第二章 食用菌菌种生产

1、天然培养基 天然培养基是指利用化学成分不清楚且不恒定的天然有 机物质配制而成的培养基。各种农副产品、下脚料（如小麦、
玉米、马铃薯、胡萝卜、麦麸、木屑等）以及动植物组织浸
出液（如牛肉膏、麦芽汁、肉汤等）均为常用原料。这些有 机物来源广，价格便宜，营养丰富，是食用菌生产中最常用 的培养基。但是不能用之进行精细的科学实验。
2、合成培养基 利用已知成分和已知数量的化学试剂配制而成的培 养基。价格较昂贵，一般只限于实验室进行食用菌生理 生化方面的研究。
3、半合成培养基 培养基中既有天然有机物质又有无机盐类，称半合成 培养基。这种培养基种类多。应用最为广泛，也是食用菌 菌种生产中常用的培养基。
（三）其他分类方法 此外，按照培养基表面形状又可把培养基分为斜面培养
（2）棉籽壳培养基 棉籽壳78%，麸皮20%，蔗糖 1 %，石膏粉1%。
此配方适用于金针菇、平菇、风尾菇、草菇、银耳、
木耳、猴头等。 （3）甘蔗渣培养基 甘蔗渣75%，麸皮或米糠24%，石膏粉1%。适 用于平菇、风尾、金针菇、草菇、木耳、白灵菇等
原种、栽培种的培养。
（4）谷粒培养基
以小麦、高粱、பைடு நூலகம்米等为主料制作的培养基为
常用于培养液体菌种或生产某些食用菌的菌丝体及其代谢产
物，实验上多用于生理生化方面的研究。
2、固体培养基
以含有纤维素、木质素、淀粉等各种碳源物质为主，添 加适量有机氮源、无机盐等，含有一定水分呈固体状态的培 养基。优点是原材料来源广，价格低廉，配制容易，营养丰 富，因此是食用菌原种、栽培种的主要培养基。
（四）接种工具 包括接种针、接种环、接种钩、接种锄、接种铲、接种
耙、接种刀、镊子、接种器等。
（五）酒精灯 酒精灯主要用于接种工具的烧灼灭菌和小范围内无菌接 种。酒精灯点燃时，其火焰附近10cm范围内会形成一个无菌
区。在菌种分离、移接时，一般应在酒精灯周围进行。
二、培养设备 用于培养接种后的各级菌种、并使菌丝生长良好的专用
接种箱的类型很多，因规模受限制，目前一般大小为长 143cm、宽86 cm 、 高159cm、分双人和单人操作两种类型， 箱的上层两侧安装玻璃，能灵活开闭，以便观察和操作。
（三）超净工作台
为局部净化空气的设备，其原理是对空气进行过滤除菌。 它的最大优点在于分离、接种时安全可靠，接种数量不受无 菌空间的限制，操作方便。但其价格昂贵，实际生产中受到 限制。
设备。培养设备可提供适宜温度和通气条件，如保温、调湿、
避光、通风等。主要有培养室、培养箱等。 三、灭菌设备 灭菌是指用化学的或物理的方法杀灭物体表面和内部的 一切微生物，使之达到无菌状态。一般采用热力灭菌设备。
热力灭菌是利用高温使菌体蛋白质变性而失去活性，达到灭
菌的目的。热力灭菌设备分干热灭菌设备和湿热灭菌设备， 常用的为湿热灭菌设备，根据压力指标主要包括高压蒸汽灭 菌锅和常压蒸汽灭菌灶两类。
行调整。
（6）过滤分装 用纱布过滤，取汁趁热分装。培养基的分装量应 为试管长度的1／5或1／4。操作时应尽量防止培养
基黏在试管口或壁上，若已黏上应立即用纱布或脱
脂棉擦净。
（7）加棉塞、包扎
装好培养基的试管应及时塞上棉塞。棉塞要用未脱脂的
原棉。棉塞要大小均匀、松紧适宜，长度一般为4～5cm，一
般要求2/3留在试管内，1/3露 在试管外。然后把塞好棉塞的 试管，每7～10支捆扎成一把， 用牛皮纸或双层报纸包扎，再
PO4 0.46g，蛋白胨2g，琼脂15g，水1000m1。此培
养基为培养食用菌母种最常用的合成培养基，有缓
冲作用，适宜保藏各种菌种。
（4）麦芽膏酵母膏培养基
（5）稻草浸汁培养基
（6）普通标准培养基
（7）苹果琼脂培养基
（8）高粱琼脂培养基
（9）酱油洋葱琼脂培养基
（10）木屑浸出汁培养基
（11）胡萝卜马铃薯培养基
（二）原种和栽培种培养基
原种培养基和栽培种培养基的配制基本相同， 只不过原则上制作原种的培养基要更精细些，营养 成分应尽可能丰富，而且还要易于菌丝的吸收，以 便移接的母种菌丝能更好生长发育。用于原种培养 基的配方。一般也适用于栽培种培养基。
1、原种和栽培种常用培养基配方 （1）木屑培养基 阔叶树木屑（或竹屑）78%，麸皮（或米糠） 20%，糖1%，石膏粉1%。此培养基适用于木腐菌 的原种、栽培种的培养，如香菇、平菇、木耳、金 针、猴头、灵芝，特别适宜于香菇菌种生产。
食用菌母种的培养基和分离菌种时使用的培养基一般都 制成斜面试管，因此又常称为斜面培养基或试管培养基。母
种培养基常用的基本物质有马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、
硫酸镁、琼脂和维生素B1等。
1、常用母种培养基配方 （1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基) 马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18～ 20g，水 1000ml， pH自然。此培养基适于一般食用菌的母 种分离、培养和保藏，广泛地应用于绝大多数的食 用菌，是生产中最常用的培养基。
用皮套扎紧或棉线捆好，放入
手提式高压锅内灭菌。
（8）灭菌 用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。步骤为：加热升 温→压力至0.05MPa时，放气阀打开，排冷气→压 力为0，关闭排气阀→继续升温，压力至0.15MPa， 持续20～30min→压力降至0。
（9）摆斜面 灭菌完毕后，让其压力和温度自然降至零后，立 即取出培养基，在清洁的台面或桌面上倾斜摆放， 摆成斜面，一般斜面长度以达试管全长的1/2-2/3为 宜。
下料的松紧度要求一致，装至瓶肩，压平表面，用 直径1. 5cm的锥形捣木的尖端，在瓶内或袋中央打1 个孔，其深度要临近瓶底，有利料中通气和固定菌 种块的作用。然后用干布擦净瓶口，用牛皮纸、塑
料布扎口，或用棉塞塞住。以塑料袋代替瓶装料时，
应配制适量的木屑培养基，要求袋的厚薄均匀、无 砂眼，并要消除料中的尖利杂物后才可装料，边装 边压实，装止离袋口4～5cm处，加口圈再用纸扎口 即可。
（六）凝固剂 配制培养基常用的凝固剂为琼脂，又名洋菜， 是由石花菜等藻类提取的一种多糖，其本身没有营 养，主要起凝固作用，约96℃时熔化，40℃凝固，
常用浓度为1.8%～2%。
三、常用培养基及配制方法
不同食用菌的菌种对培养基种类的要求均有所不同，同
一种食用菌也可同时使用几种不同的培养基。
（一）母种培养基
3、固化培养基 指将各种营养物质按比例配制成营养液后，再加入适量 的凝固剂，使之加热至60℃以上呈液态，冷却到40℃以下时 则呈固态的培养基。常将其制成斜面培养基或平面培养基以 供培养食用菌母种用。
（二）按照营养物质种类分类 根据培养基营养来源不同，分为天然培养 基、合成培养基和半合成培养基三大类。
（3）灭菌
将已装好料的瓶或袋进行高压或常压灭菌，冷却
后即为制备好的原种和栽培种培养基。
• 二(三)级种装瓶
1、常用母种培养基配方
（2）马铃薯综合培养基
马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸
镁1. 5g，琼脂18-20g，维生素B1l0mg，水l000ml。
此培养基适合于香菇菌种保藏和一般食用菌的母种
分离、培养和保藏。
（3）完全培养基 MgSO 40.5g， K2HPO4 1g，葡萄糖20g， KH2
两间，每间面积一般以4～8m2为宜，一般内装一只功率为
30W的紫外线灯。其内间为接种工作间，5～6m2，内置工作 台，要求门窗能密封，这样能减少灰尘积累和便于消毒。
外间为缓冲间，2～3m2，用于进接种间之前更换衣、帽、鞋，
同时为内间提供与外界相隔的小环境。内外间均为拉门，两
门的位置不能处于一条直线，应相互错开。内外间墙、地板、 天花板、室内用具等应尽量光滑易擦洗。 （二）接种箱 用于分离、移接菌种的专用木箱，实质上也是一个缩小 的接种室。它要求密闭严实，操作方便，易于消毒。内装一 只日光灯用于照明，一只紫外线灯用于消毒。
（四）无机盐类 菌丝体所需要的无机盐类数量很少，但它们在菌 丝体的生命活动中是不可缺少的，在配制培养基时 一般要加入少量的磷、钾、硫、钙、镁等。磷酸氢
二钾是一种磷酸盐类，具有缓冲作用，能防止培养
基pH的急剧变化。
（五）生长素
生长素对菌丝体代谢活动有刺激作用。一般天然
物质如马铃薯、麦芽汁、麸皮、米糠中均含有丰富 的生长素，无需另行添加。配制培养基时加入少量 的B族维生素，对菌丝生长有良好的作用。
第二节 培养基的配制 一、培养基的种类 培养基是指采用人工的方法，将食用菌所需要的各种营
养物质按照一定比例配合而成的营养基质。
培养基可按其物理性状和营养物质的种类两方面进行分类。 （一）根据培养基的物理性状分类 根据培养基制成后物理状态的不同，可分成液体培养基、 固体培养基和固化培养基三种。
1、液体培养基 液体培养基是指将食用菌生长发育所需要的营养物质按 一定比例加水配制而成的液态的培养基。它的优点是营养成 分分布均匀，有利于食用菌营养体充分接触和吸收。生产上
在生产中 根据菌种的来源、繁殖 代数及生产目的，把菌 种分为母种、原种和栽 培种。分别叫一级种、 二级种、三级种。
三级种(栽培种）
第一节 菌种生产的基本设备
一、接种设备
接种设备是指用于分离和扩大培养各级菌种的专业设备
和工具。包括接种室、接种箱、超净工作台、接种工具、酒 精灯等。 （一）接种室 又称无菌室，是分离和移接菌种的小房间。它分为内外
源、氮源、无机盐、维生素等，并注意各种成分的浓度配比
要合理。 第二，具有一定的生长环境，包括适宜的pH和渗透压等。 第三，必须经过严格的灭菌，使之保持无菌状态。
（一）水分
水分不仅是菌丝细胞原生质的主要成分，
而且菌丝的一切生理活动菌需在有水的情况下
进行。因此，在配臵各种培养基时，应加入一
定量的水分。
谷粒培养基。 （5）粪草培养基 （6）木条木块培养基