农残检测常用方法技术要点 PPT课件

QuEChERS Method（美国农业部农业 研究服务中心）修订方法
二、速测方法
1．快速检测程序
试样检测
阳性 复测（两次以上）
阴性
阳性
准确定量 根据市场 定性分析 规定处理
阴性
二、速测方法
GB/T 5009.199-2003
NY/T 448-2001
适用 范围
蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、 Байду номын сангаас菇和番茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假 阳性；叶绿素高的也会干扰，这两类可整株取样）
③ 快速检测方法是经过农业部会同有关部门认定发布的，经法律认可的方 法，具有权威性和统一性（不过可靠性谈不上）。【法律依据】
④ 快速检测方法所需设备简单，易掌握，平时运营成本相对较低，选用该 法主要是从我国从业人员素质、经济状况的国情出发来考虑的（不可能要 求大家都去买质谱、色谱等设备）。【方法经济性、操控性】
➢ 检测步骤：
25 g样品 ，加入50 mL乙腈高速匀浆2 min
过滤到添加5~7 g氯化钠的100 mL具塞量筒
剧烈震荡1 min后静置30 min（实践中10min即可）
分取10mL有机相，旋蒸近干，洗耳球吹干或80 ℃水浴氮气挥干
加入2 mL丙酮 丙酮定容至5.0 mL GC检测（ FPD）
加入2 mL正己烷
二、速测方法
5．农残速测与色谱、质谱等方法的结果比较
时间：从2005年至2007年。 项目：农业部开展的省份间农产品质量安全例行监测互查。 要求：承担任务的37个部级中心分别用农残速测进行初步筛查，并把所有样 品用NY/T 761等方法进行色谱、质谱定量检测。
目的：想验证速测与色谱检测的相关性，如果有相关性，就可以先用速测初 步筛查，然后把阳性（超标的）样品再用色谱等方法准确定量，那样可以大大 减少工作量。
加入2 mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)
弗罗里矽柱
依次5mL丙酮+ 正己烷(10+90), 5mL正己烷预淋
5 mL丙酮＋正己烷(10＋ 90)淋洗，重复一次
4 mL甲醇 ＋二氯甲烷 (1+99)预淋
氨基柱
2 mL甲醇＋二氯甲烷 (1+99)淋洗，重复一次
50 ℃水浴氮吹近干
50 ℃ 水浴氮吹近干
正己烷定容5.0 mL GC检测（ECD）
应以空白对照测试3min吸光度变化值＞0.3方可进行 1、样品检测放置时间与空白的时间应该一致。
备注 下一步操作。
2、丁酰胆碱酯酶对乐果、甲基对硫磷、毒死蜱、二
2、3min吸光度变化值＜0.3原因：①酶的活性不够；嗪磷等农药不太灵敏，检出浓度均在10mg/kg以上。
二、速测方法
2．结果计算
抑制率（%）= Ac As 100 Ac
有机磷、有机氯、拟除虫菊酯、氨基甲酸酯类和 苯并咪唑类农药等800多种。 ➢使用仪器：
GC、LC、GC-MS/MS和LC-MS/MS。
方法2：NY/T 761、GB/T 19648和GB/T 20769等综合法
➢ 检测步骤：
25 g样品 ，加入50 mL乙腈高速匀浆2 min
过滤到添加5~7 g氯化钠的100 mL具塞量筒中
3min吸光度变化值。
抑制率≥50%：阳性
抑制率≥70%：阳性
结果 （阳性样品需要重复检测2次以上，若不合格, 用色 （阳性样品应有2次以上的重复检测，若不合格, 用
谱、质谱等进一步定性定量分析）
色谱、质谱等进一步定性定量分析）
1、当温度低于37℃时，酶反应速度放慢，加入酶液
和显色剂后反应时间应该延长，延长时间的确定，
1-2min，倒出并静置3-5分钟； 于小试管内分别加入2.5mL样本提取液、100uL酶
液、100uL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上， 加 入 100uL 底 物 ， 应 立 即 倒 入 仪 器 比 色 皿 中 ， 记 录
取2g切碎的样本（非叶菜类取4g）放入提取瓶 内，加入20mL缓冲液，振荡1-2min，倒出并静置3-5 分钟；于小试管内分别加入50uL酶液、3mL样本提 取液、50uL显色剂，于37-38℃下放置30min后分别 加入50uL底物，倒入比色皿中，用仪器测定。
抑制率：酶被抑制的程度
△Ac —对照组3min 后与3min 前吸光值之差;
△As —样本3min 后与3min 前吸光值之差。
二、速测方法
3．注意事项
➢2011年首届全省农产品质量安全检测技术人员大比武现场操作评分细 则（农残速测类） (2011年)中对取样部位、处理方法等内容进行详细 的分项打分，这些打分项都是平时检测中需要注意的地方。
适用叶菜(除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜( 除萝卜、茭白等)
方法
速测卡法(纸片法)和酶抑制率法(分光光度法)
酶抑制率法(分光光度法)
波长
412nm
410±3nm
酶
乙酰胆碱酯酶（用pH8磷酸缓冲液溶解） （3min吸光度变化值＞0.3，4℃冰箱保存不超过4天）
丁酰胆碱酯酶（用pH8磷酸缓冲液溶解） 3min吸光度变化值0.4—0.8之间
结论：速测结果和色谱等定量检测结果几乎没有任何相关性。说白了就是速 测超标的，色谱检测不出来，速测不超标的，色谱可能会超标。因为没有什么 相关性，农业部在省部级检测中心这个层级最终导致放弃速测方法。
★★所以，速测仅仅是法律认可的一项工作，不要较真，如被检方有异议，更 不能拿速测阳性结果进行处罚和仲裁。
方法1：NY/T 761-2008
➢ 方法名称及来源： 《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和
氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》NY/T 761-2008。 ➢ 农药种类和个数：
有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农 药等共104种。 ➢ 使用仪器：GC、LC。
方法1：NY/T 761-2008
✓ 农残检测方法标准全部统一为食品安全国家标准。
一、当前常用检测方法
1.速测方法
GB/T 5009.199-2003《蔬 菜中有机磷和氨基甲酸酯 类农药残留量的快速检测 》
NY/T 448-2001《 蔬 菜 上有机磷和氨基甲酸酯 类农药残毒快速检测方 法》
一、当前常用检测方法
2.准确定性定 量检测法
前言
✓ 根据2009年6月1日实施的《中华人民共和国食品安 全法》第二十一条和第二十二条的规定，今后凡涉 及食品安全的标准（八个方面），统一由国务院卫 生行政部门部制定和颁布，国务院标准化行政部门 提供国家标准编号 。
✓ 对现行的食用农产品质量安全标准、食品卫生标准、 食品质量标准和有关食品的行业标准中强制执行的 标准予以整合，统一公布为食品安全国家标准。
➢适用范围：蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番 茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假阳性；叶绿素高的也会干扰 ，这两类可整株取样） ；农药：有机磷和氨基甲酸酯类。
➢所有操作步骤顺序、加液量、处理时间一定要严格按标准执行。 ➢建议使用同一批比色皿，不同批次的比色皿对结果可能存在影响。一 批上机样品同时检测，共用一个对照。
底物
硫代乙酰胆碱 （蒸馏水溶解，4℃冰箱保存不超过2周）
碘化硫代丁酰胆碱（BTCI） （用pH8磷酸缓冲液溶解）
显色
二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氢钠
二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）
剂
缓冲液溶液，4℃冰箱保存
缓冲液溶解
取表面干净的蔬菜或瓜果，叶菜类取叶片部分，
步骤
瓜果取表皮带肉，剪成1cm左右见方碎片。 取样1g置于小烧杯内，加入5mL缓冲溶液，振荡
无机盐 NaCl
加入量（g）
乙腈中的水分 乙腈中的水分 （加入前，%） （加入后，%）
2g / 27mL
27
6.0
Na2SO4 0.8g / 4mL
6
3.9
MgSO4 0.8g / 4mL
6
0.6
三、准确定性定量检测法
5．净化剂的选择：
PSA提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基质干扰；主要 用来消除各种有机酸、色素以及一些糖和脂肪酸。为了减少仪 器的维护，往往在PSA的基础上加C18净化。
3．盐析：
盐析剂种类：氯化钠、醋酸钠和硫酸铵等； 盐析剂能与水结合使游离水分子减少，减少了农药
在水相中的溶解度； 盐析剂能减少有机溶剂在水中的溶解度； 盐析剂能使水相的比重增大，有助于分离。
三、准确定性定量检测法
4．脱水剂的选择： 无水硫酸镁吸水能力比无水硫酸钠高3倍。 无水硫酸镁吸水的同时也放热，促进农药的萃取。
PSA可去除90％以上的脂肪酸和50％左右的色素。
GCB可去除90％以上的色素，但对脂肪酸的净化能力仅有10％ 左右。对于一些含色素高的样品，将两者联合使用。但用量要 适当，否则会吸附一些平面结构的农药，影响回收率，如六氯 苯、百菌清等。
净化剂 PSA C18 GCB
去杂种类 糖、有机酸、色素等 油脂、非极性干扰物等 色素、甾醇、非极性干扰物等
剧烈震荡1 min后静置30 min（实践中10min即可）
分取10mL有机相，旋蒸或50 ℃水浴氮气至近干，加入2 mL乙腈＋甲苯(3+1)
5mL乙腈+甲苯预淋 石墨化炭黑氨基柱（色素少，可用氨基柱代替）
洗脱液用量 约为25mL
用2 mL乙腈＋甲苯(3+1)涮洗浓缩瓶并倒入SPE小柱，重复2次 所有洗脱液氮吹仪吹干；或旋蒸近干，洗耳球吹干 丙酮定容5.0 mL
三、准确定性定量检测法
2．提取条件的优化：
QuEChERS方法选择单一乙腈为提取溶剂。 含水量低或含糖量高的样品应加入一定量的水后再 进行提取，以提高提取效率。 乙腈对N-三卤甲硫基杀菌剂类农药，具有降解作用， 如克菌丹、抑菌灵等；通过加入1%的醋酸，调节pH值， 能够抑制上述农药的分解。