总胆汁酸检测ppt课件
《肝功能检查》PPT课件_OK
血浆蛋白质
☆白蛋白是肝脏制造的主要蛋白质,半寿期 长。 低白蛋白血症是慢性进行性肝脏疾病的特征。 (重症急性肝损伤)
☆凝血酶原反映肝脏合成功能。(半寿期短,严 重肝损伤的最早指标)
☆总球蛋白作为肝脏疾病严重性的粗略估计。 ☆AFP作为肝癌指标及胚层细胞癌的标记。 ☆α1-抗胰蛋白酶及铜蓝蛋白作为肝脏专门疾病
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ห้องสมุดไป่ตู้
天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)
【概述】非特异性细胞内功能酶,在心脏活性第
一位,肝为第二位。有线粒体AST和胞液AST两种
同工酶, 催化的反应:
天门冬氨酸
α-酮戊二酸
AST
草酰乙酸
谷氨酸
【参考值】 <45U/L (连续监测法 37℃)
【临床意义】
1.急性病毒性肝炎在发病之前AST、ALT升高,
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【异常结果分析】 ★肝癌患者有时在白蛋白和α1球蛋白之间 出现一条新区带即甲胎蛋白区带。 ★多发性骨髓瘤患者在β、γ之间或γ区可 见M蛋白区带。
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血氨(Blood ammonia;BA)
采静脉血2ml,肝素抗凝,隔绝空气,立即送检
正常人蛋白质代谢过程中产生的氨,90%在肝脏通过鸟
氨酸循环形成尿素从尿中排出。肝功能严重受损时,肝脏 清除氨的能力下降,血氨升高,达到一定程度,可引起肝 性脑病,因此肝昏迷时测定血氨有助于诊断和疗效观察。
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前白蛋白( Prealbumin ,PA) 前白蛋白是一种肝合成载体蛋白,分子 量为六万,电泳时处在白蛋白前方,半衰 期为1.9天。 【参考值】
0.1~0.4g/L (透射比浊法)
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【临床意义】 1. 是一种急性时相蛋白。 2. 反映营养状态的指标。 3. 肝脏疾病时均降低,且往往早于其它
肝脏疾病常用检查PPT课件
(七)肝功能实验检查项目的选择与应用
检验肝功能的目的在于探测肝脏有无损害、查明原因、 判断预后以及鉴别黄疸等。因此,肝功能试验的临床 应用对于诊断、治疗、预后等方面具有重要价值。肝 功能试验种类繁多,不下数百种,但是一种试验只能 探查肝脏的某一种功能,没有一种试验能全面反映肝 脏的一切功能。因此,为了得到比较正确的结论,应 做若干种试验,必要时要反复复查。同时对肝功能试 验的评价,必须结合临床表现全面考虑,避免片面性 及主观性。此外,也要注意节约人为物力及财力,有 的放矢地选择性做必要的肝功能试验是重要的。
尿中胆素原
增多
不定或升高
减少或消失
粪中胆素原
增多
减少
减少或消失
血清 蛋白
电泳谱 脂蛋白X
正常 阴性
Alb减少,γ-球蛋白
升高 一般阴性
球蛋白明显升高 明显增高
血
谷丙转氨酶
正常,稍高
清 酶
碱性磷酸酶
正常
类
γ-谷氨酰转肽酶
正常
肝炎急性期增高 正常或轻度增高 可增高
正常或增高 明显增高 明显增高
其
凝血酶原时间
参考值:
成人
40-110u/L(金-阿氏法)。
儿童
<250u/L
(五)血清酶及同工酶检查
临床意义: A)ALP分布 肝、骨、肠等,主要在肝 B)ALP分布在肝细胞血窦侧和毛细胆管侧的微 绒毛上,经胆汁排入小肠,当胆汁排出不畅, 毛细胆管压力增加时,可诱发产生大量ALP, 故胆汁淤滞时,ALP升高。 C)骨骼疾病时,骨瘤、骨折恢复期ALP也可升高
肝病预后。 (2)活化部分凝血活酶时间测定(APTT) 延长见于严重肝病、维生素K缺乏。
4、血氨测定
《总胆汁酸检测》课件
总胆汁酸检测的临床应用
1
肝功能损害的评估
通过总胆汁酸检测,可以评估肝脏功能是否受到损害。
2
肝胆疾病的鉴别诊断
总胆汁酸检测可以帮助医生鉴别不同的肝胆疾病,以进行准确的诊断。
3
胎儿畸形的筛查
总胆汁酸检测在孕妇中的应用,可用于筛查胎儿畸形的风险。
总胆汁酸检测的注意事项
1 检测前的准备工作
在进行总胆汁酸检测之前,需要做好相关的准备工作,以确保准确性。
2 操作中的注意事项
在进行总胆汁酸检测时,需要注意操作的细节,以避免错误。
3 检测后的处理
对于检测后的结果,需要进行妥善处理,以提供准确的诊断和治疗。
总结
总胆汁酸检测在临床中的重要性
通过总胆汁酸检测,可以对肝功能和肝胆疾病进行 评估和诊断,对胎儿畸形进行筛查,起到重要的临 床作用。
继续研究总胆汁酸检测的优化方法
针对总胆汁酸检测的不足,我们应该继续研究和改 进检测方法,以提高准确性和临床应用价值。
《总胆汁酸检测》PPT课 件
了解世界上最常见的检测之一——总胆汁酸检测。我们将带您了解总胆汁酸 的基本知识、检测方法和临床应用,以及注意事项。让我们一起深入探索这 一重要的诊断手段。
总胆汁酸检测简介
什么是总胆汁酸
总胆汁酸是胆汁的成分之一,在汁酸的意义
通过检测总胆汁酸水平,可以评估肝功能,鉴别诊断肝胆疾病,并进行胎儿畸形筛查。
总胆汁酸检测方法
血清总胆汁酸测定法
通过血液样本中总胆汁酸的测定,可以得出准确的 检测结果。
经验法
一些经验丰富的医生可以通过观察病人的症状和体 征来判断总胆汁酸的水平。
检测结果的解读
正常值范围
了解正常的总胆汁酸水平是解读检测结果的关键。
生化检验(肝功)PPT课件
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谷丙转氨酶(ALT)
检测原理 ALT+L-丙氨酸+α-酮戊二酸
丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸+NADH
L-乳酸+NAD+
LDH
在340nm处检测NADH的吸收峰来推算 血清中ALT的浓度
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谷草转氨酶(AST)
并伴有高脂血症
.
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3、肝硬化
取决于肝细胞坏死和肝纤维化程度
肝硬化病变累及线粒体时,多数AST升高 程度可超过ALT(肝细胞中,AST80%存在于线粒体中)
4、原发性肝癌
ALT可轻度升高或正常,提示可能并发 肝坏死,预后严重
5、其他疾病
AST升高如急性心肌梗死、右心
功能不全、肌营养不良、溃疡性结
.
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附注:
应空腹采血,避免脂血引起反应液浑浊, 轻度溶血对本法无影响,但是明显溶血可 使测定结果偏低。血液标本和标准液应避 免阳光直照,防止胆红素的光氧化。胆红 素对光的敏感度与温度有关,血标本应避 光置冰箱保存。标本保存冰箱可稳定3天, -70℃暗处保存可稳定3个月。
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总蛋白(TP)测定
检测原理 AST +天门冬氨酸 + α-酮戊二酸
草酰乙酸+ L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH MDH L-苹果酸+ NAD+
在340nm处检测NADH的吸收峰来推算 血清中AST的浓度
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临床意义
1、急性病毒性肝炎 ALT、AST均升高, 急性肝炎早期,AST/ALT<1 重症肝炎临终期会出现“酶胆分离”
肝功能检查ppt课件
4.球蛋白降低
主要是合成减少: ①生理性减少:小于3岁的婴幼 儿 ②免疫功能抑制:长期应用肾上 腺皮质激素或免疫抑制剂 ③先天性低γ球蛋白血症。
5.A/G倒置
可以是白蛋白降低或球蛋白增高。 见于严重肝功能损伤及M蛋白血症, 如慢性肝炎、肝硬化、原发性肝癌、 多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血 症等。
①肝细胞损害: 常见肝脏疾病有亚急性重症肝炎, 慢性中度以上持续性肝炎、肝硬化、 肝癌等。 白蛋白减少常伴有γ球蛋白增加, 白蛋白含量与有功能的肝细胞数量呈 正比,持续下降,提示肝细胞坏死进 行性加重,预后不良,治疗后白蛋白 上升,提示肝细胞再生,治疗有效。
2.总蛋白及白蛋白降低 ①肝细胞损害: 总蛋白<60g或白蛋白<25g/ L称为低蛋白血症。 临床上常出现严重浮肿及胸、 腹水。
2.血清总蛋白及白蛋白降低
②营养不良:摄入不足或消化吸收不良。 ③蛋白丢失过多:如肾病综合征,蛋白 丢失性肠病,严重烧伤,急性大失血 等。 ④消耗增加:结核、甲亢、恶肿瘤等。 ⑤血清水分增加:水钠潴留或静脉补充 过多的晶体溶液。较少见有先天性低 白蛋白血症。
3.总蛋白及球蛋白增高
总蛋白>80g/L或球蛋白>35g/L 称为高蛋白血症或高球蛋白血症。 总蛋白增高主要是球蛋白增高, 其中又以γ球蛋白增高为主。
第一节 肝脏的基本功能
肝脏是人体内的最大腺体,基本功 能有物质代谢功能,分泌、排泄、生 物转化及胆红素有以下一些功能:
制造胆汁
解毒
合成凝血因子
储存糖分
合成蛋白质
维持生命
一、代谢功能
蛋白代谢:90%以上的蛋白质及全部 白蛋白、多种凝血因子都是由肝细胞合成, 部分球蛋白也由肝脏合成。 糖代谢:肝脏能使血糖浓度保持恒定。 脂类代谢:参与脂类的消化、吸收、分解、 合成及运输等代谢过程。 维生素及激素代谢:脂溶性维生素的吸收, 激素的灭活;胆红素、铁、铜及其他金属 的代谢等。
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2、主要化学成分 牛黄含有胆红素(72%-75%)、胆 汁酸(8%,主要为胆酸、去氧胆酸、石 胆酸等)、胆固醇、SMC(smooth muscle contractor,肽类物质)及多种 氨基酸和无机盐。其中,去氧胆酸具有 松弛平滑肌的作用,是牛黄镇痉的有效 成分。
2、显色剂 10%磷钼酸乙醇液、15%磷酸乙醇
液、10%硫酸乙醇液、间二硝基苯乙醇 液、三氯化锌的氯仿溶液等。
(二)薄层色谱 硅胶薄层色谱广泛用于动物胆汁中的胆汁酸分 离和鉴定。 1、分离游离胆汁酸的展开剂有异辛烷-异戊醚冰乙酸-正丁醇-水(10:5:5:3:1)、异辛烷-乙酸乙 酯-冰乙酸(17:7:5)等。
(四)高效液相色谱 胆汁酸类的检识常采用反相高效液相色谱法 测定。由于胆汁酸结构中缺乏共轭体系,无近紫外 吸收特征,因此,用HPLC分析这类药物时,必须将 胆汁酸经化学衍生,使其具有紫外吸收基团或荧光 生色团,才能使用高灵敏度的紫外检测器或荧光检 测器。胆汁酸可制成苯甲酰甲基酯、对氯苯甲酰甲 基酯和对溴苯甲酰甲基酯等,254nm紫外光检测。 近年来有研究报道,采用蒸发光散射检测器,可测 定非衍生化的胆汁酸类。
不同种属的动物,其胆汁酸的组成也不同,例如 牛羊胆汁中主要含有胆酸,而猪胆汁中则不含胆酸, 主要是α-猪去氧胆酸和β-猪去氧胆酸。
H HH H
COOH
粪甾烷酸
三、化学性质(重点) 胆汁酸的化学性质主要是指其结构中官能 团的反应,主要有以下几个方面。 1.酸性 游离或结合型胆汁酸均呈酸性,难溶于水, 易溶于有机溶剂,与碱成盐后则可溶于水。利 用此性质可以精制各种胆汁酸。 2.酯化反应 将胆汁酸的末端羧基酯化后,易得到胆汁 酸酯结晶,胆汁酸酯类在酸水中回流数小时, 即可得到游离的胆汁酸。 此性质也可用于精制各种胆汁酸。
肝胆疾病的生物化学检验-(3)PPT课件
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4
(二)糖代谢异常
磷酸戊糖途径和糖酵解途径相对增强,血中丙 酮酸含量可显著上升
严重肝病时糖有氧氧化及三羧酸循环运转失常 血糖浓度难以维持正常水平 糖耐糖曲线异常,可呈低平型、高峰型、高坡
型等异常曲线 血清半乳糖浓度增高
延长,VitK不能纠正 降低,尤其CHE明显降低
﹤1
.
延长,VitK可以纠正 增高 ﹥1
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(四)胆汁酸代谢及其异常
1.胆汁酸的类型
按结构分 按来源分
游离胆汁酸(free bile acid)--CA,CDCA,DCA,LCA
结合胆汁酸(conjugated bile acid)--与甘氨酸或牛磺 酸结合 初级胆汁酸(primary bile acid)--CA,CDCA
.
6
(四)胆红素代谢紊乱
1.胆红素(bilirubin)来源与生成 体内的铁卟啉化合物——血红蛋白、肌红蛋白、细胞 色素、过氧化氢酶及过氧化物酶。
胆红素来源
1)衰老的RBC破坏、降解
2)无效红细胞生成
3)非血红蛋白的血红素蛋白质 (细胞色素、过氧化物酶、肌 红蛋白等)分解
.
主流胆红素 (80%)
分流胆红素 (20%)
指标
正常
溶血性黄疸
血清胆红素 总量 结合胆红素 游离胆红素
尿三胆 尿胆红素 尿胆素原 尿胆素
粪便颜色
1mg/dl 00.8mg/dl 1mg/dl
– 少量 少量 正常
1mg/dl
– 深
肝细胞性黄疸 阻塞性黄疸
1mg/dl
1mg/dl
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血脂的检测
胆固醇(TC) 甘油三脂(TG) 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c) 低密度脂蛋白胆固醇(LDL -c) 载脂蛋白ApoA I 载脂蛋白ApoB 100 脂蛋白(a) LP (a)
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多谢大家
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血糖及糖尿病诊断标准
糖尿病的诊断标准: 1.空腹血浆葡萄糖测定》7.0mmol/L。 2.任意时间血浆葡萄糖测定》11.1 mmol/L 3.口服葡萄糖耐量实验(OGTT)》11.1 mmol/L 正常人空腹血浆葡萄糖浓度的参考范围: 3.89~6.11 mmol/L 。若空腹大于8 .0mmol/L,且有 临床症状可诊断为糖尿病,若小于6.0 mmol/L, 则可排除糖尿病,若在6.0~7.0之间应再做检查
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胆红素代谢的检验
胆红素来源绝大部分来自衰老死亡的红细胞,当肝细 胞损伤、胆管阻塞、红细胞破坏增加或寿命缩短时, 胆红素代谢发生异常,临床出现黄疸。 血清胆红素分为结合与非结合胆红素,二者合称总胆 红素。TBIL=DBIL+IBIL TBIL:<34为隐性黄疸, <170为轻度黄疸, <340为中度 黄疸,>340为高度黄疸,完全阻塞性黄疸为340~510; 不完全阻塞者为170~265,肝细胞性黄疸17~200;溶 血性黄疸<85
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三种黄疸的胆红素变化比较
正常人 溶血性黄疸
DBIL 0~6.8 轻度增高
肝细胞性黄疸 中度增高
阻塞性黄疸 明显增高
IBIL 1.7~10.2 明显增高
中度增高
轻度增高
DBIL/TBIL >35% <20%
总胆汁酸
总胆汁酸(TBA)项目介绍:总胆汁酸(TBA)是在肝脏内合成与甘氨酸或牛磺酸结合成为结合型胆汁酸,然后被肝细胞分泌入胆汁,随胆汁至肠道后,在肠道内细菌作用下被水解成游离型胆汁酸,有97%被肠道重新吸收后回到肝脏。
如此循环不息。
这样能使总胆汁酸发挥最大生理效应。
更可防止总胆汁酸大量进入循环中对其它组织细胞的毒害(总胆汁酸的PH值非常低)。
健康人的周围血液中血清胆汁酸含量极微,当肝细胞损害或肝内、外阻塞时,胆汁酸代谢就会出现异常,总胆汁酸就会升高。
因此,总胆汁酸测定是一项比较敏感和有效的肝功能试验之一。
正常人肝脏合成的胆汁酸有胆酸(CA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)和代谢中产生的脱氧胆酸(DCA)还有少量石胆酸(LCA)和微量熊脱氧胆酸(UDCA),合称总胆汁酸(TBA)。
临床意义:1、急性肝炎:急性肝炎时血清TBA显著增高,可达正常人水平的10~100倍,甚至更高,急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高值几乎与AST在同一时间降至正常水平,若持续不降或反而上升者则有发展为慢性的可能。
2、急性肝炎:急性肝炎时血清TBA显著增高,可达正常人水平的10~100倍,甚至更高,急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高值几乎与AST在同一时间降至正常水平,若持续不降或反而上升者则有发展为慢性的可能。
3、肝硬化:肝硬化时,肝脏对胆汁酸的代谢能力减低,血清TBA在肝硬化的不同阶段均增高,增高幅度一般高于慢性活动性肝炎。
即使在肝硬化晚期亦如此。
当肝病活动降至最低时,胆红素、转氨酶及碱性磷酸酶等指标转为正常,血清TBA仍维持在较高水平。
4、乙醇性肝病:乙醇性肝病血清TBA可增高,当乙醇性肝病(包括肝硬化)发生严重的肝损伤时,血清TBA明显增高,而轻、中度损伤增高不明显。
5、中毒性肝病:血清TBA测定对中毒性肝病的诊断优于常规肝功能试验。
6、胆汁淤积:血清TBA测定对胆汁淤积的诊断有较高灵敏度和特异性。
肝外胆管阻塞及肝内胆汁淤积包括急性肝炎、初期胆管性肝硬化、新生儿胆汁淤积、妊娠性胆汁淤积等均可引起TBA增高。
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7、γ-谷氨酰转移酶(GGT)
【参考值】 <50U/L 血清中的GGT主要来自肝胆系统,在肝脏内广泛分布于肝细胞的毛细胆管侧和
整个胆管系统。 ① 肝内、外胆汁淤积:GGT与STB、ALP平行增高。 ② 病毒性肝炎、肝硬化:急性肝炎时GGT中等度增高;慢性肝炎、肝硬化的非
活动期GGT正常;若GGT活性持续增高,提示病变活动或病情恶化。 ③ 酒精性肝炎、药物性肝炎:GGT可呈明显增高。 ④ 脂肪肝、胰腺炎、胰腺肿瘤、前列腺肿瘤等GGT亦可轻度增高
疸进行性加深出现“胆酶分离”现象,提示肝细胞严重坏死。
② 慢性病毒性肝炎:ALT、AST轻度增高或正常,ALT/AST>1,如AST增高较ALT显著,提示慢性肝炎进入活动
期可能。பைடு நூலகம்
③ 酒精性肝病、药物性肝炎、脂肪肝、肝癌等非病毒性肝病:ALT、AST轻度增高或正常,且ALT/AST<1;酒
精性肝病AST显著增高,ALT基本正常。
表2 黄疸的鉴别诊断
黄疸类型
血清胆红素
转氨酶
ALP
胆汁淤积性黄疸
↑↑↑
肝细胞性黄疸
↑↑
肝内局限性胆道阻塞﹡
多正常
注:↑轻度增高;↑↑中度增高;↑↑↑显著增高。
↑
↑↑↑
↑↑↑
正常或↑
正常或↑
↑↑↑
﹡如原发性肝癌、转移性肝癌、肝脓肿等。
③ 骨骼疾病:如纤维性骨炎、佝偻病、骨软化症、成骨细胞瘤及骨折愈合期,ALP增高。 ④ 生长发育的儿童、妊娠中晚期血清ALP可有生理性增高。
肝癌、胆汁淤积性黄疸)。
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11、血浆凝血因子
【参考值】凝血酶原时间(PT) 11~14秒 活化部分凝血活酶时间(APTT) 30~42秒 凝血酶时间(TT) 16~18秒
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3.总蛋白及球蛋白增高
常见原因
③自身免疫性疾病:系统性红 斑狼疮、风湿热
④慢性炎症与慢性感染:如结 核病、疟疾、黑热病、麻风病 及慢性血吸虫病等。
4.球蛋白降低
主要是合成减少: ①生理性减少:小于3岁的婴幼
儿 ②免疫功能抑制:长期应用肾
上腺皮质激素或免疫抑制剂 ③先天性低γ球蛋白血症。
5.A/G倒置
[原理]
非结合胆红素不能透过肾小球屏障,因 此不能在尿中出现,而结合胆红素为水 溶性能够透过肾小球基底膜在尿中出现。 正常成年人尿中含有微量胆红素,大约 为3.4μmol/L ,通常的检验方法不能 被发现,当血中结合胆红素浓度超过肾 阈(>34 μmol/L )时,结合胆红素可自 尿中排出。
[参考值] 正常为阴性反 应。
肝细胞性黄疸胆红素代谢特点
• 结合胆红素可由肾小球滤过,尿中出现胆 红素。
• 结合胆红素在肝内生成减少,粪便颜色变 浅。
• 尿中胆素原含量变化不定。一方面是从肠 吸收的胆素原不能有效地随胆汁排出,使 血中胆素原增加,尿中胆素原增加;另一 方面是肝实质性损伤及炎症、肿胀等造成 肝、胆管阻塞,结合胆红素不能排入肠道, 尿中胆素原减少。
4.碱中毒时胆红素分泌增加,可出现尿胆红 素试验阳性。
★四、血清酶学检查
★1、血清转氨酶测定
1)ALT、AST转氨酶是将α氨基酸的氨基转移到α-酮酸
的酮基上的一种酶 用于肝功能检查者主要是:
谷氨基丙酮酸转移酶(GPT)现名 丙氨酸氨基转移酶(ALT)
谷氨酸草酰乙酸转移酶(GOT)现名 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)
合成及运输等代谢过程。 维生素及激素代谢:脂溶性维生素的吸收,
激素的灭活;胆红素、铁、铜及其他金属 的代谢等。
课件胆汁酸代谢及其异常.ppt
游离型胆汁酸 结合型胆汁酸
第四节 肝病的生物化学代谢紊乱
一、肝硬化的临床生物化学 Clinical biochemistry of hepatocirrhosis
概念(concept)
肝硬化是一种以肝组织弥漫性纤维化、假小叶和再生 结节形成为特征的慢性肝病。是许多肝脏疾病晚期的 共同病变。临床上有多系统受累,以肝功能减损、门 脉高压两大症侯群为主要表现,晚期常出现上消化道 出血,肝性脑病,继发感染等严重的并发症。 Cirrhosis is a pathological diagnosis.It is characterized by widespread fibrosis with nodular regeneration. Its presence implies previous or continuing hepatic cell damage.
这种稳定交联的形成使胶原纤维结构稳定,故血 清中的MAO活性增高,常提示胶原纤维增生活跃。
β-脯氨酸羟化酶测定 ( β-proline hydroxylase, β-PH)
β-PH催化胶原中脯氨酸变为羟脯氨酸, 在胶原合成中起关键作用。 肝纤维化: β-PH含量及活性
其他生物化学检查
透明质酸( hyaluronic acid, HA)由间质细胞合成,大 部分在肝内被代谢。肝病患者,肝间质细胞增生,合成明显 增多,肝细胞受损,对血中的HA摄取及降解障碍
层黏连蛋白(LN)细胞外间质中基底膜的主要成分,肝 纤维化倾向时,LN合成和沉积增加
Ⅲ型胶原前肽( procollagen III peptide,PIIIP)血清中含 量反映肝纤维化的程度和活动性
IV型胶原是血管基底膜的主要成分,肝纤维化倾向时增高 穿刺肝组织活检 Liver needle biopsy
186.3胆汁酸代谢检查
肠道中的胆汁酸经分流的门脉系统直接进入体循环
生理性增高:
进食后可出现一过性升高
总胆汁酸 胆酸 脱氧胆酸 甘氨胆酸
参考值
0~10
μmol/L
0.08~0.91 μmol/L
0.23~0.89 μmol/L
0.05~1.0 μmol/L
胆汁酸检测的临床意义
胆汁酸增高见于
肝细胞损害:
急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌等。
胆道梗阻:
肝内外胆管梗阻,胆汁酸不能正常排胆汁酸 结合型胆汁酸
按来源分为两类
初级胆汁酸 次级胆汁酸
胆汁酸的代谢
图1胆汁酸的肠肝循环
胆汁酸肠肝循环的生理意义: 使有限的胆汁酸重复利用,
促进脂类食物的消化与吸收得 以正常进行。
胆汁酸是能同时反映 肝合成代谢、分泌状态及 肝细胞损伤三个方面的血 清学指标。
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酶比色法测定总胆汁酸
【操作步骤】
1.手工法按表
加入物(ml) 血清 标准液 试剂Ⅰ
测.1
0.3
标准
0.1 0.3
标准对照 a
0.1 b 0.3 c
试剂Ⅱ
0.1
0.1
d
去离子水
0.1
0.1 e
混匀,37℃水浴10min,加终止液0.1ml,摇匀,
500nm波长,以水校零,读取各管A值。
血清总胆汁酸的检测
酶比色法测定总胆汁酸 循环法测定胆汁酸
酶比色法测定总胆汁酸
【原理】
在3α -羟类固醇脱氢酶(3α -HSD)作用下,各种
胆汁酸C3上α 位的烃基(3α -OH)脱氢形成碳基
(3α =O)。同时NAD还原成NADH。随后,
NADH上的氢由黄递酶催化转移给碘化硝基四
氮唑(INT),产生红色的甲臢。甲臢的产量与
酶比色法测定总胆汁酸
-----注意事项
由于血清中TBA含量低,样品中存在干扰物质的 影响相对就大,乳酸脱氢酶(LD)是主要的干扰物质, 由LD反应中生成的NADH往往比TBA反应中生成 的量要大得多,因此测定前去除血清中LD的影响 至关重要,方法有:血清67℃加温30min;加草 氨酸作为LD的封闭剂;碱或酸处理;用丙酮酸钠 抑制LD活性。上述5种方法中丙酮酸钠法最好,可 免去前处理步骤,直接加入反应体系,不影响体系 的pH,且对反应无干扰。 血清中还存在其它脱氢酶(有相应底物存在时)和 还原性物质,如不除去,测定结果会偏高。据无选 择的40例肝功能标本的测定结果来看,平均干扰 相当于TBA 18μmol/L,范围在5.5~45μmol/L之 间。因此自动分析设计成双试剂二步法,样品先和 不加3α -HSD的体系孵育,使样品中的干扰物质先 反应,然后再加入3α -HSD,启动TBA反应。
试剂中加适量表面活性剂可防止甲 臢 沉淀。
酶比色法测定总胆汁酸(H)
【方法学评价】 1.手工法测定TBA需做标本、标准的对 照管,样品和试剂用量大,试剂价格高, 费用昂贵。分析仪测定能避免以上缺点, 但去干扰能力不如手工法分析。 血清TBA、尤其是正常血清TBA浓度低, 因而检测灵敏度至为关键,本法测定 TBA50μmol/L(标本/试剂比为1:10)的标 准液,A500nm(1cm)为0.1左右。所以低 浓度时重复性较差,对31μmol/L和 157μmol/L的样品各1份,用手工法每天上 下午双份测定,测10天,结果总CV分别为 5.46%和2.79%。。本法线性上限为 300μmol/L。
【参考范围】 60名健康成人的空腹TBA为 4.9±2.38μmol/L,
中餐后2h TBA为8.22±2.91μmol/L。
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
5.中毒性肝病:在中毒性肝病时血清TBA 也将异常。 6.胆汁淤积:血清TBA测定对胆汁淤积的 诊断有较高灵敏度和特异性。肝外胆管阻 塞及肝内胆汁淤积包括急性肝炎、初期胆 管性肝硬化、新生儿胆汁淤积、妊娠性胆 汁淤积等均可引起TBA增高。在胆管阻塞的 初期,胆汁分泌减少,使血清中的TBA显著 增高,且在阻塞的不同阶段几乎保持不变; 而血清胆红素水平则随不同阶段而变化。 胆汁淤积患者肝组织中的胆汁酸含量明显 高于正常人。肝外阻塞经引流缓解后,血 清TBA水平迅速下降,而其它指标则缓慢恢 复。
循环法测定胆汁酸
【试剂】 1.试剂Ⅰ 硫代-NAD 2mmol/L,Good’s缓冲液
200mmol/L,pH7.0。 2.试剂Ⅱ 3α-HSD 15kU/L,NADH
3mmol/L,Good’s缓冲液200mmol/L,pH8.0。 3.标准液 同比色法。 【操作步骤】自动化分析法。 • 反应类型:速率法; • 反应温度:37℃; • 波长:405nm(主)/660nm(次) • 样品3μl; • RⅠ200μl;3~5min后加RⅡ50μl, • 延迟时间1min • 读数时间4min。
循环法测定胆汁酸
【原理】
胆汁酸被3α -羟基类固醇脱氢酶及ThioNAD+(二核苷酸氧化型)特异性地氧化,生 成3-酮类固醇及Thio-NADH(二核苷酸还原 型),此外,生成的3-酮类固醇在3α -羟基类 固醇脱氢酶及还原性辅酶Ⅰ(NADH)存在下, 生成胆汁酸和NAD+。如此循环往复从而放大 微量的胆汁酸量,在405nm处测定生成的 Thio-NADH的吸光度变化,求得胆汁酸量。
总胆汁酸(TBA)成正比,在500nm波长比色。
反应式如下:
3α-羟基胆酸 + NAD+
3-氧代胆酸 + NADH + H+
NADH + H+ + INT
NAD+ + 甲臢 (红色)
酶比色法测定总胆汁酸
【试剂】
1.试剂Ⅰ 黄递酶 1 000U,NAD+ 1 mmol,碘化硝基四氮唑(INT)0.5 mmol, 丙酮酸50 mmol溶于0.1mol pH 7.5 的磷 酸缓冲液1 L中,加表面活性剂适量。 2.试剂Ⅱ 3α- 羟类固醇脱氢酶(3α-HSD) 2 000U溶于0.1mol pH 7.5的磷酸缓冲液 中1 L中。 3.终止液 1 mol/L HCl。 4.标准液(50μmol/L) 24.38 mg甘氨胆酸 溶于1 L经透析的混合血清中。
酶比色法测定总胆汁酸
-----注意事项
脂肪酶、胆固醇(包括HDL-C、LDLC)和甘油三酯测定试剂中均加有胆酸 盐,自动分析时会引起携带污染,必 须引起注意。某些先进的仪器可以设 定试剂针、样品针和反应杯的补充清 洗程序,亦可将TBA编排在上述有污 染的项目前测定。对某些不具备上述 功能的仪器,最好将TBA单批测定。
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
所有肝病中,餐后血清TBA水平及异常率 均比空腹时测定更灵敏,有人甚至认为餐 后测定TBA对各种肝病的诊断灵敏度和特异 性高达100%,而同时测定空腹血清胆汁酸 有40%的患者在正常范围。急性肝炎是否 转为慢性,连续监测餐后血清TBA可以观察 慢性过程,慢性活动性肝炎是否发生纤维 化改变,连续监测餐后血清TBA可以了解纤 维化过程,不做肝活检即可获得肝损伤的 程度。
2.自动分析法 一般无法做对照管,而是设置两 点终点法,读取前后两个吸光度A1和A2。具体按 说明书要求。
酶比色法测定总胆汁酸
【计算】 手工法:
TBA(μmol/L) =A测定-A测定对照/A标准-A标准对照×C标 准
自动分析法:
TBA(μmol/L) =A测定2-A测定1/A标准2-A标准1×C标准