血红蛋白的提取和鉴定
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课题五---血红蛋白的提取和分离
蛋白质的提取和分离一般分为四 步： 1、样品处理 2、粗分离
3、纯化 4、鉴定
1.样品处理 血浆 血 液 血细胞 水分 固体物质
白细胞 两个a肽链 血小板 血红 红细胞 蛋白 两个β 肽链 （最多） （ 90％ ） 共四条肽链
血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等
1.样品处理
①目的：去除杂蛋白 ②方法：低速短时间离心去除血浆，再加
入生理盐水洗涤，离心。
1.样品处理
1）目的：释放血红蛋白 加（ 蒸馏水 ）到（ 原血液 ）体积， 再加40％体积的（ 甲苯 ）（ 溶解细胞 膜） ，置于（ 磁力搅拌器 ）上充分搅拌 10分钟（加速细胞破裂）, 细胞破裂释放出 血红蛋白. 2) 分离血红蛋白溶液：以2000r/min的速度 离心10 min ，试管中的溶液分为4层:
分离血红蛋白溶液
有机溶剂
（无色透明的甲苯层） （红色透明液体）
脂类物质 （白色脂溶性物质沉淀层） 血红蛋白溶液
红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）
2、粗分离
用到的方法----透析
a目的：除去样品中分子量较小的杂质 b原理：
透析袋能使小分子自由进出，而大分 子保留在袋内。
透析血红蛋白
1mL 20mmol/L磷酸缓冲液
凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示
4、鉴定 方法：电泳 原理：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移 率取决于它所带净电荷的多少以及分子的 大小等因素。 为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在 凝胶中加入SDS（十二烷基磺酸钠）。
电泳来自百度文库结果
练习巩固 1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋 白质的研究和应用越来越深入，首先要 做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质
5、一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数 和CO2分子数分别是
A 4、2 B 4、4 C 2、1 D、1、1
6、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后 分层顺序自上而下是： 有机溶剂-----脂类物质-----血红蛋白溶液-----红细胞破碎物沉淀
The End
透析过程动画演示
3、纯化 a方法： 凝胶色谱法 b原理：是根据相对分子质量的大小 分离蛋白质的有效方法。
凝胶：是一些微小的多孔球体（内含许多贯穿 的通道)，由多糖类化合物构成,如葡聚糖、琼脂 糖。
c 凝胶色谱的具体过程
样品的加入和洗脱
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短， 流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长， 流动慢。
2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中， 关于蛋白质的叙述，正确的是 A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于 相对分子质量较大的蛋白质 B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于 相对分子质量较大的蛋白质 C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于 相对分子质量较大的蛋白质 D 二者根本无法比较
3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不 同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 A 调节pH B 维持红细胞的能量供应 C 防止微生物生长 D 防止血液凝固
蛋白质的提取和分离一般分为四 步： 1、样品处理 2、粗分离
3、纯化 4、鉴定
1.样品处理 血浆 血 液 血细胞 水分 固体物质
白细胞 两个a肽链 血小板 血红 红细胞 蛋白 两个β 肽链 （最多） （ 90％ ） 共四条肽链
血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等
1.样品处理
①目的：去除杂蛋白 ②方法：低速短时间离心去除血浆，再加
入生理盐水洗涤，离心。
1.样品处理
1）目的：释放血红蛋白 加（ 蒸馏水 ）到（ 原血液 ）体积， 再加40％体积的（ 甲苯 ）（ 溶解细胞 膜） ，置于（ 磁力搅拌器 ）上充分搅拌 10分钟（加速细胞破裂）, 细胞破裂释放出 血红蛋白. 2) 分离血红蛋白溶液：以2000r/min的速度 离心10 min ，试管中的溶液分为4层:
分离血红蛋白溶液
有机溶剂
（无色透明的甲苯层） （红色透明液体）
脂类物质 （白色脂溶性物质沉淀层） 血红蛋白溶液
红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）
2、粗分离
用到的方法----透析
a目的：除去样品中分子量较小的杂质 b原理：
透析袋能使小分子自由进出，而大分 子保留在袋内。
透析血红蛋白
1mL 20mmol/L磷酸缓冲液
凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示
4、鉴定 方法：电泳 原理：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移 率取决于它所带净电荷的多少以及分子的 大小等因素。 为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在 凝胶中加入SDS（十二烷基磺酸钠）。
电泳来自百度文库结果
练习巩固 1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋 白质的研究和应用越来越深入，首先要 做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质
5、一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数 和CO2分子数分别是
A 4、2 B 4、4 C 2、1 D、1、1
6、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后 分层顺序自上而下是： 有机溶剂-----脂类物质-----血红蛋白溶液-----红细胞破碎物沉淀
The End
透析过程动画演示
3、纯化 a方法： 凝胶色谱法 b原理：是根据相对分子质量的大小 分离蛋白质的有效方法。
凝胶：是一些微小的多孔球体（内含许多贯穿 的通道)，由多糖类化合物构成,如葡聚糖、琼脂 糖。
c 凝胶色谱的具体过程
样品的加入和洗脱
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短， 流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长， 流动慢。
2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中， 关于蛋白质的叙述，正确的是 A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于 相对分子质量较大的蛋白质 B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于 相对分子质量较大的蛋白质 C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于 相对分子质量较大的蛋白质 D 二者根本无法比较
3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不 同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 A 调节pH B 维持红细胞的能量供应 C 防止微生物生长 D 防止血液凝固