农药生物活性测定实验指导
除草剂生物测定
以组织细胞为靶标的试验方法：测定有丝分裂指数、 光合、呼吸、蒸腾、膜透性、酶活力、叶绿素含量等 生理生化指标；用于除草剂生理作用机理影响研究。
除草剂室内试验技术
－－科学的生测试验方法
温室盆栽方法 结果相关 遵守的原则：
最为有效
定性定量
应用广泛 与田间
针对测定药剂的应用范围选择代表性的2～6种主要杂 草作为测试靶标
除草剂室内试验技术
－－试验结果的评价和数据处理
结果分析 以药剂对主要敏感杂草的最低有效剂量 ED90为除草 剂活性评价指标，以药剂对应用作物的抑制率不超过 10% 时的最高安全剂量 ED10 （ NOEL）为作物安全性 评价指标，以g ai/ha或g ai/hm2（克 有效成分/公顷） 为剂量单位。 选择性系数为ED10/ED90≥2时，认 为药剂具有一定选择性，可以进行田间试验。 结论和讨论 对试验结果进行数据分析后，根据试验的研究目的 和性质，需要在结论部分给出客观的结论，并进行相关 讨论。
1、分别求出两个单剂的ED50（或 ED90）； 2、连线两轴上ED50（或ED90）， 作为理论上两种除草剂混用的 等效线； 3、求出各混用的ED50（或ED90）； 4、在坐标图中标出混用的ED50（或 ED90）的各点，若混用后ED50 （或ED90）各点均在A、B线之 下，则为增效作用，在其上则 为拮抗作用，接近与等效线则 为相加作用
除草剂混合使用配比筛选及评价方法 将两种或两种以上的除草剂混配在一起应用 的施药方法叫做除草剂的混用。 常用的有2种混用形式：① 现混现用或桶混， 习惯上简称除草剂混用。② 除草混剂，是由 两种或两种以上的有效成份、助剂、填料等 按一定配比、经过加工而成的农药制剂。
除草剂混用的目的和意义
（整理）农药生物测定实验指导.
（整理）农药⽣物测定实验指导.农药⽣物测定实验指导（⾃编试⽤1.0）主编：姜兴印副主编：赵春青张卫光制药⼯程专业⽤⼭东农业⼤学植物保护学院2008年9⽉棉铃⾍⼈⼯饲料制备⼀、实验⽬的学习棉铃⾍⼈⼯饲料制备技术和⽅法。
本⽅法还适合⽟⽶螟等⼈⼯饲料的制备。
⼆、实验⽤品和仪器设备仪器设备：天平、⾼压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛⼦（40⽬）、量筒、搪瓷盘、温度计实验物品：⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、V C、棉油、苯甲酸钠、⼭梨酸钾、兽⽤链霉素、⽔等三、实验⽅法1. 配⽅：2. ⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、酵母粉和棉叶装⼊罐头瓶中，⾼压灭菌40min.（120℃）3. ⽔+琼脂煮开冷却⾄70℃，加⼊Vc、防腐剂、棉油混匀，再加⼊混合好的其他成分，充分混匀。
4. 倒⼊搪瓷盘，加盖冷却后放⼊冰箱中备⽤。
四、质量检查饲料冷却后观察颜⾊和固化成型情况。
五、实验报告农药⽣物测定药剂配制⼀、实验⽬的学习⽣物测定药剂配制的实验操作技术和⽅法。
⼆、实验⽤品和仪器设备电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、吸⽿球、记号笔、容量瓶、量筒等。
实验原药：93%顺式氯氰菊酯，95%吡⾍啉实验制剂：50%多菌灵WP，2.5%功夫EC(w/w)，33%施⽥补EC(w/v)三、实验⽅法1. 原药母液的配制与稀释（1）⽤丙酮配制2％顺式氯氰菊酯母液50mL，然后稀释成200mg/L 50mL 丙酮液。
（2）⽤丙酮配制1％吡⾍啉母液50mL，然后稀释成125mg/L 50mL丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡⾍啉按照5：2的⽐例混合，配制1.5%混剂50mL 丙酮液。
2. 制剂的稀释（1）50%多菌灵WP，稀释成200mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
（2）2.5%功夫EC，稀释成1000mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
（3）33%施⽥补EC，稀释成150mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
四、结果计算和处理将以上每⼀种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。
农药生物测定(1)
1、标准目标昆虫：是指被普遍采用的，具有一定代表性和经济意义，以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力和毒效指示试虫群体。
2、毒力：是指药剂本身对不同生物发生直接作用的性质和程度。
3、药效：是在田间或接近田间的条件下所测定的药剂对生物的作用效果。
4、致死中量的置信限：即致死中量的可靠范围，亦即供试昆虫种群致死中量真值的波动范围。
5、内吸杀虫剂：凡是可以通过植物根茎叶以及种子等部位渗入植物内部组织，随着植物体液传导植株，不妨碍植物的生长发育，而对害虫具有很高毒效的化学物质，称为内吸杀虫剂。
6、内吸杀虫作用：昆虫由于受内吸杀虫剂的毒杀作用而致死亡的过程，称之为内吸杀虫作用。
7、杀菌剂室内生物测定：将杀菌物质作用于细菌、真菌或其它病原物（包括线虫）,根据其作用效果的大小来判断药剂毒力。
8、除草剂的生物测定：利用生物体（作物试材、杂草试材，主要指有害生物）对除草剂的反应，来测定除草剂的毒性及其效果的基本方法。
9、杀虫剂室内生物测定：在实验室条件下，以昆虫（包括螨类）对杀虫剂的反应来鉴别某一种农药或某一类化合物的生物活性测定的一种基本方法。
1、杀虫剂生物测定存在的问题（1）评判标准单一（2）人为地固定检查时间（3）无统一的标准试虫（4）一般用校正死亡率表示核心是没有系统评判生物测定结果的方法和标准。
2、影响杀虫剂毒力测定的主要因素分析（1）杀虫剂和溶剂杀虫剂：其理化性质是决定毒力的根本原因。
溶剂：对药剂本身的理化性质一般不产生影响，但不同溶剂会影响昆虫表皮。
（2）环境条件温度：影响到处理前---养虫；影响到处理过程中---挥发、吸收等；影响到处理后---昆虫的死亡率。
湿度：一般不影响杀虫剂的穿透性及作用速度，也不影响解毒过程，通常它只影响昆虫对杀虫剂的忍受力。
光照条件以及昆虫在药剂处理前后的食物供应，营养条件等也会影响到测定结果。
（3）供试昆虫：不同种类的昆虫敏感性不同；同种昆虫不同品系对杀虫剂的敏感性也不同；昆虫不同发育阶段对杀虫剂的敏感性也不同（卵期通常对杀虫剂的敏感性比较低，通常以为有杀虫卵作用的杀虫剂，有很多主要是杀了初孵幼虫）；昆虫的性别与生殖对杀虫剂的敏感性（一般雌性昆虫对杀虫剂的敏感性比雄性昆虫低，但对有机磷杀虫剂来讲，则雌性个体比雄性个体感受性低。
农药生物活性测定实验指导(精)
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
农药室内生物测定技术与方法
农药室内生物测定技术与方法张宗俭(沈阳化工研究院农药生物测定中，沈阳110021)一、农药生物测定的含义及其用途农药生物测定是指利用靶标生物(昆虫、螨类、病原微生物、线虫、植物等)的活体或离体器官、组织、细胞或其代谢物等(如酶、蛋白质等)为试材，测试或鉴别生物活性物质的类型、反应症状或其活性大小的一种方法。
简单地说，农药生物测定技术就是利用靶标生物等对药剂的反应来鉴别农药毒力或药效的一种技术。
农药生物测定主要包括杀虫剂(杀螨剂)、杀菌剂(杀线虫或抗病毒剂等)、除草剂、杀鼠剂以及植物生长调节物质等的生物测定技术。
它涉及靶标生物、测试物质(药剂)、反应症状及强度、测试环境条件等多方面的因素。
一个好的生物测定技术或方法应具备易于操作、结果反应灵敏、重现性好、且使用物质的剂量与反应之间有良好的相关性。
农药生物测定技术与农药的使用和开发同时产生，经过长期不懈创新、完善和发展，已经成为研究生理活性物质、靶标生物以及反应强度三者关系的一项专门技术，被广泛应用于新农药的筛选以及作用特性和应用技术评价等研究之中。
纵观目前农药生物测定的研究概况，室内农药生物测定技术主要应用于以下几个方面：1．刨制农药生物活性筛选研究：随着农业生产的发展和人们对地球环境生态和人类健康等的要求不断提高，高效、低毒、环境友好型新农药的开发应用给人类社会和生产企业带来巨大的效益，但同时也由于新农药开发的难度与费用日益增加，如何利用生物测定技术快速高效地筛选新化合物，并准确评价其生物活性以及应用技术，估测其农药生物评价技术报告会市场前景及将来在市场上的占有率和利润额，是决定其创制农药研究成功与否的关键。
利用生物测定方法研究同一类结构或同一作用类型化合物的化学结构与生物活性关系的规律(sAR)以及与靶标作用位点的结合关系，为定向创制新农药和计算机辅助设计新化合物提供基础数据和理论依据。
生物活性筛选被称为农药创制的“眼睛”．对新农药开发研究起着举足轻重的作用。
杀虫剂室内生物活性测定试验要求
主要技术要点
药பைடு நூலகம்配置方法
试验药剂
调查时间
试验方法
试虫
主要技术要点
试验目的 药剂特性 试验方法 生物试材 检查结果 结果分析
主要技术要点
把握试验目的 是确定生物试材生育期的依据，是确定试验方法的依据之一。
杀虫剂 室内生物活性测定试验要求
农业部农药检定所
二○○八年十一月
杀虫剂室内生物活性测定试验
基本要求 主要技术要点 存在问题
基本要求
试验药剂：一般要求用原药。 对照药剂：原药，作用机理、作用方式或结构类似，防治相同靶标已获
登记常用品种。 供试靶标：种类与申请登记的靶标相同，室内连续饲养2代以上，个体
大于5%要校正，大于20%视为无效测定，重新试验；
• 一般要求测定药剂要有5个或5个浓度以上，每个浓度要4次重复，检
查结果时4个重复的数据不要合并，每个重复单独进入机值分析；
• 进行数据统计分析，计算LC50（LD50）及其置信限、LC95（LD95）
及其置信限、b值及其标准误差。
存在问题
药剂浓度设置不能保证5个有效浓度； 空白对照设置不合理； 混剂的配比筛选试验，五个配比设置过于接近； 报告过于简单；
• 试验药剂、对照药剂要标明含量，生产企业、稀释过程、方法、浓度
设置等。
• 靶标生物要标明来源、饲养代数、生育期。 • 简要描述试验过程。 • 附原始数据。
谢谢大家!
药膜法： 药膜的基质为玻璃表面或滤纸表面时，应选用有机溶剂形成药膜，溶剂 的选择一般为丙酮，有些丙酮中溶解度低的药剂可以加一定比例的其它 有机溶剂； 药膜的基质为植物叶片时，应选用以水为连续相的溶液，溶液中除了依 据药剂的性质加少量有机溶剂外，要有标准的表面活性剂（0.1~1%）。 叶片的浸渍时间一般为10秒左右，然后阴干。
本科生农药生物测定
药剂：一般要求纯度在95%以上，至少是含量较高原药、原粉
作为毒力测定用的杀虫药剂最好是化学纯的化合物， 不是制剂，不是工业制品，不是加有其他辅助剂的成品， 因为任何杂质的存在都会影响到毒性，增效或减效 溶剂 不同溶剂对昆虫表皮的穿透率不同，单位时间内渗入虫体 内的虫量也不同，在体内的代谢速率也不同，最后到达 靶标部位的药量也不同，测得结果就有明显差异。因此， 配制药液的溶剂一致，一般以丙酮为宜。
是在分类上和使用价值上有一定意义。 3. 群体的生活力和抗药力要稳定和均匀一致。
筛选新农药时，应选择抗药力和生活力较强、自然死亡率低的 试虫群体，才不致影响筛选结果。测定农药残留量时，最好选用 敏感的群体，才容易得出试验结果。
4.选用合适的虫期、龄期、年龄的试虫群体或混合群体供作测试对 象。
选用原则是试虫群体间的虫期比例、虫龄、年龄用虫体大小比 较接近一致，虫龄不宜过大或过小，新羽化的或年龄过大的试虫 群体不宜采用。
一、标准目标昆虫概念 被普遍采用的，具有一定代表性和经济
意义以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力 和毒效指示试虫群体。
二、标准目标昆虫的要求
1．易饲养，繁殖力强。 不互相残杀，不受季节和寄主限制，能保证周年充分供应。
2．具有一定的代表性和经济意义。 如代表重要农业害虫的目、科或不同的取食特性和敏感性，或
三、饲养中的环境条件
1、温度：最适温度是20－25℃ 温度过低，昆虫死亡；温度过高，对很多成虫的繁殖力有不利的
影响，对饲养质量也受到影响。 虫架上装日光灯时，不要使饲养容器靠近日光灯，否则会使温度
农药生物测定田间试验
农药生物测定田间试验一个新药物的发现, 必须两个系统的同时运转一个系统是化学系统, 一个系统是生物学系统农药生物测定与田间药效试验西南大学植保学院丁伟教授一、农药室内生物测定1．生物测定（bioassay ）是由biological 和assay 组合而成，通常是指具有生理活性的物质对某种生物产生效应的一项测定技术。
但是，从更广的范围来理解生物测定，则可概括为：“对生物的任何刺激所产生的效应的测定, 包括来自物理、化学、生物、生理及心理等方面的刺激对生物活体产生的反应。
”总之，生物测定是研究作用物、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门技术。
2．生物测定的一般模式3．农药生物测定（pesticidebioassay ）指在一定条件下利用靶标生物测定其对某些化合物的反应的量度，进而鉴别某种化合物生物活性的基本技术与方法。
靶标生物：通常指有害生物，包括昆虫、螨类、病菌、杂草、鼠类等。
包括这些生物的整体或离体的组织、细胞等。
待测化合物：可以是已经成为农药的化合物，包括杀虫（杀螨）剂、除草剂、杀菌剂、杀鼠剂、杀线虫剂乃至卫生杀虫剂等；也可以是待筛选的化合物（已知物和未知物）。
生物反应：指靶标生物对杀虫、杀菌、除草等作用的反应，可以延伸为凡是干扰破坏有机体正常生长、发育、行为、代谢等效应的反应，如植物生长调节、昆虫生长调节、信息传递物质等。
生物反应用死亡率、抑制率、反应率等指标来表示。
量度：指反应的强度或者大小的指标。
要运用特定的实验设计，以生物统计为工具，借助于数学的方法，来给生物反应以量化表达。
生物活性：指药物或某一个化合物对生物体产生的效应。
如果有，则这个药物或化合物有生物活性，如果不产生效应，则这个药物或化合物就没有生物活性。
4．农药生物测定的知识体系（1）供试对象的准备（包括靶标生物的饲养技术和待测化合物的选择）；也包括组织培养、细胞培养、药剂配制、剂量计算等内容（2）生物测定的操作技术与方法（包括室内生测、小区实验和田间药效实验三个方面）；（3）影响农药生物测定的因素分析；（药剂、生物体、环境、操作方法）（4）农药生物测定结果的评价与表达。
农药生物活性测定实验指导
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度 1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
农药生物测定
《农药生物测定》复习重点农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~ 1920至1923年间:研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法.特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比较来估计其相对药效。
第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代1937年欧文首先提出了系统的生物测定方法报告;1947年芬尼出版了系统的生物测定统计方法;1950年芬尼及古德温出版《生物测定标准化》一书;1957年布斯维纳（）出版《杀虫剂生物测定评述》;1959年张宗炳在其《昆虫毒理学》一书中,以专章对杀虫剂生物测定及统计分析作了系统的论述;1963年张泽溥等出版《杀虫剂及杀菌剂的生物测定》;1984年张泽溥出版《生物测定统计》专着。
特点：研究出以生物群体为反应基础的生物测定方法，提高了测定精度。
第三时期：20世纪70年代至今1. 研究利用昆虫神经电生理方法检测化合物对昆虫的拒食活性已取得进展。
2. 杀菌剂也由以传统的病原菌离体试验方法为主，转变为寄主植物上的活体试验为主。
3. 20世纪80年代以来介于活体与离体之间的植物组织培养生物测定方法受到了广泛的重视，有可能发展成一类新的杀菌剂生物测定方法。
如适用于细菌性病害筛选的块根法；适用于大麦白粉病筛选的芽鞘表皮法等。
第四时期：20世纪70年代至今发展趋势：1.随着分子生物学及生理、生化方面研究技术的提高，运用分子生物学技术和生化技术进行生测的研究亦发展很快，如对新药剂的筛选及利用酶学试验进行害物抗药性的监测和增效剂的筛选等等。
2.由于电子计算机软、硬件的迅速发展，农药生物测定中的统计分析，早已普遍程序化和微机化，使生物测定结果的分析计算更加简便、快捷，也更加准确、可靠。
农药生物测定中应注意的几点：1.运用特定的试验设计；2.在一定条件下（局部控制）进行；3.均以群体反应为基础，以生物统计为工具。
农药生物测定的定义:运用特定的试验设计，利用生物对农药的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。
农药学实验原理与方法
农药学实验原理与方法实验原理：1.农药的活性测定原理：农药的活性是指农药对害虫、杂草或病原体的杀灭能力或控制效果。
活性测定实验可以通过标准化的方法，评价农药对目标生物的毒杀能力。
2.农药的残留分析原理：农药残留分析是指对农药在农产品、土壤、水体等生物环境中，研究其残留量、残留时间、残留分布等相关问题的实验。
通过分析农产品中的农药残留，可以评估农药的使用量、使用方式对环境和人体的影响。
3.农药的毒理学实验原理：农药毒理学实验是通过对特定物种（如小鼠、大鼠、鱼类等）进行农药的急性毒性、亚急性毒性、慢性毒性、致癌性等方面的实验，评估农药对生物的毒害程度和毒性机理。
4.农药的生态毒理学实验原理：农药的生态毒理学实验主要研究农药对非靶标生物的毒性效应及其生态风险。
包括但不限于农药对土壤微生物、水生生物和非靶标昆虫等生物的影响。
实验方法：1.农药活性测定方法：a.生物测定法：采用试验动物、害虫、杂草等进行毒杀实验，评估农药的活性。
b.生物化学方法：通过测定农药对酶活性、氧化还原系统、代谢物等的影响，评估农药的毒杀机制。
2.农药的残留分析方法：a.色谱法：包括气相色谱（GC）和液相色谱（HPLC）等方法，分离和测定农药残留。
b.质谱法：使用质谱仪检测和鉴定农药残留。
3.农药的毒理学实验方法：a.急性毒性试验：通过口服、皮肤接触等方式对动物进行毒性实验。
b.亚急性毒性试验：连续多日或多周给动物饮用或饮食含有农药的溶液或饲料，观察动物的亚急性毒性反应。
c.致癌性试验：长期给动物喂食农药，观察动物的致癌性反应。
4.农药的生态毒理学实验方法：a.土壤生态毒性试验：将农药加入土壤中，观察土壤微生物的变化和对其他生物的影响。
b.水生生物毒性试验：将农药加入水培养水生生物，观察其生长、繁殖等指标的变化。
c.非靶标昆虫毒性试验：将农药加入非靶标昆虫的饲料或环境中，观察其死亡率、行为改变等。
以上是农药学实验原理与方法的介绍，实验原理包括活性测定、残留分析、毒理学和生态毒理学等方面，而实验方法则涉及到不同的分析技术和实验设计。
生物活性测定法
EA K3
X
A+ E
有R'
RO
E + PX
有机磷类
K d PX .E K2
PX K3
P+ E
X
PX代表有机磷杀虫剂，X代表侧链部分例如对氧磷中的-O- NO2。E代表 AChE，Kd是解离常数(或者称亲和力常数)，K2是磷酰化反应速率常数有时写作 Kp，K3是脱磷酰基水解速率常数或者称酶致活常数。反应开始时有机磷酸酯先与 酶形成复合体(PX·E)，X分离后形成磷酰化酶(PE)，再经过脱磷酰基使AChE恢复。
淡水发光菌青海弧菌的发现解决了这一问题。
2 用家蝇检测蔬菜中的残留农药
60年代后期，台湾农业试验所采用生物测定方法进行农药残留 检验，其原理是释放高敏感性的家蝇于菜汁中，4～5ｈ后家蝇死亡 率在10%以下即为合格，该方法优点是过程简单无须复杂仪器检测， 缺点是检测时间较长，仅适用于田间未采收的蔬菜，另外该方法只 对部分杀虫剂有反应，无法分辨残留农药的种类，准确性较低。
明亮发光杆菌(Photobacterium phosphoreum)
最小检出浓度为3ｍｇ·Ｌ-1 已用于检测甲胺磷、敌敌畏等常用有机磷农 药。 特点：快速、简便、灵敏、价廉，适合于现 场分析 缺点：农药浓度与发光强度的线性关系不够 准确，只能用于半定量测定。
长期以来使用的发光细菌是海洋发光细菌，但该方法有严重不 足，即必须在检测的样品中加入3%的ＮａＣｌ的细菌才能正常发 光。
AchE及其功能 Ach是一种神经传递介质 , AchE是一个水解酶，底物
是Ach。水解作用的反应式如下：
CH3COOCH2CH2N+(CH3)3 + H2O CH3COOH+HOCH2CH2N+(CH3)3
农药室内生物测定试验准则 除草剂 第6部分-对作物的安全性试验土壤喷雾法
ＩＣＳ Ｂ １７
６５．１００
Байду номын сангаас
ＮＹ
中华 人民共和 国农业行业标准
ＮＹ／Ｔ １ １５５．６．－２００６
农药室内生物测定试验准则
——颜色变化（黄化、白化等）； ——形态变化（新叶畸形、扭曲等）； ——生长变化（脱水、枯萎、矮化、簇生等）等。
５数据统计与分析 ５．１计算方法 ５．１．１目测法 根据测试靶标作物受害症状，０表示安全，５１～１００表示安全性很差，有严重药害。评价指标见表
１．
表１药害评价指标
药害程度（％）
Ｏ～１０ ｌｌ～３０ ３１～５０ ５１～ｌＯＯ
２ ２ ３电子天平（感量０．１ ｍｇ）；
２．２．４移液器等。 ３试验设计
３ １试验土壤
试验采用有机质含量≤２９６、ｐＨ中性、通透性良好、过筛的风干砂壤土。 ３．２试材
试验土壤定量装至盆钵的４／５处。将预处理的供试作物种子均匀点播于盆钵内，根据种子大小覆
土０．５ ｃｍ－－２ ｃｎｌ，旱田作物以盆钵底部渗灌方式，使土壤完全湿润；水田以顶部直接浇灌的方式，使土壤 完全湿润至饱和状态。播种２４ ｈ后备用。 ３．３药剂
雾处理。每处理不少于４次重复，并设不含药剂的处理作空白对照。 处理后移人温室常规培养，旱田作物以盆钵底部渗灌方式补水，水田以顶部直接灌溉的方式，保持
１
ＮＹ／Ｔ
１１５５．６—２００６ ＣＩＴＩ水层。用温湿度数字记录仪，记录试验期间温室内的温、湿度动态数据。
１ ｃｍ－－２
４调查 处理后定期观察记载作物出苗情况及出苗后的生长状态。处理后１４ ｄ或２１ ｄ，目测法和生长抑制 法调查记录药剂对作物的影响，同时描述药害症状，主要症状有：
第八章 农药生物测定与田间药效试验
将药剂通过处理植物的某一特定部位，药剂能 5. 拒食作用 被植物吸收，并通过传导，到达其他部位，让昆虫 取食未直接用药的部位后观察昆虫的中毒症状，以 判断该药剂是否具有此特性。
6. 引诱作用 性引诱剂、食物引诱剂和产卵引诱剂。
Y型嗅觉仪
（二）杀螨剂的毒力测定方法 1. 玻片浸渍法
FAO推荐为用于杀螨剂毒力测定和害螨抗性监测的 方法，是测定药剂对螨类毒力的常用方法。
二、生物测定试验设计的基本原则
4.必须设立对照
空白对照 不含药剂对照 标准药剂对照
对照死亡率<5%，无需校正；在5%~20%，要加以校正 ；>20%,试验需重做。
5.必须设立重复
6.运用生物统计分析试验结果
三、供试材料 应参考的原则
1.在室内人为环境条件下，应用较简便、快速的 繁殖技术，可保证全年定时大量供应，不受季 节限制。
田间调查各种取样方法示意图
1.五点式（面积）2.棋盘式 3.单对角线式 4.五点式（长度） 5.分行式 6.双对角线式 7.“Z”字形 8.平行线式
调查、记录与效果计算
药效调查：药前调查虫口基数，药后根据 试验方案调查虫口数或受害率。 药效计算机数据的统计分析。
（一）杀虫剂的毒力测定方法 1. 触杀作用：指害虫接触到药剂时，药剂通过昆虫 的表皮进入虫体内而发挥作用。 喷雾法
药膜法 浸虫法 点滴法
Potter喷雾塔
2. 胃毒作用 饲喂法：单叶饲喂法、毒饵饲喂法和叶片夹毒法
饲喂叶片法
饲喂毒饵法
3. 熏蒸作用 气态的形态通过昆虫的呼吸系统起到毒杀作用。 4. 内吸作用
2.应是广泛发生为害的主要农林有害生物，具有 重要的经济意义。 3.对药剂的敏感性符合要求，试验时易操作。
农药生物测定实验指导书
②粘虫：选取健康的 3—4 日令的雌成螨，用小毛笔挑起雌成螨，将其背贴 在粘胶上，注意螨足、触须及口器不要被粘着，每张玻片粘成螨 20-30 头，分三 行排列，在玻片上的另一端写上农药种类及浓度等。
③饲虫：将上述贴有雌成螨的玻片，放在干净无毒的塑料盒（或培养皿）内， 并垫上湿滤纸保湿，盖上盖，置室温为 25℃条件下培养。
表 1 杀虫剂触杀毒力精密测定原始数据记录表
供试药 剂浓度
每微升药液含有药 剂
µg/mL
每头试虫接 试虫平 单位虫体重
受药量 µg/头 均
接受药量
克）
体重（g） (µg/g)
死亡率 %
校正死亡 率
（%）
对照
3
供试药 剂浓度
表 2 杀虫剂触杀毒力精密测定数据换算表
单位体重受药量或每头试虫受 药量
(微克/克体重或微克/头)
⑦检查：经 24 h 后，在双目解剖镜下检查死亡数及存活数。以小毛笔轻轻 触动螨足或口器，不动者即为死亡。
五、试验数据的处理 根据测试结果，如对照组有死亡，先求校正死亡率。查表转换为死亡率机率 值，将药剂的有效成分百分浓度转化为对数值，求出直线回归方程式 y=a+bx， 并从直线回归方程中求出 LC50 值。
6
实验三 杀虫剂胃毒毒力精密测定——夹毒叶片法
目前常用的杀虫剂胃毒毒力测定试验方法是夹毒叶片法，在两张叶片中间均 匀地放入一定量的杀虫剂后饲喂目标昆虫，按吞食的叶片面积计算食药量。适用 于咀嚼式口器昆虫。 一、实验目的：
熟练掌握胃毒毒力精密测定技术——叶片夹毒法，学习计算致死中量的方 法。 二、实验材料
的点药液量应一致。先做对照（点滴丙酮）再从药剂浓度低浓度至高浓度依次点
滴，处理完毕后，给一定量新鲜饲料，置于 25-27 ℃恒温条件下培养。
小蓟农药生物活性初探
关键词 ： 蓟 ； 虫活性 ； 小 杀 一谷 甾醇
中图分 类号 ： １４ 文献标 识码 ： ０７ Ａ
文章 编号 ：０４６ ２ （０ ８０ －０９２ １０ －０ Ｘ ２０ ）２０４ ４３ 于陕西 延安苹 果树上 。 供 试病 菌 ： 麦 赤 霉病 菌 （ ｕａｉｍ ｇａ ｉｅ— 小 Ｆｓｒ ｒｍｎａ ｕ ｒｍ）苹 果 炭疽 病 菌 （ ｌｍ ｒｌ ｃ ｇｌｔ） 西 瓜 枯 ｕ 、 Ｇｏ ｅｅａ ｉ ｕ ａ 、 ｌ ｎ ａ 萎病 菌 （ ．ｘｓｏｉｍ ｓ ｉ ｕ 、 茄 早 疫 病 菌 Ｆ ｏｙ ｒ ｐｎｖ ｍ） 番 ｐ ｕ ｅ （ ｈｒａｉ ｓｌｎ） 马铃薯 干腐 病菌 （ ｕａｉｍ ｏｙ． Ａ ｅｎｒ ｏ ｉ 、 ａ ａ Ｆ ｓｒ ｘｓ ｕ
１２ １ 粘 虫杀虫活 性测定 ．． 粘 虫 胃毒 活 性 测 定 ： 用 载 毒 叶 片法 Ｌ 。挑 采 ４ ｊ
选 刚蜕 皮 的粘 虫 ３龄幼 虫 ， 于直径 ６ａ 的培养皿 置 ｍ 中， 每皿 ｌ虫 ， 饿 ２ 。将供 试 样 品 以丙 酮 配 成 饥 ４ｈ ５ （ Ｖ） 溶 液 ， １ ％ Ｗ／ 的 用 Ｌ微 量 点 滴 器 点 １ Ｌ于
维普资讯
第２ ７卷 第 ２期
２０ ０８年 ６月
延安 大学学报 （ 自然科学版 ）
Ｊｕ ａ ｆ ｎ ｎ Ｕｎｖ ｒｉ （ ｔｒｌＳ ｉｎ ｅＥ ｉｏ ｏ ｒ ｌｏ ａ ｉｅｓｔ Ｎａｕａ ｃｅ ｃ ｄｔ ｎ ｎ Ｙａ ｙ ｉ
Ｖｏ ． Ｎｏ ２ １２７ ．
ｐ ｒ ｍ） 由西北农林 科技大 学农 药研 究所 微 生物 实 ｏｉ ， ｕ
验 室提供 。
小蓟 （ ｉｉｍ ｓ ｅ ｍ） 又 名猫 蓟 、 儿 菜 、 Ｃｒ ｕ ｇ ｔ … ｓ ｅ ｕ盖 、 青青 菜等 ， 为菊科蓟 属刺 儿菜 的干燥地 上 部 分 。全 国各 地 均 产 ， 主产 于 安徽 、 山
农药生物测定田间试验
一个新药物的发现,必须两个系统的同时运转一个系统是化学系统,一个系统是生物学系统农药生物测定与田间药效试验西南大学植保学院丁伟教授联系电话:68250218一、农药室内生物测定1．生物测定（bioassay）是由biological和assay组合而成，通常是指具有生理活性的物质对某种生物产生效应的一项测定技术。
但是，从更广的范围来理解生物测定，则可概括为：“对生物的任何刺激所产生的效应的测定,包括来自物理、化学、生物、生理及心理等方面的刺激对生物活体产生的反应。
”总之，生物测定是研究作用物、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门技术。
2．生物测定的一般模式3．农药生物测定（pesticidebioassay）指在一定条件下利用靶标生物测定其对某些化合物的反应的量度，进而鉴别某种化合物生物活性的基本技术与方法。
靶标生物：通常指有害生物，包括昆虫、螨类、病菌、杂草、鼠类等。
包括这些生物的整体或离体的组织、细胞等。
待测化合物：可以是已经成为农药的化合物，包括杀虫（杀螨）剂、除草剂、杀菌剂、杀鼠剂、杀线虫剂乃至卫生杀虫剂等；也可以是待筛选的化合物（已知物和未知物）。
生物反应：指靶标生物对杀虫、杀菌、除草等作用的反应，可以延伸为凡是干扰破坏有机体正常生长、发育、行为、代谢等效应的反应，如植物生长调节、昆虫生长调节、信息传递物质等。
生物反应用死亡率、抑制率、反应率等指标来表示。
量度：指反应的强度或者大小的指标。
要运用特定的实验设计，以生物统计为工具，借助于数学的方法，来给生物反应以量化表达。
生物活性：指药物或某一个化合物对生物体产生的效应。
如果有，则这个药物或化合物有生物活性，如果不产生效应，则这个药物或化合物就没有生物活性。
4．农药生物测定的知识体系（1）供试对象的准备（包括靶标生物的饲养技术和待测化合物的选择）；也包括组织培养、细胞培养、药剂配制、剂量计算等内容（2）生物测定的操作技术与方法（包括室内生测、小区实验和田间药效实验三个方面）；（3）影响农药生物测定的因素分析；（药剂、生物体、环境、操作方法）（4）农药生物测定结果的评价与表达。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度 1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
（2）、待幼虫长到2龄后，移入装有人工饲料的培养皿（5cm）内，每皿一头，幼虫在内取食，直至老熟。
（3）、幼虫进入预蛹期，即转移到装有无菌细土的养虫缸内，必须保持湿润，以利入土化蛹和蛹的存活。
（4）、成虫羽化后，雌雄配对，放入养虫缸内，缸内放一个内有10%蜂蜜液的培养皿，皿内放脱脂棉，以便蛾子从润湿的棉上吸取蜂蜜。
养虫缸上蒙上纱布，并用橡皮筋扎好。
蛾子在缸内交尾产卵，每日将产于纱布上的卵连同纱布取下，并换新纱布和蜂蜜。
五、实验注意事项：1、注意饲养室及饲养用具的清洁、消毒。
2、注意饲养环境的控制，棉铃虫的幼虫在3龄后具有自相残杀习性，应单独饲养。
3、在棉铃虫饲养过程中，应注意及时更换新鲜的饲料，以防饲料变干。
配制好的饲料必须在低温下储存。
六、实验结果处理：1、每日观察记录棉铃虫的取食、生长情况，并认真填写观察记录。
2、观察棉铃虫的蜕皮生长情况，记录各龄期的生长时间长短及试虫的平均体重。
七、思考题：1、标准目标昆虫的饲养在生物测定工作中有何意义？2、在棉铃虫的饲养过程中应该注意那些问题？并对其饲养条件和方法提出改进意见。
实验二杀虫剂初步毒力测定一、实验目的：1、通过本试验学习掌握杀虫剂室内毒力初筛试验的操作技术。
2、观察昆虫中毒征象特征——兴奋、击倒、抽搐、麻痹、昏迷、死亡等。
3、明确标准目标昆虫代表性的实用意义。
二、实验原理：为了初步确定某些化学物质是否对某些害虫具有毒杀能力，应首先进行一次淘汰试验，或叫初筛试验，又称初步综合杀虫毒力试验。
这种试验不涉及毒杀方式和毒杀能力的大小，因此，不严格限制用药量和均匀度，一般采用较高的浓度，尽量发挥综合毒效（包括胃毒、触杀、薰蒸等作用）。
一般农药初筛毒力测定方法，根据试虫对象不同，多采用浸渍法、喷雾法、喷粉法、饲料混药法等。
每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致，设置温度一般在20-28℃，相对湿度60-80%，通气良好。
一般液剂在0.1-1%，粉剂1-10%。
三、主要仪器及试材：1、试虫：小菜蛾（3龄）。
2、供试药剂：药剂A、药剂B。
3、试验器材：养虫室、potter喷雾塔、量筒、镊子、吸管、烧杯、培养皿、毛笔等。
四、实验方法与步骤1、药剂配制：将A、B药剂配成0.1%的溶液备用。
2、试虫移取：取小菜蛾3龄幼虫集中混匀后，用毛笔刷入培养皿，每处理10头，重复一次。
3、喷布质量检定用9cm的白色园纸片来检查喷雾雾滴的大小和喷布是否均匀一致，如不符合要求，可调节喷头及位置，使喷布质量达到基本要求。
4、处理方法：采用喷雾法，选用potter喷雾塔，喷布药液前，用清水及欲喷洒的药液大量喷布。
换药前需将受药盘及雾化室底部用布充分擦净，然后大量喷布试验的药液。
在接有小菜蛾的培养皿中加入一定新鲜菜叶后，用移液管吸取3ml药液进行喷布，约10秒后，待药液全部沉降，取出培养皿，做好标记，空白对照只喷洒清水。
待药剂干后，将试虫连同饲料置于恢复室内培养24小时后检查结果。
五、实验注意事项：1、目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。
2、环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气良好。
3、处理设计：每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。
六、 实验结果处理：处理24小时，48小时后，检查死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并比较不同药剂的毒力大小。
试虫死活标准，一般以能正常活动或飞翔的或能正常行动的作为活虫，其余中毒的均为死虫。
%1001%100⨯--=⨯=对照死亡率对照死亡率处理死亡率校正死亡率总虫数死虫数死亡率七、思考题：1、 将筛选药剂的毒力试验结果记入杀虫剂初步毒力试验记载表，并写成报告。
2、 杀虫剂初步毒力测定在杀虫剂的筛选中有什么重要意义。
实验三杀虫剂毒杀作用方式的测定一．实验目的：学习和掌握杀虫剂毒杀作用方式的测定技术。
二．实验原理：经初筛试验后选出杀虫毒力高的农药，需进一步测定它的毒杀作用方式——触杀、胃毒、薰蒸、内吸、忌避以及毒杀作用强度等，进一步明确不同类型杀虫剂的杀虫特性。
三．主要仪器及试材：1．供试昆虫：小菜蛾（4龄）2．供试药剂：药剂A、药剂B四．实验方法与步骤：（一）触杀作用方式的测定：触杀作用方式的测定是用来判断毒剂通过昆虫体壁进入虫体的触杀毒效。
常用的方法有浸渍法、药膜法、直接喷撒法、微量点滴法等。
本实验采用药膜法来鉴定农药的触杀毒力作用。
1．实验仪器及用具：养虫室、滤纸（9cm）、培养皿（9cm）、培养皿（5cm）、具塞小试管等。
2．实验方法与步骤：（1）药剂的配制：使用丙酮，将药剂A和B分别配制成1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml 三个浓度，每浓度5ml，装入具塞小试管。
（2）使用药膜法对小菜蛾（4龄）幼虫进行触杀作用毒力测定。
（3）制作滤纸药膜：取一张直径为9cm的滤纸，放插在报纸上的三支大头针上，不使其接触物体表面，吸取0.5ml丙酮药液，围绕滤纸外缘逐渐向内滴加，使丙酮药液均匀分布在滤纸上，同法每药剂浓度及丙酮对照各制备3张滤纸药膜。
（4）将凉干后的滤纸药膜放在培养皿底，每浓度重复三次，操作时避免手摸，随即每张药膜放入试虫20头，任其爬行15-30min。
（5）处理完毕后，将处理过的试虫置于27℃，干净的环境中，并饲喂新鲜的饲料，24小时后检查死虫数，以物触其虫体无任何反应者为死亡。
（二）胃毒作用方式的测定：胃毒作用方式的测定是用来判断毒剂通过昆虫取食进入消化道的毒杀能力，测定方法是把药加入饵料中饲喂昆虫，或将药液注入昆虫的口腔内，迫使全部吞食，较理想的方法是夹毒叶片法。
其基本原理是在两片叶中夹入均匀分散的药剂，制成夹毒叶片饲喂昆虫，药剂随昆虫取食进入消化道而发生毒杀作用。
1．实验仪器及用具：养虫室、微量注射器、培养皿（5cm）、淀粉糊、镊子、剪刀、具塞小试管等。
2．实验方法：（1）药剂的配制：使用丙酮，将药剂A和B分别配制成1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml 三个浓度，每浓度5ml，装入具塞小试管。
（2）将菜叶剪成直径2cm的小片若干张，用微量注射器将丙酮药液定量（10ul）点滴在叶片上，待丙酮挥发后，用淀粉糊涂在无药的叶片上，用镊子移于带药的叶片上，将上下两张叶片粘合制成夹毒叶片，饲喂试虫，另喂无毒叶片为对照，每浓度处理试虫20头，重复三次。
24小时后观察试虫的死亡情况。
（三）内吸作用方式的测定：内吸作用方式的测定是药剂接触植物的某一部分，如根、茎、叶或种子等，渗入到植物的内部组织，随植物体液传导至全株，在一定的时间内，当昆虫取食带毒的植物或吸取带毒的汁液，而产生致毒反应。
本实验采用根部内吸法。
1．实验仪器及用具：养虫室、烧杯、吸管、培养皿（5cm ）、剪刀、植物苗等。
2．实验方法：（1） 药剂的配制：将药剂A 和B 分别配制成1000μg/ml 、100μg/ml 、10μg/ml 的水溶液各50ml ，注入烧杯中。
（2） 将植物苗的根部插入药液中，以清水为对照，2小时后，取植物苗的上部未接触药液的叶片饲喂试虫，每浓度处理试虫20头，重复三次，24小时后观察试虫死亡情况。
（四）薰蒸作用方式的测定：薰蒸作用方式的测定是在适当温度下，在固定的空间蒸发成气态，并达到一定的浓度，与试虫接触，在短时间内能杀死试虫。
本实验采用培养皿简易薰蒸测定法。
1．实验仪器及用具：养虫室、培养皿（9cm ）、培养皿（5cm ）、吸管、纱布 烧杯等。
2．实验方法：（1） 药剂的配制：将药剂A 和B 分别配制成1000μg/ml 、100μg/ml 、10μg/ml 的水溶液各20ml ，注入烧杯中。
（2） 取直径相同的9cm 的磨口培养皿，皿底放10ml 的药剂，用双层纱布密盖皿底，其上放试虫20头，每浓度重复三次，以清水为对照。
（3） 2小时后，将试虫转入培养皿（5cm ）中，培养24小时后，观察试虫死亡情况。
五．实验注意事项：1、目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。
2、环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气良好。
3、 处理设计：每处理需试虫15-30头，重复三次，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。
4、 实验方法的选择：根据实验原理选择适宜的实验方法，尽可能避免其他毒杀作用方式的干扰。
六．实验结果处理：观察死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，判断药剂毒作用方式。