第四章抗微生物药物和敏感性试验1

20
③多种微生物感染； ④多部位感染； ⑤感染流行的控制； ⑤对A组抗生素过敏、耐受或无反应。
C组药物用于对A组药物耐药的流行菌株或对A组药
物过敏的病人和某些不常见的细菌（如肠外分
离的沙门菌属或耐万古霉素肠球菌）。 U组仅用于尿道中分离的细菌，不作为尿道外分离 菌的常规药敏试验。
21
(一）非苛养菌药敏试验抗生素的选用
第四章 抗微生物药物敏感实验
1
第一节 临床常用抗菌药物
一、抗细菌药物 二、抗厌氧菌药物
2
抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的抗生 素和化学合成药物。前者是真菌、放线菌、
细菌等的代谢产物，后者是经化学改造的
半合成抗生素和化学合成药物。
3
（一）β -内酰胺类
1. 青霉素类 2. 头孢菌素类 3. 单环类 4.头霉素类 5. 碳青霉烯类 6.β -内酰胺类/β -内酰胺酶抑制剂
• 提供所选用药物的依据； • 监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病 18 流行病学，控制和预防耐药菌感染的 发生和流行。
第三节 抗菌药物的敏感性试验
19
一、抗菌药物的选择
在标准中分成A、B、C 、 U四组, A组所列的抗生素为常规首选药敏试验药物, B组为临床使用主要抗生素,尤其在医院感染时 使用的抗生素，可在下列情况下使用： ①对A组同类抗生素耐药； ②标本来源不同时，如三代头孢菌素使用于脑脊液中的 肠杆菌，磺胺甲恶唑使用于尿道分离的细菌；
34
5.根据选择的菌株挑选 相应的抗菌纸片。
肠杆菌科：氨苄西林、阿米卡星、哌拉西林/ 他唑巴 坦、头孢噻肟、环丙沙星、亚胺培 南、氨曲南、庆大霉素； 铜绿假单胞菌：头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林、 阿米卡星、环丙沙星、头孢吡肟、亚胺 培南； 葡萄球菌属：头孢西丁、青霉素、红霉素、万古霉 素、环丙沙星、庆大霉素、利福平 ；
35
肠球菌属：青霉素 、万古霉素 、甲氧苄啶/磺胺异 噁唑 、庆大霉素、环丙沙星、红霉素、氨 苄西林 不动杆菌属：头孢他啶 、亚胺培南、阿米卡星、哌拉
西林/他唑巴坦、头孢吡肟 、头孢曲松 、
环丙沙星、米诺环素； 洋葱伯克霍德菌：头孢他啶 、米诺环素、甲氧苄啶/ 磺胺异噁唑 、美罗培南 ；
36
嗜麦芽窄食单胞菌：甲氧苄啶/磺胺异噁唑、左氧氟沙 星、米诺环素 ； 嗜血杆菌属：氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、头孢 他啶、美罗培南、阿奇霉素、环丙沙星、头孢克洛； 淋病奈瑟菌：头孢曲松、环丙沙星、青霉素、大观霉素、
13
（四）方法
（1）手工试验 1.纸片扩散法（S，I，R） 2.稀释法（MIC） 3.E test（MIC） Vitek，Microscan， Phoenix PCR直接检测mecA基因 Nitrocefin、ESBL检测
14
（2）自动仪器
（3）分子试验 （4）酶试验
（五）结果的解释和报告
• R、I、S、MIC
四环素 ；
肺炎链球菌：红霉素 、苯唑西林 、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、 克林霉素、左氧氟沙星、四环素、万古霉素 ； 除肺炎链球菌外的其他链球菌：红霉素、青霉素、克林霉素、 万古霉素、头孢曲松、左氧氟沙星。
37
6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌 纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一 旦纸片贴上，不能移动；各抗菌 纸片中 心距离应大于24mm，纸 片距平板内缘应大于15mm。
4
（二）糖肽类 （三）氯霉素 （四）氨基糖苷类 （五）大环内酯类 （六）四环素类 （七）氟喹诺酮类 （八）磺胺类
5
（九）利福霉素类 （十）林可酰胺类 （十一）恶唑烷酮类 （十二）链阳菌素类 （十三）抗分枝杆菌药物
6
二、抗厌氧菌药物
• • • • 硝基咪唑类 甲硝唑 （Metronidazole） 替硝唑 （Tinidazole） 奥硝唑 （ornidazole）
A组一级试验并常规报告的抗微生物药 ,如葡萄球 菌属用苯唑西林和青霉素。 B组一级试验有选择报告的抗微生物药,如肠球菌 属用万古霉素 。 C组补充试验有选择报告的抗微生物药，如葡萄球 菌属用氯霉素 。 U组仅用于泌尿道的补充实验的抗微生物药，如葡 萄球菌属用洛美沙星和诺氟沙星。
22
(二）苛养菌药敏试验抗生素的选用
25
26
27
(二)培养基和抗菌药物纸片
【抗菌药物纸片】
直径为6.35mm，吸水量为20μ l的专用药 敏纸片. 含药纸片密封贮存2℃～8℃且不超过1周。
【培养基】
水解酪蛋白（MH）培养基，pH为 7.2~7.4，琼脂厚度为4mm,4℃保存。
28
（三）实验方法
29
1.将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾 注直径为90mm的平板，其厚度 4mm。
16
小结
药敏试验
ASTART，用体外试验预测体内结果 未经解释、就事论事的报告经过解释、全面的报告 表型的检测耐药机制的检测、耐药流行病学分析 临床用药
Medical choice Bacteriological choice
17
二、AST的意义***
• 可预测抗菌药物治疗的效果，即AST实验“敏感”时， 治疗可能有效；实验结果为耐药时，使用该药物治疗 肯定失败； • 指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给 予病人经验性治疗24～48h之后，若AST结果为“敏 感”，该治疗有效，若结果为“耐药”，即应更换药 物；
A组一级试验并常规报告的抗微生物药,如肺 炎链球菌用红霉素和青霉素。
B组一级试验有选择报告的抗微生物药,如肺 炎链球菌用头孢噻肟或头孢曲松。
C组补充试验有选择报告的抗微生物药，如 肺炎链球菌用头孢呋辛 。
23
二、纸片扩散法***
（Kirby-Bauer法） ***
24
（一）实验原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌 的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中 水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯 度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的 生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为 抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏 感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
• 时间依赖性：β-内酰胺类，缩短投药间隔
• 浓度依赖性：氨基糖苷类，日剂量1次应用
15
三要素 相关性 预测性
药物、机体、病原菌 体外和体内，抑菌和杀菌，单独和联合 耐药表型(个体)→耐药机制→耐药表型(同类) (预测药物) (同类药物)
重点监测的耐药菌株：MRS, PRP, VRE, ESBL 发出有选择、有解释的报告，与医师直接对话
7
第二节 体外抗菌药物敏感试验
8
一、抗菌药物敏感性试验 （antimicrobial susceptibility test,AST）
（一）定义：AST 是一个检测细菌耐药性的 体外抑菌试验（ART）
AST
（二）
目的 检出细菌对抗生素的耐药性， 预测临床治疗结果 预测 不是指体外测得的数据， 强调对数据的解释 临床 不是指体外AST的结果， 强调病人用药后的疗效 治疗结果 用成功或失败衡量， 强调实验室与临床的统一
10
AST
实验室
S R
临床
成功 失败
评价
正确的预测 正确的预测 错误的预测
11
S（FS？） 失败
AST
体外R≈体内R，对R的结果可以相信
体外S≠体内S，对S的结果应持怀疑态度
12
（三）重要性
如果没有细菌耐药性检测
• • • • • • 治疗过度：用药不当，过度使用高档抗生素 治疗错误：用药错误，危重患者丧失抢救时机 增加不必要的副作用 增加不必要的费用 增加细菌的耐药性 降低医疗服务的质量
中介(intermediate,I)。
40
41
42
38
7.经过35℃16～24h孵育。
39
（四）结果判断和报告
用精确度为1mm的游标卡尺 量取抑菌圈直径。 根据NCCLS （clinical and laboratory standards institute ）标准，报告细菌 对该抗生素 敏感(susceptible,S)、
耐药(resistant,R)、
30
2.无菌挑取孵育16～24h的血 平板上4~5个菌落。
31
3.置于无菌生理盐水中，校正其 浊度于0.5 McFarland氏比浊管浓 度，细菌数量约为1.5×108 cfu/ml
32
4.用无菌棉签浸入 细菌悬液中，将拭 子在试管上壁轻轻 挤压以挤去过多的 菌液。
33
பைடு நூலகம்
4.棉签在三个方向均匀抹 琼脂表面（每次转60℃） 使菌液均匀分布，最后沿 平板内缘涂抹一周。