生化鉴定类实验
细菌鉴定技术生化实验报告
细菌鉴定技术生化实验报告实验目的：本实验旨在通过生化实验方法，对细菌进行鉴定，以确定其种属特征，为细菌分类和研究提供科学依据。
实验原理：细菌的生化特性是其代谢活动和酶系的反映，不同的细菌具有不同的生化反应模式。
通过测定细菌对特定生化底物的代谢能力，可以鉴别出细菌的种类。
常用的生化实验包括氧化酶试验、触酶试验、糖发酵试验、硝酸盐还原试验等。
实验材料：1. 待鉴定的细菌菌株2. 生化试剂盒（包括氧化酶试剂、触酶试剂、糖发酵基、硝酸盐还原试剂等）3. 无菌操作器材4. 培养基（如LB培养基）5. 显微镜6. pH计7. 其他必要的实验室设备和耗材实验步骤：1. 细菌培养：将待鉴定的细菌菌株接种于LB培养基中，37°C恒温培养箱中培养24小时。
2. 氧化酶试验：取培养好的细菌菌液，滴加氧化酶试剂，观察颜色变化，记录结果。
3. 触酶试验：取细菌菌液，滴加触酶试剂，观察是否产生气泡，记录结果。
4. 糖发酵试验：将细菌接种于含有不同糖类的发酵基中，37°C培养一定时间，通过pH计测定pH变化，记录结果。
5. 硝酸盐还原试验：将细菌接种于含有硝酸盐的培养基中，观察是否产生亚硝酸盐，记录结果。
6. 数据分析：根据生化试验结果，结合细菌的形态学特征，进行综合分析，确定细菌的种类。
实验结果：1. 氧化酶试验结果：[具体结果]2. 触酶试验结果：[具体结果]3. 糖发酵试验结果：[具体结果]4. 硝酸盐还原试验结果：[具体结果]实验讨论：根据生化实验结果，结合细菌的形态学特征，可以初步判断细菌的种类。
在实验中，氧化酶和触酶试验是快速筛选细菌的重要手段。
糖发酵试验和硝酸盐还原试验则可以提供更多的代谢信息，有助于进一步的细菌鉴定。
需要注意的是，生化实验结果应结合其他实验数据和文献资料进行综合分析，以提高鉴定的准确性。
结论：通过本次生化实验，我们对[具体细菌名称]进行了鉴定。
实验结果显示，该细菌具有[具体生化特性]，符合[具体细菌种类]的生化特性。
实验三 细菌鉴定中的几种生化试验
玫瑰吲哚 （阳性反应）
2、V-P试验 [原理]
葡萄糖
丙酮酸
缩合
乙酰乳酸
脱羧
乙酰甲基甲醇
碱性条件
二乙酰
与培养基中精氨酸 的胍基结合
红色化合物（阳性反应）
3、MR试验
[原理]
葡萄糖 丙酮酸
大量混合酸
pH值降至4.5以下
非酸性末端产物(醇、醛等）
pH值＞6.2 甲基红指示剂 培养基橘黄色(阴性反应)
荡，再放入 37℃温箱中保温 15-30min。若培养物呈
红色者，为VP 试验反应阳性 3、 “+”表示阳性反应， “-”表示阴性反应。
MR试验
1、将另一半葡萄糖蛋白胨水培养液内加入甲 基红试剂 2 滴，培养基变为红色者为阳性，变黄 色者为阴性。 2、 “+”表示阳性反应， “-”表示阴性反应。
细菌生化实验误差原因？
柠檬酸盐 利用试验 吲哚试验 硫化氢试验
IMViC 试验
硝酸还原酶试验， 淀粉水解试验
内容
一、糖发酵试验 二、IMViC试验
1、吲哚试验
2、V-P试验 3、MR试验 三、淀粉水解试验
说明
1、本次细菌的生化试验仅选择5项代表性试验
2、本次实验均按传统的生化试验方法进行检测
现代快速生化检测
现代快速生化检测
实验三
细菌鉴定中常用的几种生化试验
细菌的生化试验
用生化的方法来检测细菌对各种基质 的代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌 种类，这种生化试验称为细菌的生化反 应试验；是鉴别细菌的重要依据 。
碳水化合物 代谢试验
糖发酵试验 甲基红试验（MR） V-P试验
常 见 的 生 化 反 应
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌，可以通过一系列
生化鉴定实验来进行鉴定。
以下是一些常用的肠杆菌科生
化鉴定实验：
1. 硫代硫酸亚铁（TSI）琼脂糖培养基实验：在TSI琼脂
糖培养基上培养菌株，观察菌落的颜色和气体产生情况。
肠杆菌科细菌在该培养基上产生酸和气体，导致培养基中
的pH下降，产生黄色酸性反应。
2. 尿素水解试验：将菌株接种到尿素水解培养基上，观察
培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生
尿素酶，将尿素水解为氨和二氧化碳，导致培养基变为粉
红色。
3. 大肠杆菌甲醛试验：将菌株接种到含有甲醛的培养基上，观察培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的大肠杆菌能够
利用甲醛作为唯一的碳源，产生酸和气体，导致培养基变
为黄色。
4. 气体产生试验：将菌株接种到气体产生管中，观察管内
气体的产生情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生气体，如氢气和二氧化碳。
5. 青霉素酶试验：将菌株接种到含有青霉素的培养基上，
观察菌落的形成情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产
生青霉素酶，使得培养基中的青霉素失活，导致菌落形成。
需要注意的是，肠杆菌科细菌的鉴定通常需要结合多个实验结果进行综合判断，单一实验结果可能不足以确定菌株的分类。
此外，不同的肠杆菌科细菌种类可能在生化反应上有差异，因此具体的实验步骤和判断标准可能会有所不同。
生化鉴定类实验
观察：先在低倍显微镜下寻找已着色颗粒， 再用高倍显微镜观察
现象及结论：圆形小颗粒呈橘黄色，说明有脂肪存在。
三蛋白质鉴定
实验材料： 豆浆、鸡蛋清稀释液 仪器和试剂： 仪器： 试管、量筒等 比较双缩脲试剂和斐林试剂
试剂：双缩脲试剂（主要由质量浓度为0.1g/ml的 NaOH溶液和质量浓度为0.01g/ml的CUSO4溶液配 制 而成） 实验原理 ： 蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可以产生紫色反 应
生化鉴定类实验
课堂程序
二、实验原理
一、实验目 的、要求
五、结果及结论
三、材料用具
四、方法步骤
一还原性糖鉴定
实验材料： 苹果、梨
含糖量高、颜色为白色或近于白色的植物组织
仪器和试剂： 仪器：酒精灯、三脚架、石棉网、试管、试管夹等 试剂：婓林试剂（主要由质量浓度为0.1g/ml的 NaOH溶液和质量浓度为0.05g/ml的CUSO4溶液配 制而成） 实验原理 ： 还原性糖与斐林试剂发生作用，可以生成砖红色 沉淀
实验步骤：
选材与制备：鲜肝提取液或豆浆滤液
结论：组织样液中存在蛋白质。
注意事项：
1.现配现用 2.先加双缩脲试剂A液，后加双缩脲试剂B液 3.双缩脲试剂A液加2ml，双缩脲试剂B加3-4滴
知识小结： 生物组织中还原性糖、脂肪和蛋白质的检测
鉴定 还原糖 物质 试剂
斐林试剂
脂肪
苏丹Ⅲ 染液
蛋白质
苏丹Ⅳ 染液
试剂： 苏丹Ⅲ或Ⅳ染液
实验原理 ： 脂肪与苏丹Ⅲ发生作用，可以生成橘黄色脂肪颗 粒 脂肪与苏丹Ⅳ发生作用，可以生成红色脂肪颗粒
实验步骤：
方法一：花生种子匀浆＋3滴苏丹Ⅲ染液―→橘黄色
方法二： 取材：花生种子(浸泡)，将子叶削成薄片
微生物鉴定之生化实验大全
(一）碳水化合物代谢实验糖(醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖得能力与该菌就是否含有分解某种糖得酶密切相关,故分解糖得能力各不相同，细菌分解糖类后得终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气,使培养基颜色改变，从而判断细菌就是否分解某种糖或其她碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入0、5％-1％得糖类(单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类(水杨苷、菊糖等）、培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型.（3)实验方法：取某一种细菌得２4h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内,37℃培养2４h，观察结果并记录.（4)结果判定：如果接种进去得细菌可以发酵某种糖或醇,则可产酸,使培养基由紫色变成黄色,如果不发酵,则仍保持紫色。
如发酵得同时又产生气体,则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用:就是鉴定细菌最主要最基本得实验,特别就是对肠杆菌科细菌得鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（Ｏ/F）得测定（1）原理:细菌在分解葡萄糖得过程中，必需有氧得参加，称为氧化型(O),细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解得,称为发酵型(F）。
发酵型细菌无论在有氧无氧得环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖得细菌称为产碱型（-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义.（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5ｇ,磷酸氢二钾0、３g,葡萄糖10g,琼脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水10００mL。
将蛋白胨、盐、琼脂与水混合,加热溶解，校正PH至7、2，然后加葡萄糖与指示剂，加热溶解,分装试管，３-4ｍL/管；115℃,高压蒸汽灭菌20m ｉn,取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18—2４h得幼龄斜面培养物,穿刺接种,每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1ｍL液体石蜡，3７℃培养２4h或更长时间。
（4）结果判定:(５)应用:O／F试验主要适用于G—肠道杆菌得鉴别。
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微生物鉴定之生化实验大全Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】（一）碳水化合物代谢实验糖（醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入%-1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等).培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。
（3)实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。
（4)结果判定：如果接种进去的细菌可以发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。
如发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用：是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（O/F)的测定（1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参加，称为氧化型（O），细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解的，称为发酵型(F)。
发酵型细菌无论在有氧无氧的环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖的细菌称为产碱型(-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。
（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾，葡萄糖10g，琼脂3g，1%溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mL。
将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热溶解，校正PH至，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解，分装试管，3-4mL/管；115℃，高压蒸汽灭菌20min，取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18-24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1mL液体石蜡，37℃培养24h或更长时间。
大肠杆菌生化鉴定实验报告
大肠杆菌生化鉴定实验报告
实验目的：鉴定样品中是否存在大肠杆菌，并确定其特性和代谢途径。
实验步骤：
1.选择大肠杆菌鉴定常用的生化试验，包括甲烷氧化、尿素加水
解、氧化/发酵葡萄糖、氧化/发酵乳糖、氧化/发酵葡萄糖醇、胱氨酸脱羧等试验。
2.在实验室条件下，将样品分别接种到不同的培养基中，进行上
述生化试验。
3.根据不同试验的结果，判断样品中是否存在大肠杆菌，并确定
其特性和代谢途径。
实验结果：
1.甲烷氧化试验：阴性，说明大肠杆菌无法利用甲烷进行代谢。
2.尿素加水解试验：阳性，说明大肠杆菌能够加水解尿素，产生
氨。
3.氧化/发酵葡萄糖试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用葡萄糖进
行发酵代谢。
4.氧化/发酵乳糖试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用乳糖进行发
酵代谢。
5.氧化/发酵葡萄糖醇试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用葡萄糖
醇进行发酵代谢。
6.胱氨酸脱羧试验：阳性，说明大肠杆菌能够脱羧胱氨酸，产生
氨和二氧化碳。
根据上述结果，样品中存在大肠杆菌，并且其代谢途径主要包括葡萄糖、乳糖和葡萄糖醇的发酵代谢，以及尿素的加水解和胱氨酸的脱羧代谢。
结论：样品中存在大肠杆菌，其代谢途径主要包括葡萄糖、乳糖和葡萄糖醇的发酵代谢，以及尿素的加水解和胱氨酸的脱羧代谢。
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。
这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。
以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。
结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。
2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。
营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。
3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。
5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。
淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。
蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。
6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。
7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。
8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。
生化 实验四 植物DNA的提取和鉴定
实验四 植物DNA的提取与鉴定
实验原理
真核生物的DNA与组蛋白结合，以 DNA核蛋白的形式存在于细胞核内。
在提取DNA时，通过研磨破坏细胞壁 和细胞膜，释放出DNA核蛋白。
实验原理
在1.4 mol/L NaCl中，DNA核蛋白 的溶解度大，RNA核蛋白的溶解度 小。
在0.14 mol/L NaCl中，DNA核蛋白 溶解度小，RNA核蛋白溶解度大。
液氮：研磨 氯仿-异戊醇：蛋白质变性 异丙醇：沉淀DNA 70%乙醇：脱盐
TE缓冲液
10 mmol/L Tris-HCl （pH7.4） 维持弱碱性
1.0 mmol/L EDTA 抑制DNA酶活性
思考题
本实验中CTAB、EDTA、巯基乙醇 各有什么作用？ 吸取样品、抽提时应注意什么？为 什么？ 在提取DNA时，有哪些方法可以除 去蛋白质？
试剂
CTAB提取液
2.0% CTAB （十六烷基三甲基溴化 铵） 1.4 mol/L NaCl 20 mmol/L EDTA 100 mmol/L Tris-HCL（pH8.0） 0.2% 巯基乙醇
CTAB
CTAB是阳离子去污剂,能使蛋白质变 性，还能与核酸形成特异的核酸CTAB复合物。
核酸-CTAB复合物可溶于≥0.7 mol/L NaCl的高盐缓冲液。
③酶的作用：DNA酶降解DNA分子。
紫外光吸收法鉴定DNA纯度和浓度
核酸的紫外吸收260 nm,蛋白质280 nm DNA的A260/A280约1.8，RNA的约2.0 50 ug/mL DNA溶液，A260 = 1.0 40 ug/mL RNA溶液，A260 = 1.0
实验步骤
10 mL CTAB提取缓冲液加入50 mL 离心管 中，65℃水浴中预热。 50-60 g植物叶片，置于预冷的研钵中，倒入 液氮，充分研磨10 分钟。（全班共用） 每组取约2 g叶片粉末，加入预热的CTAB提 取缓冲液中，轻轻混匀，65℃保温30分钟。 加10 mL氯仿-异戊醇，振荡2-3分钟。 5000 rpm离心5分钟。
实验三细菌的生化鉴定
一、糖（苷、醇）利用试验：
乳糖分解利用试验
• 【原理】
不同旳细菌对不同旳糖（苷、醇）旳分解 能力不同，有旳分解，有旳不能分解，有 旳分解后能产酸产气，有旳分解后仅能产 酸，所以能够用来鉴别细菌。
以乳糖分解利用为例，乳糖发酵管中含溴 甲酚紫指示剂，当细菌分解乳糖产酸，培 养基pH下降，指示剂变黄色，不分解乳糖 旳指示剂不变色。
纸片中心，滴加一滴1%四甲基对苯二胺。 • 4．立即观察菌落颜色旳变化。 • 5．同法做铜绿假单胞菌旳氧化酶试验。
氧化酶试验
• 【成果】 滴加氧化酶试剂后铜绿假单胞菌立 即变为紫色，为氧化酶阳性。大肠埃希菌不变色， 为氧化酶阴性。
氧化酶试验（左侧为铜绿假单胞菌、右侧为大肠埃希菌）
氧化酶试验
• 【注意事项】 • 1．试验中旳菌种要求新培养旳，不宜用陈旧旳培养物。 • 2．刮取细菌时不可遇到培养基，不可用接种环等金属物
尿酶试验（U）
• 【试剂与器材】 • 1、菌种 大肠埃希菌、一般变形杆菌 • 2、器材 尿素培养基、接种针或接种环、
酒精灯、火柴、记号笔、试管架、37℃恒 温培养箱，超净工作台。
尿酶试验（U）
• 【操作环节】 • 1、取2支尿素培养基，用记号笔分别标识
大肠埃希菌和一般变形杆菌。 • 2、按液体接种法，将2菌分别接种于尿素
1g，95%乙醇95ml，浓盐酸20ml配制） • 3．器材 蛋白胨水培养基、接种针或接种
环、酒精灯、火柴、记号笔、试管架、 37℃恒温培养箱，超净工作台。
吲哚试验
• 【操作环节】 • 1．取2支蛋白胨水培养基，用记号笔分别
标识大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。 • 2．按液体接种法，将2菌分别接种于蛋白
过பைடு நூலகம்化氢酶试验
葡萄球菌生化鉴定实验报告
葡萄球菌生化鉴定实验报告
实验目的：
通过生化鉴定方法，对给定的葡萄球菌进行鉴定。
实验原理：
葡萄球菌是一种常见的革兰氏阳性球菌，可以通过其生化特性进行鉴定。
常用的生化鉴定方法包括：表面蛋白酶、凝固酶、氧化酶、稀蛋白酶、脱氧核糖核酸( DNA酶)等。
实验步骤：
1. 提取葡萄球菌菌株：从实验室保存的菌株中，选取一株葡萄球菌，进行营养琼脂平板培养，并培养至菌落生长。
2. 制备菌液：用无菌的生理盐水将菌落取下，制备葡萄球菌的菌液。
3. 表面蛋白酶试验：取一份菌液，滴加到表面蛋白酶试验板上，观察是否出现菌落周围的溶解圈。
4. 凝固酶试验：取一份菌液，滴加到凝固酶试验管中，观察是否出现凝结。
5. 氧化酶试验：取一份菌液，滴加到氧化酶试纸上，观察是否出现颜色变化。
6. 稀蛋白酶试验：取一份菌液，滴加到稀蛋白酶试纸上，观察是否出现颜色变化。
7. DNA酶试验：取一份菌液，滴加到DNA酶试纸上，观察是否出现颜色变化。
实验结果：
根据实验步骤中观察到的结果，记录下每个试验的结果。
实验结论：
根据实验结果，判断葡萄球菌是否具有表面蛋白酶、凝固酶、氧化酶、稀蛋白酶、DNA酶等酶活性，从而鉴定葡萄球菌的菌株。
实验总结：
通过生化鉴定实验，可以对葡萄球菌进行简单的鉴定，从而获得其生化特征，为后续的研究和应用奠定基础。
同时，实验中需要注意无菌操作，以避免实验结果的偏差。
菌株生理生化鉴定实验方法
菌株生理生化鉴定实验方法菌株的生理生化鉴定是确定菌株的分类地位和特性的重要实验方法。
下面将介绍一种常用的菌株生理生化鉴定的实验方法，包括实验步骤和鉴定结果的解析。
实验步骤：1.菌株的预处理将菌株从培养基上取下，用生理盐水或无菌的蒸馏水洗净，放入灌装好的试管或培养皿中。
2.观察形态特征观察菌株在不同培养基上的形态特征，包括菌落形状、颜色和质地等。
也可以在显微镜下观察菌丝和孢子的形态特征。
3.生化特性鉴定（1）氧需求鉴定：将菌株接种到含有不同浓度的氧气的试管中，观察菌株在厌氧和需氧条件下的生长情况。
（2）温度需求鉴定：将菌株接种到不同温度的培养基上，观察菌株在不同温度下的生长情况和生长速率。
（3）酸碱度鉴定：将菌株接种到不同pH值的培养基上，观察菌株在不同酸碱度条件下的生长情况。
（4）氧化还原鉴定：通过添加不同氧化剂和还原剂来观察菌株的氧化还原反应能力。
（5）酶活性鉴定：利用不同底物和指示剂来检测菌株的酶活性，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等。
（6）碳源利用鉴定：将菌株接种到含有不同碳源的培养基上，观察菌株对不同碳源的利用情况。
4.生理特性鉴定（1）产酸和产气鉴定：将菌株接种到含有指示剂的管中，观察产酸和产气的情况。
（2）抗生素敏感性鉴定：通过将菌株接种到含有抗生素的培养基上，观察菌株对抗生素的敏感性。
（3）生长速率鉴定：观察菌株在不同培养基和条件下的生长速率，包括生长曲线的绘制和计算生长速率。
（4）生殖方式鉴定：通过观察菌丝和孢子的产生情况来确定菌株的生殖方式。
鉴定结果的解析：例如，菌株的形态特征观察结果可以用来确定菌株的属名，生化特性鉴定结果可以用来确定菌株的代谢途径和功能，生理特性鉴定结果可以用来确定菌株的环境适应能力和生长要求。
综上所述，菌株的生理生化鉴定是一种全面了解菌株特性和分类地位的重要实验方法，通过观察形态特征、生化特性和生理特性，可以准确鉴定菌株的分类地位和特性。
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类革兰氏阴性杆菌，包括许
多人类和动物肠道中常见的细菌。
肠杆菌科的生化鉴定实验是通过
一系列生化反应来确定细菌属的方法。
以下是肠杆菌科生化鉴定实
验的详细步骤：
1. 外观观察：观察菌落形态和颜色，以及菌液的浑浊度和颜色。
2. 革兰染色：将细菌制备的涂片进行革兰染色，观察细菌的形态和
染色反应。
3. 氧需求：通过培养细菌在氧气条件下的生长来确定其氧需求。
肠
杆菌科中的许多细菌是好氧菌，可以在氧气存在下生长。
4. 糖发酵：使用糖盐培养基，如肉汤糖盐琼脂培养基（TSI）或亚
硝酸盐葡萄糖琼脂培养基（GNB）等，观察细菌对不同糖类的发酵情况。
常用的糖类包括葡萄糖、乳糖、蔗糖等。
5. 气体产生：观察细菌在糖盐培养基中是否产生气体，如二氧化碳
和氢气等。
6. 硫代硫酸盐还原：使用含有硫代硫酸盐的培养基，观察细菌是否
能够还原硫代硫酸盐，产生黑色沉淀。
7. 非糖类物质利用：观察细菌对非糖类物质的利用情况，如酪蛋白、尿素等。
8. 酸碱产生：使用酸碱指示剂，观察细菌在糖盐培养基中是否产生
酸碱。
9. 氧化还原酶：使用氧化还原酶试剂，观察细菌是否具有氧化还原
酶的活性。
通过以上步骤，可以根据细菌的生化反应特点来确定其属于肠杆菌科中的哪个属。
需要注意的是，这只是一种初步的鉴定方法，最终的确定还需要进一步的分子生物学鉴定。
实验2生化组分的鉴定
生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见 的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都 含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因 此叫做还原糖。 蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫 做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用 本尼迪特试剂只能检验生物组织中还原糖存在 与否，而不能鉴定非还原性糖。
实验二：生化组分的鉴定 （以糖和蛋白质为例）
一、实验目的 1、了解常见生化组分鉴定的方法与意义。 2、掌握鉴定糖和蛋白质的原理与方法。 3、了解有关酶的特性。
(C6H10O5)x 淀粉
(C6H10O5)y 各种糊精
C12H22O11 麦芽糖
C6H10O6 葡萄糖
淀粉广布于植物界，谷、果实、种子、块茎中含 量丰富。 淀粉遇碘呈蓝色 α-淀粉酶能将淀粉分子链中的α-1，4-葡萄糖苷键 切断，使淀粉成为长短不一的短链糊精以及少量 麦芽糖和葡萄糖，因此酶反应过程中淀粉对碘呈 蓝色的特异反应逐渐消失，同时出现单糖的还原 性。
3、本尼迪特试验：
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（3）取上述反应液3滴于1支试管中，然后加 入本尼迪特试剂2ml，置沸水浴中加热数分钟， 取出，冷却，观察结果。 （4）另取1支试管，加入1%葡萄糖溶液1ml， 然后加入本尼迪特试剂2ml，置沸水浴中加热 数分钟，取出，冷却，观察结果。
5、蛋白质双缩脲试验：取一试管，加蛋白质 溶液10滴，再加10%NaOH溶液10滴及1%硫 酸铜溶液2滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色。 6、蛋白质茚三酮反应：取1ml蛋白质溶液置于 试管中，加2滴茚三酮试剂，加热至沸，即有 蓝紫色出现。（此反须在pH5-7进行）。
双缩脲反应：双缩脲试剂的成分是质量浓度为 0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01 g ／mL的硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中， 双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用， 形成紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反 应。 由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似 的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜 色反应。 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而形成 双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结 合成红紫色的络合物，此反应称为双缩脲反应。
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生化鉴定类实验此类实验是利用物质的一些特性来鉴定该物质，因此物质的特性及常用的鉴定方法必须牢牢掌握。
高巾生物学教材中相关的实验有：①生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定；②叶绿体中色素的提取和分离；③DNA的粗提取与鉴定。
中学阶段，最常用的提取、分离方法是利用各种物质溶解度的差异进行盐析或层析；最常用的鉴别（定）方法是利用各种物质特定的显色反应，此法应严格控制样品的量，和排除其他有关物质的干扰，最常用的定量方法是滴定法和比色法。
－、实验：生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定1．实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关化合物，产生特定的颜色反应。
还原糖＋斐林试剂→砖红色沉淀脂肪＋苏丹Ⅲ染液→橘黄色显色反应脂肪＋苏丹Ⅳ染液→红色蛋白质十双缩脲试剂→紫色反应2．方法步骤：还原糖的鉴定：选材→制备组织样液→鉴定样液。
脂肪的鉴定：选材→切片制作→染色→镜检鉴定。
蛋白质的鉴定：选材→制备样液→鉴定样液。
3．注意事项：（1）本实验成功与否的关键在于实验材料的选择，为提高实验效果，应根据当地实际情况，精心选择含糖量较高，富含脂肪、蛋白质的生物组织或器官作为实验材料。
选好实验材料，实验则成功了一半。
（2）用于鉴定还原糖的生物组织，最好选含糖量较高，而组织颜色较浅，或近于白色的，如苹果和梨的果实。
经试验比较，颜色反应的明显程度，依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。
（3）用于鉴定脂肪的实验材料最好选择富含脂肪的种子，如花生种子取其子叶，供实验用的花生种子必须提前浸泡3～4h（以宜于制作临时装片为准）。
浸泡时间短了不容易成切片；浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形。
（4）用于鉴定蛋白质的植物材料，应提前浸泡1～2d，便于研磨。
（5）斐林试剂极不稳定，其甲液和乙液需分别配制、储存，使用时再临时混合均匀用于实验。
（6）双缩脲试剂的使用，应先加试剂A，造成碱性环境，再加试剂B。
（7）在可溶性糖的鉴定中，对试管中的溶液加热时，试管底部不要触及烧杯底部；试管口不要朝向实验者，以免溶液沸腾时冲出试管造成烫伤。
（8）蛋白质的鉴定如果是用稀释液，浓度不能太大，以免实验后粘住试管壁，不易洗净。
【例1】下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是A．用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定B．脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴C．鉴定可溶性还原糖，要加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液D．用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入含样品的试管中，且必须现混现用［解析］本题在于考查学生的操作是否规范、正确，是否注意了不同鉴定实验之间的差别。
斐林试剂与双缩脲试剂所用漆质相同，且所用氢氧化钠溶液的浓度相同，但二者所用的硫酸铜的质量浓度不同。
鉴定可溶性还原糖时，是甲、乙液现混现用，一次加入。
而鉴定蛋白质时要先加A液，再加B液。
还原糖、蛋白质的颜色反应走试剂与其发生化学反应的结果，足肉眼可见的。
脂肪的鉴定中，由于脂肪滴小且分散在细胞中，所以需要借助于显微镜观察。
［答案］B［变式1］将面包围包在纱布中在清水中搓洗，鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的试剂分别是A．碘液、苏丹Ⅲ溶液B．双缩脲试剂、碘液C．斐林试剂、苏丹Ⅲ溶液D．碘液、斐林试剂二、实验：叶绿体中色素的提取和分离1．实验原理：叶绿体色素能溶解在有机溶剂中，如丙酮；叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散的速度也不同。
2．方法步骤：提取色素→制滤纸条→滤液画线→纸上层析→观察结果。
3．注意事项：（1）要选取新鲜色深的叶片作实验材料，以便使色素液中含有较多的色素。
（2）研磨时一定要快速充分。
（3）过滤时要用脱脂棉（或单层尼龙纱布），不能用滤纸。
（4）滤液细线画得要细而直，否则，在层析时会导致色素带的重叠。
要把滤液细线画细画直。
应该做到：毛细吸管的管口要细要齐，画线时，速度要快且均匀。
（5）画滤液细线时，要重复画2～3次，以便提高色素细线中色素的含量。
（6）层析时不能让滤液细线接触到层析液，因为色素容易溶解于层析液中，导致色素带不清晰。
【例2】下列为“叶绿体色素提取和分离”实验：（1）在“叶绿体色素的提取和分离实验”中，将叶绿体色素进行分离的方法名称是（2）某学生在实验过程中将画有滤液细线的滤纸条（已重复几次画线）浸入层折液中，几分钟后取出观察，发现在滤纸条上无色素分带现象，而其他用同一滤液做实验的同学的滤纸条上却色素分带明显。
其实验失败的原因可能是。
（3）观察叶绿体色素的荧光现象，可将盛有叶绿体色素溶液的试管，让光线照射。
如果置叶绿体色素溶液于光下，则呈绿色；如置于光下，则溶液呈现红色。
［解析］此题主要考查叶绿体色素提取和分离实验的知识。
用丙酮溶解法可以提取叶绿体色素，用纸层析法可以分离叶绿体色素，分离色素时，如果滤液细线浸入层析液中，叶绿体色素就会溶解在层析液中而无法分离。
与物理学的反射和透射知识相联系，就可以观察到叶绿体色素的不同的颜色。
［答案］（1）纸层析法（2）滤液细线浸入层析液（3）透射；反射［变式2］某同学在做“叶绿体中色素的提取和分离”实验时，操作情况如下所述，结果实验失败，请指出其错误所在。
（1）将5g新鲜菠菜叶片放入研钵中，加入丙酮、石英砂、碳酸钙，快速充分研磨，然后按要求过滤。
（2）用毛细吸管吸取少量滤液，沿着笔线处小心均匀地画出一条滤液细线，并连续迅速地重复画2～3次。
（3）把画好细线的滤液条插入层折液中，并不断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散。
三、实验：DNA的粗提取与鉴定1．实验原理：DNA在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠浓度的变化而变化；DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液；DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。
2．方法步骤：提取细胞核物质→溶解核内的DNA→析出DNA黏稠物→滤取DNA黏稠物→DNA黏稠物再溶解→过滤含DNA的氯化钠溶液→提取含杂质较少的DNA→DNA的鉴定。
3．注意事项：（1）血液量充足（不能用哺乳动物的血细胞）。
（2）血细胞液加水后，必须充分搅拌，让血细胞充分破碎，溶解出DNA。
（3）用NaCl溶液析出DNA时，注意控制温度，NaCl溶液和血细胞滤液要混合均匀。
（4）所用酒精要充分预冷，提取DNA丝状物的方法是缓缓旋转玻棒。
（5）盛放鸡血细胞液的容器等最好使用塑料制的。
【例3】在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA的黏稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于A．前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNAB．前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaCl溶液C．前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取DNAD．前者使DNA从核中分离出来，后者使DNA析出［解析］此题主要考查DNA的粗提取实验的知识。
第一次加蒸馏水的作用是使血细胞过度吸水而破裂，以便使核内物质释放；第二次加适量蒸馏水，是为了降低氯化钠浓度，使DNA 因溶解度达到最小而析出。
［答案］D［变式3］在DNA粗提取实验中，有两次DNA的沉淀析出，其依据的原理是①DNA在氯化钠的浓度为0．14 mol·L-l时溶解度最低②DNA在95％的酒精中能沉淀析出A．两次都是①B．两次都是②C．第一次是①，第二次是②D．第一次是②，第二次是①［变式4］下图所示为关于“DNA的粗提取和物理性状观察”实验。
诗据图回答下列问题：（1）DNA在氯化钠溶液中溶解度，随氯化钠而改变，当氯化钠物质的量浓度为0．14 mol·L-l时，＿＿＿＿最低，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA 。
（2）在下图中图A所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是；通过图B 所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入2 mol·L-l NaC1溶液的目的是；图中C 所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是。
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10 mL，注入到50 mL烧杯中，向烧杯中加入20 mL蒸馏水的目的是。
（3）在制鸡血细胞液的过程中，加入的抗凝剂是［变式5］DNA在氯化钠溶液中的溶解度有二重性，随着NaCl溶液浓度的变化而变化。
（1）请在下列浓度的NaCl溶液中，选出能使DNA析出最彻底的一种和溶解度最高的一种A．0．14 mol·L-l B．2 mol·L-l C．0．15 mol·L-l D．0．3 mol·L-l（2）欲使溶有DNA的2 mo1·L-l的NaCl溶液中的DNA析出，需降低NaCl溶液的浓度，最有效的方法是A．加蒸馏水B．加矿泉水C．加清水D．加生理盐水（3）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以，可以推测溶于酒精的物质中可能有。
（4）利用DNA遇呈蓝色的特性，将该物质作为鉴定的试剂。
其实验过程要点是向放有的试管中加入4 mL的。
混合均匀后，将试管置于 5 min，待试管，观察试管中溶液颜色的变化。
这个实验说明DNA耐温，前次温度有利于，后次温度则有利于DNA的1．（2004年江苏高考题）根据生物组织中的有机物与某些化学试剂相互作用能产生颜色反应的原理，可以鉴定生物组织中某些有机物的存在。
请填写下表中的空格。
2．（2004年江苏高考题）鉴定DNA时，一般先将被鉴定物加入到物质的量浓度为0．015 mol·L-l的Nacl溶液的试管中，搅拌后，再加入试剂，混合后将其置于沸水中加热5 min。
待试管冷却后，若其中溶液颜色为，而对照组试管中溶液为无色，则可确定被鉴定物为DNA。
3．（2003年新课程高考理综题）在过氧化氢酶溶液中加入双缩脲试剂，其结果应该是A．浅蓝色B．砖红色C．绿色D．紫色4．（2003年江苏高考生物试题）分别在A、B、C三个研钵中加2g剪碎的新鲜菠菜绿叶，并按下表所示添加试剂，经研磨、过滤得到三种不同颜色的溶液，即：深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。
注：“＋”表示加；“—”表示不加。
试回答：（1）A处理得到的溶液颜色是，原因是（2）B处理得到的溶液颜色是，原因是（3）C处理得到的溶液颜色是，原因是5．（2001年高考理综全国卷Ⅳ）下列关于实验的描述中，正确的是A．将在蔗糖溶液中已发生质壁分离的洋葱表皮细胞转到更高浓度的蔗糖溶液中，则发生质壁分离复原B．将斐林试剂加入到蔗糖溶液中，加热后出现砖红色沉淀C．将肝脏研磨液煮沸冷却后，加入到过氧化氢酶溶液中立即出现大量气泡D．将双缩脲试剂加入到蛋清稀释液中，溶液变成紫色选择题：每小姐仅有一个选项最符合姐菠。
1．制备鸡血细胞液的过程中，要除去上清液的主要原因是A．上清液中存在有毒物质B．上清液中的某些成分能与DNA结合成复合物C．DNA分子不存在于上清液中D．上清液中水分含量高，影响DNA的提取2．某同学收集到的叶绿体中色素提取液为淡绿色，产生该结果的可能原因是①研磨不充分，色素未充分提取出来②丙酮加入量太多，稀释了色素提取液③丙酮加得太少，色素未提取出来④未加CaCO3粉末，叶绿素分子已被破坏A．①②④B．①③④C．③④D．①②3．在实验过程中实验材料必须自始至终保持在生活状态下的是①观察植物细胞的有丝分裂②观察植物细胞的质壁分离和复原③观察黑藻细胞的细胞质流动④叶绿体色素的提取和分离A．①②B．②③C．①③D．①④4．在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取舍杂质较少的DNA时必须用A．0．14 mo1·L-l的NaCl溶液B．玻璃棒充分搅拌直至丝状物溶解C．经充分冷却的95％的酒精溶液D．0．1g·mL-l的柠檬酸钠溶液5．下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是A．提取高等植物叶绿体中的色素B．用纸层析法分离色素C．了解各种色素的吸收光谱D．验证叶绿体中所含色素的种类6．下列对斐林试剂和双缩脲试剂的配方，叙述不正确的是A．都含有NaOH溶液和CuSO4溶液B．斐林试剂的配制是将4～5滴0．05g·mL-l的CuSO4溶液滴入2mL-l0．lg·mLˉl的NaOH 溶液中即成C．双缩脲试剂是将3～4滴4．01g·mL-l的CuSO4溶液滴入2 mL0．1g·mL-l的NaOH溶液中混合而成D．双缩脲试剂含有两种试剂：质量浓度为0．1g·mLˉl的NaOH溶液和质量浓度为0．01g·mL-l的CuSO4溶液⒎为了便于提取鸡血细胞中的DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血细胞液加入A．蒸馏水B．ATP C．0．3g·mL的蔗糖溶液D．二氧化碳8．如图所示，将提取的叶绿体色素滤液装入试管中，让一束白光穿过该滤液后经三棱镜对光进行色散，哪条光谱的颜色明显减弱A．绿光B．红光C．红橙光、蓝紫光D．黄光非选择题1．据药理研究，一种茅草的根内含有降血糖的因子及多种有益于健康的成分，某公司将它开发成一种保健饮料。