应用四甲基氢氧化铵控制电渗流的毛细管电泳方法分离多沙唑嗪及其中间体的对映体

!" 实验部分
! ) !" 仪器与试剂 ! ! 美国 ),./01- 公司 的 * 2 !%3 &(4 毛 细 管 电 泳仪； (& 51617 软件； 石英毛细管 （ 总长 ") .0 ， 有效 长度 () .0 ， 内径 $) ! 0 ， 河北永年锐沣色谱器件 有 限公司） ； 奥利龙 *&* 型酸度计。 ! !（ +） ’ 多沙唑嗪盐酸 盐、 （ +） ’#（ ’ #， "’苯 并 二 ! 烷 ’& ’ 羰基 ） 哌 嗪 盐 酸 盐、 " ’ 氨 基 ’& ’ 氯 ’% ， ’’二 甲 基 喹 唑啉 （ !%4 ） 均为重庆医科大学药物化学与生物材 料研究室提供； （ 用前经去离子水重 结 晶两 " ’ 环糊精 次） 、 &$ 8 四甲基氢氧 化 铵 水 溶 液、 十六烷基三甲基 溴化铵均为分析纯， 购自国药集团化学试剂有限公 司； 其余试剂均为分析纯； 实验用水为去离子水。 ! ) #" 毛细管电泳条件 ! ! 将 )%* 溶解于去离子水中， 配成 ") 09 2 " 的溶 液。电泳缓冲 液： 由 %) 00:; 2 " <1# & *= （ 用磷酸 " 调节 ># 至 & ? & ） 、 #& 00:; 2 " " ’%( 和 () 00:; 2 "
［(］ ［,］ 溴化铵 （ 11:3 ） ； 也有短链季铵盐如四丁基氢氧 ［%］ 化铵 （ 1:3 ） 、 四甲基 氢氧化 铵 （ 123 ） 。 !) 环 糊 精
（ ! );N ） 是一种廉价易得的手性添加剂， 但 在分 离一 些对 映 体 时， 它 的 选 择 性 不 如 带 负 电 的 ! );N ， 如羧 甲基 ) ! ) 环糊 精 （ ;2) ! );N ） 、 磺 酸 基 ) !) 环 糊 精 （ /"#) F,DCE) ! );N ） ， 从而不能使对映体 分离或 仅能 达到部 分分离。手性 药 物 多 沙 唑 嗪 （ E&0,G&/-? ） 是一种选
#" 结果与讨论
# ) !" 实验条件的初步选择 ! ! 在分离 一 些 对 映 体 时， 用 带 负 电 的 " ’%( 衍 生 物作 为 手 性 添 加 剂， 在 相 同 条 件 下 能 得 到 比 " ’%( 更好的分离效果。 其 原 因 主 要 有 两 点： 一是带负电 的 " ’%( 衍生物与对映体之 间 存 在 着 离 子 间 的 静 电 作用［ * ］， 从 而 产 生 更 高 的 选 择 性； 二 是 带 负 电 的 "’ %( 衍生物在电 泳时 的迁移 方向通 常与电 渗流 方向 相反， 当其与对映体 作 用 时 能 减 慢 对 映 体 的 迁 移 速 度， 从而延长了对映体的迁移时间， 增加了对映体与 手性添加剂之间 的 作 用 几 率［ - ］。 因 此， 在分离这些 对映体时， 如果选择 " ’%( 作 为 手 性 添 加 剂， 也有可 能通过控制电渗流来延长对映体的迁移时间来达到 理想的分离度。 ! ! 缓冲液的 ># 值对电渗 流和 对映体 的 解 离 状 态 都有重要影响， 因此本 文 首 先 考 察 了 ># 对 )%* 分 离的影响。 由 于 )%* 是 碱 性 化 合 物， 因此较低的 ># 对分离有利。实验发现 ># 小于 ( 时， 组分的迁 移时间及 分 离 度 均 基 本 保 持 不 变。 进 一 步 改 变 " ’
! 第 " 期 成禹杉， 等： 应用四甲基氢氧化铵控制电渗流的毛细管电泳方法分离多沙唑嗪及其中间体的对映体 ・ " ’ - ・ 择性 ! # 受体阻断剂， 用于治疗高血压和良性前 列 腺 肥大。但是， 新近的 抗 高 血 压 和 降 脂 治 疗 预 防 心 肌 梗死实验 （ !""#!$ ） 结 果 表 明： !# 受 体 阻 断 剂 组 的 多沙唑嗪 出 现 较 多 的 心 血 管 事 件
。常用 的 季 铵 盐 有 阳 离 子 表 面 活 性 剂 如 十
［!］
六烷基三 甲 基 溴 化 铵 （ ;1:3 ） 、 十四烷基三甲基
收稿日期： !""# )"( )!$
第一作者： 成禹杉， 男， 硕士研究生， 从事药物化学方面的研究， *)+,-# ： .$/ ) 0$ * (+, ’ .&+’ 通讯联系人： 余 - 瑜， 男， 教授， 博士生导师， *)+,-# ： $"$",$(. * (+, ’ .&+’
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应用四甲基氢氧化铵控制电渗流的毛细管电泳方法 分离多沙唑嗪及其中间体的对映体
成禹杉， - 杨晓兰， - 余- 瑜
（ 重庆医科大学药物化学与生物材料研究室，重庆 %"""(+ ） 摘要： 建立了毛细管电泳手性分离多沙唑嗪中间体 对 映 体 的 方 法， 并 同 时 分 离 了 多 沙 唑 嗪 对 映 体。 考 察 了 不 同 种 能有效控制电渗流并提高组分的分离度。实验 还 考 类季铵盐对电渗流及分离的影响， 其中四甲基氢氧化铵 （ 123 ） 察了其他因素， 如 45 值、 分离电压和磷酸二氢钠浓度对分离的影响。所用的毛细管为 %" .+ （ 有 效 长 度 ," .+ ）/ $" ! + ， 缓冲液为 (! ++&# 6 7 ! ) 环糊精、 ," ++&# 6 7 123 、 +" ++&# 6 7 磷酸二氢钠 （ 45 !0 ! ） ， 分离电压为 !" 8% 。在 此条件下多沙唑嗪及其中间体的对映体均达到了基线分离。实验结果表明， 一些用 ! ) 环糊 精 不 能 完 全 分 离 的 对 映 体通过加入 123 控制电渗流能达到满意的分离效果。 关键词： 毛细管电泳法； 电渗流； 四甲基氢氧化铵； 多沙唑嗪及其中间体； 对映体分离 中图分类号： 9+$&- - 文献标识码： : - - 文章编号： (""" )&#(, （ !""# ） "% )"%#& )"%- - 栏目类别： 研究论文
［$］
（ $ /*1 , $ @ ） ， 负极检测； $&) 组成。阳极压力进样 测电渗流时采用 正 极 检 测， #) 8 乙 醇 为 电 渗 流 标 记 检测波长为 &)$ -0 ， 实验温 物。分离电压为 &) /A ， 度为 &$ B 。两次进样间依次 用水冲 洗 & 0C- ， 缓冲 液冲洗 & 0C- 。
。为探讨其毒
副作用产生的原因， 实现多沙唑嗪的安全使用， 人们 致力 于 对 多 沙 唑 嗪 单 一 对 映 体 的 研 究。 牛 长 群 等［ % ］报道了用 %&’ " ’%( 作 为 手 性 添 加 剂 的 毛 细 管 电泳分离多 沙 唑 嗪 对 映 体 的 方 法， 但 用 " ’%( 分 离 未 获 成 功。 #（ ’ #， " ’ 苯 并 二 ! 烷 ’& ’ 羰 基 ）哌 嗪 （ )%* ） 是合成多 沙 唑 嗪 （ 结构见图 #） 的重要中间 体。 %+,- 等［ ’ ］ 采 用 了 高 效 液 相 色 谱 法 手 性 分 离 )%* 。但未见毛细管电泳分离多沙唑嗪及 其 中 间体 的报道。本文 通 过 采 用 $&) 控 制 电 渗 流， 直接以 并在此基础上同 " ’%( 为拆分 剂 手 性 分 离 了 )%* ， 时分离了多 沙 唑 嗪 对 映 体， 扩 大 了 " ’%( 的 应 用 范 围， 为多沙唑嗪的 生 产 监 测 及 质 量 控 制 提 供 了 可 行 的分析方法。
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图 ! " （ !） "#$ 和 （ %） 多沙唑嗪的结构式 &’() !" *+,-.+-,/0 12（ ! ）"#$ !34（ % ）415!610’3
背景电解质 浓 度 和 分 离 电 压 等， 得到了较 %( 浓度、 优化的 条 件， 即 ") 00:; 2 " <1# & *= " 缓 冲 液 （ ># &. & ） 、 #& 00:; 2 " " ’%( 、 分离电压 &) /A 。但该条件 不能使 )%* 达 到 理 想 的 分 离。 因 此， 在 此 基 础 上， 考察了季铵盐对分离的影响。 # ) #" 不同种类的季铵盐对 "#$ 分离的影响 ! ! 实验分别 考 察 了 %$!) 、 $!) 、 $&) 对 )%* 分 离的影响。其 中， %$!) 对 组 分 的 迁 移 时 间 和 分 离 度均无影响， 即使其 浓 度 接 近 临 界 胶 束 浓 度 时 也 不 能使电渗流反向。 $!) 和 $&) 均 能 延 长 组 分 的 迁 移时间， 提 高 分 离 度。 实 验 发 现 $&) 控 制 电 渗 流 的能力比 $!) 更 强， $&) 在 &) 00:; 2 " 时 即 可 使 电渗流反向， 而 $!) 在 $) 00:; 2 " 时 才 能 产 生 反 向电渗 流。 因 此 选 择 $&) 为 控 制 电 渗 流 的 添 加 剂。进一步考察了 $&) 浓 度对 电 渗 流 （ 3=D ） 及分 的影响， 结果分别见图 & ’1 和图 & ’E 。 离度 （ !@ ） ! ! 从 图 & 结 果 看， $&) 浓 度 增 加， 反向电渗流增 大， 而 )%* 的分离度呈现先降低后增加的 趋势。可 能的原因为对映体的迁移时间差和峰宽决定其分离 度。一方面， 迁 移 时 间 延 长 可 以 增 加 组 分 与 " ’%(