Bradford法蛋白定量试剂盒
Bradford法测蛋白浓度
Bradford法测蛋白浓度原理：这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。
在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。
反应化合物在465－595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。
溶液：①Bradford储存液100ml95％乙醇200ml88％磷酸350mgServaG蓝室温下长期保持稳定。
②Bradford工作液425ml双蒸水15ml95％乙醇30ml88％磷酸30ml Bradford储存液用滤纸过滤，保存于室温棕色瓶中，可保存数周，但在使用前需要过滤。
③配制1mg/ml牛血清蛋白（BSA）做标准曲线：表4.2 蛋白质浓度测定标准曲线制作表样品号蛋白量（ug）标准溶液1mg/mlBSA（ul）实验缓冲液（ul） Bradford试剂（ml） A5951 0 0 100 3 02 2.5 2.5 97.53 0.1203 2.5 2.5 97.5 3 0.1304 5 5 95 3 0.2505 5 5 95 3 0.2156 7.5 7.5 92.5 3 0.3317 7.5 7.5 92.5 3 0.3648 10 10 90 3 0.4609 10 10 90 3 0.44210 12.5 12.5 87.5 3 0.53111 12.5 12.5 87.5 3 0.56212 15 15 85 3 0.63313 15 15 85 3 0.61714 17.5 17.5 82.5 3 0.68415 17.5 17.5 82.5 3 0.65016 20 20 80 3 0.72117 20 20 80 3 0.727。
蛋白质浓度测定-Bradford
蛋白质浓度测定—Bradford法一、实验目的学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度。
二、实验原理考马斯亮蓝能也与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸盐呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈兰色，其最大吸收峰改变为595nm。
考马斯亮蓝G250在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律，因此可以通过测定染料在595nm处光吸收的增加量得到与其结合的蛋白质量。
（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液，用g―球蛋白或牛血清清蛋白(BSA)，配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。
（2）考马斯亮兰G―250染料试剂：称100mg考马斯亮兰G―250，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85%的磷酸，用水稀释至1升。
2. 器材：（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器（3）试管16支三、操作方法1.标准曲线制作（按下表0-11管操作，每管做3个平行）0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100标准蛋白含量( g)0 0．1 0．2 0．3 0．4 0．5 0．6 0．7 0．8 0．9 1．0标准蛋白溶液（0.1mg/mL）(mL)0．1 0．2 0．3 待测蛋白质溶液(mL)2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 1.9 1.8 1.7 蒸馏水(mL)2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2考马斯亮蓝试剂摇匀，1 h内以0号试管为空白对照，在595nm处比色OD595nm以OD595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。
2. 未知样品蛋白质浓度的测定测定方法同上（上表11-13管），将未知待测样品做一定的稀释（鸡血清1：100稀释；羊血清1：200稀释；肝匀浆1：100稀释），使其测定值在标准曲线的直线范围内，每管做3 个平行。
bradford法测定蛋白的浓度
该法是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成，
实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。
利用此方法检测速度极快，10〜20个样品只需不足10分钟即可完成。
0.01%,Triton X-100低于
0.05%,Tween20, 60, 80低于
0.015%。
试剂和仪器
一、试齐I」
试剂盒自备：
G250染色液、BSA标准蛋白。
BSA标准蛋白浓度已稀释至500卩g/ml -20C保存。二、测试样品
待测样品蛋白浓度稀释在50-500 g/ml范围内为宜。
三、仪器
96孔酶标、酶标仪。
操作方法
标准品编号
500ug/mlBSA/口1
蒸馏水/卩110302
1.5
28.45
12
186
6830
0分别于小离心管中混匀后，取20卩加入到对应酶标孔中待测样品编号31415•…待测样品稀释后，各取20卩加入到相应酶标孔中G250/卩1200孔1/
反应3-5min
1.用酶标仪测定A595nm处的吸光值。
灵敏度高，检测浓度下限达到25ug/ml,最小检测蛋白量达到
0.5ug待测样品体积为1〜20ul。
且在50〜1000ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。
Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品 中-巯基乙醇的浓度可咼达1M，二硫苏糖醇的浓度可咼达5mM。但受略咼浓度 的去垢剂影响。需确保SDS氐于
2.根据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。
Bradford法测蛋白质浓度
Bradford法测蛋⽩质浓度Bradford法测蛋⽩质浓度Bradford 蛋⽩检测就是考兰法。
特点1.快速：10分钟既可完成测定。
2.稳定：加样，混匀后 2分钟既可测定， 1 ⼩时内吸光度变化不超过10%。
3.⾼敏感度：可精确定量 1～1000 µg/ml 的蛋⽩样品。
4. 595 nm检测4.不受绝⼤部分样品中的化学物质的影响。
巯基⼄醇的浓度可⾼达1M，⼆硫苏糖醇的浓度可⾼达5 mM。
但受略⾼浓度的表⾯活性剂影响。
若SDS⾼于0.1%，TritonX-100⾼于0.1%，Tween20，60，80⾼于0.06%，可取少量样品加⽔稀释到适当浓度，再⾏测定。
考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋⽩质浓度1、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%⼄醇，加⼊100ml 85% H3PO4，⽤蒸馏⽔稀释⾄1000ml, 滤纸过滤。
最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）⼄醇，8.5%（W/V）H3PO4。
（2）标准蛋⽩质溶液：纯的⽜⾎清⾎蛋⽩，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋⽩溶液。
2. 器材：（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器3、标准曲线的制作试管编号 0 1 2 3 4 5 6100ug/ml标准蛋⽩（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.60.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4考马斯亮蓝试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 5摇匀，1h内以0号管为空⽩对照,在595nm处⽐⾊A595nm以A595nm为纵坐标，标准蛋⽩含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
4、样品中蛋⽩质含量的测定另取两⽀⼲净的试管（做⼀重复），加⼊合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定⽅法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明
Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明货号：PC0010规格：2500T保存：开封使用后请密封保存，本试剂盒自订购之日起九个月内有效。
产品内容：组成包装（2500微孔)保存5×G250染色液100ml2-8℃PBS稀释液30ml2-8℃蛋白标准(5mg/ml BSA)1ml-20℃产品简介：考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。
Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween20,60,80低于0.06%。
操作说明：一．微孔酶标仪法1.完全溶解蛋白标准品，取10ul，稀释至250ul，使终浓度为0.2mg/ml。
待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。
但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl 或PBS稀释标准品。
2.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3.将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。
4.将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。
由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5.各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。
6.用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
超详细WB实验蛋白浓度定量与上样体积计算Protocol分享
超详细WB实验蛋白浓度定量与上样体积计算Protocol分享实验目的：本实验旨在测定WB实验中所用蛋白的浓度，以及确定所需的上样体积。
实验所需材料和试剂：1. Bradford蛋白浓度定量试剂盒（含标准品）2.微量比色皿3.安培管4.高速离心机5.加热水浴6.微量移液器和相应的移液管头实验步骤：1.准备样品和标准品a.样品：蛋白样品的提取方法可以根据具体实验的要求进行选择，提取的样品应该是无色透明的。
b. 标准品：打开 Bradford 蛋白浓度定量试剂盒，将标准品溶液均匀分别加入到安培管中，每个安培管中的标准品浓度依次加大。
2.给样品和标准品上色a.分别取出一些样品和不同浓度的标准品，放入微量比色皿中。
b.对每个样品和标准品重复上述步骤，以保证后续比色的准确性。
3.加载试剂a. 打开 Bradford 蛋白浓度定量试剂盒，取出 Bradford A 和Bradford B 试剂。
b. 将 Bradford A 试剂加入到样品和标准品中，混匀。
c. 将 Bradford B 试剂加入到样品和标准品中，再次混匀。
4.反应a.将样品和标准品放入加热水浴中，温度设定为37摄氏度。
b.在水浴中反应20分钟。
5.蛋白浓度测定a.将标准品放入高速离心机中离心2分钟。
b.取出标准品及样品，用微量移液器将每个样品和标准品的上清液吸取到微量比色皿中。
c.将比色皿放入比色计，测量比色皿中的吸光度。
6.制作标准曲线a.根据试剂盒中的说明书，将各标准品的吸光度值记录下来。
b.将吸光度值（Y轴）与标准品的浓度（X轴）绘制成标准曲线。
c.通过标准曲线可以计算出样品中蛋白的浓度。
7.计算蛋白浓度a.根据标准曲线，将样品的吸光度值代入计算，得到蛋白的浓度。
8.计算上样体积a.根据实验需求，计算出所需上样的蛋白质量。
b.根据所得蛋白浓度，计算出所需上样的体积。
实验注意事项：1.实验操作过程中需要注意无菌操作，以避免样品受到外源性污染。
Bradford蛋白浓度测定试剂盒
产品编号 P0006
产品名称 Bradford蛋白浓度测定试剂盒
包装 1000次
产品简介：
Bradford蛋白浓度测定试剂盒(Bradford Protein Assay Kit)是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。
使用说明：
1. 完全溶解蛋白标准品，取10l稀释至100l ，使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀 释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2. 将标准品按0, 1, 2,ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ4, 8, 12, 16, 20l加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20l。 3. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液到20l。 4. 各孔加入200l G250染色液，室温放置3-5分钟。 5. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 6. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
3. Liu M, Li W, Cai G, Zhang Y, Zhang J. Clone , Expression and Purification of SD ratβB2 - Crystallin.
J Mod Clin Med Bioeng. 2005; 11(1): 1-4. 4. Jiang Q, Huang X, Dai Z, Yang G, Zhou Q, Shi J, Wu Q.
使用本产品的文献：
1. Qing-song Jiang, Hui-jiu Wang, Qin Wu, Yuan-fu Lu, Li Li, Dan-li Yang, Qi-xin Zhou and Xie-nan Huang. Effects of isocorydine on cardiaomyocyte hypertrophy induced by prostaglandin F2α. Acta Acad Med Zunyi; 2004, 27(2):14-17.
Bradford蛋白质浓度定量试剂盒产品说明书中文版主要
Bradford蛋白质浓度定量试剂盒产品说明书（中文版）主要用途Bradford蛋白质浓度定量试剂是一种旨在使用考马斯亮蓝染色剂G－250与可溶性蛋白质特异性结合产生色彩差异变化，通过比色测定其最大吸收转换来定量蛋白质浓度的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种蛋白质（动物、人体、植物、微生物等）的含量检测。
产品即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感，定量精确。
技术背景考马斯亮蓝染料G－250（Coomassie Brilliant Blue G－250）是一种与蛋白质结合的化学染料。
它的三苯甲烷（triphenylmethane）基团，主要与蛋白质的非极性结构结合。
而它的阴离子磺酸盐（anion sulfonate）基团与蛋白质分子的阳离子和芳香类氨基酸，尤其是精氨酸和赖氨酸侧链的结合。
在酸性环境下，其最大吸收波长从465nm转换为595nm。
Bradford提出的方法的最大优点在于不受样品中各种化学成分的干扰。
较之Lowry，Hartree-Lowry和 BCA技术，更为敏感。
产品内容反应液（Reagent A）毫升标准液（Reagent B）毫升补充液（Reagent C）毫升产品说明书1份保存方式保存标准液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，反应液（ReagentA），避免光照；有效保证6月用户自备48孔板：用于样品比色的容器比色杯：用于样品比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤一、48孔板微量测定A．建立标准样品曲线1．将－20℃冰箱里试剂盒中的标准液（Reagent B）置入冰槽里融化2．准备1个48孔板，做好相应的标记3．按下表配制标准样品反应液1）分别移取适量的标准液（Reagent B）到48孔板里指定序号的样品孔里2）分别移取适量的补充液（Reagent C）到48孔板里指定序号的样品孔里3）最后分别加入100微升反应液（Reagent A）序号标准液（Reagent B）补充液（Reagent C）反应液（Reagent A）标准样品蛋白质含量（微克）1 25微升 375微升 100微升252 12.5微升 387.5微升 100微升12.53 10微升 390微升 100微升104 5微升 395微升 100微升 55 2.5微升 397.5微升 100微升 2.56 1.25微升 398.75微升 100微升 1.257 0 400微升 100微升04．轻轻摇动48孔板，混匀反应物5．室温下暗室里孵育5分钟6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD595，横座标（X）为蛋白质含量（微克）B．样品测定1．将待测样品置入冰槽里融化2．分别移取100微升待测样品到48孔板里指定序号的样品孔里（注意：参见注意事项4）3．分别移取300微升补充液（Reagent C）到48孔板里指定序号的样品孔里4．最后分别加入100微升反应液（Reagent A）5．轻轻摇动48孔板，混匀反应物6．室温下暗室里孵育5分钟7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以100微升（样品量），获得待测样品的实际浓度（微克/微升）（注意：参见注意事项5）二、比色杯标准测定A．建立标准样品曲线1．将－20℃冰箱里试剂盒中的标准液（Reagent B）置入冰槽里融化2．准备好1毫升比色杯3．按下表配制标准样品反应液1）分别移取适量的标准液（Reagent B）到1毫升比色杯2）分别加入适量的补充液（Reagent C）3）最后分别加入200微升GENMED反应液（Reagent A）序号标准液（Reagent B）补充液（Reagent C）反应液（Reagent A）标准样品蛋白质含量（微克）1 50微升 750微升 200微升502 25微升 775微升 200微升253 20微升 780微升 200微升204 10微升 790微升 200微升105 5微升 795微升 200微升 56 2.5微升 797.5微升 200微升 2.57 0 800微升 200微升04．轻轻上下倾倒比色杯，混匀反应物5．室温下暗室里孵育5分钟6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD595，横座标（X）为蛋白质含量（微克）B．样品测定1．将待测样品置入冰槽里融化2．移取200微升待测样品到1毫升比色杯里（注意：参见注意事项4）3．加入600微升补充液（Reagent C）4．加入200微升反应液（Reagent A）5．轻轻上下倾倒比色杯，混匀反应物6．室温下暗室里孵育5分钟7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以200微升（样品量），获得待测样品的实际浓度（微克/微升）（注意：参见注意事项5）三、玻璃管大量测定（注意：参见注意事项2）A．建立标准样品曲线1．将－20℃冰箱里试剂盒中的标准液（Reagent B）置入冰槽里融化2．准备好5毫升玻璃管3．按下表配制标准样品反应液1）分别移取适量的标准液（Reagent B）到5毫升玻璃管2）分别加入适量的补充液（Reagent C）3）最后分别加入1毫升反应液（Reagent A）序号标准液（Reagent B）补充液（Reagent C）反应液（Reagent A）标准样品蛋白质含量（毫克）1 4毫升0 1毫升 42 2.5毫升 1.5毫升1毫升 2.53 2毫升2毫升1毫升 24 1毫升3毫升1毫升 15 0.5毫升 3.5毫升1毫升0.56 0.25毫升 3.75毫升1毫升0.257 0 4毫升1毫升0 4．涡旋震荡，混匀反应物5．室温下暗室里孵育30分钟6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD595，横座标（X）为蛋白质浓度（毫克）B．样品测定1．将待测样品置入冰槽里融化2．移取250微升待测样品到5毫升玻璃管里30030.23．加入3.75毫升补充液（Reagent C ） 4．加入1毫升反应液（Reagent A ）5．涡旋震荡，混匀反应物 6．室温下暗室里孵育30分钟7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以0.25毫升（样品量），获得待测样品的实际浓度（毫克/毫升）注意事项1． 本产品为200次（96孔板测定），100次操作（48孔板测定），50次操作（比色杯测定）包括标准曲线 2． 玻璃管大量测定须另购 Bradford 大量蛋白质浓度定量试剂盒（）3． 操作时，须戴手套4． 建议用户使用48孔板微量测定时样品和试剂的用量，以及在最后浓度计算时的除数 序号待测样品补充液（Reagent C ）反应液（Reagent A ）蛋白浓度计算的除数 1 5微升 395微升 100微升 5 2 50微升 350微升 100微升 50 3 100微升 300微升 100微升 100 4250微升 150微升 100微升250如果是96孔板测定：待测样品、补充液（Reagent C ）和反应液（Reagent A ）的用量是48孔板测定的二分之一如果是比色杯测定：待测样品、补充液（Reagent C ）和反应液（Reagent A ）的用量是48孔板测定的2倍 5． 样品浓度计算公式：标准曲线求得蛋白含量（微克）÷样品量（微升）＝微克/微升6． 加样后即刻比色测定7． 比色测定后，比色杯须清洗彻底 8． 强碱性样品将会干扰比色检测9． 下列化学成分和浓度范围不会干扰比色检测：Acetate0.6 M KCI1.0 M AcetoneMalic acid0.2 MAdenosine 1 mM MgCl 2 1.0 M Amino Acids Mercaptoethanol 1.0 M Ammonium sulfate 1.0 M MES 0.7 M Ampholytes Methanol 0.5％ AcidMOPS 0.2 M ATP 1 mM NaCl 5 M Barbital NAD 1 mM BES2.5 M NaSCN3 MBoric acidPeptonesCacodylate-Tris 0.1 M Phenol 5% CDTA 0.05 M Phosphate 1.0 MCitrate 0.05MM PIPES 0.5acid 1mM Deoxycholate 0.1% Polyadenylic（MW<3000）PolypeptidesMDithiothreitol 1M0.2mg/ml PyrophosphateDNA 1mg/ml EDTA 0.1M rRNA 0.25mg/mlM tRNA 0.4 EGTA, 0.05mg/ml0.30RNAEthanol totalEagle’s MEM SDS 0.1%phosphatesolution SodiumsaltEarle’s20%sulfateacid 1.0M StreptomycinFormicX-100 0.1% FructoseTritonGlucose TricinemM Glutathione Tyrosine 1mMThymidine 1 Glycerol99%Glycine 0.1 M Tris 2.0 MGuanidine-HCI Urea 6 Msaltsolution VitaminsHank'sHEPES buffer 0.1 M10．建立微量测定的标准曲线，建议使用的蛋白质浓度范围为0至50微克11．本公司提供系列蛋白定量检测产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
实验六蛋白质浓度测定--bradford法
稀释倍数
8
20
80
100
5
9
40
60
100
2.5
10
60
40
100
1.67
3.加入G250试剂
各试管充分混匀后，用取样器分别加入5.0mL考马斯亮兰G250试剂，每加完一管，立即混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。
（2）仍有一些物质干扰此法的测定。主要的干扰物质有：去污剂Triton X-100、十二烷基磺酸钠（SDS）和0.1mol/L的NaOH（如同0.1mol/L的酸干扰Lowary法一样）。
（3）标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定待测蛋白质的浓度。
100
6
80
20
100
7
100
0
100
2.将待测蛋白配成合适浓度
另取3支清洁试管，编号8、9、10，用微量注射器按表6-2操作，将待测蛋白配成系列浓度。
表6-2待测蛋白的稀释
管号
待测蛋白质（mL）
缓冲液（mL）
Bradford法的突出优点是：
（1）灵敏度高。据估计比Lowry法约高4倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大得多。
（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5min左右。由于染料与蛋白质结合的过程大约只要2min即可完成，其颜色可以在1h内保持稳定，且在5min～20min之间，颜色的稳定性最好，因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
bradford法测蛋白浓度原理
bradford法测蛋白浓度原理Bradford方法是一种用于测定蛋白质浓度的实验室和常规医学检测方法，也称为Bradford试剂盒试验，它是由美国科学家Marion M. Bradford在1976年提出的，主要应用于生物医学、药物学、食品学和其他分子生物学领域。
Bradford法是一种快速灵敏的比色分析方法，可以测定蛋白质的浓度，这也是它的高效性的一个很大原因。
Bradford试剂由Bradford发明，由一种特定的酶蛋白原料制成，它可以与任何一种类型的蛋白质反应，从而生成一种特殊的比色物质。
当把Bradford试剂添加到蛋白质溶液中时，会发生一种特殊的化学反应，其后积累的颜色称为Bradford比色，可用来测量蛋白质的浓度。
Bradford法比色的原理是利用蛋白质与Bradford试剂中的色原分子在反应过程中形成一种新的比色物质，经光度切换实现颜色变化，从而能够准确的测量蛋白质的浓度。
Bradford法的优点是结果可靠，结果准确、快速，因此它是许多日常实验室检测中最常用的分析方法之一。
Bradford法可用于多种蛋白质的测定，但最常用的是白蛋白、胆红素和伽马蛋白等血液分析中的参数测定，也可以用于检测其他蛋白质过表达和表达水平。
Bradford试剂盒在使用时，必须先进行标准曲线和检测物质样本的光谱吸收率测定，以确定准确的光吸收峰值，以及浓度与吸光度的关系。
通过该关系可以计算检测物质的浓度。
Bradford方法的缺点是检测的灵敏度相对较低，由于其体系中的基础参数不同，因此在不同实验室中可能存在差异，这就需要实验者在进行检测时，仔细调整和校准实验参数，以确保实验结果的可靠性。
总之，Bradford方法是一种简便、准确、快速、经济的比色分析方法，它可用于生物医学、药物学、食品学和其他分子生物学领域，用于测定各种蛋白质的浓度。
如果正确使用，Bradford方法能够为实验室提供准确的结果，同时也能为医学和其他领域的研究和检测提供有效的解决方案。
蛋白定量：BCA法丨Bradford法详情应用攻略
蛋白定量：BCA法丨Bradford法详情应用攻略蛋白定量BCA法，Bradford法，是2种常见的蛋白定量方法，关于这两种方法的原理，优缺点，以及操作步骤，下面将一一解析。
一、蛋白定量BCA（Bicinchoninic Acid）法BCA (bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为苹果绿，即BCA工作试剂。
在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+，一个Cu+螯合二个BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，562nm处有zui高的吸收值，可在540-595nm测定其吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
特点：灵敏度高，操作简单，正常情况下可在45分钟内完成测定；且试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳。
需要注意的是这种方法需要提前制作标准曲线。
Abbkine定量总蛋白的蛋白质定量试剂盒（BCA法），线性标准曲线范围为50-1000 ug/ml，灵敏度25ug/ ml，zui低检测蛋白量达到5ug。
实验所需仪器及试剂：恒温水浴锅、可见光分光光度计、离心机、旋涡混合器、试管操作步骤：1.标准液制备：梯度稀释牛血清白蛋白（BSA）标准品。
将8个EP管按照1到8进行标记，将BSA标准品稀释成1mg/mL工作液，准备浓度梯0，50，100，200，400，600，800，1000 ug/mL。
2.BCA工作液制备：将A液和B液摇晃混匀，按照A:B=50:1的比例配置BCA工作液，充分混匀。
（BCA工作液室温下24h内稳定，故现用现配）3.加样孵育：吸取20μL各个稀释浓度的蛋白质标准品或待测蛋白质样品，加入96孔板底部或试管中，向孔/管中再加入200uL BCA工作液轻轻摇晃混匀。
在37°C下孵育30min，冷却至室温。
4.测定：冷却到室温后，以空白为对照，测量样品在562nm或该波长附近的吸光值5.将各个标准品和待测蛋白质样品在562nm处的吸光值减去空白标准品在562nm处的平均吸光值。
_Bradford法检测蛋白质含量标准操作规程
Bradford法测蛋白质含量标准操作规程Bradford法检测蛋白质含量1.试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
2.器皿与耗品：所有玻璃器皿为清洁级，37度烤干。
tube、tip：一次性使用，容量瓶，96孔酶标板，3.仪器设备：酶标仪：旋涡混匀器。
4.溶液的配置：4.1.G250储存液：95%无水乙醇：100ml88%磷酸：200 ml考马斯量兰G250：350mg室温下可长期保存，稳定。
4.2.G250工作液：双蒸水：425ml95%无水乙醇：15 ml88%磷酸：30 mlG250储存液：30 ml可根据体积相应缩小比例配制，用1号滤纸过滤并保存于室温棕色瓶中，可使用数周。
6.3牛血清白蛋白标准品BSA(实验室购买).配制标准品标准程序：将牛血清白蛋白配制成1mg/ml，取牛血清白蛋白100mg，先用超纯水溶解，待其溶解后定容到一个洁净的100ml容量瓶中，300ul分装，保存于-20度，使用时，将其稀释至200ug/ml，配制标准品备用。
4.3.标准品的鉴定用原有的标准品做标准曲线，随机取三支本分装品为样品，测定样品蛋白含量，得X ±SD（其中X 单位为ug/ml）与RSD, 当X值为98-102，且RSD值小于等于2%者，认为该标准品的标示浓度为200ug/ml。
Bradford法测蛋白质含量标准操作规程5.程序：5.1.样品的处理5.1.1.一次检测过程包括标准不能超过20个样品。
若是原液或成品, 每个样品需做2个或3个稀释度：V水＝V原（d－1）其中V水为需要加入纯化水的体积，V原为稀释前样品的体积，d为稀释度5.1.2.待测样品如为冻干品，则根据标示量稀释至1mg/ml，再稀释10倍；待测样品如为未知浓度的样品，可以根据bradford标准品颜色目测后稀释样品。
5.1.3.待测样品均需溶解后先离心，再进行稀释和检测操作。
5.1.4.稀释后的样品需做同样的三个反应体系。
Bradford 法蛋白浓度测定试剂盒Bradford Protein Assay Kit
Bradford 法蛋白浓度测定试剂盒 Bradford Protein Assay Kit产品编号：C503031包装规格：200 Assays/1000 Assays+10 Microplates 产品简介Bradford 试剂蛋白定量是一种快速，即用型的总量蛋白光学定量方法，在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm ，同时颜色也由棕色变为蓝色，该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。
将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford 试剂混合，测量在595 nm 处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA 建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
产品特点 1. 检测速度快，10~20个样品只需不足10 min 即可完成。
2. 灵敏度高，最小检测蛋白量达到0.2 μg ，待测样品体积1~20 μL 。
3. 在10~150 μg/mL 浓度范围内有较好的线性关系。
4.与还原性糖和还原性巯基试剂兼容。
运输和保存条件常温下运输，收到后，将Bradford 试剂和PBS 在2~8°C 环境中保存，5 mg/ml 蛋白质标准液-20°C 保存，保质期两年。
试剂盒组成 组分 C503031 Bradford 试剂200 mL BSA 标准蛋白 5 mg/mL 1 mL1×PBS 10 mL操作步骤A 试剂准备1. 取一定量的BSA 蛋白质标准液(5 mg/ml )，用1X PBS 稀释为终浓度为200 μg/ml 。
2. 将样品用1X PBS 做适当倍数的稀释。
B. 分光光度法 1.取20支1.5 mL 离心管，分为标准组和样品组。
其中16支1.5 mL 离心管，每个标准品设置1个重复，各管分别加入100 μL 相应浓度的标准蛋白质溶液(200 μg/mL)；剩余4支1.5 mL 离心管，分为2个重复组，重复组离心管编号相同。
普利莱蛋白定量试剂盒,bradford法
蛋白定量试剂盒，Bradford法，5 ×P1510 2666 assay 150 元描述：Bradford法是最常用的蛋白质快速定量方法。
Coomassie brilliant blue G-250与蛋白质结合使染料的最大吸收峰由465 nm变为595 nm，溶液的颜色由棕色变为兰色，595nm波长下吸光度值与蛋白含量成正比。
灵敏度比Lowry法高4倍，与BCA法相当。
反应迅速，2分钟即可达到平衡并在1小时内保持稳定。
操作简便，只需要一种反应试剂。
干扰物质少，钠钾镁离子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、硫酸氨、EDTA等均不干扰测定。
原有Bradford法蛋白定量是一种非线性测定。
本试剂盒采用改良Bradford法和优化的试剂与优化的测试方案相结合，能分别对(1) 0.5-50 µg/ml，(2) 20-1000 µg/ml，(3) 50-4000 µg/ml浓度范围的蛋白进行线性检测，并可用Excel自动得出计算公式和样品蛋白浓度数值。
显著提高了蛋白检测灵敏度，适用于各种范围内的蛋白测定。
提供5×染料浓缩液可进行200-400次标准2 ml比色杯检测，或1400-2666次microplate检测。
组成与储存：(1). 5 × Coomassie浓缩溶液80 ml。
室温或4ºC保存1年。
用水稀释至1×，可4ºC 保存2月。
(2). 蛋白标准品：牛血清清蛋白(BSA)4.0mg/ml标准溶液。
－20ºC保存。
可进行200-400次标准2 ml比色杯检测，或1400-2666次microplate检测。
Bradford法物质干扰及耐受的最大浓度。
考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒
考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒Coomassie (Bradford) Protein Assay Kit产品简介：Bradford法（考马斯亮蓝法），是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。
当Bradford 染色液（考马斯亮蓝G250）和蛋白在酸性条件下结合时，溶液颜色由棕黑色转为蓝色，最大吸光值波长由456nm 转至595nm，吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。
Bradford 染色液为2 倍浓缩母液，便于储存。
产品特点:●快速，10-20 个样品只需要10 分钟即可完成测定。
●稳定，加样混匀后2 分钟既可测定，1 小时内吸光度变化不超过10%。
●最小测量体积为1-20 uL，最低测量蛋白量为0.5 ug。
●有常规和微量两种检测模式。
●不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM。
●但受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
●经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
产品组成：上海美季生物技术有限公司上海市中山南二路777号2号搂2303考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书保存温度：Bradford染色液2-8℃保存，BSA蛋白标准-20℃保存。
有效期一年。
操作步骤：一、常规测定A．96 孔酶标板测定：1.根据需要从冰箱取出适量Bradford 2x 染色液，平衡至室温并混匀；预热酶标仪20分钟。
2.根据需要取适量标准品,加入去离子水稀释至1mg/ml(原液5mg/ml),并混匀。
注意：原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。
但是为了简便起见，也可以用去离子水、0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
Lowry法和 Bradfard法测定蛋白质含量
Lowry 法和Bradfard法测定蛋白质含量一.试剂Folin酚试剂(甲) 70毫升Folin酚试剂(乙) 8毫升考马斯亮兰G250 70毫升BSA 10毫升二.实验材料血清 10 ml小白菜 2克(叶多梗少)三.实验仪器722分光光度计 ; 低速台式离心机;电热恒温水浴(37℃) ; 微型漩锅混合仪四.本次实验所需器皿洗涤普通试管 27只 0.5毫升移液管 2支离心试管4只 1毫升移液管 5支50毫升容量瓶 4只 5毫升移液管 2支￠7㎝布氏漏斗 1个研钵 1个150ml抽滤瓶 1个 50毫升烧杯 1个125毫升棕色试剂瓶 2个玻璃比色皿 1对说明:1.试剂乙加入后务必立即混合.2.血清与BSA在两种测定方法中浓度不同.用时从冰箱冷藏室取用.3.取试剂一律用本实验配给的专用干净量具,按给定取用量一次性取足,量具用毕放回原处,勿扯用.15ml以内试剂取用量可直接用自备试管(1.5×15)或具塞试管装取,其余用试剂瓶装取.4.实验材料一律用自来水、蒸馏水洗净,吸水纸吸干水分后再用称量纸称重.一般情况测定酶及RNA等材料都采用冰浴研磨.5.移液管、容量瓶用洗液洗涤.(洗瓶用毕倒回原瓶)其余用洗衣粉洗涤(务必用自来水反复冲洗十几遍后再用蒸馏水过一遍)6.使用所有仪器前必须清楚该仪器的正确使用方法及步骤,使用光度计时,自带洗瓶、废液杯(500ml塑料烧杯),并登记仪器使用情况.7.值日生负责本次实验工具取还,蒸馏水补充及实验室卫生.卫生要求:(1)所有实验台及公用台抹干净,地面拖干净.(2)检查所有仪器是否置正常关机位置.并拔出电源,盖好机罩.(3)垃圾倒干净,废液桶倒干净.。
Bradford蛋白质定量试剂盒说明书
Bradford蛋白质定量试剂盒说明书注意事项在使用本试剂盒之前请务必阅读此注意事项。
1. 考马斯亮蓝染液与石英比色皿可以产生强烈的结合，因此建议使用玻璃或塑料比色皿。
2. 疏水的膜或“粘”蛋白在考马斯亮蓝染液存在下可以形成沉淀，可以使用少量的NaOH促进蛋白的溶解。
(在这种情况下向样品中加入等体积的1 M NaOH)3. 由于不同蛋白与考马斯亮蓝染液的结合程度不同，因此使用被测蛋白做标准曲线，可以得到更准确的结果。
4. 应按蛋白浓度由低到高的顺序进行测定，测定过程请连续进行，不要清洗比色皿，因为水质会影响测定结果。
操作步骤1. 考马斯亮蓝染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀，预热分光光度计；2. 将0、10、20、30、40、50、60 μl牛血清白蛋白(BSA)标准溶液（1 mg/ml）分别加入到试管中，加入PBS补足到150 μl；3. 将适当体积的样品加入到试管中，并用PBS补足到150 μl；4. 向各试管中加入2.85 ml考马斯亮蓝染液，混匀，室温放置5-10 min；5. 用分光光度计测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
6. 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
7. 若用微孔板检测按上述体系比例缩小10倍操作即可。
附：PBS配方PBS缓冲液(pH7.2-7.4)：137 mmol/L NaCl ，2.7 mmol/L KCl ，10 mmol/L Na2HPO4，1.76 mmol/L KH2PO4。
Order: 010-********Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号: PA121221产品内容产品组成 PA102考马斯亮蓝染液(CBB Staining Solution) 300 ml牛血清白蛋白(BSA)标准溶液 (BSA Standard Solution) (1 mg/ml) 10×1 ml 储存条件考马斯亮蓝染液4℃避光保存。
Bradford法蛋白浓度测定试剂盒-说明书
Bradford 法蛋白浓度测定试剂盒 Bradford Protein Assay Kit产品编号：C503031包装规格：200 Assays/1000 Assays+10 Microplates 产品简介Bradford 试剂蛋白定量是一种快速，即用型的总量蛋白光学定量方法，在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm ，同时颜色也由棕色变为蓝色，该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。
将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford 试剂混合，测量在595 nm 处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA 建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
产品特点 1. 检测速度快，10~20个样品只需不足10 min 即可完成。
2. 灵敏度高，最小检测蛋白量达到0.2 μg ，待测样品体积1~20 μL 。
3. 在10~150 μg/mL 浓度范围内有较好的线性关系。
4.与还原性糖和还原性巯基试剂兼容。
运输和保存条件常温下运输，收到后，将Bradford 试剂和PBS 在2~8°C 环境中保存，5 mg/ml 蛋白质标准液-20°C 保存，保质期两年。
试剂盒组成 组分 C503031 Bradford 试剂200 mL BSA 标准蛋白 5 mg/mL 1 mL1×PBS 10 mL操作步骤A 试剂准备1. 取一定量的BSA 蛋白质标准液(5 mg/ml )，用1X PBS 稀释为终浓度为200 μg/ml 。
2. 将样品用1X PBS 做适当倍数的稀释。
B. 分光光度法 1.取20支1.5 mL 离心管，分为标准组和样品组。
其中16支1.5 mL 离心管，每个标准品设置1个重复，各管分别加入100 μL 相应浓度的标准蛋白质溶液(200 μg/mL)；剩余4支1.5 mL 离心管，分为2个重复组，重复组离心管编号相同。
Bradford法蛋白定量试剂盒
Bradford法蛋白定量试剂盒(Catalog : DBI-1039,DBI-1040)原理这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红、蓝两种不同颜色的形式。
在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。
反应化合物在465~595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。
描述1 所需时间：10min。
2 优点：快速（反应时间仅需2min）；敏感，几乎没有蛋白质损失。
3 缺点：对各种纯化蛋白质反应不同；用这种测定方法对蛋白质引起不可逆的变性。
4 灵敏度范围：蛋白质溶液25μg/ml~200μg/ml，最小测量体积0.1ml，最小测量蛋白质2.5μg。
试剂盒内容物内容物含量颜色Bradford 工作液100ml 褐色标准品（1mg/ml） 1.7ml 黄色标准品1（200ug/ml）1ml 绿色标准品2（150ug/ml）1ml 白色标准品3（100ug/ml）1ml 灰色标准品4（50ug/ml）1ml 浅红色标准品5（25ug/ml）1ml 粉色注：标准品1（1mg/ml）的标准品作为试剂盒中的备用标准品，实验者可以根据自己的需要进行稀释自己制作标准品。
保存Bradford 工作液和样品稀释液于室温保存; BSA 标准品于-20℃保存。
检测1）将蛋白质溶液转移至试管中（最大体积100μl）；2）补加试验用缓冲液（样品稀释液）至终体积100μl;3) 加入1ml Bradford工作液并震荡混匀；4）在2min后测A595值，测量应在1h内完成。
制作标准曲线1）做标准曲线所用的已知蛋白质应和未知浓度蛋白质溶液一起准备，这对于定量测定蛋白质浓度是十分必要的。
另外，每一样品应当做两到三次重复，如果用同一个比色杯来测定蛋白质的浓度，则应当先测量低蛋白浓度的样品，以避免因Bradford染料吸附在比色杯上不能彻底冲洗干净而带来误差。
Bradford 法蛋白定量试剂盒
Bradford法蛋白定量试剂盒 一、 试剂盒组成、储存、稳定性试剂盒组成 保存250次（GK5021）1000次（GK5022）2500次（GK5023）蛋白标准（5mg/mlBSA）-20℃ 0.25ml 1ml 3ml Bradford染色液 4℃ 50ml 200ml 500ml本产品收到后按照上面指示温度存放各成份，九个月内有效。
二、 原理简介Bradford 法蛋白浓度定量试剂盒是在当前常用的蛋白浓度检测方法之一Bradford 法基础上（考马斯亮蓝结合显色法）改进而成，当bradford染色液（考马斯亮蓝）和蛋白在酸性条件下结合时，最大吸光值波长立刻由456nm转至595nm，同时颜色由褐色转为蓝色，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度。
三、 产品特点1. 灵敏度高，检测浓度下限达25ug/ml,最小检测蛋白量达到0.5ug, 待测样品体积为1～20ul。
2. 检测速度快，10～20个样品只需不足10分钟即可完成。
3. 在50～1000ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。
四、注意事项1．Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
2．Bradford染色液中考马斯亮蓝易聚集成团，每次使用前请颠倒6～8次并且竖直抓住瓶口做水平圈动作，旋转瓶中液体，帮助充分混匀，但不可以上下振荡混匀。
3．低温会降低Bradford 染色液的敏感度，因此每次使用前应该使Bradford 染色液回复到室温，可以倒出每次需要的 Bradford 染色液，将原瓶放回冰箱，仅仅将需要的Bradford 染色液复温，可以减少复温时间。
4．蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。
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Bradford法蛋白定量试剂盒
产品简介：
目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford法蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit) 。
Bradford 法与传统方法相比，更简单、更稳定、兼容性更好。
Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。
但受高浓度的去垢剂的影响， 故在用Bradford Protein Assay Kit进行蛋白定量的时候，需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20, 60, 80低于0.015%。
含高浓度去污剂的蛋白定量，建议采用Leagene BCA Protein Assay Kit。
Leagene Bradford Protein Assay Kit检测速度很快，少量样品一般只需10min即可完成检测。
检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl。
在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
产品组成：
主要成分：
试剂(A): 主要由G250、缓冲液等组成。
试剂(B): 主要由牛血清白蛋白(BSA)、防腐剂等组成。
自备材料：
1、酶标仪或分光光度计
2、微量移液器
3、双蒸水
4、96孔板
操作步骤（仅供参考）：
1、完全溶解蛋白标准(BSA 5mg/ml)，按蛋白标准:稀释液=1:9进行稀释，如取蛋白标准
10μl稀释溶解于稀释液90μl，使终浓度为0.5mg/ml。
注意，蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也宜用什么溶液稀释。
也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准(BSA 5mg/ml)。
2、将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释
液补足到20μl。
3、加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液到20μl。
4、各孔加入200μl G250染色液，室温放置3～5min。
5、用酶标仪测定A595，或560~610nm之间的其它波长的吸光度。
6、根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
注意事项：
1、G250染色液使用前充分混匀。
2、G250染色液回复至室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
3、蛋白标准在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
4、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
5、需可检测560~610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm，并需96孔板。
6、建议每次测定时都做标准曲线。
因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
7、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比色皿的最小检测体积。
应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
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PE0103丙烯酰胺:亚甲基双丙烯酰胺溶液(30%Acr-Bis,29:1)。