不同缺氧复氧损伤程度对H9c2心肌细胞自噬的影响
氧化应激与心肌
氧化应激与心肌1957年美国克里夫兰临床中心，第一将大隐静脉搭桥术应用于冠心病病人，尔后冠状动脉粥样硬化性心脏病血运重建医治快速进展。
冠状动脉溶栓术、经皮冠状动脉成形术、冠状动脉支架植入术、冠状动脉旁路手术已成为拯救缺血心肌的重要医治方式。
但血流恢复本身也会引发显著的损伤，部份患者在血供恢复后，出现细胞超微结构转变、细胞代谢障碍、细胞内外环境改变，致使缺血再灌注损伤（ischemia/reperfusion-associated tissue injury，IRI），临床表现为心律失常、心力衰竭等。
IRI也出此刻心脏手术、心脏移植、心肺苏醒等临床情形后。
目前研究表明细胞IRI的机制主要包括：氧自由基含量增多、细胞内钙超载、线粒体膜去极化等。
氧化还原失衡是IRI发生的重要起始因素，但其机制和细胞中存在的保护机制尚不完全明确，本文重点对氧化应激与心肌IRI的研究进展做一综述。
1.氧化应激和ROS氧化应激（oxidative stress，OS）主如果由于内源性和(或)外源性刺激引发机体代谢异样而骤然产生大量活性氧簇（ROS）。
ROS是指在外层电子轨道含有一个或多个不配对电子的原子、原子团或分子，包括超氧阴离子（O2- ·）、过氧化氢（H2O2）、过氧亚硝酸盐（ONOO-）和羟基自由基（·OH）。
ROS作为第二信使介导了许多生理性与病理性细胞事件，包括细胞分化、过度生长、增殖及凋亡。
超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶作为体内清除自由基的重要物质，在维持体内氧化还原平衡方面发挥重要的作用。
但在IRI进程中，参与合成ROS的酶体系增多，且活性更强，如NADPH氧化酶、线粒体黄素酶、黄嘌呤氧化酶、未偶联的一氧化氮合酶、细胞色素P450、脂氧合酶、环氧合酶和过氧化物酶体，ROS的生成量明显高于细胞内的清除能力，致使氧化还原失衡。
ROS虽然半衰期很短，但具有极强的氧化活性，与细胞内脂质、蛋白质、核酸等生物大分子发生过氧化反映，造成细胞结构损伤和代谢障碍。
10月30日麻醉大讲堂第140讲治疗性浅低温的临床应用及研究进展 (1)
治疗性浅低温的临床应用和研究余树春 邓伟南昌大学第二附属医院治疗性浅低温（MTH）的定义和分级l定义：l低温可以降低组织代谢，提高机体对缺氧的耐受能力。
治疗性低温是控制性地将机体温度降低从而达到治疗目的的方法。
l分级：l根据其温度的不同，可分为深低温治疗 （ ＜19.9℃ ）、中低温治疗（20～27.9℃ ）、亚低温治疗（27.9～31.9℃ ）和 MTH 治疗（32～35℃ ）。
l现临床上多用32～35℃的 MTH对已缺血的器官进行保护治疗。
(HALE S L,et al．J Cardiovsc Pharmacol Ther, 2011,16:131-39)围术期低体温 ≠治疗性低温低温治疗的发展史l十八世纪早期，Larrey 男爵观察到低体温能减少伤兵的死亡l1941 年美国Fay首次应用冬眠低温治疗颅脑损伤，对临床总体预后的改变不显著l1993 年美国Mariou 和Clifton用亚低温治疗重型颅脑损伤，发现患者颅内压、脑氧代谢较正常体温组明显下降l1996 年德国Metz 用亚低温治疗10例特重型颅脑损伤患者，其生存率有明显提高l1950 Bigelow 等运用狗作模型，对低温引起的生理影响做了研究l1952，John Lewis等在适度全身低温下对一小孩进行了房缺手术l1959，Drew等将体温降到12-15度 并提出了心脏手术中停循环的概念33°C within 2 hours after the return of spontaneous circulation and maintained at that temperature for 12 hours32 degrees C to 34 degrees C, measured in the bladder) over a period of 24 hours2002 年，2篇标志性文章的结论：治疗性浅低温治疗能明显降低心跳骤停后的死亡率和神经功能损害。
丹参素对缺氧复氧诱导H9C2心肌细胞损伤和内质网应激的改善作用
652Chin J I.ab Diagn,A pril,2020»Vol 24,No.4文章编号：1007 — 4287(2020)04 — 0652 — 04丹参素对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞损伤和内质网应激的改善作用丁玉红，郭秀颖*(吉林大学第一医院二部皮肤科，吉林长春130031)摘要：目的观察丹参素（D LA)通过抑制内质网应激和凋亡对H9C2心肌细胞缺氧/复氧（H/R)后损伤的保护作用。
方法将离体培养的H9C2心肌细胞随机分为3组：对照组、缺氧/复氧组（H/R组）、D L A+H/R组（DLA 组）。
H/R组先缺氧6 h后复氧24 h;D L A组于缺氧时给予D L A U0-6M)培养6 h，再复氧24 h。
对照组心肌细胞正常培养至实验结束。
E L IS A测定细胞中乳酸脱氢酶（L D H)、肌酸激酶M B同工酶(C K-M B)和丙二醛（M D A)的含量；W estern b lo t检测细胞中内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(G R P78)、CaspaSe~12、Bax、B d-2和S O D的蛋白含量。
结果与对照组比较，H/R组细胞L D H、C K-M B和M D A的含量显著升高（P<0. 05), G RP78、Caspase~12和B a x蛋 白表达明显增加（P<〇. 05)，而B cl-2和S O D的蛋白含量明显降低（P<0. 05);给予D L A可明显改善上述指标的变化。
结论H/R可诱导H9C2心肌细胞发生凋亡、氧化应激和内质网应激，引起细胞损伤和凋亡；D L A可以通过抑制凋亡、氧化应激和内质网应激，减少细胞损伤，发挥保护细胞的作用。
关键词：丹参素；H9C2心肌细胞；缺氧/复氧；内质网应激；凋亡中图分类号：R364.4文献标识码：AAmeliorating effects of Danshensu on hypoxia/ reoxygenation-induced H9C2 cardiomyocytes injury and endoplasmic reticulum D IN G Yu-hong，GUO X iu-y in g. {Department o f D ermatology，The First Hospital o f Jilin U niversity，Chang-chun130031 ,C/i/wa)Abstract：Objective T o o b se rv e th e p ro te c tiv e effe ct of D L A o n h y p o x ia/re o x y g e n a tio n C H/R)in ju ry by a tte n u atin g e n d o p la sm ic re tic u lu m s tr e s s(E R S)an d a p o p to s is in H9C2c a rd io m y o cy tes. Methods T h e H9C2card io m y o cy tes w e re ra n d o m ly d iv id ed in to th re e g r o u p s: co n tro l g r o u p，h y p o x ia/re o x y g e n a tio n g ro u p( H/R g r o u p)，D L A+H/R g ro u p(D L A g r o u p). H/R g ro u p u n d e rw e n t h y p o x ia fo r 6 h follow ed by re o x y g e n a tio n fo r 24 h. D L A g ro u p w as g iven a t th etim e of h y p o x ia fo r 6 h,t h e n re o x y g e n a tio n fo r 24 h. H9C2ca rd io m y o c y tes o f c o n tro l g ro u p w ere c u ltu re d u n d e r n o rm al co n d itio n till th e en d o f e x p e rim e n t. L actic d eh y d ro g en aseC L D H), C K-M B, M D A an d S O D a c tiv ity w ere m easu red byE L IS A and th e p ro te in e x p re ssio n of g lu c o s e-re g u la te d p ro te in s 78C G R P78) ,C a sp a se-12, B cl-2, Bax and SO D w ere detected by w estern blot. Results C om pared w ith th e control g ro u p,increased levels of L D H N C K-M B and M D A,increased expressions of G R P78,C asp ase-12and Bax p ro tein,d ecre ased activity of S O D,d ecreased ex pression of Bcl-2 and SO D protein w ere show n in th e H/R g roup sig n ifican tly,w h ile D L A am eliorated th e above indicators. Conclusion H/R can induce E R S leading to cell injury and apoptosis. D L A can protect H9C2 against H/R injury by inhibiting E R S and apoptosis.Key words:D L A; H9C2c a rd io m y o c y te s; H y p o x ia/re o x y g e n a tio n;e n d o p la s m ic re tic u lu m s tr e s s;a p o p to s is(Chin J Lab,2020,24：0652)冠心病治疗过程中，在缺血的基础上恢复血液灌注后，心肌组织的损伤不仅没有缓解反而变得更加严重，甚至出现不可逆性损伤，即心肌缺血再灌注 损伤（I/R)[1]。
利用低氧／厌氧工作站建立H9c2细胞缺氧复氧模型的探讨
利用低氧／厌氧工作站建立H9c2细胞缺氧复氧模型的探讨储倩雯;李伟秋;鲁诗史;黄丹梅;张艳美【摘要】目的：利用低氧／厌氧工作站，结合不同的缺氧条件，探讨建立H9c2细胞缺氧复氧（hypoxia／reoxygenation， H／R）模型的最佳方法。
方法缺氧时将H9c2细胞置于低氧／厌氧工作站中，分别以完全培养基，无糖培养基和酸性缺氧液培养1、2、4、6、8 h，缺氧后换用完全培养基于培养箱中按常规条件培养1 h。
流式细胞仪测定细胞内活性氧（ reactive oxygen species ，ROS）含量，噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测细胞生存率，倒置显微镜下观察H9c2细胞形态变化。
结果与对照组比较，缺氧时以完全培养基和无糖培养基处理的H9c2细胞H／R后，细胞内ROS含量和细胞存活率随缺氧时间延长无明显改变，且倒置显微镜下未观察到明显的形态变化。
缺氧时以酸性缺氧液处理的H9c2细胞，随H／R时程的延长，细胞内ROS含量不断增加（P＜0.01），且细胞存活率逐渐降低（P＜0.01），倒置显微镜下观察到细胞H砄1 h／R：1 h后开始出现部分细胞皱缩，少量坏死细胞漂浮，随时间延长损伤加重；缺氧8h后，细胞皱缩成圆形，大量坏死细胞漂浮，复氧1h后可见细胞膜表面不平滑，复氧液中仍有少量坏死细胞漂浮。
结论采用低氧／厌氧工作站，并结合酸性缺氧液，可成功建立重现性非常好的H9 c2细胞H／R模型。
%Objective To investigate optimal method of establishing hypoxia/reoxygenation(H/R) model ofH9c2 cell by using hypoxia/anoxic workstation under different conditionsin hypoxia.Methods H9c2 cell was placed into hypoxia/anoxic workstation and simultaneously cultured with complete medium, glucose-free DMEM and acidic hypoxic solution for 1,2,4,6 and 8 h respectively, and then reoxygenated with complete medium for 1 h in normoxic incubator.Thelevel of ROS was measured by flow cytometry.The cell viability was detected by MTT assay.The cellular morphology was observed by inverted microscope.Results With the extension of cell hypoxia time, there were no significant differences in the ROS level and cell viability in complete medium-and glucose-free DMEM-treated H/R groups compared with control group(P<0.05).There was no obvious morphologic change observed with inverted microscope, either.Nevertheless, when H9c2 cells were treated with acidic hypoxic solution in hypoxia, the ROS level continuously increased and the cell viability decreased with the extension of cell hypoxia time ( P<0.01 ).Since H:1 h/R:1 h, some of the cells shrunk and a few necrotic cells floated in the media under the inverted microscope , and the damage was aggravated with the extension of hypoxia time.After the cells were exposed in hypoxia for 8 h, they wrinkled to be round and a large number of floating necrotic cells were observed.When the cells were reoxygenated for 1 h, the cytomembrane was not smooth and there were still a few necrotic cells floating in culture dish .Conclusion The H9c2 cell H/R model with good repeatability can be established successfully by using hypoxia/anoxic workstation combining with acidic hypoxic solution.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2015(000)011【总页数】4页(P11-14)【关键词】低氧/厌氧工作站;H9 c2细胞;缺氧复氧模型【作者】储倩雯;李伟秋;鲁诗史;黄丹梅;张艳美【作者单位】汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041;汕头大学医学院分析细胞实验室，广东汕头 515041;汕头大学医学院第一附属医院药剂科，广东汕头 515041;汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041;汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041【正文语种】中文【中图分类】R363心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion， I/R)损伤是心脏缺血性疾病和心脏外科手术后常见的一种病理生理现象。
丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究
丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究毛智姚;郑继锋;赵士棋【期刊名称】《心脑血管病防治》【年(卷),期】2022(22)2【摘要】目的评估丹皮酚对H9c2细胞内活性氧(ROS)水平调节作用并探讨其潜在机制。
方法通过缺氧/复氧诱导方法建立心肌缺血/再灌注损伤细胞模型。
根据H9c2细胞是否用丹皮酚(10μmol/L)预处理分为空白对照组、模型组、治疗组;根据乳腺癌易感基因1(BRCA1)-siRNA或control-siRNA转染H9c2细胞分为实验组和阴性对照组。
通过流式细胞检测仪检测细胞内ROS水平,使用商业试剂盒检测总抗氧化能酶(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,实时荧光定量聚合酶链式反应法和蛋白质印迹评估BRCA1和Nrf 2转录因子表达水平;使用RNA干扰技术验证丹皮酚可能通过BRCA1调控细胞内ROS水平。
结果治疗组细胞中ROS的水平明显低于模型组,SOD和T-AOC水平明显高于模型组,BRCA1和Nrf 2转录因子mRNA表达水平明显高于模型组(P <0.05)。
使用siRNA阻断BRCA1表达后实验组ROS水平明显高于阴性对照组,Nrf 2转录因子、谷胱甘肽S-转移酶(GST)mRNA和T-AOC水平明显低于阴性对照组(t=5.862、7.630、5.706、5.914,P <0.05)。
结论丹皮酚可显著抑制H9c2细胞内ROS水平,提高细胞抗氧化能力,其可能作用机制是通过BRCA1基因依赖的Nrf 2抗氧化信号通路。
【总页数】4页(P19-22)【作者】毛智姚;郑继锋;赵士棋【作者单位】蚌埠医学院研究生院;浙江省嘉兴市第二医院心血管内科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究2.花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用3.茶多酚对H9C2大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用机制4.活血解毒中药配伍对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞自噬损伤的保护机制5.参附注射液诱导H9C2大鼠心肌细胞热休克蛋白22表达并减轻缺氧/复氧损伤的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于p38MAPK
doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2023.07.010基于p38MAPK/SERCA2α通路观察羟基红花黄色素A对大鼠心肌缺血/ 再灌注损伤的保护作用于华曲莉（青岛市中医医院，青岛市海慈医院药剂科，青岛 266033）中图分类号R542.2 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2023）07-1395-07［摘要］目的：基于p38丝裂原活化蛋白激酶/肌质网Ca2+-ATP酶2α（p38MAPK/SERCA2α）通路观察羟基红花黄色素A（HSYA）对大鼠心肌缺血/再灌注损伤（MIRI）的保护作用。
方法：120只SD雄性大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、HSYA 5 mg/kg组、HSYA 10 mg/kg组、HSYA 20 mg/kg组及p38MAPK信号通路抑制剂组（SB203580组）。
5、10、20 mg/kg HSYA组大鼠分别灌胃给予对应剂量HSYA，SB203580组给予100 μg/kg SB203580，末次灌胃结束后制作MIRI模型，Sham组仅切开左胸暴露心脏不结扎。
缺氧4 h、复氧12 h建立H9C2心肌细胞OGD/R损伤模型并分为6组：对照组（Control 组）、缺氧复氧模型组（OGD/R组）、5、10、20 μmol/L HSYA组及SB203580组，Control组、OGD/R组不进行药物干预。
TTC染色测定大鼠心肌梗死面积；超声心动图检测大鼠心脏功能；HE染色观察大鼠心肌组织病理学改变；Annexin V-FITC/PI双染法检测大鼠心肌组织和H9C2细胞凋亡；检测大鼠血清氧化应激及心肌酶指标；ELISA检测大鼠心肌组织和H9C2细胞炎症因子含量；CCK8及EdU染色检测H9C2细胞增殖能力；qRT-PCR检测心肌组织和H9C2细胞p38MAPK、SERCA2α mRNA表达；Western blot检测大鼠心肌组织和H9C2细胞p38MAPK、p-p38MAPK、SERCA2α、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达。
缺血缺氧导致心肌自噬的分子机制
缺血缺氧导致心肌自噬的分子机制作者：李兴岳郭润民梁伟钧来源：《中国医学创新》2015年第36期【摘要】自噬是自噬是细胞维持内环境稳态的重要方式之一，在各种生命活动中扮演着十分重要的角色。
在能量缺乏或者缺血缺氧的情况下，通过自噬能够提供能量的中间产物以及降解异常的细胞器以维持细胞的正常生理活动。
适当的自噬保护了在缺血缺氧情况下的细胞。
本文在缺血缺氧情况下导致的心肌自噬的分子机制作一综述。
【关键词】自噬；缺血；缺氧；心肌细胞；分子机制The Molecular Mechanism of Myocardial Autophagy Induced by Ischemia and Hypoxia/LI Xing-yue，GUO Run-min，LIANG Wei-jun.//Medical Innovation of China，2015，12（36）：153-156【Abstract】 Autophagy is one of the important ways to maintain cellular homeostasis and plays a very important role all kinds of life activities. In the absence of energy or in the case of ischemia and hypoxia， It would maintain the normal physiological activity of the cells via autophagy which can provide the intermediate product for the energy and degrade the abnormal cells . Appropriate autophagy protects cells in the condition of ischemia and hypoxia. In this article， we summarize the molecular mechanism of myocardial autophagy caused by ischemia and hypoxia.【Key words】 Autophagy； Ischemia； Hypoxia； Myocardia； Molecular mechanismFirst-author’s address：Affiliated Hospital of Guangdong Medical College， Zhanjiang 524000 ，Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.36.050自噬（autophagy）是由 Ashford和Porter在1962年发现细胞内有“自己吃自己”的现象后提出的，是指具有双层膜结构的自噬小泡将损害的蛋白或细胞器包裹后送至溶酶体中降解并完成细胞器更新的过程[1]。
当归补血汤调节自噬干预心肌梗死模型大鼠心肌损伤的作用机制
当归补血汤调节自噬干预心肌梗死模型大鼠心肌损伤的作用机制陈前;申楚翘;程凯;袁慧伦;叶树;申国明;江爱娟【期刊名称】《安徽中医药大学学报》【年(卷),期】2023(42)1【摘要】目的观察当归补血汤对心肌梗死模型大鼠心肌损伤的影响并探究其作用机制。
方法将大鼠随机分为假手术组,模型组,当归补血汤低、高剂量组和地尔硫[艹卓]组。
连续给药7 d后结扎大鼠冠状动脉左前降支复制心肌梗死模型。
缺血24 h 后,采用TTC染色检测心肌梗死面积,苏木精-伊红染色检测心肌的组织形态,微板法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平,ELISA法检测肌酸激酶心肌型同工酶(creatine kinase-myocardial band,CK-MB)水平,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylate phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(phosphorylate protein kinase B,p-AKT),磷酸化雷帕霉素靶蛋白(phosphorylate mammalian target of rapamycin,p-mTOR)及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1及p62蛋白的表达水平。
结果当归补血汤能明显减少心肌梗死面积(P<0.05),降低血清CK-MB、LDH水平(P<0.05),减轻心肌组织的病理损伤,对心肌梗死具有明显的保护作用;Western blot结果显示,当归补血汤能降低自噬通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT及p-mTOR的表达水平(P<0.05),升高自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的表达水平(P<0.05),降低p62的表达水平(P<0.05)。
结论当归补血汤可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,激活自噬,改善心肌梗死模型大鼠的心肌损伤。
缺氧复氧致心肌AC16细胞损伤途径的研究
缺氧复氧致心肌AC16细胞损伤途径的研究DAI Wen-zhi;YE Wen-feng;HE Yuan;CHEN Can;HUANG Shi-an;LEI Wei;GUO Jun【摘要】目的:探讨缺氧复氧条件下不同复氧时间致心肌细胞损伤的途径.方法:培养人心肌AC16细胞,先置入1％O2、无糖无血清条件下培养24 h,再更换含10％胎牛血清的低糖DMEM联合21％O2进行不同时间的复氧培养,采用CCK-8法检测细胞活力,并通过Western blot法检测不同细胞损伤途径标记分子的蛋白水平,如细胞自噬相关蛋白LC3-II/-I、细胞焦亡相关蛋白caspase-1和gasdermin D 及凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl2.结果:与空白对照组相比,各缺氧复氧组细胞活力降低,且随复氧时间延长,细胞活力相应持续降低(P<0.05),同时缺氧组LC3-II/-I上调(P<0.05),而复氧后LC3-II/-I较缺氧组下降,但仍高于对照组;此外,cleaved caspase-1和cleaved gasdermin D蛋白在复氧6 h组和复氧12 h 组表达水平上调(P<0.05);cleaved caspase-3水平和Bax/Bcl2在复氧12 h组上调(P<0.05).结论:缺氧致心肌AC16细胞的自噬上调,并随复氧时间增加自噬水平减弱,且在复氧过程中细胞焦亡的激活早于细胞凋亡.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2019(035)007【总页数】4页(P1232-1235)【关键词】缺氧复氧;心肌细胞;细胞自噬;细胞焦亡;细胞凋亡【作者】DAI Wen-zhi;YE Wen-feng;HE Yuan;CHEN Can;HUANG Shi-an;LEI Wei;GUO Jun【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文【中图分类】R363.2;R541.4缺血性心脏病是心血管系统中致死率和致残率最高的疾病之一，临床使用经皮冠状动脉介入术疏通狭窄甚至闭塞的冠状动脉管腔，从而改善心肌血流灌注和阻止梗死面积扩大，是治疗缺血性心脏病的基本原则和有效方法[1]。
过氧化氢对原代心肌细胞及H9c2细胞的损伤作用
过氧化氢对原代心肌细胞及H9c2细胞的损伤作用李月婷;刘影;王静娴;李靖;肖婷婷;王爱民;廖尚高;王永林【摘要】Objective: To explore the similarity of the damage effect of hydrogen peroxide ( H2 02 ) on cardiac cell H9c2 and primary cardiac myocytes. Method: H9c2 cells and primary cardiac myocytes of neonatal rats were selected, and the effects of different concentration of H2O2 on the activity of H9c2 cells and primary cardiac myocytes were measured wilh MTT method, and their sensitivity to oxidative damage induced byH2O2 was observed. Result; In the concentration range of 600 ~1 600μm · L-1 , H9O2 caused oxidative damage to these two kind of cells in a dose-dependent manner. The viability of H9e2 cells was reduced by 40% ~60% when the concentration of H2O2 was 1 200 μm · L , which was similar to that of primary cardiac myocytes. Conclusion; H2O2 has similar oxidative damage effect on H9c2 cells and primary cardiac myocytes.%目的:考察过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞损伤作川的相似性.方法:选用H9c2心肌细胞与新生大鼠原代心肌细胞,应用MTT法测定不同浓度过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞活性的影响,观察两株细胞对过氧化氢损伤的敏感性.结果:600～1 600μ mol/L的过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞所造成的氧化损伤均具有浓度依赖性,1 200 μmol/L的过氧化氢使H9c2心肌细胞的存活率降低40％～60％ (P<0.01),表现出与原代心肌细胞相似的H2O2损伤敏感性(P>0.05).结论:H9c2心肌细胞与原代心肌细胞对过氧化氢氧化损伤具有相似的作用和浓度依赖性.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2012(037)003【总页数】3页(P225-227)【关键词】过氧化氢;氧化损伤;细胞,培养的;H9c2细胞【作者】李月婷;刘影;王静娴;李靖;肖婷婷;王爱民;廖尚高;王永林【作者单位】贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004;贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004;贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004;贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004;贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004;贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004;贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004;贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R363建立体外心肌细胞氧化损伤模型已成为研究心肌缺血再灌注损伤的常用实验方法，但由于分离培养原代心肌细胞的技术要求较高，且心肌细胞属于终末分化细胞，每次实验需要重新分离心肌组织，批间差异大，重复性不好［1］。
黄精多糖的功效及研究进展
1632019.09中医中药<<下转164页●基金项目：2018年国家级大学生创新创业训练项目（编号：201810199015）。
黄精多糖的功效及研究进展王佳鑫 沙昕宇 石佳莹 蔡雨良 张海瑞 甄慧燕长春中医药大学 吉林省长春市 130117【摘 要】黄精是百合科多年生草本植物，是我国传统且普遍应用的中药材，能养气滋阴、强肾健脾、养肺润肺。
研究发现，黄精中的有效成分黄精多糖具有增强免疫力与抗肿瘤、抗菌和抗炎、抗衰老、抗病毒、降血糖血脂及动脉粥样硬化、改善学习和增强记忆力功能、抑制骨质疏松、抗抑郁症和保护心肌细胞等作用。
由于黄精多糖功效多样性，近年来对其功效的研究热度只增不减。
本文总结大量相关资料，对其功效及研究进展进行了详细论述。
【关键词】黄精多糖；功效；研究进展黄精又名鸡头黄精、黄鸡菜、笔筒菜、爪子参、老虎姜、鸡爪参等，为黄精属植物。
研究发现，黄精中的有效成分黄精多糖具有增强免疫力与抗肿瘤、抗菌和抗炎、抗衰老、抗病毒、降血糖血脂及动脉粥样硬化、改善学习和增强记忆力功能、抑制骨质疏松、抗抑郁症和保护心肌细胞等作用。
由于黄精多糖功效多样性，近年来对其功效的研究热度只增不减。
本文总结大量相关资料，对其功效及研究进展进行了详细论述。
1 增强免疫力与抗肿瘤作用黄精多糖可以通过增强动物的免疫功能杀死肿瘤细胞。
黄精多糖可以增加小鼠脾和胸腺的功能，提升巨噬细胞吞噬指数和血清溶血素质量的质量，表明黄精多糖对免疫抑制的大鼠免疫力一定的影响[1]。
江华等人[2]研究了黄精多糖对移植瘤中的Hep 和EAC 的活性的影响，对比于空白对照组，黄精多糖不同剂量组的瘤质量均小于对照组。
张峰等人[3]用黄精多糖治疗小鼠肉瘤S 180腹水肿瘤和肝癌H 22实体瘤，发现黄精多糖具有显着的抗肿瘤作用，对腹水肿瘤和实体瘤均有抑制效果。
2 抗菌和抗炎作用炎症是身体对刺激的防御反应，但炎症也会对身体造成伤害，并且还可能伴有细菌感染。
人参皂苷基本成分对细胞保护作用研究进展-高彦宇
57第22卷 第11期 2020 年 11 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 22 No. 11 Nov .，2020人参皂苷基本成分对细胞保护作用研究进展高彦宇，沈芳玲，李永鑫，李文慧，李冀（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150000）基金项目：国家自然科学基金（81874426）作者简介：高彦宇（1963-），男，黑龙江哈尔滨人，副研究员，博士，研究方向：中药及方剂药效物质基础研究。
通讯作者：李冀（1960-），男，黑龙江哈尔滨人，教授、主任医师，博士，研究方向：方剂配伍规律及药效物质基础研究。
摘要：人参皂苷是人参的主要活性成分，有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、抑制氧化应激、抗炎、增加细胞活力等多种药理作用，可对神经细胞、心肌细胞、肝细胞、肺上皮细胞等多种细胞发挥保护作用。
该文查阅了国内外近5年人参皂苷的相关文献，将人参皂苷对细胞的保护作用进行综述。
关键词：人参皂苷，药理作用，细胞保护中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2020) 11- 0057- 04Research Progress on the Protective Effect of Ginsenosides on CellsGAO Yanyu，SHEN Fangling，LI Yongxin，LI Wenhui，LI Ji（Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150000，Heilonhjiang，China）Abstract：Ginsenoside is the main active component of Panax ginseng . It has many pharmacologicaleffects，such as promoting cell proliferation，inhibiting cell apoptosis，inhibiting oxidative stress，anti-inflammatory，increasing cell activity and so on. It can play a protective role on nerve cells，cardiac myocytes，liver cells，lung epithelial cells and so on. In this paper，the related literature of ginsenoside at home and abroad in recent five years was reviewed，and the protective effect of ginsenoside on cells was summarized.Keywords：ginsenoside；pharmacological effects；cell protection 人参皂苷是人参的主要活性成分，人参皂苷都含有由30个碳原子排列成4个环的甾烷类固醇核，是由糖和苷元相连而成的糖苷类化合物，根据其糖苷基架构的不同而被分为达玛烷型和齐墩果烷型。
2021双氧水预处理对氧化损伤的H9c2心肌细胞的保护机制范文1
2021双氧水预处理对氧化损伤的H9c2心肌细胞的保护机制范文 前言 心肌缺血再灌注损伤（Myocardialischemia reperfusion in-jury，MIRI）是指心肌缺血/缺氧一段时间，当重新恢复血流或血氧供应后，心肌细胞功能代谢障碍及结构破坏反而较缺血/缺氧时进一步加重、心功能进一步恶化的病理生理过程。
细胞内既有活性氧等氧化系统，也存在清除活性氧的抗氧化酶系统，如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等。
在生理状态下，体内的氧化系统和抗氧化系统处于动态平衡状态，不会导致损伤。
然而，缺血再灌注阶段会产生大量活性氧，而机体又无法完全清除，这些过量的活性氧就会引起一些重要的生物大分子的氧化损伤，从而诱导心肌细胞凋亡和坏死。
目前认为活性氧介导的氧化损伤是引起心肌缺血再灌注损伤的重要原因。
然而近年来大量研究表明，H2O2预处理能保护PC12细胞抵抗氧化损伤，抑制氧化损伤导致的细胞凋亡。
Guo等研究还发现活性氧可作为抗氧化酶第二信使激活级联反应，增加SOD、CAT等抗氧化酶活性，清除活性氧，从而起到抗氧化损伤的保护作用。
对于氧化损伤的H9c2心肌细胞，目前尚不清楚低浓度H2O2预处理是否具有保护作用以及能否上调抗氧化酶活性。
本研究通过构建大鼠H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型，给予低浓度H2O2预处理，以探讨低浓度H2O2预处理对氧化损伤的H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。
目前，对于缺血再灌注损伤的防治尚无有效办法，本研究在不改变损伤因子性质的情况下，通过适宜浓度的活性氧进行预处理，激活机体自身的抗氧化防护机制，从而加强细胞对氧化损伤的抵抗能力，这种主动性抵抗作用将为临床防治缺血再灌注损伤提供了一种新的思路。
1、材料与方法 1.1材料 大鼠心肌细胞系（H9c2）购自中国科学院细胞中心。
高糖DMEM为GIBCO公司产品，胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司，胰蛋白酶、Hoechst33258购自Sigma 公司，CCK8试剂盒购自江苏碧云天公司，超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒为南京建成生物工程研究所产品，An-nexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒购自奥地利Bender MedSys-tems公司，其他试剂均为国产分析纯试剂。
缺氧、复氧条件下低氧反应元件(HRE)对心肌细胞转染hVEGF165基因表达的调控作用
缺氧、复氧条件下低氧反应元件(HRE)对心肌细胞转染hVEGF165基因表达的调控作用董红燕;张中明;闫英群【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2006(022)009【摘要】目的:探讨缺氧、复氧条件下,低氧反应元件(HRE)作为氧条件基因表达控制开关,对心肌细胞转染rAAV-HRE9-hVEGF165基因表达的调控作用.方法:分离新生SD大鼠心肌细胞,采用无血清培养,将在HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞.实验共分为8组:Ⅰ组(空白对照组):常氧培养24 h(氧浓度21%);Ⅱ组(缺氧对照组):常氧培养16 h,缺氧8 h(氧浓度1%);Ⅲ组(转基因对照组):常氧培养24 h;Ⅳ组(转基因缺氧1组):转基因后缺氧8 h;Ⅴ组(复氧1组):常氧培养16 h,缺氧8 h、复氧4 h;Ⅵ组(复氧2组):常氧培养16 h,缺氧8 h、复氧8 h;Ⅶ组(复氧3组):常氧培养16 h,缺氧8 h、复氧12 h;Ⅷ组(转基因缺氧2组):转基因后常氧培养16 h,缺氧20 h.ELISA法测定培养液VEGF蛋白含量;细胞免疫荧光染色及RT-PCR分别检测细胞内VEGF蛋白及VEGF165 mRNA的表达.结果:95%的培养心肌细胞可见自律搏动,cTn-Ⅰ染色阳性率为86%;病毒转染率约为87%.Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ组培养液中VEGF蛋白含量显著高于其它各组(P＜0.01),细胞免疫荧光VEGF蛋白染色呈阳性;RT-PCR测定显示,Ⅳ、Ⅴ及Ⅷ组可见484 bp目的条带.结论:rAAV-HRE9-hVEGF165可成功地转染原代培养心肌细胞,在缺氧环境下,受HRE 的调控,VEGF165 mRNA及VEGF165蛋白可有效表达,而在常氧状态下,目的基因的表达及蛋白合成即行中止.【总页数】5页(P1712-1716)【作者】董红燕;张中明;闫英群【作者单位】徐州医学院神经生物学研究中心,江苏,徐州,221002;徐州医学院附属医院胸心外科,江苏,徐州,221002;徐州医学院附属医院胸心外科,江苏,徐州,221002【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.蒺藜总皂苷对缺氧复氧心肌细胞NF-κB核移位及其调控下游基因表达的影响 [J], 殷惠军;王显刚;史大卓2.低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用 [J], 姜桢;曹永梅;曾真;顾玉春;季莹莹;赵宇鹏;李颖川3.低氧反应元件调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对新生血管的影响 [J], 董红燕;王强;张中明;袁延亮;张宜乾;徐夏红4.低氧反应元件对缺血心肌转导hVEGF165基因表达的调控 [J], 姜波;张中明;董红燕5.雷诺嗪预处理对缺氧/复氧损伤H9C2心肌细胞自噬的调控及对心肌细胞的保护作用 [J], 赵茜;刘明远;李萌;栾海艳;杨玉;马春艳;张宝成;赵锦程;杨光远因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
右美托咪定减轻氧化应激改善H9C2细胞缺氧／复氧损伤
右美托咪定减轻氧化应激改善H9C2细胞缺氧／复氧损伤目的探讨右美托咪定减轻氧化应激改善H9C2细胞缺氧/复氧损伤的作用。
方法H9C2心肌细胞随机分为三组，正常对照组（Control）、缺氧/复氧组（H/R）、Dex（5 μmol/L）干预H/R组。
Dex干预H/R组先用Dex预处理6 h后，再经缺氧/复氧处理。
检测各组细胞培养基中LDH的含量，CCK-8法检测各组H9C2心肌细胞的存活率，试劑盒检测caspase-3活性，试剂盒检测MDA的含量和SOD 活性。
结果与Control组相比，H/R组细胞活力降低，培养基中LDH含量增加，caspase-3活性增加，MDA含量升高而SOD活性降低，统计学意义显著（P＜0.01）；Dex预处理提高H/R处理后的细胞活力，减少LDH含量和caspase-3活性，降低MDA含量，增加SOD活性，统计学意义显著（P＜0.01）。
结论Dex可通过减轻氧化应激改善H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤。
Abstract：Objective To investigate the effect of dexmedetomidine on oxidative stress and improvement of hypoxia/reoxygenation injury in H9C2 cells.Methods H9C2 cardiomyocytes were randomly divided into three groups.The normal control group（Control），hypoxia/reoxygenation group（H/R），and Dex（5μmol/L）were used to intervene in the H/R group.Dex intervention in the H/R group was pretreated with Dex for 6 h and then treated with hypoxia/reoxygenation.The LDH content in the cell culture medium was detected. The survival rate of H9C2 cardiomyocytes in each group was detected by CCK-8 method.The caspase-3 activity was detected in the kit，and the MDA content and SOD activity were detected by the kit.Results Compared with the Control group，the cell viability in the H/R group decreased，the LDH content in the medium increased，the caspase-3 activity increased，the MDA content increased and the SOD activity decreased，statistically significant（P＜0.01）；Dex pretreatment improved cell viability after H/R treatment，decreased LDH content and caspase-3 activity，decreased MDA content，and increased SOD activity，with statistical significance（P＜0.01）.Conclusion Dex can alleviate hypoxia/reoxygenation injury of H9C2 cardiomyocytes by reducing oxidative stress.Key words：Dexmedetomidine；Oxidative stress；Hypoxia/Reoxygenation；H9C2缺血性心肌病（Ischemic cardiomyopathy，ICM）是世界范围内具有高致残率和致死率的疾病，是目前威胁人类生命健康的一类主要疾病[1]。
miR-93-5p对缺氧
miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞凋亡的作用机制研究刘斌,刘娜,曹广林摘要目的:探讨miR-93-5p对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用机制㊂方法:取对数生长期的H9c2心肌细胞用于实验,将细胞分为control组㊁H/R组㊁miR-NC组㊁miR-93-5p mimic组㊂miR-NC组转染miR-93-5p阴性对照片段50μmol/L,miR-93-5p mimic 组转染miR-93-5p模拟物㊂24h后,除control组外,H/R组㊁miR-NC组㊁miR-93-5p mimic组建立H/R模型㊂2h后采用聚合酶链式反应(PCR)法检测心肌细胞中miR-93-5p表达水平,噻唑蓝(MTT)比色法检测心肌细胞存活率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,二硫双硝基苯甲酸定量法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)㊁白细胞介素-1β(IL-1β)㊁白细胞介素-6(IL-6)含量,蛋白免疫印迹法检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)㊁B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)㊁Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达㊂结果:与control组比较,H/R组miR-93-5p表达㊁心肌细胞存活率㊁SOD和GSH-Px活性㊁Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率㊁MDA㊁TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R组和miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组miR-93-5p表达㊁心肌细胞存活率㊁SOD和GSH-Px活性㊁Bcl-2蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率㊁MDA㊁TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂结论:miR-93-5p通过降低H/R心肌细胞的炎症和氧化应激水平,发挥抗细胞凋亡作用㊂关键词心肌细胞凋亡;miR-93-5p;缺氧/复氧;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.21.011随着生活方式的改变和生活节奏的加快,心血管疾病的发生率逐渐趋于年轻化㊂心肌缺血再灌注损伤造成的心肌细胞凋亡和线粒体功能障碍是心肌缺血再灌注病人发生心力衰竭的主要原因[1]㊂研究表明,降低炎症反应和氧化应激水平可明显减少心肌细胞凋亡,改善线粒体功能障碍[2]㊂miRNA是一种单链非编码RNA,研究发现,多种miRNA参与调节心肌缺血再灌注损伤[3-5],miRNA-93-5p对脓毒症造成的心肌损伤以及糖尿病肾病等具有保护作用[6-7]㊂本研究旨在探讨miR-93-5p在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞中的作用㊂1材料与方法1.1细胞系大鼠H9c2心肌细胞购自中国科学院上海细胞生物学研究所㊂1.2试剂及仪器超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)㊁丙二醛(malondialdehyde,MDA)㊁谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒购自南京建成生物工程研究所;白细胞介素(interleukin,IL)-6㊁基金项目河北省2020年度医学科学研究课题计划(No.20200283)作者单位沧州市人民医院(河北沧州061000),E-mail:luxtqg@163. com引用信息刘斌,刘娜,曹广林.miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞凋亡的作用机制研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(21): 3931-3935.IL-1β㊁肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自武汉博士德生物有限公司;miR-93-5p阴性对照片段以及miR-93-5p mimic购自上海吉玛制药技术有限公司;miR-93-5p和U6的聚合酶链式反应(PCR)引物序列购自中国广州锐博公司;兔抗大鼠活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (cysteinyl aspartate specificproteinase-3,Caspase-3)㊁B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)㊁Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)㊁甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)一抗购自英国Abcam公司;辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔二抗购自美国Sigma公司;DMEM培养基购自北京华美试剂公司;超净工作台购自沈阳市医疗器械二厂;培养箱购自美国NAPCO公司㊂1.3分组及给药将H9c2心肌细胞接种到含有10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养,置于37ħ5%CO2的恒温培养箱中孵育,当细胞融合度达到90%时,进行传代㊂取第4代对数生长期的细胞用于实验㊂将细胞分为对照组(control组)㊁H/R组㊁miR-93-5p阴性对照组(miR-NC组)㊁miR-93-5p模拟物组(miR-93-5p mimic 组)㊂miR-NC组转染miR-93-5p阴性对照片段50μmol/L,miR-93-5p mimic组转染miR-93-5p模拟物50μmol/L㊂24h后,除control组外,其余3组建立H/R 模型㊂首先,将不含血清和糖的DMEM培养基用混合气体(95%N2和5%CO2)平衡2h制备饱和缺氧液,将心肌细胞中原有的培养液弃掉,加入饱和过的缺氧液,并放置在37ħ含有95%N2和5%CO2的培养箱中培养10h,建立缺氧模型㊂10h后,弃掉缺氧液,加入含糖和10%胎牛血清的DMEM培养基,置于37ħ含有95%O2和5%CO2的培养箱中,培养2h,建立复氧模型㊂control组心肌细胞置于含糖和10%胎牛血清的DMEM培养基中培养,置于37ħ含有95%O2和5%CO2的培养箱中孵育㊂1.4实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定miR-93-5p 的表达水平复氧结束后,弃去细胞培养液,磷酸缓冲盐溶液(PBS)清洗2次,Trizol试剂完全裂解细胞,细胞裂解液用氯仿抽提,异丙醇沉淀后,收集总RNA㊂紫外分光光度计鉴定RNA浓度和纯度㊂取1μL样品进行反转录,荧光定量PCR仪进行扩增,反应条件为95ħ2min; 95ħ30s;58ħ40s;共40个循环㊂所有样品均进行5次重复操作㊂以U6作为内参,采用2-әәCt法计算miR-93-5p的相对表达水平㊂miR-93-5p的引物序列见表1㊂表1基因及引物序列基因引物序列miR-93-5p正向:5'-ATCTGCCGTTGATGCTGA-3'反向:5'-CTGGCTATCATCGCGTGC-3'U6正向:5'-CTGACCTAGCGTGAGCTA-3'反向:5'-CGATGGACCAGTAGCGCT-3'1.5噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率各组心肌细胞复氧结束后,MTT比色法检测心肌细胞存活率㊂将细胞制成细胞悬液,接种于96孔板中,每孔3000个细胞,每孔中再加入5mg/mL的MTT 溶液20μL,37ħ培养箱中孵育4h㊂弃去上层清液后,每孔再加入200μL的二甲基亚砜,振荡孵育10 min后,放置在酶标仪上,设定波长为490nm,测定A 值,参照试剂盒说明书指定标准曲线,根据标准曲线计算心肌细胞存活率㊂细胞存活率=(实验组A值/对照组A值)ˑ100%㊂1.6流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率各组心肌细胞复氧结束后,胰酶消化细胞,PBS 洗涤重悬,加入500μL缓冲液混匀,取100μL细胞悬液加入膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)孵育10min,然后加入碘化丙啶(PI)孵育15min㊂使用流式细胞仪和Flowjo软件分析心肌细胞凋亡率㊂1.7氧化应激损伤指标检测各组心肌细胞复氧结束后,弃掉细胞培养基,收集细胞,冰浴中用超声细胞粉碎仪处理30s,之后,4ħ下3500r/min离心10min,收集上清㊂根据各试剂盒说明书,用紫外-可见分光光度计平行测定各组细胞裂解液中SOD㊁GSH-Px活性和MDA含量㊂黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,二硫双硝基苯甲酸定量法检测GSH-Px活性㊂1.8ELISA检测炎性因子TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6表达各组心肌细胞复氧结束后,收集上清液检测炎性因子TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6表达㊂首先,用包被液稀释包被抗原,最适浓度为5~20μg/mL,450nm波长处测定A值,根据说明书建立标准曲线,由标准曲线计算含量㊂反应板每孔各加入0.3mL,37ħ水浴2h,弃掉包被液,加入洗涤缓冲液洗涤㊂每孔加入经稀释过的待测上清液0.2mL,37ħ水浴2h㊂洗涤后,每孔加入稀释过的酶结合物0.2μL,37ħ水浴2h㊂洗涤后,加入邻苯二胺溶液0.2μL,室温静置30min,每孔加入0.05μL终止液㊂酶标仪波长调至490nm处,测量A值㊂1.9蛋白免疫印迹法检测心肌细胞中蛋白表达各组心肌细胞复氧结束后,弃去上清液,预冷过的PBS洗涤各组细胞,各洗3次,加入50μL的RIPA裂解液,置于冰上30min,4ħ下12000r/min离心10 min,收集上清液,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白浓度㊂按照实验分组依次加入各蛋白样品20μL,120V恒压电泳,直至溴酚蓝达到凝胶底部,结束电泳㊂采用聚偏二氟乙烯(PVDF)膜,0.3A恒流湿转2h,室温封闭1h,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)㊁Bcl-2㊁Bax㊁GAPDH一抗4ħ孵育过夜,二抗(1ʒ5000)室温孵育2h,增强化学发光试剂(enhanced chemiluminescence, ECL)法显色,Image J软件分析蛋白条带灰度值,以目的蛋白条带灰度值与GAPDH蛋白条带灰度值的比值为目的蛋白的相对表达量㊂1.10统计学处理采用SPSS21.0软件进行统计学分析㊂符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1各组心肌细胞中miR-93-5p表达比较各组miR-93-5p表达比较,差异有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组miR-93-5p表达降低(P<0.05);与H/R组比较,miR-93-5p mimic 组miR-93-5p表达升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组miR-93-5p表达升高(P<0.05)㊂详见表2㊂表2各组心肌细胞中miR-93-5p表达比较(xʃs)组别样本量miR-93-5p control组516.63ʃ4.22H/R组58.74ʃ3.17①miR-NC组59.16ʃ4.32①miR-93-5p mimic组525.30ʃ3.74①②③注:F=20.056,P<0.001㊂与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.2各组心肌细胞存活率比较各组心肌细胞存活率比较,差异有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组心肌细胞存活率降低(P<0.05);与H/R组比较,miR-93-5p mimic 组心肌细胞存活率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组心肌细胞存活率升高(P<0.05)㊂详见表3㊂表3各组心肌细胞存活率比较(xʃs)单位:%组别样本量心肌细胞存活率control组5100.00H/R组547.62ʃ5.44①miR-NC组550.18ʃ6.25①miR-93-5p mimic组586.47ʃ6.51①②③注:F=98.128,P<0.001㊂与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.3各组心肌细胞凋亡率比较各组心肌细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组心肌细胞凋亡率升高(P<0.05);与H/R组比较,miR-93-5p mimic 组心肌细胞凋亡率降低(P<0.05);与miR-NC组比较, miR-93-5p mimic组心肌细胞凋亡率降低(P<0.05)㊂详图1㊁表4㊂图1流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡情况表4各组心肌细胞凋亡率比较(xʃs)单位:%组别样本量心肌细胞凋亡率control组5 2.68ʃ0.33H/R组525.49ʃ0.54①miR-NC组524.83ʃ0.57①miR-93-5p mimic组510.50ʃ0.48①②③注:F=2620.066,P<0.001㊂与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.4各组氧化应激指标SOD㊁MDA㊁GSH-Px水平比较各组SOD㊁GSH-Px㊁MDA水平比较,差异均有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组SOD㊁GSH-Px水平降低,MDA水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R组㊁miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组SOD㊁GSH-Px水平升高,MDA水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂详见表5㊂表5各组氧化应激指标SOD㊁MDA㊁GSH-Px表达比较(xʃs)组别样本量SOD(U/L)MDA(nmol/L)GSH-Px(U/L) control组5173.48ʃ23.6646.77ʃ8.29163.42ʃ20.38 H/R组593.79ʃ22.43①112.58ʃ9.47①86.47ʃ18.29①miR-NC组594.68ʃ21.54①110.84ʃ10.02①85.62ʃ18.14①miR-93-5p mimic组5132.29ʃ25.37①②③83.17ʃ8.06①②③128.75ʃ21.34①②③F值13.17258.65518.276P<0.001<0.001<0.001注:与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.5各组炎性因子TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平比较各组TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平比较,差异均有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平升高(P<0.05);与H/R组㊁miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平降低(P< 0.05)㊂详见表6㊂表6各组炎性因子TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平比较(xʃs)单位:ng/L 组别样本量TNF-αIL-1βIL-6 control组556.27ʃ8.2448.24ʃ6.7343.90ʃ6.47H/R组5147.62ʃ9.77①122.75ʃ8.66①135.64ʃ7.45①miR-NC组5142.58ʃ9.64①120.38ʃ7.47①132.18ʃ7.22①miR-93-5p mimic组593.80ʃ8.51①②③79.63ʃ6.82①②③88.36ʃ8.64①②③F值240.456114.305166.218P<0.001<0.001<0.001注:与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.6各组心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bcl-2㊁Bax 蛋白表达比较各组心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bcl-2㊁Bax 蛋白表达比较,差异均有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组Cleaved Caspase-3㊁Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R组㊁miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组Cleaved Caspase-3㊁Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂详见表7㊁图2㊂表7各组心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bcl-2㊁Bax蛋白表达水平比较(xʃs)组别样本量Cleaved Caspase-3蛋白Bcl-2蛋白Bax蛋白control组50.25ʃ0.03 1.07ʃ0.050.55ʃ0.03 H/R组50.94ʃ0.05①0.54ʃ0.04① 1.23ʃ0.05①miR-NC组50.88ʃ0.04①0.58ʃ0.04① 1.18ʃ0.05①miR-93-5p mimic组50.49ʃ0.04①②③0.95ʃ0.05①②③0.85ʃ0.05①②③F值325.455171.138239.107P<0.001<0.001<0.001注:与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂图2各组心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bcl-2㊁Bax蛋白表达条带图(A为control组;B为H/R组;C为miR-NC组;D为miR-93-5p mimic组)3讨论缺血再灌注时心肌细胞由长时间的缺血缺氧状态到吸入大量的氧气和营养物质,导致线粒体功能损伤,活性氧过度产生,氧化应激水平升高,诱导心肌细胞凋亡㊂心肌细胞损伤触发炎症反应,大量炎性因子释放,进一步加重心肌细胞凋亡㊂过度的炎症反应和氧化应激水平引起细胞凋亡㊁纤维化和细胞自噬[8-11],抑制炎症和氧化应激水平可减少心肌缺血再灌注或H/R诱导的心肌细胞凋亡[12]㊂既往研究表明,miR-93-5p通过调节Toll样受体4(TLR4)/髓分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路抑制脂多糖造成的炎症反应,改善急性肺损伤[13]㊂本研究通过建立H/R心肌细胞模型,探讨miR-93-5p对H/R造成的心肌细胞损伤的影响㊂SOD和GSH-Px是广泛存在于细胞内的一类抗氧化酶,线粒体损伤时,过度产生活性氧,使氧化应激水平升高,而GSH-Px可有效清除活性氧,保护线粒体结构和功能完整㊂SOD具有清除超氧阴离子的作用,保护细胞免受损伤,其活性的高低间接反映机体清除氧自由基的能力[14],而MDA水平则间接反映氧自由基对细胞损伤的程度㊂心肌细胞损伤触发TNF-α的释放,进一步刺激炎性因子的分泌,如IL-1β㊁IL-6㊁黏附分子等,而促炎因子的大量分泌,会进一步加重心肌损伤㊂在本研究中,心肌缺血再灌注时,SOD和GSH-Px活性降低,MDA水平升高,炎性因子TNF-α㊁IL-1β和IL-6水平升高,由于活性氧和氧自由基清除受到阻碍,以及促炎因子大量释放,导致心肌细胞存活率降低㊁凋亡率升高㊂miR-93-5p参与调节多种生理过程,如高糖诱导的细胞增殖㊁迁移㊁纤维化及心肌细胞凋亡等[15-16]㊂为了探讨miR-93-5p对H/R造成的心肌细胞损伤是否具有保护作用,采用miR-93-5p mimic孵育心肌细胞后,建立H/R模型㊂实验结果显示,miR-93-5p 过表达增强SOD㊁GSH-Px活性,降低MDA以及炎性因子TNF-α㊁IL-1β和IL-6水平,心肌细胞存活率升高,凋亡率降低,表明,miR-93-5p通过降低氧化应激水平和炎症反应,改善H/R诱导的心肌细胞损伤㊂细胞凋亡受到促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的共同调控,两类凋亡蛋白失衡,导致细胞凋亡发生㊂Caspase 家族是一组半胱氨酸蛋白酶,在调节细胞凋亡的过程中发挥重要作用,其中Caspase-3位于凋亡级联反应的关键位置,是重要的凋亡蛋白酶㊂Bcl-2家族同样是调节细胞凋亡的重要家族,Bcl-2通过干扰细胞色素C 的释放,阻断Caspase蛋白酶的激活,抑制细胞凋亡㊂Bax作为Bcl-2家族重要的促凋亡蛋白,其表达水平与细胞凋亡密切相关㊂Bax是线粒体膜上离子通道的组成部分,可以使细胞色素C穿过线粒体膜,激活Caspase-3,促进细胞凋亡[17]㊂本实验通过蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白表达情况,H/R使心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低,miR-93-5p过表达使Cleaved Caspase-3㊁Bax 蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高㊂本实验结果表明,miR-93-5p通过调节凋亡相关蛋白表达,抑制细胞凋亡㊂综上所述,miR-93-5p可有效抑制H/R诱导的细胞凋亡,可能是通过调节凋亡相关蛋白表达,抑制炎症反应和降低氧化应激水平发挥作用,为临床治疗心肌缺血再灌注提供理论支持㊂参考文献:[1]LIAO C L,LIU Y,HUANG M Z,et al.Retraction note:myocardialischemia reperfusion injury is alleviated by curcumin-peptidehydrogel via upregulating autophagy and protectingmitochondrial function[J].Stem Cell Research&Therapy,2022,13(1):51.[2]LIU X,BIAN H,DOU Q L,et al.Ginkgetin alleviates inflammation,oxidative stress,and apoptosis induced by hypoxia/reoxygenationin H9c2cells via Caspase-3dependent pathway[J].BioMedResearch International,2020,2020:1928410.[3]CHENG N,LI L B,WU Y B,et al.microRNA-30e up-regulationalleviates myocardial ischemia-reperfusion injury and promotesventricular remodeling via SOX9repression[J].MolecularImmunology,2021,130:96-103.[4]ZHANG M,WANG J Y,LI L,et al.miR-506alleviates myocardialischemia-reperfusion injury via targeting PI3K/AKT[J].EuropeanReview for Medical and Pharmacological Sciences,2020,24(24):12896-12903.[5]CHENG H,YAN W.miR-433regulates myocardial ischemiareperfusion injury by targeting NDRG4via the PI3K/Akt pathway[J].Shock,2020,54(6):802-809.[6]SHAN B,LI J Y,LIU Y J,et al.LncRNA H19inhibits theprogression of sepsis-induced myocardial injury via regulation ofthe miR-93-5p/SORBS2axis[J].Inflammation,2021,44(1):344-357.[7]YANG J D,SHEN Y,YANG X,et al.Silencing of long noncodingRNA XIST protects against renal interstitial fibrosis in diabeticnephropathy via microRNA-93-5p-mediated inhibition of CDKN1A[J].American Journal of Physiology Renal Physiology,2019,317(5):F1350-F1358.[8]DU J X,WANG G J,LUO H Y,et al.JNK-IN-8treatment alleviateslipopolysaccharide-induced acute lung injury via suppression ofinflammation and oxidative stress regulated by JNK/NF-κBsignaling[J].Molecular Medicine Reports,2020,23(2):150. 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[10]LI Z,FENG H H,HAN L,et al.Chicoric acid ameliorateinflammation and oxidative stress in Lipopolysaccharide and d-galactosamine induced acute liver injury[J].Journal of Cellularand Molecular Medicine,2020,24(5):3022-3033.[11]YU P,MA S C,DAI X C,et al.Elabela alleviates myocardialischemia reperfusion-induced apoptosis,fibrosis andmitochondrial dysfunction through PI3K/AKT signaling[J].American Journal of Translational Research,2020,12(8):4467-4477.[12]LIANG H Q,LI F J,LI H X,et al.Overexpression of lncRNA HULCattenuates myocardial ischemia/reperfusion injury in rat modelsand apoptosis of hypoxia/reoxygenation cardiomyocytes viatargeting miR-377-5p through NLRP3/caspase-1/IL-1βsignalingpathway inhibition[J].Immunological Investigations,2021,50(8):925-938.[13]GAO H,XIAO D Q,GAO L B,et al.microRNA-93contributes to thesuppression of lung inflammatory responses in LPS-inducedacute lung injury in mice via the TLR4/MyD88/NF-κB signalingpathway[J].International Journal of Molecular Medicine,2020,46(2):561-570.[14]TIWARI M K,JENA N R,MISHRA P C.Mechanisms of scavengingsuperoxide,hydroxyl,nitrogen dioxide and methoxy radicals byallicin:catalytic role of superoxide dismutase in scavengingsuperoxide radical[J].Journal of Chemical Sciences,2018,130(8):1-17.[15]LI J Z,ZHAO Q,JIN X H,et al.Silencing of LncRNA PVT1inhibitsthe proliferation,migration and fibrosis of high glucose-inducedmouse mesangial cells via targeting microRNA-93-5p[J].Bioscience Reports,2020,40(5):BSR20194427.[16]LV J,ZHU Y,YAO S.LncRNAMORT is upregulated in myocardialinfarction and promotes the apoptosis of cardiomyocyte bydownregulating miR-93[J].BMC Cardiovasc Disord,2020,20(1):247.[17]CAMPBELL K J,TAIT S W G.Targeting Bcl-2regulated apoptosisin cancer[J].Open Biology,2018,8(5):180002.(收稿日期:2022-01-25)(本文编辑郭怀印)。
丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究
丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究刘莎莎;张赛;汤智;李玉冰;冯凯;刘湘【摘要】Objective To investigate the protective effect of salvianolic acid B (Sal B) on hypoxia-reoxygenation (H/R) induced injury in H9c2 cardiomyocytes. Methods The hypoxia-reoxygenation model of H9c2 cardiomyocytes was constructed. The relationship between the activity of Sal B and H9c2 was measured by MTT assay, and the protective effect of Sal B was determined. The following sets of experiments were performed: control group, Sal B group, model group (H/R group), H/R+Sal B group. The contents of lactic dehydrogenase (LDH), superoxide dismutase (SOD), malonaldehyde (MDA), glutathione per-oxidase (GSH-Px), catalase (CAT), reactive oxygen species (ROS) and Caspase-3 in all groups were determined. The effect of Sal B on Akt phosphorylation was tested with Western blotting, and LY294002 added as the control. Results Compared with the control group, LDH, MDA, ROS, and Caspase-3 levels in H/R group significantly increased (P<0.05) and SOD, GSH-Px, and CAT levels in H/R group significantly decreased (P<0.05). Compared with H/R group, Sal B significantly increased SOD, GSH-Px, and CAT levels and decreased LDH, MDA, ROS, and Caspase-3 levels. Western blotting results showed that: com-pared with the control group, Akt phosphorylation level in model group decreased significantly (P <0.01); comparedwith model group, Akt phosphorylation level in Sal B group increased significantly (P<0.01), whilethis effect could be blocked by LY294002 (P<0.01). Conclusion Sal B shows protective effect on H9c2 cadiomyocytes injury induced by H/R, which mechanism may be related with the PI3K/Akt signaling pathway.%目的观察丹酚酸B(Sal B)对H9c2心肌细胞缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法首先构建H9c2心肌细胞缺氧复氧模型,采用噻唑蓝(MTT)法研究丹酚酸B与H9c2心肌细胞活力的量效关系,确定丹酚酸B 的保护作用,给药方式为预给药.实验分为正常对照组、丹酚酸B组、模型组(H/R 组)、H/R+丹酚酸B组,分别检测各组乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧簇(ROS)以及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的含量变化.Western印迹检测添加丹酚酸B对Akt磷酸化的影响,添加Akt抑制剂LY294002加以比较.结果与正常对照组相比较,模型组LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px以及CAT含量水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,丹酚酸B能够显著提高SOD、GSH-Px以及CAT含量水平(P<0.05),显著降低LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平(P<0.05).Western印迹结果显示与正常对照组相比较,模型组Akt磷酸化水平显著降低(P<0.001),相对于模型组丹酚酸B能够显著提高Akt的磷酸化水平(P<0.01),而这种保护作用能被LY294002所阻断(P<0.01).结论丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,其机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K/Akt)通路相关.【期刊名称】《湖南中医药大学学报》【年(卷),期】2017(037)008【总页数】6页(P832-837)【关键词】丹酚酸B;H9c2心肌细胞;缺氧复氧;抗氧化;抗凋亡;磷脂酰肌醇3-激酶【作者】刘莎莎;张赛;汤智;李玉冰;冯凯;刘湘【作者单位】湘潭市中心医院,湖南湘潭 411100;湘潭市中医院,湖南湘潭 411100;湘潭市中医院,湖南湘潭 411100;大连市友谊医院,辽宁大连 116100;大连市口腔医院,辽宁大连 116021;湘潭市中心医院,湖南湘潭 411100【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R541.4缺血性心脏病（冠心病）是全世界范围内发病率及致死率最高的疾病之一，严重威胁人类的健康[1]。
SIRT3-FOXO1介导自噬在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤中的保护作用
细胞与分子生物学SIRT3-FOXO1介导自噬在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤中的保护作用王尚徐，林先和△摘要：目的探究沉默信息调节因子2相关酶类3（SIRT3）-叉头盒转录因子O1（FOXO1）通路介导自噬在心肌细胞缺血再灌注损伤中的作用。
方法慢病毒感染H9C2心肌细胞构建SIRT3过表达稳定株。
实验分4组：正常对照（NC）组、缺血再灌注（IR）组、SIRT3过表达+缺血再灌注（S+IR）组、SIRT3过表达+IR+SIRT3抑制剂（S+IR+3-TYP）组。
Western blot检测SIRT3、乙酰化FOXO1（Ac-FOXO1）、自噬标记蛋白LC3B、Beclin1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达；流式细胞分析仪检测细胞凋亡率；全自动生化仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平。
结果与NC组相比，IR组SIRT3表达降低，Ac-FOXO1表达升高，自噬标记蛋白LC3B、Beclin1表达升高，抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低，促凋亡蛋白Bax表达升高，LDH水平和细胞凋亡率升高（P＜0.05）。
与IR组相比较，S+IR组SIRT3表达升高，Ac-FOXO1表达降低，LC3B、Beclin1表达升高，Bcl-2表达升高，Bax表达降低，LDH水平和细胞凋亡率降低（P＜0.05）；加入SIRT3抑制剂3-TYP后，与S+IR组相比，SIRT3表达水平无明显变化，但Ac-FOXO1表达升高，LC3B、Beclin1表达降低，Bcl-2表达降低，Bax表达升高，LDH水平和细胞凋亡率升高（P＜0.05）。
结论SIRT3-FOXO1通路激活可提高H9C2心肌细胞自噬水平，对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。
关键词：肌细胞，心脏；再灌注损伤；自噬；细胞凋亡；叉头框蛋白O1；沉默信息调节因子2相关酶类3；H9C2细胞中图分类号：R542.2文献标志码：A DOI：10.11958/20211124The protective effect of SIRT3-FOXO1-mediated autophagy on ischemia-reperfusioninjury of H9C2cellsWANG Shang-xu,LIN Xian-he△Department of Cardiovascular Medicine,the First Affiliated Hospital of Anhui Medical University,Hefei230032,China△Corresponding Author E-mail:******************Abstract:Objective To investigate the role of silent mating type information regulator2homolog3(SIRT3)-forkhead box O1(FOXO1)pathway-mediated autophagy in myocardial ischemia-reperfusion(IR)injury.Methods SIRT3 overexpression stable strain was constructed by lentivirus infection of H9C2cells.The cells were divided into four groups: the normal control(NC)group,the ischemia-reperfusion(IR)group,the SIRT3overexpression+IR(S+IR)group and the SIRT3overexpression+IR+SIRT3inhibitor(S+IR+3-TYP)group.The expressions of SIRT3,Ac-FOXO1,autophagy labeled protein LC3B,Beclin1and apoptotic proteins Bcl-2and Bax were detected by Western blot assay.The apoptosis rate was detected by flow cytometry.The level of lactate dehydrogenase(LDH)in the supernatant of cell culture was determined by automatic biochemical analyzer.Results Compared with the NC group,the expression of SIRT3was decreased,Ac-FOXO1was increased,the expressions of autophagy related proteins Beclin1and LC3B were increased,the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2was decreased,the expression of pro-apoptotic protein Bax was increased,LDH release and cell apoptosis rate were increased in the IR group(P＜0.05).Compared with the IR group,the expression of SIRT3increased, Beclin1,LC3B and Bcl-2were increased,the expressions of Ac-FOXO1,pro-apoptotic protein Bax were decreased,LDH release and cell apoptosis rate were decreased in the S+IR group(P＜0.05).After adding SIRT3inhibitor3-TYP,there was no significant change in SIRT3expression compared with that of the S+IR group,but the expression of Ac-FOXO1was increased,the expressions of Beclin1and LC3B were decreased,the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2was decreased,the expression of pro-apoptotic protein Bax was increased,LDH release and cell apoptosis rate were increased (P＜0.05).Conclusion The activation of SIRT3-FOXO1pathway can increase autophagy level of H9C2cells,and has a 基金项目：安徽省自然科学基金资助项目（2008085MH239）作者单位：安徽医科大学第一附属医院心血管内科（邮编230032）作者简介：王尚徐（1996），女，硕士在读，主要从事冠心病相关基础和临床研究。
线粒体自噬与疾病
线粒体自噬与疾病王培;付宇【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2018(039)007【总页数】5页(P853-857)【关键词】自噬;线粒体;疾病【作者】王培;付宇【作者单位】华北理工大学医学实验研究中心,河北唐山 063210;华北理工大学医学实验研究中心,河北唐山 063210【正文语种】中文【中图分类】R329.25线粒体是哺乳动物细胞内重要的“发动机”，由4种蛋白酶复合体组成的氧化呼吸链是生物转化和能量供应过程中重要的细胞器。
线粒体自噬在细胞生长发育中具有重要作用，线粒体自噬基因缺失[1]、溶酶体功能破坏[2]、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)[3]和线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)[4]等均参与线粒体自噬过程。
线粒体自噬发生异常与人类各种疾病有直接或间接联系。
1 自噬的分类自噬是一种高度保守的自我消化降解过程，能够维持细胞内环境的稳定，是细胞生存的重要生理过程，广泛存在于真核细胞内[5]。
研究表明，在心肌缺血过程中，自噬水平明显升高[6]，内质网膜包裹异常的蛋白质及细胞器等融合为自噬体，与溶酶体结合形成自噬溶酶体，降解其内容物，维持心肌细胞内环境稳态。
由内质网膜包裹变性坏死的细胞质和可溶性蛋白等待降解的物质形成自噬体，进而与溶酶体融合并降解其内容物的过程称为巨自噬。
微自噬是指细胞内的液泡内膜或溶酶体以内陷、分隔和突出等方式降解底物的过程。
分子伴侣介导的自噬不需底物自噬体的形成且具有高度的选择性，在其介导下，底物转移到溶酶体腔内进行降解。
分子伴侣介导的自噬只能清除可溶性蛋白，能使未折叠蛋白直接跨膜易位而不涉及膜重排。
研究表明，自噬参与细胞氧化应激和缺血/再灌注等过程[7]。
2 线粒体自噬损伤线粒体利用自噬机制选择性清除受损的蛋白质和细胞器，维持细胞内环境稳定，该过程被称为线粒体自噬。
瓜蒌皮抗缺氧作用的研究
瓜蒌皮抗缺氧作用的研究
邵春丽;王世久;王进;李居平
【期刊名称】《沈阳药科大学学报》
【年(卷),期】1998(15)1
【摘要】实验结果显示，瓜蒌皮提取液（ＥＰＴ）腹腔注射４０ｇ·ｋｇ－１能明显延长常压缺氧、组织缺氧、特异性心肌缺氧小鼠的存活时间，延长率分别为１４５％，２．７９％，１１０．７％，使减压缺氧小鼠的存活率达８５％．表明瓜蒌皮确能增强整体动物的抗缺氧能力．
【总页数】3页(P38-40)
【关键词】瓜蒌皮;抗缺氧作用;心肌缺血
【作者】邵春丽;王世久;王进;李居平
【作者单位】沈阳药科大学药学系
【正文语种】中文
【中图分类】R541.405;R965
【相关文献】
1.EGCG在不同缺氧状况下抗缺氧作用的实验研究 [J], 汪晨净;裴淑艳;张倪;杨少轩
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不同缺氧复氧损伤程度对H9c2心肌细胞自噬的影响
黄小玲;唐轶洋;钟敏;赵高峰
【期刊名称】《实用医学杂志》
【年(卷),期】2018(034)013
【摘要】目的观察不同缺氧复氧(H/R)损伤程度对H9c2大鼠心肌细胞自噬及细胞存活率的影响.方法缺氧时将H9c2大鼠心肌细胞置于缺氧培养箱分别以0.5％胎牛血清(FBS)复合高糖(4.5 g/L)DMEM、无糖培养基、磷酸盐缓冲液(PBS)为缺氧液培养3h后置换完全培养基置于正常培养箱中培养3 h;取复氧后心肌细
胞,MTT法检测各组心肌细胞存活率,MDC荧光染色后流式细胞仪检测心肌细胞自噬率,实时荧光定量PCR法检测细胞内自噬相关基因5(Atg5)mRNA的表达水平.结果与对照(CON)组相比,各H/R模型组细胞存活率均降低(P<0.05),且0.5％FBS 复合高糖DMEM、无糖培养基、PBS处理的H/R心肌细胞存活率逐渐下降;流式细胞仪与实时荧光定量PCR的结果显示,与对照CON组相比各H/R模型组心肌细胞自噬率与Atg5 mRNA的表达差异均有统计学意义(均P<0.05),且0.5％FBS复合高糖DMEM、无糖培养基、PBS处理的H/R心肌细胞自噬率与Atg5 mRNA 的表达均逐渐下降,其中0.5％FBS复合高糖DMEM、无糖培养基处理的相对CON 组是增加的,PBS处理的则是下降的.结论利用缺氧培养箱可以造成H9c2大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤,细胞适度缺氧复氧可以激活细胞自噬,但细胞过分缺氧反而抑制自噬.
【总页数】4页(P2165-2168)
【作者】黄小玲;唐轶洋;钟敏;赵高峰
【作者单位】广州中医药大学第二附属医院麻醉科广州 510006;广州中医药大学第二附属医院麻醉科广州 510006;广州中医药大学第二附属医院麻醉科广州510006;广州中医药大学第二附属医院麻醉科广州 510006
【正文语种】中文
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