雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤对帕金森病小鼠运动行为及黑质自噬相关蛋白LC3的影响解析
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ａｖｅｒａｇｅ ７５３．２±１
１０６．７）ｃｍ掷（４６６９．３１９６９．１）ｃｍ．Ｐ＜０．０１）ａｎｄ
ｓｐｅｅｄ（（１９．２９±２．３５）ｃｍ／ｓ猫（１６．４７±３．０１）ｃｍ／ｓ，ｐ＜０．０５；（１８．７１±２．７１）ｃｍ／ｓ ｔ培（１５．８０±２．５０） ｃｍ／ｓ，Ｐ＜０．０１），ｗｈｉｌｅ ３－ＭＡ ａｇｇｒａｖａｔｅｄ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｄｅｆｔｃｉｔｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎ ｐｏｌｅ ｔｅｓｔ（１９．９２１ １．６１ ｓ傩１７．９３±１．１１ ｓ，Ｐ＜Ｏ．０５），ａｎｄｂｏｔｈｔｏｔａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙｄｉｓｔａｎｃｅ（（３８７９．７±５７５．０）ｃｍ街（４６６９．３±９６９．１）ｃｍ，Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ａｖｅｒ．
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‘９６１・
・基础研究・
雷帕霉素和３一甲基腺嘌呤对帕金森病小鼠 运动行为及黑质自噬相关蛋白ＬＣ３的影响
吴忧张荣博梁顺利 朱悦红徐彬 ３１０００５杭州。浙江中医药大学附属Fra Baidu bibliotek二医院神经内科 通信作者：徐彬，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｂｉｎ２００８．１０ｖｅ＠１６３．ｃｏｒｎ
ＭＰＴＰ注射的同时分别予雷帕霉素、３－ＭＡ腹腔注射。各组小鼠在最后１次ＭＰＴＰ或生理盐水注射后
１ ｄ、７ ｄ、１４
ｄ分别进行行为学测试，最后１次行为学测试后处死小鼠取中脑黑质脑组织，Ｗｅｓｔｅｒｎ
Ｂｌｏｔ
检测自噬相关蛋白ＬＣ３的表达。结果与ＭＰＴＰ模型组比较，雷帕霉素组小鼠的爬杆时间明显缩短 ［（１４．８９±１．１４）ｓ铘（１６．２４±１．３９）Ｓ，Ｐ＜０．０５；（１５．１８±１．３６）Ｓ伽（１７．９３±１．１１）Ｓ，Ｐ＜０．０１］，悬挂分值增加 ［（１．７±０．５）分嬲（１．２＋０．４）分，Ｐ＜０．０５；（１．５±０．５）分／）Ｓ（１．１±０．３）分，Ｐ＜Ｏ．０５］，旷场实验的总距离 ［（５８７５．３＋１１４８．９）ａｍ船（５０６１．５±７７３．１）ｃｍ，Ｐ＜０．０５；（５７５３．２±１１０６．７）ｃｍ掷（４６６９．３土９６９．１）ｃｍ，Ｐ＜
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．Ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－６５５４．２０１６．１
１．００１
【摘要】
目的探讨自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂３－甲基腺嘌呤（３－ＭＡ）对Ｃ５７ＢＬ／６帕金
森病（ＰＤ）模型小鼠运动行为及自噬相关蛋白ＬＣ３的影响。方法取４０只Ｃ５７ＢＬ／６雄性小鼠随机 分为实验组和正常对照组．实验组又分为ＭＰＴＰ模型组、雷帕霉素组、３－ＭＡ组。每组１０只。实验组采 用ＭＰＴＰ腹腔注射建立ＰＤ模型。正常对照组给予等量生理盐水腹腔注射。雷帕霉素组和３－ＭＡ组在
０．０１］及平均速度［（１９．２９±２．３５）ｃｎＶｓ Ｖ５（１６．４７±３．０１）ｃｍ／ｓ，Ｐ＜Ｏ．０５；（１８．７ｌ±２．７１）ｃｍ／ｓ堋（１５．８０＋ ２．５０）ｃｍ／ｓ，Ｐ＜Ｏ．０１］均增加，ＬＣ３．Ｕ蛋白表达增加，而３－ＭＡ组小鼠的爬杆时间延长［（１９．９２±１．６１）Ｓ 傩（１７．９３±１．１１）Ｓ，Ｐ＜０．０５］，旷场实验总距离［（３８７９．７±５７５．０）ｃｍ堋（４６６９．３士９６９．１）ａｍ），Ｐ＜０．０５］及
ｅｓ．
ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ ｗｈｉｃｈ
ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ ＭＰｌＰ
ｇｒｏｕｐ，ｗｉｔｈ １０ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ．Ｍｉｃｅ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｔａｂｌｉｓｈ ＰＤ
ｔｈｅ ｌｔｈ，７ｔｈ ａｎｄ １４ｔｈ ｄａｙ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｉｎｉｅｃｔｉｏｎ．
ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｉｄｂｒａｉｎ ｎｉｇｒａ ｗｅｒｅ ｇａｉｎｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ＬＣ３ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
・９６２。
主堡鱼塑匿堂皇堕型堂盘查！Ｑ！垒生！！旦筮堑鲞箜！！塑ｇ！垫』旦！！型丛鲤鱼曼趔！！尘：盟！！！坐堕！Ｑ！垒：！堂：堑：堕！：！！
１．３９）Ｓ，Ｐ＜０．０５；（１５．１８＋１．３６）８ ＶＳ（１７．９３±１．１１ｓ），Ｐ＜０．０１），ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ（（１．７±０．５）埘（１．２±０．４）．Ｐ＜ Ｏ．０５；（１．５±０．５）销（１．１＋０．３），Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ ｗｈｉｃｈ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｔｏｔａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｉｓｔａｎｃｅ（（５ ８７５．３ ±１１４８．９）ｃｍ傩（５０６１．５土７７３．１）ｃｍ，Ｐ＜０．０５；（５
平均速度［（１３．３４±１．８７）ｃｍ／ｓｆｆ￥（１５。８０±２．５０）ｃｍ／ｓ，Ｐ＜０．０５］减少，ＬＣ３．１Ｉ蛋白表达减少。结论自 噬诱导剂雷帕霉素可改善ＰＤ小鼠的行为学症状。增加黑质自噬相关蛋白ＬＣ３的表达。而自噬抑制剂 ３－ＭＡ则会加重ＰＤ小鼠的行为学障碍，减少黑质ＬＣ３的表达，调节自噬的药物可能是ＰＤ防治的新方 向。
ｏｎ ａｎ
ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｎｄｕｃｅｒ ａｎｄ ３． ＬＣ３ ｉｎ
ｍｏｔｏｒ
ｂｅｈａｖｉｏｒ ａｎｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｄｉｓｅａｓｅ（ＰＤ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ
４０ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍａｌｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ．ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ３－ＭＡ ｗｉｔｈ ＭＰＴＰ ｔｏ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ｍｏｄｅｌｓ．ａｎｄ
ｍｉｃｅ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｓａｌｉｎｅ ｗｉｔｈ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ａｎｄ ｍｉｃｅ ｉｎ ３．
ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｆｏｒ ｌ ｗｅｅｋ．Ｍｉｃｅ ｉｎ
组１０只。
ｙｃｉｎ，ｒｏＴＯＲ）信号通路诱导细胞产生自噬”剖。３一甲 基腺嘌呤（３－Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｉｎｅ，３－ＭＡ）则可特异地阻断 自噬泡与溶酶体的融合。是一种常见的自噬抑制 剂［５］。本实验通过腹腔注射１．甲基一４．苯基一１，２，３，
６．四氢吡啶（１．ｍｅｔｈｙｌ一４．ｐｈｅｎｙｌ．１，２，３，６－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ—
ａｇｅ ｓｐｅｅｄ（（１３．３４＋１．８７）ｃｍ／ｓ ＶＳ（１５．８０±２．５０）ｃｍ／ｓ．Ｐ＜０．０５）ｉｎ
ｄｕｃｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬＣ３．ＩＩ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
ｏｐｅｎ
ｆｉｅｌｄ
ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ
ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｌ＇ｅＳｕｌｔｓ
ｒｅ．
ｏｆ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈａｔ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｕｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬＣ３．ＩＩ．ｈｏｗｅｖｅｒ ３－ＭＡ ｃｏｕｌｄ Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
２．ＰＤ模型建立１６－７］：实验组小鼠给予ＭＰＴＰ腹 腔注射３０
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍｓ：Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｌａｎｎｉｎｇ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ
Ｐｒｏｊｅｃｔ
ｏｆ
Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｏｆ
Ｃｈｉｎａ（２０１４７１６３２）；
Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（Ｙ２０１４３１４５７）：Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉ．
ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｇｒｏｕｐ ｒｅｃｅｉｖｅｄ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
Ｏｉｌ
ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ
ｓａｌｎｅ
ＭＡ ｇｒｏｕｐ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｈａｖｉｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ
ｗｉｔｈ ３－ＭＡ ａｔ ｔｈｅ
ｔｉｍｅ ｗｈｅｎ ＭＰＴＰ ｗａｓ ｉｎｊｅｃｔｅｄ．Ａｎｉｍａｌ ｂｅ．
ｃａｎ
ｎｉｇｒａ．ｎＵＳ
ｉｔ
ｃａｎ
ｂｅ ｓｐｅｃ．
ｒｅｇｕｌａｔｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｍａｙ ｂｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ ＰＤ． ３－ＭＡ；Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ；ＬＣ３； Ａｕｔｏｐｈａｇｙ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｐｒｏｊｅｅｔ
Ｒａｐａｍｙｃｉｎ；
ｍｉｃｅ
Ｗｕ Ｙｏｕ，Ｚｈａｎｇ Ｒｏｎｇｂｏ，Ｌｉａｎｇ Ｓｈｕ，１２ｉ，Ｚｈｕ Ｙｕｅｈｏｎｇ，Ｘｕ Ｂｉｎ
Ｓｅｃｏｎｄ
ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ ３１０００５，Ｃｈｉｎａ（Ｗｕ ｙ，Ｚｈａｎｇ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ
ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ
ｔｈａｔ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｕｌｄ ａｌｌｅｖｉａｔｅ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ
ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ＰＤ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＬＣ３ ｉｎ ｍｉｄｂｒａｉｎ ｎｉｇｒａ．ｗｈｉｌｅ ３．ＭＡ ｃｏｕｌｄ ｅｘａｃｅｒｂａｔｅ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｉｎ ＰＤ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＬＣ３ ｉｎ ｍｉｄｂｒａｉｎ ｕｌａｔｅｄ ｔｈａｔ ｄｒａｇｓ ｗｈｉｃｈ
ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍ—
光照和１２ ｈ黑暗交替，动物可自由摄食饮水。上述 动物实验设施、饲料等均由浙江中医药大学动物实 验中心提供，实验动物使用许可证号：ＳＹＸＫ（浙）
２０１３—０１８４。
二、方法 １．动物分组：将小鼠随机分为实验组和正常对 照组，实验组又分为３组，分别为ＭＰＴＰ模型组（模 型组）、雷帕霉素组、３．ＭＡ组，每组１０只，正常对照
ｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｌａｎｎｉｎｇ
Ｐｒｏｊｅｃｔ
ｏｆ
Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｏｆ
Ｃｈｉｎａ（Ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ
Ｙｏｕｔｈ
Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）（２０１５ＺＱ０１７）
帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）是中老年人 最常见神经系统变性疾病之一。已严重威胁到人类 健康。路易氏小体（Ｌｅｗｙ ｂｏｄｉｅｓ）中异常聚集的仅一 突触核蛋白（０【一Ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ，０【一Ｓｙｎ）与ＰＤ的发生发展 密切相关。细胞自噬功能障碍被认为是导致ｄ．Ｓｙｎ 清除障碍、异常蛋白聚集以及寡聚体形成的重要因 素，因此具有调节细胞自噬功能的药物可能是ＰＤ 药物治疗的有效靶点［１’２］。雷帕霉素可通过抑制哺 乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍａｍｍａｌｉａｎ
ｐｒｏｖｅ
Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＭＰＴＰ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ．ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｕｌｄ ｉｍ． ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎ ｐｏｌｅ
ｔｌｌｅ ｇｅｎｅｒａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ
ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ
ｔｅｓｔ（（１４．８９±１．１４）Ｓ哪（１６．２４±
万方数据
【关键词】雷帕霉素；３－甲基腺嘌呤；帕金森病；ＬＣ３；
省中医药科技计划项目（青年人才基金项目）（２０１５ＺＱ０１７）
自噬
基金项目：浙江省医药卫生科技计划项目（２０１４７１６３２）；浙江省教育厅项目（Ｙ２０１４３１４５７）：浙江
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ａｎｄ
３－ＭＡ
ｏｎ
ｍｏｔｏｒ ｂｅｈａｖｉｏｒ ａｎｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＬＣ３ ｉｎ ＰＤ ｍｏｄｅｌ
ＲＢ，Ｌｉａｎｇ ＳＬ，Ｚｈｕ ＹＨ，Ｘｕ Ｂ）
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏ’：池成ｎ，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｂｉｎ２００８．１０ｖｅ＠１６３．ｃｏｒｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ ａｄｅｎｉｎｅ（３－ＭＡ）ｗｈｉｃｈ ｉｓ ａｎ
Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
１０６．７）ｃｍ掷（４６６９．３１９６９．１）ｃｍ．Ｐ＜０．０１）ａｎｄ
ｓｐｅｅｄ（（１９．２９±２．３５）ｃｍ／ｓ猫（１６．４７±３．０１）ｃｍ／ｓ，ｐ＜０．０５；（１８．７１±２．７１）ｃｍ／ｓ ｔ培（１５．８０±２．５０） ｃｍ／ｓ，Ｐ＜０．０１），ｗｈｉｌｅ ３－ＭＡ ａｇｇｒａｖａｔｅｄ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｄｅｆｔｃｉｔｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎ ｐｏｌｅ ｔｅｓｔ（１９．９２１ １．６１ ｓ傩１７．９３±１．１１ ｓ，Ｐ＜Ｏ．０５），ａｎｄｂｏｔｈｔｏｔａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙｄｉｓｔａｎｃｅ（（３８７９．７±５７５．０）ｃｍ街（４６６９．３±９６９．１）ｃｍ，Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ａｖｅｒ．
史堡堡塑匡堂皇堕叠堂盘查垫！！生！！旦箜箜鲞筮！！塑鱼垒也』垒！！型丛鲤鱼量翌也！亟：盟！！！坚坚！！垒！鱼：！堂：箜ｚ型！卫
‘９６１・
・基础研究・
雷帕霉素和３一甲基腺嘌呤对帕金森病小鼠 运动行为及黑质自噬相关蛋白ＬＣ３的影响
吴忧张荣博梁顺利 朱悦红徐彬 ３１０００５杭州。浙江中医药大学附属Fra Baidu bibliotek二医院神经内科 通信作者：徐彬，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｂｉｎ２００８．１０ｖｅ＠１６３．ｃｏｒｎ
ＭＰＴＰ注射的同时分别予雷帕霉素、３－ＭＡ腹腔注射。各组小鼠在最后１次ＭＰＴＰ或生理盐水注射后
１ ｄ、７ ｄ、１４
ｄ分别进行行为学测试，最后１次行为学测试后处死小鼠取中脑黑质脑组织，Ｗｅｓｔｅｒｎ
Ｂｌｏｔ
检测自噬相关蛋白ＬＣ３的表达。结果与ＭＰＴＰ模型组比较，雷帕霉素组小鼠的爬杆时间明显缩短 ［（１４．８９±１．１４）ｓ铘（１６．２４±１．３９）Ｓ，Ｐ＜０．０５；（１５．１８±１．３６）Ｓ伽（１７．９３±１．１１）Ｓ，Ｐ＜０．０１］，悬挂分值增加 ［（１．７±０．５）分嬲（１．２＋０．４）分，Ｐ＜０．０５；（１．５±０．５）分／）Ｓ（１．１±０．３）分，Ｐ＜Ｏ．０５］，旷场实验的总距离 ［（５８７５．３＋１１４８．９）ａｍ船（５０６１．５±７７３．１）ｃｍ，Ｐ＜０．０５；（５７５３．２±１１０６．７）ｃｍ掷（４６６９．３土９６９．１）ｃｍ，Ｐ＜
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．Ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－６５５４．２０１６．１
１．００１
【摘要】
目的探讨自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂３－甲基腺嘌呤（３－ＭＡ）对Ｃ５７ＢＬ／６帕金
森病（ＰＤ）模型小鼠运动行为及自噬相关蛋白ＬＣ３的影响。方法取４０只Ｃ５７ＢＬ／６雄性小鼠随机 分为实验组和正常对照组．实验组又分为ＭＰＴＰ模型组、雷帕霉素组、３－ＭＡ组。每组１０只。实验组采 用ＭＰＴＰ腹腔注射建立ＰＤ模型。正常对照组给予等量生理盐水腹腔注射。雷帕霉素组和３－ＭＡ组在
０．０１］及平均速度［（１９．２９±２．３５）ｃｎＶｓ Ｖ５（１６．４７±３．０１）ｃｍ／ｓ，Ｐ＜Ｏ．０５；（１８．７ｌ±２．７１）ｃｍ／ｓ堋（１５．８０＋ ２．５０）ｃｍ／ｓ，Ｐ＜Ｏ．０１］均增加，ＬＣ３．Ｕ蛋白表达增加，而３－ＭＡ组小鼠的爬杆时间延长［（１９．９２±１．６１）Ｓ 傩（１７．９３±１．１１）Ｓ，Ｐ＜０．０５］，旷场实验总距离［（３８７９．７±５７５．０）ｃｍ堋（４６６９．３士９６９．１）ａｍ），Ｐ＜０．０５］及
ｅｓ．
ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ ｗｈｉｃｈ
ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ ＭＰｌＰ
ｇｒｏｕｐ，ｗｉｔｈ １０ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ．Ｍｉｃｅ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｔａｂｌｉｓｈ ＰＤ
ｔｈｅ ｌｔｈ，７ｔｈ ａｎｄ １４ｔｈ ｄａｙ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｉｎｉｅｃｔｉｏｎ．
ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｉｄｂｒａｉｎ ｎｉｇｒａ ｗｅｒｅ ｇａｉｎｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ＬＣ３ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
・９６２。
主堡鱼塑匿堂皇堕型堂盘查！Ｑ！垒生！！旦筮堑鲞箜！！塑ｇ！垫』旦！！型丛鲤鱼曼趔！！尘：盟！！！坐堕！Ｑ！垒：！堂：堑：堕！：！！
１．３９）Ｓ，Ｐ＜０．０５；（１５．１８＋１．３６）８ ＶＳ（１７．９３±１．１１ｓ），Ｐ＜０．０１），ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ（（１．７±０．５）埘（１．２±０．４）．Ｐ＜ Ｏ．０５；（１．５±０．５）销（１．１＋０．３），Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ ｗｈｉｃｈ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｔｏｔａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｉｓｔａｎｃｅ（（５ ８７５．３ ±１１４８．９）ｃｍ傩（５０６１．５土７７３．１）ｃｍ，Ｐ＜０．０５；（５
平均速度［（１３．３４±１．８７）ｃｍ／ｓｆｆ￥（１５。８０±２．５０）ｃｍ／ｓ，Ｐ＜０．０５］减少，ＬＣ３．１Ｉ蛋白表达减少。结论自 噬诱导剂雷帕霉素可改善ＰＤ小鼠的行为学症状。增加黑质自噬相关蛋白ＬＣ３的表达。而自噬抑制剂 ３－ＭＡ则会加重ＰＤ小鼠的行为学障碍，减少黑质ＬＣ３的表达，调节自噬的药物可能是ＰＤ防治的新方 向。
ｏｎ ａｎ
ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｎｄｕｃｅｒ ａｎｄ ３． ＬＣ３ ｉｎ
ｍｏｔｏｒ
ｂｅｈａｖｉｏｒ ａｎｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｄｉｓｅａｓｅ（ＰＤ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ
４０ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍａｌｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ．ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ３－ＭＡ ｗｉｔｈ ＭＰＴＰ ｔｏ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ｍｏｄｅｌｓ．ａｎｄ
ｍｉｃｅ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
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ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｆｏｒ ｌ ｗｅｅｋ．Ｍｉｃｅ ｉｎ
组１０只。
ｙｃｉｎ，ｒｏＴＯＲ）信号通路诱导细胞产生自噬”剖。３一甲 基腺嘌呤（３－Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｉｎｅ，３－ＭＡ）则可特异地阻断 自噬泡与溶酶体的融合。是一种常见的自噬抑制 剂［５］。本实验通过腹腔注射１．甲基一４．苯基一１，２，３，
６．四氢吡啶（１．ｍｅｔｈｙｌ一４．ｐｈｅｎｙｌ．１，２，３，６－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ—
ａｇｅ ｓｐｅｅｄ（（１３．３４＋１．８７）ｃｍ／ｓ ＶＳ（１５．８０±２．５０）ｃｍ／ｓ．Ｐ＜０．０５）ｉｎ
ｄｕｃｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬＣ３．ＩＩ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
ｏｐｅｎ
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ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ
ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｌ＇ｅＳｕｌｔｓ
ｒｅ．
ｏｆ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈａｔ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｕｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬＣ３．ＩＩ．ｈｏｗｅｖｅｒ ３－ＭＡ ｃｏｕｌｄ Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
２．ＰＤ模型建立１６－７］：实验组小鼠给予ＭＰＴＰ腹 腔注射３０
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍｓ：Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｌａｎｎｉｎｇ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ
Ｐｒｏｊｅｃｔ
ｏｆ
Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｏｆ
Ｃｈｉｎａ（２０１４７１６３２）；
Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（Ｙ２０１４３１４５７）：Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉ．
ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｇｒｏｕｐ ｒｅｃｅｉｖｅｄ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
Ｏｉｌ
ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ
ｓａｌｎｅ
ＭＡ ｇｒｏｕｐ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｈａｖｉｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ
ｗｉｔｈ ３－ＭＡ ａｔ ｔｈｅ
ｔｉｍｅ ｗｈｅｎ ＭＰＴＰ ｗａｓ ｉｎｊｅｃｔｅｄ．Ａｎｉｍａｌ ｂｅ．
ｃａｎ
ｎｉｇｒａ．ｎＵＳ
ｉｔ
ｃａｎ
ｂｅ ｓｐｅｃ．
ｒｅｇｕｌａｔｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｍａｙ ｂｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ ＰＤ． ３－ＭＡ；Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ；ＬＣ３； Ａｕｔｏｐｈａｇｙ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｐｒｏｊｅｅｔ
Ｒａｐａｍｙｃｉｎ；
ｍｉｃｅ
Ｗｕ Ｙｏｕ，Ｚｈａｎｇ Ｒｏｎｇｂｏ，Ｌｉａｎｇ Ｓｈｕ，１２ｉ，Ｚｈｕ Ｙｕｅｈｏｎｇ，Ｘｕ Ｂｉｎ
Ｓｅｃｏｎｄ
ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ ３１０００５，Ｃｈｉｎａ（Ｗｕ ｙ，Ｚｈａｎｇ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ
ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ
ｔｈａｔ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｕｌｄ ａｌｌｅｖｉａｔｅ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ
ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ＰＤ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＬＣ３ ｉｎ ｍｉｄｂｒａｉｎ ｎｉｇｒａ．ｗｈｉｌｅ ３．ＭＡ ｃｏｕｌｄ ｅｘａｃｅｒｂａｔｅ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｉｎ ＰＤ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＬＣ３ ｉｎ ｍｉｄｂｒａｉｎ ｕｌａｔｅｄ ｔｈａｔ ｄｒａｇｓ ｗｈｉｃｈ
ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍ—
光照和１２ ｈ黑暗交替，动物可自由摄食饮水。上述 动物实验设施、饲料等均由浙江中医药大学动物实 验中心提供，实验动物使用许可证号：ＳＹＸＫ（浙）
２０１３—０１８４。
二、方法 １．动物分组：将小鼠随机分为实验组和正常对 照组，实验组又分为３组，分别为ＭＰＴＰ模型组（模 型组）、雷帕霉素组、３．ＭＡ组，每组１０只，正常对照
ｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｌａｎｎｉｎｇ
Ｐｒｏｊｅｃｔ
ｏｆ
Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｏｆ
Ｃｈｉｎａ（Ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ
Ｙｏｕｔｈ
Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）（２０１５ＺＱ０１７）
帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）是中老年人 最常见神经系统变性疾病之一。已严重威胁到人类 健康。路易氏小体（Ｌｅｗｙ ｂｏｄｉｅｓ）中异常聚集的仅一 突触核蛋白（０【一Ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ，０【一Ｓｙｎ）与ＰＤ的发生发展 密切相关。细胞自噬功能障碍被认为是导致ｄ．Ｓｙｎ 清除障碍、异常蛋白聚集以及寡聚体形成的重要因 素，因此具有调节细胞自噬功能的药物可能是ＰＤ 药物治疗的有效靶点［１’２］。雷帕霉素可通过抑制哺 乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍａｍｍａｌｉａｎ
ｐｒｏｖｅ
Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＭＰＴＰ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ．ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｕｌｄ ｉｍ． ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎ ｐｏｌｅ
ｔｌｌｅ ｇｅｎｅｒａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ
ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ
ｔｅｓｔ（（１４．８９±１．１４）Ｓ哪（１６．２４±
万方数据
【关键词】雷帕霉素；３－甲基腺嘌呤；帕金森病；ＬＣ３；
省中医药科技计划项目（青年人才基金项目）（２０１５ＺＱ０１７）
自噬
基金项目：浙江省医药卫生科技计划项目（２０１４７１６３２）；浙江省教育厅项目（Ｙ２０１４３１４５７）：浙江
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ａｎｄ
３－ＭＡ
ｏｎ
ｍｏｔｏｒ ｂｅｈａｖｉｏｒ ａｎｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＬＣ３ ｉｎ ＰＤ ｍｏｄｅｌ
ＲＢ，Ｌｉａｎｇ ＳＬ，Ｚｈｕ ＹＨ，Ｘｕ Ｂ）
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏ’：池成ｎ，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｂｉｎ２００８．１０ｖｅ＠１６３．ｃｏｒｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ ａｄｅｎｉｎｅ（３－ＭＡ）ｗｈｉｃｈ ｉｓ ａｎ
Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ