细菌总数的检验方法
食品中细菌总数的测定
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度 最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀 释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其 中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告
之。 检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释
若大于2则报告其中较小的数字。
度的各平板平均菌落总数。 平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
（2）菌落计数的报告 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿 15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培 养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空 白对照。
细菌和霉菌总数的检验
3.2仪器
3.2.1250ml锥形瓶。
3.2.2电子天平、量筒。
3.2.3压力蒸汽灭菌锅。
3.2.4移液管。
3.2.5灭菌培养皿：直径9cm。
3.2.6酒精灯。
3.2.7恒温培养箱。
3.2.8放大镜。
3.3培养基和试剂的制备
3.3.1生理盐水：氯化钠8.5g
细菌计数结果及报告方法：
例次
不同稀释度的平均菌落数10-110-210-3
两稀释度菌数之比
菌落总数
个/g或个/ml
报告方式
个/g或个/ml
1
1365 16பைடு நூலகம் 20
－
16400
16000或1.6×104
2
2760 296 46
1.6
38000
38000或3.8×104
3
2890 271 60
2.2
27100
60÷2×63.6×1000＝1.9×106
63.6是按皿底直径为9cm时计算而得的面积，如所用培养皿底直径不是9cm，应另求面积。
4）鉴于检样中的细菌是以单个、成双、链状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落可
以来源于细胞块，也可来源于单个细胞，故平板上所得需氧和兼性厌氧的菌落数应以单位重量（g）或容量（ml）的菌落形成单位（Colony Formingunits CFU）报告更恰当。
2）如果平板上出现链状菌落，菌落之间没有明显的界限，这是在琼脂与检样混合时，一个细胞
块被分散所造成。一条链作为一个菌落计，如有来源不同的几条链，每条链应作为一个菌落计，不要把链上生长的各个菌落分开来数。此外，如培养皿内琼脂凝固后未及时进行培养而遭受昆虫侵入，在昆虫爬过的地方也会出现链状菌落，也不应分开来数。
实验十二-水中细菌总数和大肠杆菌检测
30
2
1
150
2
2
200
2
3
240
3
0
160
3
1
20032Fra bibliotek240
95%可信限
上限
90
130
200 210
230 360
360
2
0
0
90
10
360
2
0
1
140
30
370
2
0
2
200
2
0
3
260
2
1
0
150
30
440
2
1
1
200
70
890
2
1
2
270
2
1
3
340
2
2
0
210
40
470
2
2
1
280
100
4400
3
2
2
2100
350
4700
3
2
3
2900
3
3
0
2400
360
13000
3
3
1
4600
710
24000
3
3
2
11000
1500
48000
3
3
3
≥24000
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色
产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试 管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生， 需进一步试验。
稀释度选择及细菌总数报告方法
平均 菌落
ISO4833-2003菌落总数的检测方法
ISO与美国FDA的不同处食品微生物检验方法（FDA与ISO对比）内容提要：l 菌落总数检测l 大肠菌群及大肠杆菌检测l 金黄色葡萄球菌检测l 沙门氏菌检测l 单核细胞增生李斯特氏菌检测菌落总数测定——菌落总数的概念l 菌落总数是指在被检样品的单位重量（g）、容积（ml）或表面积（cm2）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。
菌落总数测定——卫生学意义l 判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。
l 及时反映食品加工过程是否符合卫生要求，为被检食品卫生学评价提供依据。
l 通常认为，食品中细菌数量越多，则可考虑致病菌污染的可能性越大，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
FDA BAM 菌落总数测定流程检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）适当十倍稀释样品选择2~3个连续适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌平皿内（每个稀释度做两个平行）每皿内加入适量平板计数琼脂（PCA）35 ℃ 48 ± 2h菌落计数FDA BAM 菌落计数方法l 选择25~250CFU之间的菌落进行计数，计算公式如下：N=∑C/（1*n1+0.1*n2）*dl 所有平板的菌落数都不足25CFU，报告EAPC/ml（g）为＜25*1/d。
EAPC：estimated aerobic plate countl 所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2 ，报告EAPC/ml（g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度。
l 所有平板的菌落数都超过100/cm2 ，计算平板的面积（直径为90mm的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml（g）为＞65*100* 1/d。
l 无法计数的平板报告LA（Laboratory Accident）。
l 最终结果保留前两位有效数字。
按照4舍6入，5是奇进偶不进。
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定公共场所的空气质量对人们的健康和舒适度有着重要影响。
其中，微生物的存在是一个重要的指标，尤其是细菌的总数测定。
本文将介绍公共场所空气微生物检验的方法，重点关注细菌总数的测定。
公共场所的空气中存在大量的微生物，包括细菌、真菌和病毒等。
这些微生物可以通过空气传播，并对人们的健康造成潜在威胁。
因此，对公共场所的空气质量进行监测和检验是非常重要的。
细菌是一类常见的微生物，广泛存在于自然界和人类生活环境中。
测定公共场所空气中细菌总数的方法有多种，下面将介绍其中两种常用的方法。
一种常用的方法是采用空气采样器进行采样，然后将采样得到的样品进行培养和计数。
空气采样器可以根据不同的需求选择不同的类型，如空气质量检测仪、空气质量监测仪等。
采样时应注意避免污染和交叉污染，选择合适的采样时间和采样位置。
采样得到的样品需要进行培养和计数。
培养方法可以选择常规的液体培养基或固体培养基，也可以选择特定的培养基，如选择含有某种抗生素的培养基来筛选特定的细菌。
培养时间和培养温度也是影响结果的重要因素，一般情况下，培养24-48小时后进行计数。
另一种常用的方法是采用表面采样法进行采样，然后将采样得到的样品进行培养和计数。
表面采样法可以使用不同的方法，如擦拭法、刮取法、涂抹法等。
采样时应注意选择合适的采样器具和采样面积，避免污染和交叉污染。
采样得到的样品需要进行培养和计数。
培养方法和计数方法与空气采样相似，可以选择常规的液体培养基或固体培养基，也可以选择特定的培养基来筛选特定的细菌。
培养时间和培养温度也是影响结果的重要因素，一般情况下，培养24-48小时后进行计数。
细菌总数的测定结果可以通过计算得到，一般以CFU/m3（每立方米的菌落形成单位）为单位。
根据不同的场所和要求，对细菌总数的限制标准也有所不同，一般情况下，室内空气的细菌总数应控制在一定范围内，以保证公共场所的空气质量。
公共场所的空气微生物检验方法中，细菌总数的测定是一个重要的指标。
细菌总数的测定法
细菌总数的测定法一、细菌数测定的基本概念药品细菌数测定是微生物的定量检查，是用来判断药品被细菌污染程度和卫生质量评价的重要指标，也是检测药品质量的重要指标之一。
细菌计数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH 位、培养温度和时间等）每1g、lml、l0cm2供试品液经培养后所生长的菌落数。
所谓一定条件是按我国药典规定，在需氧条件下，30～35℃，一般培养48h,在营养琼脂培养基平板上生长的细菌菌落数。
细菌数的测定方法有多种：平板法、薄膜过滤法、涂抹法。
药品细菌数测定是活菌计数，最常用的平板法是以平板菌落计数为依据，即每个菌落代表个菌细胞，但有的菌落也可能是多个菌细胞形成，如双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等，很可能是多个菌细胞在一起。
故准确地说，细菌数测定值实际上是菌落形成单位数( CFU)。
平板法菌落计数法，是受一定条件的限制：如供试液是否均质，供试液中的细菌是否充分分散；培养基的质量、培养温度及培养时间的影响；有繁殖能力的菌细胞才能形成菌落，死菌及某此受损伤的细菌或营养要求苛刻的细菌在规定的培养基上不能生长，因而不被计数。
在试验操作中应考虑到这此问题。
二、设施、设备、仪器及器皿1、设施细菌数测定全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净净度l0000级和局部洁净度100 级单向流空气区域内进行，以防止再污染。
2、设备、仪器恒温培养箱（30～35℃）、微波炉、匀浆仪（4000～10000r / min ）、康氏振荡器、恒温水浴、电热干燥箱（250～300℃）、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果验证并应定期请有关部门检定）菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平（感量0.1g）、pH 值系列比色计、全封闭可拆卸或开放式的薄膜过滤器。
3、器皿锥形瓶（250～300ml ）、培养皿（∮9cm）、量筒（100ml）、试管（18×18mm）、刻度吸管（l ml , 10ml）、载玻片、玻璃或搪瓷、不锈钢消毒缸（带盖）。
水质 细菌总数的测定 菌落计数
水质细菌总数的测定菌落计数1.适用范围本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水细菌总数的测定。
2.原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。
因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。
所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。
3.仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱解剖镜。
采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121°C（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。
培养基营养琼脂培养基：市售营养琼脂培养基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121C高压蒸汽灭菌15min,经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。
4.步骤4.1选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30〜300之间。
大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL,所得的菌落总数可适于计数。
4.2水样的稀释方法①将水样用力振摇20〜25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。
②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。
按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。
注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。
4.3操作方法①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2〜3个适宜浓度的稀释水样ImL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每个水样应倾注两个平皿。
②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37C恒温箱内培养24h,进行菌落计数。
4.4菌落计数培养之后，立即进行平皿菌落计数。
如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5〜10C冰箱内，且不得超过24h。
但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。
公共场所空气中细菌总数检验方法
公共场所空气中细菌总数检验方法1 定义撞击法（impacting method）是采用撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使用空气通过狭颖或小孔而产生高整气流，使用悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37°、48h培养后，计算出每m3空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。
自然沉降法（natural sinking method）是指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露15分钟，经37°、48h培养后计数生长的细菌菌落数的采样测定方法。
2 仪器和设备2.1高压蒸汽灭菌器。
2.2干热灭菌器。
2.3恒温培养箱。
2.4冰箱。
2.5平皿（直径9cm）。
2.6制备培养基用一般设备：量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。
2.7撞击式空气微生物采样器。
3培养基3.1营养琼脂培养基3.1.1成分；蛋白胨牛肉浸膏10g氯化钠3g琼脂15～20g蒸馏水1000ml3.1.2制法将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min高压灭菌。
用自然沉降法测定时，倾注约15ml于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
撞击法参照采样器使用说明制备营养琼脂平板。
4操作步骤4.1撞击法4.1.1选择有代表性的位置设置采样点。
将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。
4.1.2样品采完后，将带核辐射营养琼脂平板置36±1℃恒温箱中，培养48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每m3空气中的菌落数，以CFU/m3报告结果。
4.1.3选择撞击式空气微生物采样器的基本要求。
（a）对空气中细菌捕获率达95%。
（b）操作简单，携带方便，性能稳定，便于消毒。
4.2自然沉降法4.2.1设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为1采样点，该交点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。
采样高度为1.2～1.5m。
食品中细菌总数的检验实验步骤及注意事项
食品中细菌总数的检验实验步骤及注意事项食品中细菌总数的检验实验步骤及注意事项一、实验目的要求1、了解细菌总数检验的意义。
2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法3、掌握国标法测定菌落总数的方法和技能4、熟练无菌操作技术。
二、原理菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。
菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
三、试剂和仪器（一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌）规格名称1、500ml广口瓶2、500ml三角瓶3、250ml三角瓶4、18×180mm试管数量1个1个2个3支用途:稀释样品配制:生理盐水配制:营养琼脂稀释样品倒营养平板5、1ml移液管5支6、直径为90mm平皿10套7、250ml量筒1支8、玻璃珠：直径约5mm（二）应灭菌、消毒的器材剪刀1把不锈钢药匙1把称量纸：适量酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头4只，开瓶器（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1、0.85%NaCl生理盐水1瓶300ml/瓶500ml三角瓶2、平板计数琼脂（PCA）培养基：2瓶100ml/瓶250ml三角瓶四、实验内容（一）、基本操作过程：样品称量→→样品稀释→→倾注平皿→→培养48小时→→计数报告。
（二）、样品的稀释（样品的处理）样品：袋装乳粉外包装消毒→→无菌称样品25g→→加无菌生理盐水→→加盖振荡摇均匀1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，用无菌剪刀开封取样。
称取检样25g，放入装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶子中，然后用225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入（先加入少量生理盐水将乳粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结团），采用振摇法（用力快速振摇50次,振幅不小于40cm）振摇均匀，即为1:10的稀释液。
细菌总数检验
细菌总数检验
一、试剂
1、营养琼脂培养基
称取30克营养琼脂培养基，用1升蒸馏水混和，加热完全溶解后，用高
压消毒锅在121℃恒温15分钟进行消毒。
2、70％酒精
3、无菌水吸取9ml蒸馏水于小瓶，放入上述条件的消毒锅中灭菌。
二、仪器
同《霉菌、酵母菌检验》法。
只是少需用一 55±1℃的培养箱。
三、操作步骤
1~6步与《霉菌、酵母菌检验》法同，只是第5步要一个样记三个皿，各皿分别标记10ˉ1、10ˉ2、和10o三个稀释度。
7、摇匀样，以无菌操作开罐，用烧过管口的无菌吸管吸1 ml样液于10o 的相应标号的平皿中。
再用该吸管吸取1 ml样液于一瓶无菌水中，混匀无菌水，换一试管，按上法各吸取1 ml 稀释液于10ˉ1平皿和另一瓶无菌水中，再次混匀新制稀释样，换一吸管吸取1 ml稀释液于10ˉ2平皿中。
8、将凉至46℃的营养琼脂培养基注入平皿约15 ml，转动平皿使混合均匀平皿使混合均匀，同时作一空白样。
9、待琼脂凝固后，翻转平皿，置于37±1℃恒温箱内培养48小时）。
10、恒温到期后计算菌落数并报告之。
四、计数和报告
1、计数时应选取菌落数在30~300之间的平皿，若有二个稀释度均在30~300之间时，按国家标准方法要求以二者比值决定，比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于2 则取其转小数字。
细菌总数是怎么检验的
细菌总数是怎么检验的我们在疾病预防控制工作中每年都会对辖区内食物中毒所引发的事件进行统计和梳理，发现食物中毒的比例逐年提升，并且还有些严重情况是由于食物中毒而导致的死亡。
在这些引人深思的食物中毒事件当中，由于细菌食品中毒的事件占到了1/4左右，而最重要的致病原因就是微生物致病菌的存在。
在临床检验时对于细菌总数的检验也是重要的参照指标，本篇文章关于细菌总数检验过程进行论述和探讨，希望更多的人能够对于这一检验过程有一定的了解，加深对于临床检验知识的认知。
1显微镜直接计数法进行细菌总数检验1.1直接涂片计数法直接图片计数法的操作方法是需要经过适当稀释之后的样品均匀涂布在载玻片的一平方厘米方格内，然后进行一系列的后续操作，譬如样品干燥、固定及革兰氏染色，最后用显微镜来观察计数。
接下来逐步讲解每一步的具体操作，在进行涂片操作时，首先接触到的工具是接种环，用接种环挑取单菌落，然后滴入生理盐水，并保证涂布的均匀性，借助于火焰的光热完成热固定操作。
涂布完成之后需要进行的是初染操作，需要将结晶紫滴入一滴左右，然后静置一分钟，起到染色目的，一分钟之后进行水洗，将多余的结晶紫染料冲洗掉。
初染结束之后需要进行媒染，媒染过程中所使用的是碘液，同样加入一滴的碘液，在滴入之后静止一分钟，然后再借助水洗操作，将多余的碘液冲洗掉，这两步结束之后需要进行的是脱色处理。
脱色所使用到的是95%的乙醇，将95%的乙醇滴入30秒后进行复染。
复染所使用的是复红，复红滴入持续时间也约为30秒，然后才可进行下一个阶段。
在借用显微镜进行细菌观察之前，先要用物镜测量出油镜视野的直径，然后再依次计算10~15个视野内的细菌总数，计算出其平均值。
直接图片计数法，拥有操作简单快捷的特点。
但是这一技术方法无法准确区分出视野内的活菌与死菌，一般来说会将死菌也计算在细菌总数当中，导致最终的计数结果偏高，所以只将这种方法应用于菌数较高的样本或者是单细胞微生物。
1.2血球计数板计数法在计数之前需要进行样品的适当比例稀释，然后将其注入血球板的计数室当中，因为已知的计数室容积是0.1立方毫米，所以计算这一微小体积内的菌落总数，就可以推算出每克样品或者是每毫升样品的总菌落数。
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定随着人们对公共场所环境质量要求的提高，对公共场所空气中微生物的检测也越来越重视。
其中，细菌总数是衡量空气中微生物含量的一项主要指标。
下面将详细介绍公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤。
1.样品采集首先，确定采样位置。
根据公共场所的具体情况，如是否有空调、通风设备等信息，选择具有代表性的采样点位。
一般来说，可选择通风良好、人员流动频繁的位置进行采样。
然后，采用采样器具进行空气采样。
空气采样器具常用的有空气生物分析仪、洒雾器等。
根据采样器具的具体操作手册，按照规定的操作步骤进行采样，同时注意采样时间和采样量的控制。
2.样品处理采样完成后，将采样器具中的采样物转移到适当的载体（如培养基、液体培养基）中。
根据具体情况，选择合适的载体。
对于空气样品，一般选择液体培养基，如生理盐水。
将采样管中的液体转移到含有生理盐水的试管中。
3.稀释操作将采样物进行稀释，以便于接种和计数。
稀释液的选择可依据之前的实验经验，一般选用营养琼脂或平板培养基。
将采样物中的适量细菌悬浮液取出，用移液管分别转移到不同稀释管中，依次进行系列二次稀释。
每次稀释后，需充分摇匀。
根据之前的实验经验，每一次稀释可选用10倍、100倍、1000倍等稀释倍数。
4.接种和培养将稀释液分别接种到含有固体培养基的平板上，均匀涂布。
然后将接种后的平板培养基放置于恒温培养箱中，选择适宜的培养温度和时间。
一般来说，菌落计数应在培养48小时后进行。
5.计数和结果分析计数时，将培养出的菌落进行清点，并将数量记录下来。
根据菌落的大小、颜色和形态等特征，可初步判断不同菌种的存在情况。
最后，将不同菌种的菌落数量进行统计和分析，并将细菌总数计算出来。
需要注意的是，在细菌总数测定过程中，应严格控制实验条件，如温度、湿度等，以确保结果的准确性。
另外，细菌总数的测定结果应与相关标准进行比较，以评估空气中微生物的含量是否符合要求。
总结：公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤包括样品采集、样品处理、稀释操作、接种和培养、计数和结果分析等。
细菌总数的测定
一、测定方法平皿计数法二、方法依据《生活饮用水卫生规范》（2001）三、测定范围生活饮用水及其水源水中的细菌总数的测定四、测定原理细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。
按本作业指导书所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
五、试剂营养琼脂1、成分A蛋白胨 10gB牛肉膏 3gC氯化钠 5gD琼脂 10～20gE蒸馏水 1000mL2、制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
六、仪器设备1、高压蒸汽灭菌器2、干热灭菌箱3﹑培养箱36±1℃4、电炉5、天平6、冰箱7、放大镜或菌落计数器8、pH计或精密pH试纸9、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等七、分析步骤1、生活饮用水1.1以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36±1℃培养箱内培养24h，进行菌落计数，即为水样1mL中的细菌总数。
2、水源水2.1以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液。
2.2吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。
按同法依次稀释成1:1000，1:10000稀释液等备用。
如此递增稀释一次，必须更换一支1 mL 灭菌吸管。
2.3用灭菌吸管取2~3个适宜稀释度的水样1mL，分别注入灭菌平皿内。
以下操作同生活饮用水的检验步骤。
八、计算1、菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
公共场所卫生检验方法 细菌总数 自然沉降法
公共场所卫生检验方法细菌总数自然沉降法1. 适用范围本方法规定了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与实验室培养方法。
本方法适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌以及嗜肺军团菌的测定，其他场所可参照执行。
注：本方法中同一个指标如果有2个或2个以上检验方法时，可根据技术条件选择使用。
2. 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1 细菌总数公共场所空气中采集的样品，计数在营养琼脂培养基上经35℃〜37℃、48h 培养所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
2.2 真菌总数公共场所空气中采集的样品，计数在沙氏琼脂培养基上经28℃，5d培养所形成的菌落数。
2.3 β-溶血性链球菌公共场所空气中采集的样品，经35℃〜37℃、24h〜48h培养，在血琼脂平板上形成的典型菌落。
2.4 嗜肺军团菌样品经培养在GVPC琼脂平板上生成典型菌落，并在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板上不生长，进一步经生化试验和血清学鉴定确认的菌落。
2.5 撞击法采样撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，从而将悬浮在空气中的微生物采集到营养琼脂平板上，经实验室培养后得到菌落数的测定方法。
2.6 自然沉降法将营养琼脂平板暴露在空气中，微生物根据重力作用自然沉降到平板上，经实验室微生物培养后得到菌落数的测定方法。
3. 细菌总数3.1 原理采用撞击式或自然沉降法采样，营养琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的细菌总数。
3.2 撞击法（省略）3.3自然沉降法3.3.1仪器和设备3.3.1.1高压蒸汽灭菌器3.3.1.2恒温培养箱3.3.1.3平皿：直径90 mm3.3.1.4采样支架3.3.2 培养基3.3.3采样3.3.3.1采样点：见附录A。
3.3.3.2采样环境条件；见3.2.3.2。
3.3.3.3采样方法；将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min。
7 微生物检验-细菌总数
2、稀释度的选择： ①应选择平均菌落数在30—300之间的稀释度，乘 以稀释倍数报告之（见表中例1） ②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30—300 之间，则应
③若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之（根据表中例4） ④若所有稀释度的平均菌落数均小于300， 则应按稀释倍数最低的平均菌落数乘以 稀释倍数报之（见表中例5）
平板菌落计数法
3、加样： 根据对样品污染情况的估计， 选择2—3个适宜稀释度。分别在作10倍 递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的 吸管移1毫升稀释液于灭菌平皿内，每个 稀释度作2个平皿。
4、倾注培养基： 倾注培养基： 稀释液移入平皿内后， 稀释液移入平皿内后，即时 将冷至45 55℃ 的营养琼脂培养基（ 45—55 将冷至 45 55℃ 的营养琼脂培养基 （ 可 放置于46 水浴保温） 倾注平皿约15 46℃ 15毫 放置于 46℃ 水浴保温 ） 倾注平皿约 15 毫 并移动平皿使混合均匀。 升，并移动平皿使混合均匀。
二、实验器材
样品 37℃恒温培养箱、接种环、酒 37℃恒温培养箱、接种环、 恒温培养箱 精灯、试管架、记号笔等 精灯、试管架、 待测菌
无菌操作转接培养物
三、方法
（一）样品稀释及倾注平板：
1、取样： 无菌操作，取试样10克（或10毫升） 放于含有100毫升（如检样为液体则改为 90毫升）灭菌生理盐水或其它稀释液的 灭菌玻璃瓶内（瓶内予先放置适当数量 的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇 或研磨作成1：10的均匀稀释液。
2、稀释： 稀释： 毫升灭菌吸管，吸取1 10稀释液 用1毫升灭菌吸管，吸取1：10稀释液 毫升，注入含有9 1 毫升，注入含有9 毫升灭菌生理盐水或其 他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀， 他稀释液的试管内， 振摇试管混合均匀， 作成1 100稀释液 稀释液。 作成1：100稀释液。 另取1 毫升吸管， 另取 1 毫升吸管 ， 按以上操作顺序作 10倍递增稀释液 如此每递增稀释1 倍递增稀释液， 10 倍递增稀释液 ， 如此每递增稀释 1 次 ， 即换用1 毫升灭菌吸管。 即换用1支1毫升灭菌吸管。
实验十细菌菌落总数(CFU)的测定(精)
4）注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培 养基（用于河水样）立即旋摇培养皿，充分混匀。 方法是握住平皿，先往一个方向画圆，再朝相反 方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿 使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿基于 水平位置放置至固化。 5）接种河水样的培养皿，倒置于37℃培养箱中培 养24h。
六、思考题
1、测定水中细菌菌落总数有什么实际意义？ 2、根据我国饮用水水质标准，讨论你这次的 检验结果。 3、本实验中哪些步骤属无菌操作？为什么？
4、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应 按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 5、如果全部稀释度的平均菌落数均不在30～300 之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之。 6、菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数 报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位 有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为 了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示， 在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水 样的稀释倍数。
操作步骤图示振荡10min水样9ml9ml9ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml10110210320ml20ml20ml倒培养基2五菌落计数及报告方法?一平板菌落数的选择?1进行平皿菌落计数时记下同一浓度的3个平板或2个的菌落总数计算平均值再乘以稀释倍数即为1ml水样中的细菌总数
实验十 细菌菌落总数 （CFU）的测定
(二) 稀释度的选择 l、首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，当 只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可 用它作为平均值乘其稀释倍数。 2、若有两个稀释度的平均菌落数都在30～300之 间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2， 应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小 的菌落数。 3、如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则 应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告 之。
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细菌总数的检验方法
1 试验器材: 样品、无菌水、制备好的营养琼脂培养基200 ml 装于三角瓶、装有三、四十粒玻璃珠的三角瓶一个、平板数套、1 ml 吸管、计数器、试管。
2. 试验步骤:
2.1 在无菌条件下取样品10ml。
2.2 用1 ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml ，置于9 ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀成1:100稀释液。
2.3 另取1 ml灭菌吸管吸，按上述操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml 灭菌吸管。
2.4 根据对样品的污染程度选择2到3个适宜的稀释度分别在作10倍递增稀释液的同时,即以吸取该稀释度的吸管,吸取1ml 稀释液，置于灭菌平板内，每个稀释度作2个平板。
2.5 稀释液移入平板后，立即将冷却至45°C的营养琼脂基约15 ml倾入平板中,并转动平板使混合均匀。
2.6待琼脂凝固后翻转平板,置于37°C 恒温培养箱内培养24小时或48小时，计算平板内菌落数目，将细菌菌落乘以稀释倍数，即得每毫升样品中所含菌落总数。
3 菌落计数方法:
3.1 平板内菌落计数时，可用肉眼观察,必要时用放大镜。
3.2 在记下各菌落数后，求出同稀释度的各平板的平均数。
4 菌落计数的报告
4.1平板菌落数的选择:选取菌落数在30到300之间的平板作为菌落数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板内的菌落平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时。
不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数。
若片状菌落不到平板的一半，而其余部分又很均匀,则可计算半个平板后乘以2以代表全平板的菌落数。
4.2 稀释度的选择
4.2.1 应选择平均菌落数在30到300之间的稀释度，乘以稀释倍数来报告它。
4.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30到300之间，应视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数。
若大于2，则报告其中较小的数字。
4.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数来报告它。
4.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数来报告它。
4.2.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30到300之间，其中一大部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数来报告。
4.3菌落数的报告
4.3.1 菌落数在100以内时，按实有数报告。
4.3.2 大于100时,采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。
4.3.3 为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示它。