埃博拉+细菌耐药+乙肝

埃博拉防控

5．1预防性措施目前我国尚未出现埃博拉病毒爆发趋势，但防治管理不可松懈。我国暂可通过以下形式与方法进行预防与管理：

1）政府建立出入境特殊传染病筛查监测体制，要加强进、出境检疫，加强对动物的检疫，尤其是要加强对非人灵长类和蝙蝠等野生动物的检疫工作。口岸检疫部门一旦发现可疑病例或动物，要及时通报卫生部门做好疫情调查和处理。

2）对公众以及前往埃博拉流行地区的旅游和进行医护工作的人员要进行有关埃博拉出血热防病知识的普及和教育，使其提高警惕意识，做好个人防护。提高卫生工作人员对埃博拉的诊断、报告水平及意识。医务人员需严格遵守洗手规程，并认真清理、消毒暴露表面。患者需被安置在一个单独的隔离观察室。

3)建议公众近期不要前往几内亚、利比里亚和塞拉利昂旅行，若要前往尼日利亚也要格外小心病毒暴露风险。

4) 建议所有自几内亚、利比里亚、尼日利亚和塞拉利昂归国的游客，连续 21天密切监测体温和身体其他体征改变，一旦出现如寒战、皮疹等类埃博拉症状，应立即报告给当地医院或医生，并主动提供近期疫区接触史，以便有关部分及时采取适当的预防措施。

5）加强国际间信息交流与合作．密切关注该病的流行动态，尤其要高度关注曾出现过埃博拉出血热流行的地区。

6) 任何疑似病例都需要进行隔离，直至被确诊或被排除。

5．2疫情控制措施

1）多地多种相关部门建立联系与快捷信息渠道，保证一旦发现可疑病例及其接触者，应立即采取严格的隔离措施．以防止疫情的扩散及流行。

2）与病人接触时做好个人防护，防止直接接触患者污染物。对病人的分泌物、排泄物要严格消毒，污染的针头、注射器等可用焚烧或高压蒸汽进行消毒处理。

3）所有涉及埃博拉病毒的实验室活动应严格按照我国有关规定进行。相关的实验室检查病料送检过程中一定要注意防止病毒的散播。病毒分离与培养只能在生物安全4级实验室(BSL-4)进行。该病无特效治疗措施，主要采用对症和支持疗法，注意水、电解质平衡，预防和控制出血，控制继发感染。

一、细菌耐药性检测的方法

1、细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。也可通过以下方法进行检测：（1）耐药筛选试验（2）折点敏感试验（3）双纸片协同试验（4）药敏试验的仪器化和自动化

2．β-内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法和头孢硝噻吩纸片法。

3．耐药基因检测

4．特殊耐药菌检测

（1）耐甲氧西林葡萄球菌检测：（2）耐青霉素肺炎链球菌检测（3）耐万古霉素肠球菌检测（4）产超广谱β-内酰胺酶的肠杆菌科细菌检测

二、目的

细菌耐药性监测是一项指导、监督合理应用抗生素、控制医院感染的重要措施，为控制医院感染、新药开发、耐药机制的基础研究提供依据。特别是为掌握重要病原菌对一些新抗菌药的耐药情况，作为合理用药的依据

1、检测细菌的敏感性，指导临床用药

2、检测细菌的耐药性，预测临床结果

三、意义

因而加强抗生素耐药性的监测，了解本地区耐药情况，对于指导临床经验用药，控制院内感染，减缓细菌耐药变迁有重要临床意义。

避免以下1、治疗过度：用药不当，过度使用高档抗生素2、治疗错误：用药错误，危重

患者丧失抢救时机3、增加不必要的副作用4、增加不必要的费用5、增加细菌的耐药性6、降低医疗服务的质量

乙肝病毒耐药的检测方法

核苷(酸)类似物是目前临床进行抗乙型肝炎病毒(H B V)治疗的主要药物, 但长期使用可引起病毒突变产生耐药。基因型耐药和表型耐药分析是病毒耐药性检测的两种基本手段,

前者主要通过基因测序和线性反向探针杂交等方法检测H B V 基因组中已知与耐药相关的病毒变异; 后者则是确定新发与复杂HBV 耐药变异的必要方法, 其基本策略是构建HBV 变异株与野生株基因组重组载体, 转染细胞系后定量检测HBV 复制中间体, 比较在不同药物浓度下病毒复制力的受抑制程度。建立敏感、特异、经济、高效的检测方法是基因型耐药和表型耐药分析应用于临床的基础。V基因变异主要的检测方法对于核苷酸类似物耐药的检测，欧美国家多采用IN—NO—LIPA方法，其灵敏度和特异性都比较高，但试剂盒非常昂贵，在我国尚难推广普及。目前国内检测HBV基因耐药变异的方法主要有以下几种，各有其优缺点。下面将逐一阐述。（一）聚合酶链反应一逆向点杂交（PCR—RBD）技术利用PCR—RBD技术可实现一次检出10余种至几十种突变位点。首先设计带标记的靶序列扩增引物和检测各种耐药突变位点的特异性探针，将各探针固化在尼龙膜上，制成能够检测所有耐药相关SNP突变位点和类型的检测膜条；然后用PCR对检测区域的HBVDNA片段进行扩增，并将扩增产物与检测膜条进行杂交，通过加入四甲基联苯胺进行显色，便可直接判断有无基因耐药突变和突变的类型等结果。刘彦辰等利用该技术建立了LAM、ADV、ETV3种NA药物相关的10个耐药位点上的突变检测，检测结果与直接测序法一致。（二）聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）用特异性引物PCR扩增目的DNA，再用限制性内切酶消化切割扩增产物，然后通过凝胶电泳分辨不同HBV突变类型产生的由不同片段长度构成的多态性来判断有无基因耐药变异。该方法较简便，具有一定的敏感性和特异性，可检测数量占HBV准种池5％的耐药变异株；曾被国内外众多实验室应用于LAM耐药变异的检测工作中，近来国内也建立了基于该技术的ADV耐药变异检测方法。但所需的限制性内切酶类型较多，有些耐药突变很难找到合适的限制性内切酶。因此，可检测的突变类型有限，对于少数耐药变异位点监测不失为一种简便、快速且廉价的方法。但随着多种NA的相继问世

和HBV耐药变异位点的不断出现，该方法将难以胜任多位点变异的检测。（三）基因芯片（gene chip）技术亦称DNA芯片（DNA chip）或DNA微阵列（DNA microarray）技术，其基本原理与RBD技术相似，是将大量特定的基因片段或寡核苷酸片段作为探针有序和高密度地排列、固定在玻璃或膜等载体上，然后与待测有标记的样品核酸按碱基配对的原则杂交，然后检测结果。不同之处在于基因芯片技术往往使用荧光标记来代替酶标记，将酶催化的化学显色改为荧光扫描观察，通量更高，可实现高达成千上万种SNP的检测。具有快速、高效、敏感、平行化和自动化等优点，可检测已知变异位点。另外随着基因芯片高通量测序技术的进展，还可用于检测未知变异位点。目前国内用于核苷（酸）类似物耐药临床检测的芯片正在研发中。（四）限制性片段质谱多态性技术（RFMP）该技术将PCR—RFLP技术与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）技术结合，是根据被测物质的相对分子质量进行定量检测的，在PCR—RFLP的基础上，将消化后的片段与芯片结合，当加入能量吸收分子后，芯片上保留的被测物质形成晶体，在特异的激光照射后，晶体发生解离作用，带电分子在通过电场时加速，记录仪记录飞行时间的长短，质量越轻，相对所带的电荷越多，飞行时间越短。该方法敏感、准确、重复性好，能够发现数量不足H B V准种池1％的变异株，有研究报道用此法检测rtI169、rtT184、rtS202、rtM204、rtM250位点变异。但其同样仅能检测已知位点变异，且价格昂贵，很难在临床推广应用。（五）实时PCR（real—time PCR）该技术是在PCR反应体系中加人带有荧光基团的突变位点检测探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程的每一个循环，最后通过Ct值和标准曲线对样品中DNA的起始浓度进行定量的方法。该方法操作简便，可检测变异发生率低于10％的耐药变异。缺点为仅能检测已知位点，同样难以实现一次进行多个耐药突变位点的检测；同时，针对每个位点的不同变异均需合成相应的探针。随着NA耐药位点的增多，相应合成探针的费用增高。国内已有经SFDA批准的实时PCR试剂盒用于rtM204V／I变异的临床检测。（六）PCR产物直接测序（direct PCR sequencing）可进一步分为双脱氧测序法与焦磷酸测序法。是将HBV基因组的逆转录酶区进行扩增后直接进行测序分析的方法。PCR 产物直接测序法可检测已知和可能的未知耐药变异位点，是最常用的基因型耐药检测方法之一。Keeffe等认为PCR产物直接测序的方法应作为基因型耐药检测的金标准。该方法的缺点是灵敏度较差，只有当变异株超过HBV准种池（quasispecies pool）的20％时才能被发现。孙树梅等新近报道发现巢式PCR+焦磷酸测序的方法较普通测序法有更好的灵敏性，尤其在低病毒拷贝数时差异明显。这尚有待于临床应用的验证。随着核苷类抗病毒药物的长期广泛应用，其耐药已成为一个不容忽视且广泛关注的问题。目前报道了核苷类药物的一部分耐药的位点，但新的基耐药突变化点不断被发然而，目前应用于临床的、可全面反映基因耐药情况、有效指导临床药物选择的检测方法十分有限。因此，在现有HBV 基因耐药突变研究的基础上，建立起适合临床的全面检测HBV耐药突变的新技术，制定更加合理的抗病毒治疗方案，对可能耐药的患者进行相关的耐药方面的检测，及时调整治疗方案，无疑具有非常重要的临床意义常用的耐药基因检测方法有： 1.PCR直接测序法：是最常用的基因耐药检测方法之一，能测出所有变异位点，包括可能的补偿性突变和新突变位点，对于新的治疗手段，或现行治