测序技术 原理和流程

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测序反应以磁珠上大量扩增的ssDNA为模板,每次反应加入 一种dNTP进行合成反应。如果这种dNTP能与待测序列配对, 则会在合成后释放焦磷酸基团。释放的焦磷酸基团会与反应 体系中的ATP硫酸化酶反应形成ATP。生成的ATP和荧光素酶 共同氧化反应体系中的荧光素分子并发出荧光。测序反应产 生的荧光信号由放置在PTP板另一侧的CCD照相机记录,再 经过计算机分析转换为测序结果。由于每种dNTP在反应中产 生的荧光颜色不同,因此可以根据荧光的颜色来确定被测分 子的序列。反应结束后,游离的dNTP会在双磷酸酶的作用下 降解ATP,导致荧光淬灭,从而使反应体系再生.
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