有必要进一步研究, 以寻 找更佳的AMD 模型。
五、与基因治疗相关的研究
基因治疗是一个很有前景的治疗方法，把目的基 因导入人的细胞去修正原有基因缺陷或者合成新的物 质达到治疗作用 。
过量的drusen将会损坏视网膜色素上皮细胞，被损坏 的视网膜色素上皮细胞及其引起的慢性炎症异常反应 会导致视网膜萎缩以及血管原性细胞因子(如VEGF等) 的表达，发展成湿性 AMD。
三、和AMD发病相关的基因
AMD 的发病机制较为复杂，目前尚不清楚其确切 的发病机制。目前提出的有遗传因素、光积聚损伤、 自由基损伤及脉络膜血液动力学改变等学说。
6 周龄的小鼠模型可观察到类玻璃膜疣的视网膜 改变，并随着年龄的增长变大融合，一些会形成疤痕 样萎缩灶；同时该模型还会出现 RPE 细胞异常和光 感受器细胞的萎缩。该模型小鼠优点是出现 AMD 病 理改变要早于其他 AMD 模型小鼠，然而此模型造模 技术要求高。
4.载脂蛋白 Bl00（ApoBl00）转基因小鼠模型
3.补体系统C1抑制因子(SERINGl)基因的单体型 CGTGCA是一种中国汉族人群湿性 AMD 的风险单体型， 另一种单体型CGTGCA是中国汉族人干性 AMD 的一个 风险单体型。
4.2005年三个独立的科研小组分别在science上发现 常染色1（1q31）上的补体系统H基因(CFH)上的一段 氨基酸序列中，Tyl402His的重复性与白色人种 AMD 的高发率有关。
2.趋化因子受体 1 抗体基因敲除（Cx3crl -/-）小鼠模型
12 月龄 Cx3crl -/-小鼠眼底可观察到光感受器 层明显变薄，黄色结节样类玻璃膜疣沉积物。 在视 网膜内，小胶质细胞（MCs）是 Cx3crl 的唯一寄存 细胞，该模型可用于 MCs 与 AMD 病理机制的相关性 研究。
3.单核细胞趋化蛋白-1（Ccl-2） ／ 趋化因子受体 Cx3crl 双基因敲除小鼠模型
5.CFH是主要补体系统的抑制剂，在黄斑部位合成并出现在 drusen中。补体系统F基因（CFH）的4个SNP位点rs3753394、 rs800292、rsl061170、rsl329428与中国汉族湿性AMD显著 相关，它们的单体型CATA是中国汉族人湿性AMD的保护因子
而补体因子B(CFB)及c2基因对增加 AMD 的发病风险也 有关，有数据显示因CFH、CFB及C2基因引起的 AMD 占全部 AMD 病例的75％。
ApoBl00 是肝脏合成和分泌甘油三酯的VLDL 所 必须的载脂蛋白，此基因的突变可引起多种脂蛋白的 代谢紊乱。12月龄的人ApoBl00 转基因小鼠体内观察 到了Bruch 膜明显增厚及基底膜沉积物，RPE 细胞的 空泡形成。
5.ApoE 基因缺失（ApoE-/-）小鼠模型
对 ApoE-/-小鼠进行高脂喂养 出现光感受器细 胞和 RPE 层细胞萎缩、排列紊乱，Bruch 膜厚薄不 均，胶原纤维分叉，分叉处可见玻璃膜疣。 其作为 AMD 动物模型的优点在于较符合 AMD 自然病程。缺 点是此动物模型的成模率不高。
二、分类
1.萎缩型——又称干性或非渗出性。主要为脉络膜毛 细血管萎缩，玻璃膜增厚和视网膜色素上皮萎缩引起 的黄斑区萎缩变性。病之早期即见中心视力下降或伴 视物变形。眼底可见较多玻璃膜疣，黄斑部结构不清， 色素紊乱或脱失。荧光素眼底血管造影为透见荧光， 系视网膜色素上皮萎缩所致。
黄斑区大量玻璃膜疣
巨噬细胞是清除补体及免疫复合物的主要细胞， 其功能的缺失有利于补体和免疫复合物的堆积，这可 能间接促进了 AMD 的形成。Ccl-2 对单核细胞具有 趋化活性，可激活单核细胞和巨噬细胞，并调控单核 细胞和巨噬细胞的黏附分子和细胞因子的表达。
在 Ccl-2 及 Ccr-2 敲除小鼠的体内均发现了类似人 类 AMD 的病理改变，包括 RPE 内脂褐素的沉积、玻 璃膜疣的产生和光感受器细胞的萎缩。此类小鼠的存 活率以及成模率不甚理想。
黄斑区玻璃膜疣
2.渗出型——又称湿性。视网膜下出现黄斑部反复渗 液、出血，最后机化而成为瘢痕，造成中心视力丧失。 荧光素眼底血管造影可见新生血管渗漏及出血而遮蔽 荧光。据临床观察萎缩型也可转变为渗出型。
黄斑区片状出血， 周围黄白色渗出
新生血管荧光渗漏
病理改变：AMD 以视网膜上出现玻璃膜疣(drusen)为 典型性特点，drusen是细胞代谢产物堆积在视网膜上 而形成的。早期干性 AMD 并无明显症状，随着病情 逐渐发展，drusen，数目增多、体积变大并引起视力 模糊、图像变形、盲区扩大，致使中心视觉丧失。
7.黄斑变性易感基因2(ARMS2／LOC387715)位于常染 色体10(10q26)，ARMS2负责编码位于视网膜线粒体中 的蛋白的表达，该基因上的氨基酸序列 Ala69Ser也 与 AMD 的发生发展有关。
8.研究发现一个参与人体免疫反应的关键分子 TLR3 的分子可被周围出现的病毒 RNA 激活，与 AMD 发生 有关。可以成为基因治疗的靶点。
年龄相关性黄斑变性的 基因研究治疗新进展
董洪涛 李秋明 郑州大学第一附属医院眼科
河南省眼科医院
一、定义
年 龄 相 关 性 黄 斑 变 性 ( a g e — r e l a t e d maculardegeneration，简称AMD或ARMD)，又称老年 性黄斑变性，是视网膜色素上皮细胞和神经视网膜退 行性病变造成的一种视力下降的疾病。该病与年龄增 大及视网膜色素上皮代谢功能衰退密切相关，目前普 遍认为是由环境因素作用于遗传易感个体而引起的疾 病。
CFH -/-小鼠也发生了类 AMD 的视网膜病理改变。 包括 ERG 显示 a、b 振幅均降低，视网膜自发荧光 的增强，视网膜下沉积物的增多，光感受 器 外 段 的紊乱。
9.脑啡肽酶（NEP）基因敲除小鼠模型
Aβ 沉积于 AMD 患者眼内， 并与玻璃膜疣的形 成相关，而 NEP 具有降解 Aβ 的作用。 NEP 基因 敲除小鼠体内可发现 Aβ 沉积和VEGF 高表达，同时 伴随色素上皮源性因子（PEDF）的低表达，符合氧化 应激反应的表现。此外有视网膜下沉积以及 RPE 细 胞的萎缩等类似早期 AMD 的病理改变。
6.超氧化物歧化酶（SOD）基因修饰小鼠模型
SOD 是一类超氧自由基的消除剂，SOD-1 则 是其一种亚型，SOD-1 基因的缺失会增强氧化应 激反应对视网膜的损伤。实验研究显示Sod-1 -/小鼠体内可发现类玻璃膜疣的视网膜沉积物，部 分小鼠可发生CNV。SOD基因修饰小鼠可用于氧化 应激反应与 AMD 致病机制的研究。
7.血浆铜蓝蛋白（CP）/亚铁氧化酶（HP）双基因敲除小鼠模型
铁与氧化应激反应相关联，CP 是一种铁氧化酶， 调节细胞中铁的输出。CP 和 HP 双基因敲除小鼠眼 底观察到了与 AMD 类似的病理表现，包括 RPE 的 肥大和色素减退，光感受器萎缩，视网膜下新生血 管。但该模型小鼠存活率低。
8.补体因子 H（CFH）基因敲除小鼠模型
源自文库
3.另有报道在实验性模型中用转导抗血管生成因 子的方法治疗，这为基因治疗提供了新的可能性 。
谢谢您的聆听！
1.以VEGFR1为靶点经化学修饰得到的siRNA可使 上调的VEGF mRNA沉默，阻断VEGF的过度表达，从而 抑制脉络膜新血管的形成，其作为治疗AMD药物正处 于研究中。
2.研究表明 VEGF 对视网膜下新生血管（SRN） 形成起着关键作用，VEGF可溶性受体基因转染可抑制 SRN。 已有报道构建的腺病毒可以表达表达人 VEGF 受体/FLT-1融合到人 IgG 的 Fc 部分（AdFLT-EXR） 的整个胞外域，腺病毒转染到小鼠模型中。荧光素血 管造影评估 SRN 的形成比对照大鼠中更显著地抑制7 天。