常用pH缓冲液配置方法及注意事项

常用pH缓冲溶液的配制和pH值

一、常用溶液的配制

（一）溶液配制注意事项

1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。

2．药品称量要精确。

3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液

1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。

2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

（三）0.15Mol/L PB液

Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。

Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。

NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。

NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23.4g/L。

（四）0.2Mol/L PB缓冲液

0.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/L

Na2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L

0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L

NaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L

欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS 液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（0.15Mol/L PH 7.2）

NaCl 8.0g

KCl 0.2g

Na2HPO4 1.15g

（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）

KH2PO4 0.2g

将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）

1．硼酸（Ｈ3BO3）

0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）

0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。

（七）巴比妥缓冲液

1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥钠 47.6g

蒸馏水 3 000ml

1.17N HCl 55.0ml

（1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）

⑴ 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。

⑵ 加1.17 N HCl 55ml。

⑶ 用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。

2．pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥 1.84g

巴比妥钠 10.30g

加蒸馏水至 1 000.00ml

3．pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥 1.66g

巴比妥钠 12.76g

加蒸馏水 1 000.00ml

（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5

（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）

不同pH，0.05Mol/L

25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）

三羟甲基氨基甲烷（Tris）

分子量=121.14

0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。

0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。

（十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液

NaHCO3 3.70g

Na2CO3 0.60g

溶于600.00ml蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。

（十一）甘油磷酸缓冲液

1．配制pH8.0磷酸缓冲液

0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml

0.1N NaH2PO4 5.50ml

混合即可

2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。

用途：用于免疫荧光试验。

（十二）Hank’s液

1．贮存液

NaCl 80.00g

KCl 4.00g

Na2HPO4·12 H2O 1.52g

KH2PO4 0.60g

葡萄糖 4.00g

0.4％酚红液 50.00ml

双馏水加至 100.00ml

115℃高压灭菌15min，冰冻保存。

2．工作液

贮存液 1份

双馏水 9份

115℃高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）

配方1：氯化汞 6.0g

碘化钾 12.4g

20％NaOH 30ml

加蒸馏水至 100ml

配方2：碘化汞 11.5g

碘化钾 8g

蒸馏水 50ml

（完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。

用途：检测溶液中氨离子。

（十四）阿氏（Alsever’s）液

葡萄糖 2.05g

柠檬酸钠 0.80g

氯化钠 0.42g

蒸馏水 100ml

溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）

青霉素（40万U） 5支