白芷香豆素类成分的提取分离和鉴定

白芷香豆素类成分的提取分离和鉴定

二、实验目的

1. 学习用有机溶剂提取香豆素类成分的方法。

2. 学习用柱层析色谱分离香豆素类化合物的方法。

三、实验操作

（一）总提取物的制备

取白芷生药粗粉200g，用石油醚-丙酮（4:1）回流提取3次，每次250ml，分别提取2,1,1h，合并提取液，回收溶剂至干，得总提取物月2.5g。

（二）柱层析色谱分离

取总提取物1.5g，用5g硅胶吸附，在25×4cm的色谱柱上干法上样，进行低压柱层析色谱。

色谱条件：

吸附剂：硅胶H 20g（薄层色谱用）

洗脱剂：石油醚-丙酮8:1，6:1，4:1，3:1各80ml。

压力：0.5~0.7 kg/cm2

收集：5~8ml/份

用下述薄层色谱条件进行检识，将相同斑点的流分合并，用石油醚-乙酸乙酯（8:2）的溶剂重结晶1~2次，分别得到单体化合物，测定熔点。

（三）鉴定

1. 薄层色谱

吸附剂：硅胶（薄层色谱用）

展开剂：（1）石油醚-丙酮8:2；（2）苯-乙酸乙酯8:2

样品：白芷总提取物，异欧前胡素，欧前胡素

标准品：异欧前胡素，欧前胡素

显色：紫外灯（365nm）下观察荧光。

2. 光谱测定

1H-NMR谱：用CDCl

作为溶剂。

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一、实验目的

1.掌握连续回流提取法的原理和方法；

2.掌握重结晶的原理和方法

二、实验原理

白芷为伞型科植物白芷的干燥根。具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功能。白芷中的有效成分为香豆素类化合物。用单位白芷的提取物（其中主要是香豆素类化合物）制成的制剂对功能性头痛、白癜风的临床疗效较好。异欧前胡素和欧前胡素为白芷的主要有效成分。

常见的提取方法有：溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、升华法。其中，溶剂提取法应用最广。溶剂提取法的原理：根据相似相溶原理，选择与化合物极性相当的溶剂将化合物从植物组织中溶解出来，同时，由于某些化合物的增溶或助溶作用，其极性与溶剂极性相差较大的化合物也可溶解出来。溶剂提取法一般包括浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法等，其实用反胃和特点各有所不同。连续回流提取法具有提取效率高、溶剂用量少等优点。

本实验利用连续回流提取法提取白芷中的香豆素。

三、试剂与仪器

试剂：乙醇，白芷粗粉，石油醚，乙醚，蒸馏水，丙酮。仪器：烧杯，圆底烧瓶，三角烧瓶，索氏提取器，电子天平，恒温水浴，硅胶薄层板，色谱缸，球形冷凝管，真空泵。

四、实验步骤与记录

⑴．白芷中香豆素的提取取白芷粗粉30g，置于索氏提取器中，加入95%的乙醇300ml，80℃恒温水浴回流2h，提取液减压浓缩至糖浆状。用丙酮溶解并转移至50ml三角烧瓶中，放置结晶，抽滤后，再重结晶，所得产品干燥称重，计算得率。

⑵．产品的薄层色谱鉴定

色谱材料：硅胶薄层板

点样：产品，欧前胡素和异欧前胡素标准品。

展开剂：石油醚-乙醚1:1

显色：置紫外光灯（365nm）下，观察斑点颜色。

展开方式：预饱和后，上行展开。

五、实验数据处理及结果

①．索氏提取两个小时后得到棕色的澄明液体，真空抽提后得到深棕色的糖浆状浓稠液体。丙酮转移静置后析出淡黄色晶体，精制后得到白色晶体。

香豆素样品中含有欧前胡素和异欧前胡素两种物质，并且还含有其他两种未知物质，在紫外光照射下显紫色

②. 产品为无色晶体。

六、注意事项

抽滤操作要小心，以免倒吸。

七、问题讨论

1) 连续回流提取法的原理是什么？有何特点？

答：原理：将装好药材粉末的滤纸袋中药粉高度应低于虹吸管顶部，自冷凝管家溶剂入烧瓶内，水浴加热。溶剂受热蒸发，遇冷后变为液体回滴入提取器中，接触药材开始进行浸提，待溶剂液面高于虹吸管上端时，在虹吸作用下，浸出液体流入烧瓶，溶剂在烧瓶内因受热继续气化蒸发，而被提取的药物被溶剂带入烧瓶内逐渐累积。

特点：不断循环利用提取药物的溶剂，可使溶剂的利用率提高

2)对比浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法和连续回流提取法的使用范围和特点

答：浸渍法适用于对热不稳定的成分及含大量淀粉、树胶、果胶、黏液质中药的提取

特点：本法简单可行，但浸出率低，如用水注意防腐 渗漉法

适用于贵重药材、毒性药材及高浓度制剂；也可用于有效成分含量较低的药材提取。特点：溶剂利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液，该法

常用不同浓度的乙醇或白酒做溶剂，故应防止溶剂的挥发损失。 煎煮法煎煮法适用于有效成分能溶于水，且对湿、热均稳定的药材。

特点：该法浸提成分范围广，但往往杂质较多，给精制带来不利，且煎出液易霉败变质。④回流提取法适用于对热稳定的成分。特点：提取效率高；溶剂消耗量大。⑤连续回流提取法适用于对热稳定的成分。特点：提取效率最高；节省溶剂；提取时间较长。

回流提取法是用乙醇等易挥发的有机溶剂提取原料成分，将浸出液加热蒸馏，其中挥发性溶剂馏出后又被冷却，重复流回浸出容器中浸提原料，这样周而复始，直至有效成分回流提取完全的方法。回流法提取液在蒸发锅中受热时间较长，故不适用于受热易遭破坏的原料成分的浸出。

回流的目的是为了节省溶剂。乙醇是易挥发的液体，如果不采用回流提取法的话，在提取的过程中乙醇会因为蒸发消耗。这时候就需要不断地补充乙醇的量，不仅操作繁琐而且浪费。回流提取的好处就是可以使乙醇蒸汽冷凝后再回到烧瓶内达到反复循环的作用。

在回流的过程中，植物中能溶解在乙醇中的成分就会跑到乙醇中（包括你要的产品）。其实跟煎中药是一个道理。

至于你要的产品很简单，只要回流提取完毕之后，回收乙醇提取液，滤过，然后减压蒸馏至干，然后再进行进一步的分离纯化得到产物。