(推荐)菌种的接种及菌悬液制备操作程序

菌种的接种及菌悬液制备操作程序

一、菌种的接种：

1、菌种的复苏：

1.1 把冻干菌种管、灭菌1ml毛细滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或超净工作台。

1.2 将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦净，放在

灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌毛细滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使冷而炸裂。

1.3 取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取

一支灭菌毛细滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌块搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面置35～37℃培养22～24小时。

1.4 取出培养物，仔细观察菌苔形态、有无杂菌、涂片、革兰氏染色镜检，

呈典型菌落后，转种3代即可应用。如发现菌形不典型，可进行平板分离单菌落。

2、菌种的接种：

2.1 准备需用的培养基，培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜

再使用。标签上注明菌名及接种日期。自冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。

2.2 点燃酒精或其他灯，在左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手

拿接种棒后端，将接种环烧红30分钟，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开棉塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管品移至火焰旁。堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。

2.3 取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接

种棒在火焰上烧灼灭菌。

2.4 将已接种毕的细菌管置35～37℃培养22～24小时，霉菌管一般置24～

25℃霉菌培养箱内培养7日。

二、菌悬液的制备：

1、短小芽孢杆菌悬液取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物加灭菌水1～2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，均匀摊布。在35～37℃培养7日。取菌苔少许涂片，革兰氏染色镜检，

应有芽孢85%以上，用灭菌水10

ml将芽孢洗下，制成芽孢悬液，合并至灭菌大试管内，在70～75℃水浴内加热30分钟将菌体杀死，待冷后冰箱贮藏为浓菌液。

2、大肠杆菌悬液取大肠杆菌工作用菌种的营养琼脂斜面培养物，用接种环取菌苔少许接种至营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时，临用时，取大肠杆菌的营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，制成悬液，在36±1℃培养18～24h后使用。此菌液只供当天使用。

3、沙门菌取沙门菌工作用菌种的营养琼脂斜面培养物，照大肠杆菌悬液制备方法进行，此菌液只供当天使用。

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