遗传学实验 蝗虫精原细胞减数分裂观察.

蝗虫精原细胞减数分裂观察

摘要通过获取蝗虫精巢,经固定、染色后观察蝗虫精原细胞分裂各个阶段。了解生物性母细胞减数分裂的一般规律及减数分裂过程中的染色体行为的动态变化过程,掌握制片、染色技术。

1.引言

不分栏减数分裂仅发生在生命周期某一个阶段,它是进行有性生殖的动植物性母细胞成熟、形成配子的过程中出现的一种特殊分裂方式,也叫成熟分裂。

在减数分裂中染色体仅复制一次,细胞则连续分裂两次,在两次分裂中分别将同源染色体与姐妹染色体均分给子细胞,最终形成的配子中染色体数目仅为性母细胞的一半。

在高等植物的有性生殖过程中,花药和胚珠中有些细胞经过生长和分化为小孢子母细胞和大孢子母细胞,它们经过减数分裂分别形成4个小孢子和1个大孢子。

2.实验材料

2.1实验材料

固定的蝗虫精巢、改良苯酚品红染液、载破片、盖玻片、显微镜、解剖针、镊子。

2.2实验方法

2.2.1材料的获取及处理

取材:对于动物来说,在生殖期间,雄蝗虫其精巢内不断进行着减数分裂,取材比较容易。蝗虫雌、雄容易鉴别,雄性个体较小,雌性个体较大,雌性蝗虫尾部有产卵瓣,从外部易于区别。

得到雄蝗虫后,去掉第一对步足及翅,在翅基部的后方(相当于腹部背侧前端,用解剖剪将其体壁剪开,见到在上方两侧各有一块黄色的团块,这便是蝗虫精巢。精巢有许多排列在一起的精巢小管组成。

固定:固定的目的是采用渗透力强的固定液将组织、细胞迅速杀死,使蛋白质沉淀,并尽量保持原有状态。将生活的细胞固定以后,将有利于后续的解离、染色等。固定液比较常

用、有效的是Carnoy固定液:CarnoyⅠ:冰醋酸:乙醇=1:3(应用最为广

泛;CarnoyⅡ:冰醋酸:氯仿:乙醇=1:3:6(含油脂类较多的材料以及需要更加硬化的组织的固定。

将精巢投入蒸馏水中低渗5min后转至固定液(甲醇:冰醋酸=3:1中固定4~6h,待黄色组织块变白即可(若尚未变白还可继续固定适当时间。【1】

保存:将固定好的材料转入70%的酒精溶液,冰箱中保存备用。【1】

2.2.2染液的制备

常用染料有:洋红、碱性品红、苏木精等。本次实验中用的是改良苯酚品红,其制备过程如下:

原液A 3g碱性品红溶于100ml 70%乙醇中。

原液B 取原液A 10 ml加入90 ml 5%的苯酚水溶液。

取原液B 45ml加入6ml 冰乙酸和6ml 37%的甲醛。(适合于植物原生质培养中的细胞核染色取2-10ml染色液,加90-98ml 45%的醋酸1.8g山梨醇。(适合于细胞核的染色,只有细胞核及染色体被染成紫红色,而细胞质不着色

2.2.3制片及镜检

制片:在干净的载玻片上滴一滴燃料,挑取3~4条曲细管置于其中,用两根解剖针十字交叉将小管撕破,或用刀片在曲细精管中横切两三道,轻轻挤出其中的细胞,染色10~15min,压片、镜检。

3.结果

细线期偶线期粗线期

双线期

中期Ⅰ侧面观后期Ⅰ

末期Ⅰ中期Ⅱ斜侧面观

末期Ⅱ精细胞

枣核状精细胞柳叶状精细胞细线状精子

4.讨论

1.实验中染色时应该破碎精细管以便彻底染色。

2.挑选精细管应选择较粗的,因为其正属于分裂时期。

3.压片前注意先用解剖针后部轻敲,以让细胞尽量,但用力要轻,以防敲碎盖玻片。

4.压片时应用一只手按住盖玻片在压片,防止盖玻片滑动。

间期Ⅰ减数分裂Ⅰ偶线期粗线期双线期中期Ⅰ后期Ⅰ末期Ⅰ

间期Ⅱ

减数分裂

Ⅱ

前期Ⅱ中期Ⅱ后期Ⅱ末期Ⅱ

参考文献

[1]傅鹏,石秀.制备观察蝗虫精原细胞减数分裂装片[J].生物学通报,1999,34(8:7.

[2]杨大鹏.动植物剑术分裂过程中染色体行为的观察。遗传学实验,2010年9月第八次印刷.