伤寒杆菌实验室诊断研究进展

伤寒杆菌实验室诊断研究进展

【关键词】伤寒杆菌；检测方法；实

验室诊断

伤寒是由伤寒杆菌引起的肠道传染病，除引起肠道病变外，还能导致其他器官或全身感染，严重威胁人民的健康。伤寒杆菌的诊断依据主要为临床症状及实验室诊断。肥达试验和细菌培养是诊断伤寒杆菌的传统

方法，但敏感性低且费时。近年来出现的免疫学检测方法和聚合酶链反应技术具有较

高的特异性和敏感性，且操作简单、快速。本文就伤寒杆菌实验室诊断方法综述如下。

1 细菌培养

培养是最常用确诊伤寒的诊断依据，由于特异性高，不出现假阳性而被称为金标准。血液和骨髓穿剌液先用亚硒酸盐胱氨酸增

菌液进行增菌培养，粪、尿可直接接种于SS 培养基，经历37℃ 24 h培养后从SS培养

基上挑取较小的无色或淡黄色菌落，首先进行革兰染色镜检，镜下为革兰染色阴性，呈

短杆状，无芽胞，无荚膜。挑选可疑菌落，接种双糖铁，作血清学鉴定为沙门菌属D组后，进一步作生化反应，即伤寒杆菌不分解乳糖、蔗糖及鼠李糖，能分解葡萄糖，产酸不产气，赖氨酸脱羧酶阳性，谷氨酸脱羧酶阴性，甲基红试验阳性。副伤寒杆菌形态与伤寒杆菌相似，能分解葡萄糖，产酸产气。临床上伤寒患者在体温上升阶段，在抗生素应用之前作血培养，阳性率可在80%以上，在发病第2周、第3周，粪便培养阳性率可达到60%。培养结果容易受抗生素、培养条件、标本采集的质、量和时间等多因素影响，带菌者检出率较低，结果报告也常需3 d～5 d的时间。

2 血清学反应

肥达试验是常用于辅助诊断伤寒的传

统方法。其原理是用伤寒杆菌的菌体抗原和鞭毛抗原以及副伤寒甲、乙、丙菌液与稀释的待测血清反应，根据凝集效价判断血清中有无伤寒杆菌的抗体。伤寒病发作后，约在第5天出现O抗体，第10天～第12天产生H抗体。早期肥达试验需要急性期和大约间

隔10天的康复期血清，两份标本之间抗O 抗体或抗H抗体滴度升高4倍，更有诊断意义。伤寒杆菌的 O抗原与A群、B群沙门氏菌有部分相同抗原，与甲、乙两种副伤寒杆菌有一定的交叉反应，因此，肥达反应诊断伤寒杆菌常出现假阳性，特异性差，敏感性低，而且抗原抗体结合出现凝集沉淀常需要20 h以上。

3 免疫学方法

酶联免疫吸咐试验(ELISA) 根据抗原

或抗体特异性免疫反应原理设计，将已知的抗原或抗体结合在某种固相载体上，以辣根过氧化酶为指示剂，标记在另一种抗原或抗体上，加入酶作用底物，酶与底物发生反应后，底物显色，根据底物显色的深浅定性或定量地检测样本中的抗体或抗原。

双抗体夹心ELISA法检测的是血清中的伤寒杆菌或伤寒杆菌抗原。其原理是：用于包被的抗体和酶标记的抗体是针对伤寒

杆菌鞭毛抗原的单克隆抗体。与甲、乙、丙型副伤寒杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌等无交叉反

应，但伤寒杆菌H抗原仅有的第一相，与斯坦利等一些罕见的沙门氏菌有相同的相位，斯坦利菌虽然不引起类似伤寒的疾病，但可使结果出现假阳性；据文献报道有少数健康人血清也能使双抗体夹心法的结果呈阳性［1］。因此，ELISA法特异性有一定的局限性，阳性结果表明有伤寒杆菌或伤寒抗原存在的可能性，但此法敏感性高，阴性结果可靠。该方法操作简便,约40 min即能报告结果，具有早期诊断价值，适用于疾病预防部门对从业人员定期检测伤寒杆菌带菌者，追踪传染源，在流行病学上有重要意义。

斑点酶联免疫吸附试验的基本原理是双抗原夹心法。伤寒杆菌的脂多糖即O抗原能剌激机体产生IgM抗体，H抗原能刺激机体产生IgG抗体。通过检测患者血清中的IgM、IgG抗体，即可知道是否感染了伤寒杆菌。［2］等以硝酸纤维素膜为载体，用伤寒杆菌的IgG、IgM抗原包被，利用微孔滤膜的可过滤性使抗原抗体发生反应，建立LISA试验。对102例伤寒患者在发病不同的时间段进行

检测，结果显示，IgG抗体的敏感性和和特异性分别为88%和88%，IgM抗体的敏感性和特异性分别为%和97%。Khan［3］等用

法对128例疑似伤寒患者进行检测，以骨髓培养为金标准，法的敏感性和特异性分别为71%和43%。文献报道法的敏感性和特异性的差异较大，可能与研究者研究的对象和IgM、IgG 抗体在患者体内产生的时间有关。

浸染试验又称快速试纸法。Dipstick 是近年发展起来的一种用胶体金作指示剂

的快速诊断方法。基本原理是先将特异性的抗原或单克隆抗体固定于试纸条的一端，检测时将试纸条的另一端浸入待测样品，由于毛细管作用，样品液向前移动，如待测样品中含有相应的抗体或抗原，则当样品液移至固定有抗原或抗体区时会发生特异性结合，在显色系统的作用下，该区域出现一定的颜色。此法具有操作简单，不需任何仪器，20 min即能报告结果，适合现场查病时使用。Dipstick试条上的固相用伤寒杆菌的IgM抗原包被，以胶体金作指示标记，检测血清中