仪器分析实验 HPLC性能检查和参数测定
HPLC有关物质分析方法验证
HPLC有关物质分析方法验证HPLC（高效液相色谱）是一种常用的物质分析方法，广泛应用于药品、食品、环境等领域。
为了保证分析结果的准确性和可靠性，对HPLC方法进行验证是非常必要的。
HPLC方法验证包括了准确性、精密度、线性范围、灵敏度、特异性和系统适应性等方面的评估。
首先，准确性是衡量方法是否精确地测量目标物质含量的能力。
方法准确性的验证包括添加回收试验、标准品浓度重现性试验以及样品稀释后的测试。
通过添加已知浓度的目标物质到待测样品中，在不同浓度下测定回收率，可以评估方法的准确性。
其次，精密度是衡量方法在短期内进行重复实验的一致性。
精密度的验证包括了重复测定试验以及系统精密度试验。
通过重复测定同一样品多次，计算相对标准偏差，可以评估方法的精密度。
线性范围是指方法在一定浓度范围内的目标物质含量与测定结果之间的关系。
验证线性范围时，需要测试少量目标物质的浓度，以及相对较高的浓度，测定结果在一定限度内应与浓度成比例关系。
灵敏度是指方法在检测限下测定目标物质的能力。
灵敏度的验证包括了检测限试验和定量限试验。
检测限试验是通过在基质中添加多个不同浓度的目标物质溶液，确定出检测限。
定量限试验是通过在基质中添加不同浓度的目标物质溶液，确定出定量限。
特异性是指方法所测定的目标物质与其他干扰物之间的选择性。
特异性的验证包括了干扰物试验和选择性试验。
通过加入干扰物到目标物质溶液中，然后进行测定，确定干扰物是否对结果产生影响。
选择性试验是通过测定其他可能存在的相关物质浓度，确定是否与目标物质有影响。
最后，系统适应性主要是验证HPLC仪器和设备的稳定性和可靠性。
系统适应性的验证包括了仪器精度试验和仪器稳定性试验。
精度试验是通过测定标准品溶液的浓度，评估仪器的精度。
稳定性试验是在一定时间范围内，对同一样品进行多次测定，评估仪器的稳定性。
在进行HPLC方法验证时，需要根据相关规范文件，制定详细的验证计划和方案，确保验证方法的全面性和科学性。
九高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数的测定
线性范围
检查自动进样器在不同进 样量下的线性响应范围， 以确保其适用于不同浓度 的样品分析。
检测器性能检查
噪声与漂移
评估检测器的基线噪声和漂移，以确保其稳定性和灵 敏度。
线性范围与响应因子
检查检测器在不同浓度下的线性响应范围和响应因子， 以确保其准确性和可靠性。
检测限与定量限
确定检测器的检测限和定量限，以评估其对于低浓度 样品的检测能力。
九高效液相色谱仪的性能检查和色 谱参数的测定
目录
• 性能检查 • 色谱参数测定 • 方法开发与验证 • 仪器维护与故障排除 • 数据处理与结果分析 • 法规要求与实验室管理实践
01 性能检查
泵系统性能检查
01
02
03
流量准确性
通过测量实际流量与设定 流量的偏差来评估泵系统 的准确性。
流量精密度
03 方法开发与验证
方法开发流程梳理
明确分析目标
确定需要分析的样品类型、目标化合物以 及分析要求。
确定洗脱程序
通过优化洗脱程序，包括梯度洗脱和等度 洗脱，使目标化合物在合适的时间内出峰，
并获得良好的峰形和分离度。
选择色谱柱和流动相
根据目标化合物的性质选择合适的色谱柱 和流动相，确保目标化合物能够得到有效 的分离和检测。
峰识别、定量计算及结果解读方法分享
峰识别
根据色谱峰的保留时间、峰形等特征，识别出样品中的各 组分，并与标准品进行比对验证。
定量计算
通过比较样品峰与标准品峰的峰面积或峰高，使用内标法、 外标法等定量方法，计算出样品中各组分的含量。
结果解读
根据定量计算结果，结合样品信息和相关标准，对检测结果进行解读和评估， 判断样品是否符合要求。同时，对异常结果进行原因分析，并提出相应的改进 建议。
仪器分析实验
仪器分析实验讲义西安文理学院化学系分析化学教研室2011-3实验一、HPLC法测定减肥茶中五种蒽醌类化合物的含量一、实验目的1.了解HPLC在药物分析方面的应用。
2.熟悉色谱分析方法和操作。
二、实验原理减肥茶（植物药）中含有多种蒽醌类化合物、萘并-吡酮类、蛋白质及氨基酸、糖类及人体所必需的微量元素，其中蒽醌类成分为减肥茶的主要功效成分之一。
通过优化色谱分离条件，可以建立同时分离测定减肥茶中蒽醌类化合物的反相高效液相色谱法(RP-HPLC) ，大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素可得到有效分离三、仪器和试剂高效液相色谱仪：岛津LCSolutionSPD-20A 紫外检测器；LC-20A液相色谱高压泵；SPD-M20A 二极管阵烈检测器；CTO-20A柱箱芦荟大黄素(Aloe-emodin)、大黄酸(Phein)、大黄素(Emodin)、大黄酚Chrysophanol)和大黄素甲醚(Physcion)对照品由中国药品生物制品检定所提供。
色谱分析用试剂为色谱纯.其它试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水，所有试剂溶液使用前均经0.45μm微孔滤膜过滤。
四、实验步骤1、流动相的配制用移液管吸取1.18 mL的质量分数85%的磷酸(西安化学试剂厂XK130201-0257-007(2))于2000 mL的烧杯中加超纯水至1000ml摇匀，定容，配制成浓度为0.1%的磷酸溶液。
将配制好的溶液装入两个棕色瓶中，备用。
用100ml的量筒量取0.1%的磷酸75ml，再用250ml的量筒量取色谱纯甲醇425ml，将甲醇加入磷酸中，摇匀，配制成甲醇-0.1% H3PO4 (85:15.V/V)，然后用超声清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)超声处理一个小时。
2、对照品和样品溶液的配制对照品的制备：用分析天平精确称取芦荟大黄素0.0043g，大黄酸0.0044g，大黄素0.0050g，大黄酚0.0050g和大黄素甲醚0.0030g，分别用色谱纯甲醇溶解(若难溶或溶解很慢，可超声处理几分钟)，并定容至50ml,配制成浓度分别为0.086g/l，0.044g/l，0.1g/l，0.1g/l和0.060g/l的甲醇储备液，置于阴暗处保存。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法实验报告导言：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本实验旨在通过HPLC技术对某种药物样品进行分析，并探讨其应用的可行性和优势。
实验方法：1. 仪器设备：HPLC仪、色谱柱、样品溶液、流动相、检测器等。
2. 实验步骤：a. 样品制备：将药物样品粉末溶解于适当的溶剂中，制备成一定浓度的样品溶液。
b. 色谱柱准备：根据样品特性选择合适的色谱柱，并进行柱平衡处理。
c. 流动相制备：根据样品特性选择合适的流动相组成，并进行气泡排除和气体除湿处理。
d. 参数设置：根据样品特性和实验要求，设置适当的流速、温度、检测波长等参数。
e. 样品注射：使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入色谱柱。
f. 数据采集：通过检测器采集样品在色谱柱中的峰值信号，并记录相关数据。
g. 数据处理：利用计算机软件对采集的数据进行峰面积计算、峰高度计算等处理。
实验结果：通过HPLC技术对药物样品进行分析，得到了以下结果：1. 样品在色谱柱中产生了明确的峰值信号，峰形对称且峰高度适中。
2. 根据峰面积计算，得到了样品的浓度为X mg/mL。
3. 通过与标准品的比对，确认了样品的成分和含量。
讨论：1. HPLC技术在药物分析中的应用优势：a. 高灵敏度：HPLC技术能够检测到极低浓度的物质，对于药物分析中微量成分的检测非常重要。
b. 高选择性：通过调整流动相的组成和色谱柱的特性，可以实现对复杂样品中不同成分的分离和检测。
c. 高分辨率：HPLC技术能够有效地分离样品中的各个成分，提供准确的分析结果。
d. 自动化程度高：HPLC仪器配备了自动进样器和数据采集系统，能够实现实验过程的自动化操作和数据处理，提高了实验效率和准确性。
2. 实验中可能存在的误差和改进方法：a. 样品制备过程中的误差：药物样品的溶解度、稳定性等因素可能会对实验结果产生影响。
高效液相色谱仪的使用及运行性能测试
高效液相色谱仪的使用及运行性能测试高效液相色谱仪的使用及运行性能测试实验目的1.了解高效液相色谱仪的基本原理和结构。
?2.掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。
3.掌握测试高效液相色谱仪运行性能的指标和方法，验证各部件及整机的性能。
实验器材?高效液相色谱仪，LC-ATvp高压泵、SCL-10Avp程序控制器、SPD-M10Avp二极管阵列检测器、CTO-10Asvp温度控制器。
Shim-packVP-ODS C18 150×分析柱、20μl进样器、AS3210型超声波发生器。
无水甲醇和双蒸水各500ml（脱气处理）、萘、咖啡因（均为色谱纯或分析纯）。
实验原理高效液相色谱法是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
描述高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
LC-2010和Agilent1100型为单泵型，适于单一流动相的洗脱；LC-10Avp型为双泵型高效液相色谱仪，适于程序洗脱。
单泵型高效液相色谱仪的结构示意见图9-1。
实验步骤?（一）高效液相色谱仪的基本操作步骤（以岛津LC-10A为例）1.依照顺序开机，自检完毕后进入操作模板；2.设定洗脱程序、检测器的条件及测定报告；3.完成实验过程，打印试验结果，依照顺序关机。
（二）性能测试高效液相色谱仪的性能检查分为单个部件的验证和整机验证。
验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。
验证目的是检查并确认高效液相色谱仪运行性能是否符合要求。
1.验证标准按照中华人民共和国国家计量检定规程，高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的合格标准见表9-1。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过高效液相色谱技术，对给定的混合物进行分离和分析，掌握高效液相色谱仪的操作方法，以及对不同成分的定量分析。
二、实验原理。
高效液相色谱（HPLC）是一种高效、灵敏、准确的分析技术，它利用高压泵将样品溶液以高压送入色谱柱，通过与填料相互作用而进行分离。
在色谱柱中，不同成分将因其在填料中的亲和力不同而被分离开来。
通过检测器检测各个组分的峰面积或峰高，从而进行定量分析。
三、实验步骤。
1. 样品制备，将待分析的混合物溶解于适当的溶剂中，并进行过滤处理。
2. 色谱柱准备，连接色谱柱，并进行平衡处理。
3. 仪器调试，将色谱仪的流动相、检测器等参数进行调试。
4. 样品进样，将处理好的样品通过自动进样器送入色谱柱。
5. 数据采集，通过色谱仪软件进行数据采集和记录。
6. 数据分析，根据色谱图进行各组分的峰识别和定量分析。
四、实验结果。
通过本次实验，我们成功地对给定的混合物进行了分离和定量分析。
得到了混合物中各组分的峰面积和峰高，并通过标准曲线进行了定量分析。
实验结果表明，本实验的色谱分离效果良好，各组分分离度高，定量分析结果准确可靠。
五、实验总结。
通过本次实验，我们掌握了高效液相色谱技木的基本操作方法，了解了色谱柱的选择和调试、样品的制备和进样、数据采集和分析等基本步骤。
同时，我们也认识到了高效液相色谱技术在化学分析中的重要性和广泛应用性。
希望通过今后的实验操作，能够进一步提高我们的操作技术和分析能力。
六、参考文献。
1. Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2017). Principles of instrumental analysis. Cengage Learning.2. Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Glajch, J. L. (2011). Practical HPLC method development. John Wiley & Sons.以上就是本次高效液相色谱实验的全部内容，希望对大家有所帮助。
高效液相色谱法相关参数测定
化学键合固定相
硅氧碳键型： ≡Si—O—C 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相；
硅碳键型： ≡Si—C 硅氮键型： ≡Si—N
稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广；
化学键合固定相的特点
（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱；
2.流速
流速大于0.5 cm/s时, H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。
二、分离类型选择
choice of separation types
application of HPLC
三、HPLC的应用
高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)
高效液相色谱(HPLC)柱效测定
实验六高效液相色谱(HPLC)柱效测定093858 张亚辉一. 实验目的1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。
2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。
3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。
二. 实验原理高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。
在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。
反之，则称为正相色谱分离系统。
反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。
定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。
分离度（R）的计算公式为：R＝ 2[t(R2)-t(R1)] /1.7*(W1＋W2)式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的半峰宽。
除另外有规定外，分离度应大于1.5。
本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。
它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。
但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。
待测物性质见表1。
表1色谱柱测试条件如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC分离检测。
三.仪器与试剂1、仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。
2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水四. 实验步骤1、色谱条件色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C8）柱温：室温流动相：初始为高纯水：20％，甲醇：80％检测器：DAD检测器;检测波长：220nm；进样体积：20µl定量环，实际注射每次可控制在40µl。
HPLC性能检查和参数测定
高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数的测定一、 实验目的1、 熟悉高效液相色谱仪性能检查和色谱参数测定的方法2、 掌握高效液相色谱仪的一般使用方法二、实验原理1、性能检查：噪音、漂移、定性重复性、定量重复性、检测限；2、色谱参数：理论塔板数（n ）、理论塔板高度（H ）、有效塔板数（n eff ），有效塔板高度（H eff ），容量因子（k ），分配系数比（α），分离度（R ）。
三、色谱条件色谱仪由岛津10AT vp 泵、10AT vp 紫外检测器及岛津ODS 色谱柱（150×4.6mm ，5μm ）组成；流动相：甲醇-水（85:15，v/v ）；流速：1ml/min ；柱温：常温；检测波长：254nm ；进样量：定量环20μl 。
四、实验步骤1、打开计算机、工作站，确认参数；打开泵电源（power ），更换流动相，排气，设定流速，开泵（pump ）；打开检测器电源，自检完毕后设定检测波长；采集基线，观察噪音和漂移，记录。
2、进样一次，出峰完毕后手动停止，保存。
重复5~6次。
3、打开保存的色谱图，积分处理；打印一副色谱图和所有实验数据，老师审阅后签名。
4、关闭检测器，停泵，更换纯甲醇，排气，设定流速0.5ml/min ，开泵，关闭工作站、计算机，用纯甲醇分别在Inject 和Load 位置清洗进样口。
5、计算性能指标（灵敏度，检测限，定性、定量重复性）。
6、以苯和萘的数据计算色谱参数。
五、数据处理要求1、计算公式：21/25.54R t n W ⎛⎫= ⎪⎝⎭，H = L/n ，21/2'5.54R eff t n W ⎛⎫= ⎪⎝⎭， H eff = L/n eff ， W = 1.699W 1/2，2121(1)(2)121/21/22() 1.177()1.5R R R R t t t t R W W W W --==≥++， 222111''R R k t K k t K α===， 0's R m m t k m t ==，灵敏度： )(601000min)/()()/(g m ml F S V A g ml mV S ⨯⋅=⋅μ， 检测限（g/ml ）： D=2N/S ，N 为噪音（mV ），C 萘= g/ml 。
hplc含量测定实验流程
hplc含量测定实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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试验九高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数的测定
实验九 高效液相色谱仪的性能检查和 色谱参数的测定
2. 色谱条件 色谱柱：ODS柱（4.6×150mm, 5 μm）； 流动相：甲醇-水（80:20，v/v）； 流速：0.8 ml/min ； 检测器：UV 254 nm ； 进样量：20 l。
操作步骤
电源开关
2)开电源开关；
泵
3)启动泵;
启 动
4)设定压力上、下限; ／
5)设定分析流速及压
停 止
力上下限；
键
设定流速及压力上/下限
实验九 高效液相色谱仪的性能检查和 色谱参数的测定
操作步骤
6)设定波长
检测器 电源开关
波长设定键
零点调节键
实验九 高效液相色谱仪的性能检查和 色谱参数的测定
操作步骤
7)通过进样器进样； 8)进样分析; 9)记录数据与数据处
理; 10)分析结束后停
泵，将进样阀手柄 置LOAD位置； 11)停泵； 12)关闭电源开关。
Thank you
实验九 高效液相色谱仪的性能检查和 色谱参数的测定
三、实验内容
1．高效液相色谱法方法的特点
作为一种分离分析方法，应用广泛，具有分 析效率高、选择性好、分析速度快、检测灵敏度 高等优点
实验九 高效液相色谱仪的性能检查和 色谱参数的测定
2．高效液相色谱仪介绍（1）
进样口
在线检测
混合器
高压泵
溶剂
高压输送流动相
实验九 高效液相色谱仪的性能检查和 色谱参数的测定
4．高效液相色谱仪性能检查 流量精度 噪音和飘移 定性重复性考察
定量重复性考察
实验九 高效液相色谱仪的性能检查和 色谱参数的测定
hplc操作规程
hplc操作规程HPLC（高效液相色谱）是一种高效、准确、灵敏的分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等领域。
为了确保HPLC分析的准确性和可靠性，有必要制定一份详细的HPLC操作规程。
以下是一个HPLC操作规程的示例，共计1200字。
HPLC操作规程1. 实验前准备工作(1) 确保仪器处于正常工作状态。
检查HPLC系统的压力、流速、温度等参数，确保所有泵、检测器和采样器都能正常工作。
(2) 根据实验的需求，准备好HPLC色谱柱和色谱柱保护柱。
(3) 检查溶液的pH值、浓度等参数，确保样品溶液的配制准确无误。
2. 样品制备(1) 根据实验需求，准确称取适量的样品，并将其溶解于适量的溶剂中。
(2) 需要注意的是，溶解样品时要完全溶解，避免残留物对HPLC柱造成损害。
(3) 使用过滤器或离心机去除样品中的杂质和固体颗粒。
3. 系统平衡(1) 打开HPLC系统的所有阀门，确保流路畅通。
(2) 开始系统平衡前，关闭检测器和采样器，以避免样品流入检测器和采样器。
(3) 启动系统，调整流速至实验所需的流速。
通常流速为0.2-2 mL/min。
(4) 进行15-30分钟的系统平衡，确保系统稳定。
4. 校正和质量控制(1) 定期校正流速、温度和检测器灵敏度等参数，确保实验结果的准确性。
(2) 进行质量控制，包括运行标准曲线、检测器灵敏度和峰面积的稳定性等测试，以确保分析结果的可靠性。
5. 样品注射(1) 将样品以合适的方式注入采样环或自动采样器中。
(2) 确保注射量适当，一般不超过色谱柱的容量的10%。
(3) 使用空白样品作为对照，进行注射前和注射后的检测，以排除注射器、柱等可能引起的峰偏移或异常的情况。
6. 数据采集和分析(1) 设置合适的检测波长和积分时间，以获得准确的检测结果。
(2) 在实验过程中定期检查系统的稳定性和峰形。
(3) 根据实验要求，对分析结果进行计算和解释，包括峰高、峰面积、保留时间等指标。
(4) 记录得到的数据和结果，保存实验记录和报告。
HPLC性能测试
HPLC性能测试一、仪器性能测试1、流量准确性与重复性泵的稳定性与流量准确与否直接相关。
以100%水为流动相（经过过滤和脱气处理），设定流量为1ml/min，在泵出口处连接电子流量计，待流速稳定后连续记录5次读数，以5次读数的平均值作为流量测定值F m ,重复上面的测定步骤3次，按照下式计算S S和S RS S =（F m -F S)/ F S×100%式中：S S——流量准确度（%）F m——流量实测值，ml/min（取三次测量的平均值）F S ——流量设定值，ml/minS R =×S R——流量重复性误差（%）F m——流量实测值，ml/min——同一组测量的算术平均值，ml/min按照同样步骤测试0.1ml/min、2ml/min与5ml/min 的相应指标。
2、噪声与漂移实验条件：紫外吸收波长为254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，选用C18 色谱柱，开机，平稳运行2h后，记录基线60min,利用工作站计算噪声和漂移。
3、检出上限将检测器和记录仪连接好，检测器波长选在254nm,通电稳定后，用注射器直接向检测池中注射2%异丙醇水溶液冲洗检测池至记录仪读数不变，记下此值。
之后，依照上法分别注入丙酮/2%异丙醇系列水溶液（丙酮含量为0.1%、0.2%、0.3%…1.0%）冲洗检测池，并记录各溶液对应的稳定记录仪读数，每个溶液重复测量3次，取算术平均值。
以5个丙酮含量（0.1%-0.5%）和对应的记录仪读数做标准曲线，在曲线上找出丙酮含量大于0.5%各点的读数，与对应含量的测量值做比较，测量值低于读数5%时，认为曲线弯曲，此点的浓度作为检测上限C H。
二、应用性能测试1、梯度误差由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B经由5个梯度从0变到100%(0%-20%-40%-60%-80%-100%)。
将输液泵盒检测器连接（不接色谱柱），开机后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，求出A,B溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次，计算平均值。
高效液相色谱仪的性能检查
高效液相色谱仪的性能检查一、实训目标 1．了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，把握高效液相色谱仪的基本操作； 2．认识高效液相色谱仪仪器性能检查的项目和办法； 3．把握液相色谱柱性能指标（如理论塔板数、峰不对称因子、柱的反压等）的测定办法，学会判别其性能优劣。
二、实训原理 1．高效液相色谱仪的性能指标 (1)流量精度仪器流量的精确性，以测量流量与指示流量的相对偏差表示。
(2)检测限本试验用法紫外检测器，其检测限为某组分产生的信号大小等于2倍噪声时，每毫升流淌相所含该组分的量。
(3)定性重复性在同一试验条件下，组分保留时光的重复性，通常以被分别组分的保留时光之差的相对标准偏差来表示（RSD≤1％认为合格）。
(4）定量重复性在同一试验条件下，组分色谱峰峰面积（或峰高）的重复性，通常以被分别组分的峰面积的相对标准偏差来表示（RSD≤2％认为合格）。
2．液相色谱柱的性能指标一支色谱柱的好坏要用一定的指标来举行评价。
通常评价色谱柱的主要指标包括：理论塔板数N；峰不对称因子；两种不同溶质的挑选性（(a)；色谱柱的反压；键合固定相的浓度；色谱柱的稳定性等。
一个合格的色谱柱评价报告起码应给精彩谱柱的基本性能参数，如柱效能（即理论塔板数N)、容量因子k、分别度R、柱压降等。
评价液相色谱柱的仪器系统应满足相当高的要求：一是液相色谱仪器系统的死体积应尽可能小；二是采纳的样品及操作条件应该合理，在此合理的条件下，评价色谱柱的样品可以彻低分别并有适当的保留时光。
不同类型色谱柱性能评价所需的样品与所采纳的操作条件是不同的，可查阅相关参考资料。
三、实训仪器与试剂 1．仪器 PE200型高效液相色谱仪或其他型号液相色谱仪（一般配置，带紫外检测器）；TC4色谱工作站或其他色谱工作站；色谱柱［PEBrownleeC18反相键合相色谱柱（5μm,4.6mmi.d.×150mm)];100μL平头微量注射器；超声波清洗器；流淌相过滤器；无油真空泵；容量瓶等玻璃仪器。
HPLC测定有关物质和含量方法验证解析
HPLC测定有关物质和含量方法验证解析HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，在药品分析、环境监测、食品安全等领域有着广泛的应用。
在HPLC测定有关物质和含量方法验证解析中，可以从方法验证的目的、内容和步骤等方面展开。
方法验证的目的主要是验证所采用的分析方法是否可靠、精确、准确且具有可重复性，以保证在日常分析中的可靠性和可应用性。
方法验证的内容包括系统适用性、灵敏度、线性度、准确度、精密度、稳定性等，可以通过一系列实验和分析来进行验证。
方法验证的步骤一般包括以下几个方面：1.系统适用性验证：通过对样品的系统性能参数进行验证，包括压力、回峰时间、分离度和理论板数等。
通过调整仪器条件和操作参数，使得方法能够恰当地适用于所测定的物质。
2.灵敏度验证：通过测定不同浓度的标准品，确定方法的最小测定限和最小检测限。
灵敏度的验证可以通过信噪比、回归方程等指标进行评估。
3.线性度验证：通过测定一系列浓度已知的标准品，绘制浓度与峰面积或峰高的线性关系图，确认方法的线性范围和相关系数。
4.准确度验证：通过加标回收实验，比较样品中已知添加量与实际回收量的差异，评估方法的准确度。
5.精密度验证：通过同一样品的多次测定，计算相对标准偏差（RSD）来评估方法的精密度。
6.稳定性验证：通过不同储存条件下样品的测定，包括短期和长期稳定性试验，评估方法的稳定性。
在方法验证的解析中，需要对上述步骤进行详细的数据处理和结果分析。
对于系统适用性验证，需要报告各项系统性能参数的测试结果，并说明是否符合要求；对于灵敏度验证，需要计算最小测定限和最小检测限，并评价方法的灵敏度；对于线性度验证，需要绘制线性关系图，并计算回归方程的相关系数；对于准确度和精密度验证，需要计算回收率和相对标准偏差，并进行统计学分析；对于稳定性验证，需要比较不同条件下测定结果的差异。
此外，在HPLC测定有关物质和含量方法验证解析中还需要注意的是，要同步验证色谱柱的适用性、短柱、长柱分析的差异，以及可能的干扰和修正因子等因素。
HPLC的使用步骤
HPLC的使用步骤HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是一种高效液相色谱技术，用于分离和分析溶液中的化合物。
下面是HPLC的使用步骤：1.样品准备：首先，需要准备样品。
根据所研究的化合物性质，选择适当的提取和纯化方法。
确保样品的浓度适当，并将其溶解于适当的溶剂中。
2.设定仪器参数：接下来，需要设置和检查仪器的相关参数。
这包括选择适当的色谱柱、流动相、检测器和流速等。
根据样品特性和分离要求，选择合适的操作条件。
3.预洗色谱柱：在开始实验之前，需要进行柱子的预洗。
这可以通过将流动相在柱子上通过一段时间来完成。
这有助于去除残留杂质并稳定柱子。
4.校准仪器：为了确保准确的分析结果，需要校准仪器。
这可以通过使用标准样品来完成。
选择适当的标准物质，根据其峰面积和浓度绘制标准曲线。
5.注射样品：将样品溶液注射到色谱仪中，通常使用自动注射器。
确保样品注射量适当，以避免柱子过载。
6.运行分离：开始运行仪器，以分离样品中的化合物。
流动相以设定的速率通过色谱柱，用于分离化合物。
这个过程可能需要一段时间，取决于样品的复杂性。
7.监测检测器信号：使用合适的检测器监测流经柱子的化合物。
常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
通过检测器产生的信号，可以确定样品中的目标化合物的存在和浓度。
8.数据分析：分析检测器产生的信号，并将其转换为峰面积。
使用标准曲线和峰面积，可以计算出样品中目标化合物的浓度。
进行数据分析和处理，以获取所需的结果。
9.定性和定量分析：根据所需的目标，确定化合物的质量和纯度。
可以使用定性和定量方法来确定目标化合物的结构和浓度。
10.清洗和保养：在使用HPLC之后，需要对仪器进行清洗和保养。
这包括冲洗色谱柱、清洗注射器和流动相贮存器。
确保所有的部件都干净，没有残留物。
这些步骤提供了使用HPLC进行分离和分析化合物的基本指南。
根据具体的实验目的和所研究的化合物，可能需要进行调整和优化。
hplc实验注意事项
高效液相色谱法（HPLC）是一种在化学分析中常用的技术，但在进行HPLC实验时需要注意一些事项，以确保实验的准确性和安全性。
以下是一些HPLC实验的注意事项：
1. 设备检查：在进行实验前，确保HPLC仪器的各个部件都处于良好状态，包括柱、检测器、流动相、进样器等。
2. 溶剂质量：使用优质的溶剂，并确保其纯度和配制的准确性。
不良的溶剂质量可能导致峰形状异常或基线漂移。
3. 柱的适用性：根据分析物性质选择合适的柱，并确保柱的状态良好。
柱的使用寿命有限，需要定期更换。
4. 流动相的准备：严格按照实验方法准备流动相，并使用过滤器或超纯水保证流动相的纯净性。
避免在流动相中引入气泡。
5. 进样器的操作：确保进样器干净，避免交叉污染。
正确设置进样体积和注射速度，以确保样品得到均匀的进样。
6. 检测器设置：根据实验要求选择适当的检测器波长和灵敏度。
在实验过程中，监测峰的形状和基线，确保信号的稳定性。
7. 温度控制：对于某些实验，需要对系统进行温度控制。
确保系统温度稳定，以获得准确的分析结果。
8. 废弃物处理：处理废弃物时，特别是有机溶剂，要按照安全规定进行，避免对环境造成污染。
9. 个人安全：使用适当的个人防护设备，如实验室外套、手套和护目镜。
避免接触有毒或刺激性物质。
10. 实验记录：记录实验条件、参数和结果。
良好的实验记录有助于追溯实验过程和结果。
在进行HPLC实验时，严格遵循实验方法、注意仪器维护和个人安全，能够提高实验的可靠性和准确性。
高效液相色谱仪校准安全操作及保养规程
高效液相色谱仪校准安全操作及保养规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于生化、医药、环保等领域。
为确保HPLC的准确度和稳定性，需要经常进行校准和保养。
本文将针对HPLC的校准和保养过程中的安全操作规程进行介绍。
一、HPLC校准HPLC校准是确保HPLC测试值准确度和精度的必要步骤。
在进行校准之前，应做好以下准备工作：1.准备好标准溶液：根据需要的物质准备好标准溶液。
例如，若需要校准氨基酸分析，应准备标准氨基酸溶液；2.准备好HPLC系统：按照操作手册的步骤进行，启动HPLC系统并等待稳定；3.准备好校准参数：参数包括流速、检测器波长、温度等。
在进行HPLC校准时，需要遵守以下安全操作规程：1.告知其他人员：在进行校准之前，需要告知实验室其他人员，以免发生意外伤害；2.戴手套和防护眼镜：在校准时需要戴手套和防护眼镜，以免校准液体溅入眼睛或皮肤；3.清洁工作台：要确保操作台面干净，并进行消毒，以免污染标准溶液；4.注意标准品的浓度：标准品的浓度应选择合适的范围，以免操作过程中出现误差；5.记录参数：在校准过程中应记录参数，以便查验和复查。
二、HPLC保养HPLC作为一台动力学仪器，需要经常进行维护和保养，才能保持稳定性和准确度。
下面介绍HPLC保养时的安全操作规程：1.清洗样品针头：样品针头是HPLC中易出现问题的部件之一，需要经常清洗和更换。
在清洗时需要戴手套和防护眼镜，在清洗时，用溶液清洗样品针头，并用水冲洗干净；2.更换柱：在使用一段时间后，柱子会产生变形和酸化，需要及时更换。
在更换时，应先停止运行HPLC，并关闭系统。
在更换柱子时，需要戴手套和防护眼镜，同时将管路清洗干净；3.保养检测器：检测器是HPLC的核心部件之一，需要经常维护和更换。
在保养检测器时，应戴手套和防护眼镜，关闭HPLC并将检测器拆卸，清洗并更换检测器洗涤液。
在以上操作完成后，还需要注意以下几点安全操作规程：1.打开机箱前需要断电，以免触电或引发电火灾；2.感应器需要定期校准，以保持准确度；3.定期检查管路是否有泄漏，以保证检测结果的准确性；4.植物油润滑泵需要使用专门的润滑油。
仪器分析实验HPLC性能检查和参数测定
仪器分析实验HPLC性能检查和参数测定HPLC（高效液相色谱）是一种广泛应用于化学分析和生物科学领域的分析工具。
在进行HPLC分析之前，需要对仪器进行性能检查和参数测定，以确保仪器的正常运行并获得准确的分析结果。
一、HPLC性能检查：1.系统漏率检查：将HPLC柱安装在系统中，关闭柱前和柱后的开关，然后观察系统是否存在漏气。
如果存在漏气，应检查并修复可能的漏点。
2.系统稳定性检查：打开系统，让其稳定运行30分钟，观察系统是否有任何问题，例如气泡形成或压力不稳定等。
如果出现异常，应检查并修复问题。
3.系统噪声检查：将检测器设置为负值和零值，并观察噪声水平。
如果噪声过高，可以检查并清洁检测器或更换耗材。
二、HPLC参数测定：1.流速测定：测定流速是确保HPLC系统正常运行的重要参数。
可以使用标准溶液通过系统进行测定，记录流速，以确保其稳定性和准确性。
2.程序温度测定：对于一些分析，需要控制系统温度以保持准确的分析结果。
使用温度传感器测量系统温度，确保其与设定的温度一致。
3.峰面积测定：使用标准品进行测定，记录峰面积，并与文献或已知值进行比较，以验证分析方法的准确性。
4.分辨率测定：使用合适的混合物进行测定，计算分离峰的分辨率。
分辨率测定是评估HPLC方法性能的重要指标之一需要注意的是，HPLC参数测定的具体方法和步骤可能会因应用和分析对象的不同而有所变化。
在进行参数测定时，应参考相关文献和方法，并按照实验要求进行操作。
总之，HPLC性能检查和参数测定是确保HPLC系统正常运行和获得准确分析结果的关键步骤。
通过定期检查和测定，可以保证仪器的稳定性和可靠性，并确保实验结果的准确性和可重复性。
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HPLC 性能检查和参数测定
一、实验目的 二、实验原理
1、性能检查：噪音、漂移、定性重复性、定量重复性、检测限；
2、色谱参数：理论塔板数（n ）、理论塔板高度（H ）、有效塔板数（n eff ），有效塔板高度（H eff ），容量因子（k ），分配系数比（α），分离度（R ）。
三、色谱条件
色谱仪由岛津10AT vp 泵、10AT vp 紫外检测器及岛津ODS 色谱柱（150×4.6mm ，5μm ）组成；流动相：甲醇-水（85:15，v/v ）；流速：0.8ml/min ；柱温：常温；检测波长：254nm ；进样量：定量环20μl 。
四、实验步骤
1、打开计算机、工作站，确认参数；打开泵电源（power ），更换流动相，排气，设定流速，开泵（pump ）；打开检测器电源，自检完毕后设定检测波长；采集基线，观察噪音和漂移，记录。
2、进样一次，出峰完毕后手动停止，保存。
重复5~6次。
3、打开保存的色谱图，积分处理；打印一副色谱图和所有实验数据，老师审阅后签名。
4、关闭检测器，停泵，更换纯甲醇，排气，设定流速0.5ml/min ，开泵，关闭工作站、计算机，用纯甲醇分别在Inject 和Load 位置清洗进样口。
5、计算性能指标（灵敏度，检测限，定性、定量重复性）。
6、以苯和萘的数据计算色谱参数。
五、数据处理要求
1、计算公式：
2
1/25.54R t n W ⎛⎫= ⎪⎝⎭，H = L/n ，2
1/2'5.54R eff t n W ⎛⎫
= ⎪⎝⎭，H eff = L/n eff ，W = 1.699W 1/2，
2121(1)(2)
121/21/2
2() 1.177()
1.5R R R R t t t t R W W W W --=
=≥++， 222111''R R k t K k t K α=
==， 0
'
s R m m t k m t ==，
灵敏度：
)
(601000m in)
/()()/(g m ml F S V A g ml mV S ⨯⋅=
⋅μ，检测限（g/ml ）：D=2N/S ，N 为噪音（mV ），
C 萘= g/ml 。
2、数据结果按表中内容填写，对色谱仪和色谱柱性能参数进行评价。
高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数的测定
表1 HPLC 仪性能检查结果
1
2 3 4 5 6 平均值
S
RSD （%）
t0(min)
t R苯(min)
t R萘(min)
Δt R(min)
A苯（uv.s）
A萘（uv.s）
A苯／A萘
h苯(uv)
h萘(uv)
W1／2（苯）（S）
W1／2（（萘）（S）
表2 苯和萘的高效色谱参数的测定
1 2 3 4 5 6 平均值n苯
n萘
H苯(mm)
H萘(mm)
n eff苯
n eff萘
H eff苯(mm)
H eff萘(mm)
k苯
k萘
α
R
D萘
六、思考题
P155 1，3。